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  • 乌索酸对高糖诱导人肾小球系膜细胞增殖肥大及细胞外基质分泌的影响

    作者:岳媛;范秋灵;都姝妍;远方;徐莉;李琳;刘楠;姜奕;王力宁

    目的 探讨乌索酸(UA)对高糖(HG)所致人系膜细胞(RMC)损伤的保护作用,保护机制是否通过抑制系膜细胞增殖、肥大及细胞外基质分泌而完成.方法 取对数生长期细胞,分为空白对照组、模型组、对照组、实验A、B、C组.空白对照组予以5.5 mmol·L-1葡萄糖培养;模型组予以30.0 mmol·L-1葡萄糖培养;对照组予以5.5 mmol· L-1葡萄糖+ 24.5 mmol·L-1甘露醇培养;实验A、B、C组分别予以30.0 mmol·L-1葡萄糖+0.5,1.0,2.0 μmol·L-1乌索酸培养.6组均给药48 h.用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,用PI单染流式细胞仪检测细胞周期及细胞肥大,用逆转录聚合酶链式反应法及免疫印迹法检测转化生长因子-β1(TGF-β1)、纤维连接蛋白(FN) mRNA及蛋白表达.结果 给药48 h后,空白对照组、模型组、对照组、实验A、B、C组的细胞增殖分别为(3.66 ±0.32),(4.33 ±0.23),(3.50 ±0.22),(3.93±0.11),(3.59±0.06)和(0.67 ±0.16).模型组和空白对照组的细胞增殖率比较,差异有统计学意义(P<0.05);实验B组、实验C组与模型组的细胞增殖率比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);实验A组与空白对照组及对照组的细胞增殖率比较,差异均无统计学意义(均P>0.05);实验C组大部分系膜细胞已经死亡,设定实验B组为后续实验终实验组.空白对照组、模型组、对照组、实验组的TGF-β1mRNA分别(24.80 ±0.90),(29.89±1.06),(23.72 ±0.87)和(25.06 ±0.11),FN mRNA分别为(42.03±0.57),(54.55±1.20),(42.72±0.40)和(45.32 e0.51),TGF-β1蛋白分别为(54.92 ±3.28),(125.93±3.58),(25.11 ±0.51)和(101.23±7.55),FN蛋白分别为(46.44±7.90),(66.13±13.10),(34.98 ±5.52)和(28.70±5.70);模型组的上述指标与空白对照组及实验组比较,差异均有统计学意义(均P <0.05).结论 乌索酸通过抑制系膜细胞增殖、肥大及细胞外基质分泌,从而减轻高糖诱导的系膜细胞损伤.

  • 活性维生素D3对人系膜细胞凋亡及Caspase-3表达的影响

    作者:张昊;尹璇;陈建平;马莉;张春江;刘春

    目的 探讨活性维生素D3[1,25 (OH)2D3]对人系膜细胞凋亡的影响,并初步探究其作用机制.方法 体外培养人系膜细胞,随机分为4组:正常对照组,表皮生长因子(EGF)组,1,25 (OH)2D3组,EGF联合1,25 (OH)2D3组,采用流式细胞术检测各组系膜细胞的凋亡率,Western blotting检测各组半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达的情况.结果 与正常对照组比较,EGF组系膜细胞凋亡率降低,Caspase-3表达量降低(P<0.05),1,25 (OH)2D3组系膜细胞的凋亡率升高,Caspase-3表达量升高(P<0.05);与EGF组比较,EGF联合1,25 (OH)2D3组系膜细胞的凋亡率升高,Caspase-3表达量升高(P<0.05);EGF联合1,25 (OH)2D3组与正常对照组系膜细胞的凋亡率和Caspase-3表达量间差异均无统计学意义(P>0.05).结论 1,25 (OH)2D3可能是通过上调Caspase-3的表达而诱导系膜细胞的凋亡.EGF可抑制人系膜细胞的凋亡,1,25 (OH)2D3可逆转EGF对系膜细胞凋亡的抑制作用.

  • 高糖对原代培养人系膜细胞表达FN与IL-6的影响

    作者:尹燕志;张李梅;鞠建伟;牟授菡;吕丛奎

    目的:了解高糖对原代培养的人肾小球系膜细胞表达FN、IL-6的影响,并进一步探讨糖尿病肾病的发病机制.方法:取自愿水囊引产的胎儿肾,解剖取肾皮质剪碎,应用肾皮质组织块法合优生选择法培养人肾小球系膜细胞.ELlSA方法检测FN、IL-6的表达.结果:与正常组相比较,高糖组FN、IL-6在24 h、48 h、72 h均显著升高(P<0.05或P<0.01).结论:高糖能够升高系膜细胞FN、IL-6分泌,这可能与肾小球系膜细胞细胞外基质积聚和糖尿病肾病发病密切相关.

  • 乌索酸对高糖诱导人系膜细胞损伤的作用

    作者:岳媛;范秋灵;都姝妍;远方;徐莉;李琳;刘楠;姜奕;王力宁

    目的 探讨乌索酸(UA)对高糖诱导人系膜细胞损伤的保护作用.方法 人系膜细胞复苏后,用MCM 4201完全培养基常规培养,置于37℃、饱和湿度5% CO2的孵箱内贴壁传代培养,隔天换液1次,取5~9代对数生长期细胞,分为正常糖组(5.5mmol· L-1葡萄糖),高糖组(30.0 mmol·L-1葡萄糖),高渗对照组(5.5 mrnol·L-1葡萄糖+24.5 mmol·L-1甘露醇),乌索酸治疗A、B、C组(30.0 mmol·L-1葡萄糖,A、B、C组分别给予0.5、1.0、2.0 μmol· L-1乌索酸).6组均给药48 h.利用MTT比色法检测细胞增殖,流式细胞仪检测系膜细胞凋亡,采用实时PCR及Western blotting检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-xL、Bax、survivin mRNA及蛋白表达,细胞损伤相关蛋白TGFβ-1、FN mRNA及蛋白表达.结果 0.5 μmol·L-1乌索酸治疗组与正常糖组、高渗对照组系膜细胞增殖程度差异无统计学意义(P>0.05),2.0 μmol·L-1乌索酸治疗组大部分系膜细胞已经死亡.1.0 μmol·L-1乌索酸组抑制高糖诱导的系膜细胞增殖和TGF-β1、FN、Bcl-xl、survivin mRNA及蛋白表达,增强促凋亡基因BaxmRNA及蛋白表达,促进系膜细凋亡.结论 乌索酸通过促进系膜细胞早期凋亡抑制系膜细胞增殖,抑制TGF-β1表达和FN聚集,减轻系膜细胞损伤.

  • IL-10对人肾小球系膜细胞细胞周期负调控蛋白p27的调节

    作者:吴元俊;陈吉庆;唐云章;张爱华;陈荣华

    观察白细胞介素10(IL-10)对体外培养的人肾小球系膜细胞(HMC)增殖影响,并探讨IL-10对HMC细胞周期负调控蛋白p27的影响,旨在了解其调节HMC增殖的内在机制.HMC用含5%FCS的RPMI 1640培养,加入IL-10刺激后,应用流式细胞术分别测定HMC细胞增殖周期的变化以及p27的水平.结果表明IL-10可抑制血清诱导的HMC增殖,IL-10显著减少了HMC G0/G1期细胞进入S期和G2/M期;25ng/ml IL-10明显地上调细胞周期负调控蛋白p27水平,是血清刺激组的1.7倍(P<0.05).IL-10抑制血清诱导的HMC增殖的作用机制可能部分是通过上调细胞周期负调控蛋白p27来实现的,提示IL-10在增殖性肾小球肾炎中可能发挥重要的调节作用.

  • 脂多糖、植物血凝素对人肾小球系膜细胞分泌IL-18的影响

    作者:齐晖;李富荣;戴勇

    系膜细胞(mesangial cell,MC)数量的异常增加或减少是肾小球疾病的常见特征.在肾小球肾炎发病过程中,不管是肾小球受到损伤还是肾小球细胞过度增生的修复阶段,以及慢性肾小球细胞衰竭及肾小球硬化,都存在细胞凋亡.

  • HMGB1和TNFAIP3在狼疮性肾炎系膜细胞增殖中的作用

    作者:张玮;杨冉;郭惠芳;封晓娟;魏群;张玉;王奕卓;李金泽;刘淑霞

    目的 初步探讨高迁移率族蛋白1(high mobility group protein B1,HMGB1)和肿瘤坏死因子α诱导蛋白3(tumor necrosis factor α-induced protein-3,TNFAIP3)在狼疮性肾炎(lupus nephritis,LN)患者和人类肾小球系膜细胞(human mesangial cell,HMC)增殖中的作用及机制.方法 收集Ⅳ型LN患者的肾穿样本,采用免疫荧光和免疫组化技术检测肾小球细胞中HMGB1、TNFAIP3及IκBα蛋白表达水平;运用人重组HMGB1为刺激物刺激HMC,采用BrdU参入技术检测细胞增殖水平,并用Western blot技术检测TNFAIP3、IκBα及p65表达水平.结果 与对照组相比,LN患者肾小球细胞中HMGB1及TNFAIP3蛋白表达升高,IκBα表达水平降低;体外实验证实,人重组HMGB1刺激HMC后,细胞增殖水平明显升高,同时在HMGB1刺激30 min后,与对照组相比,TNFAIP3的蛋白表达水平明显升高(P<0.05),而IκBα蛋白表达水平降低(P<0.05),随后p65蛋白表达明显升高(P<0.05).结论 HMGB1和TNFAIP3可能通过活化NF-κB信号通路促进LN系膜细胞的过度增殖.

  • exendin-4对高糖条件下人系膜细胞细胞外基质代谢的影响

    作者:肖知周;关美萍;郑宗基;贾懿劼;王玲;薛耀明

    目的:探讨exendin-4对高糖条件下人系膜细胞(HMC)细胞外基质(ECM)代谢的影响及其可能的机制。方法取对数生长期的HMC分为正常对照(NG)组、渗透压对照(Man)组、高糖(HG)组和高糖联合不同浓度exendin-4(1、10、100 nmol/L)组。体外培养HMC,采用cck8法测24 h HMC增殖情况;Western Blotting检测细胞培养15 min后细胞外调节激酶(ERK)/p-ERK蛋白表达情况,24 h后Ⅰ型胶原、纤维连接蛋白(FN)、转化生长因子β1(TGF-β1)蛋白表达情况。结果 CCK-8结果显示高糖诱导HMC 24 h后可见细胞增殖明显增强(1±0.06 vs 1.20±0.07,P<0.001),加入exendin-4后可抑制细胞增殖(1.12±0.02 vs 1.20±0.07,P<0.05,1.05±0.08 vs 1.20±0.07,P<0.001)。细胞培养24 h后,与NG组相比,HG组细胞Ⅰ型胶原、FN、TGF-β1蛋白表达量均显著增加(P<0.001);与HG组相比,高糖联合exendin-4组Ⅰ型胶原、FN、TGF-β1蛋白表达量均显著降低(P<0.01)。细胞培养15 min后,与NG组相比,HG组细胞ERK磷酸化蛋白表达量较NG组显著增加(P<0.001);与HG组相比,高糖联合exendin-4组ERK磷酸化蛋白表达量显著下降(P<0.001)。渗透压对照组与正常对照组各指标间差异均无统计学意义。结论 Exendin-4可能通过抑制TGF-β1/ERK通路活性对高糖条件下HMC ECM代谢起到了保护性的调节作用。

  • 植物血凝素及脂多糖对人肾小球系膜细胞分泌IL-1 8的影响

    作者:齐晖;李富荣;戴勇

    目的 了解植物血凝素(PHA)、脂多糖(LPS)对人肾小球系膜细胞分泌IL-18的影响。方法 体外培养的人系膜细胞经不同浓度的PHA,LPS诱导,ELISA测定培养上清。结果LPS和PHA均可诱导人肾小球MC释放IL-18,LPS和PHA呈浓度促进MC释放IL-18,LPS诱导作用较PHA强,均显著高于对照组水平(P<0.05)。结论 肾小球系膜细胞在LPS和PHA诱导下可增加IL-18分泌。

  • 高糖对原代培养人系膜细胞表达TGF-β1的影响

    作者:尹燕志;张李梅;牟授菡;吕丛奎;鞠建伟;王鸿梅

    目的 了解高糖对原代培养的人肾小球系膜细胞表达TGF-β1的影响,并进一步探讨糖尿病肾病的发病机制.方法 取自愿水囊引产的胎儿肾并解剖取肾皮质剪碎,应用肾皮质组织块法合优生选择法培养人肾小球系膜细胞.以ELISA方法检测TGF-β1的表达.结果 与正常组相比较,高糖组TGF-β1在24、48、72 h均显著升高(P<0.05或P<0.01).结论 高糖能够升高系膜细胞TGF-β1分泌,这可能与肾小球系膜细胞细胞外基质积聚和糖尿病肾病发病密切相关.

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