首页 > 文献资料
-
人博卡病毒在部分国产血液制品中的流行情况研究
目的 了解国产血液制品中人博卡病毒(HBoV)的基因组及血清学抗体的流行状况.方法 基于ABI7900 HT Fast Real-time PCR System平台,建立检测HBoV DNA的特异性、敏感性Real-time PCR(SYBR)方法,并依之对2009～2012年国内3家血液制品公司生产的326份血液制品[65份白蛋白、197份静脉注射丙种球蛋白(IVIG)、47份凝血因子(FⅧ)、12份纤维蛋白原(Fg)和5份蛋白酶原复合物(PCC)]作HBoV DNA的筛查,并用Nested-PCR法确认;对HBoV DNA确认阳性的样品进行抗-HBoV-IgG和IgM筛查.结果 部分国产血液制品中HBoV DNA的阳性率为13.50％ (44/326);白蛋白、IVIG、FⅧ和Fg的阳性率分别为3.08％ (2/65)、7.11％ (14/197)、55.32％ (26/47)和16.67％ (2/12),PCC中HBoV DNA未检出.阳性样品中,有2份FⅧ制品HBoV载量＞104 cp/mL.33份HBoV基因组阳性血液制品的抗-HBoV-IgG和IgM筛查.所有样品抗-HBoV-IgM均为阴性,33.33％ (11/33)的样品抗-HBoV-IgG阳性,抗体滴度为(254.74～ 336.88) ng/L.结论 国产血液制品中存在低载量的HBoV流行.
-
实时荧光PCR技术检测登革病毒的研究
目的:建立登革病毒的荧光定量PCR检测技术.方法:针对1～4型登革病毒3′端非编码区的一段高度保守序列设计引物和探针,建立登革病毒实时荧光PCR 检测方法及定量的检测方法.并对10例ELISA法检测为登革病毒阳性的病例,取其发热1～2天的临床血清标本进行荧光定量PCR 检测.结果:实时荧光PCR 检测1～4 型登革病毒均为阳性,该探针和引物是登革病毒检测的通用探针和引物.实时荧光PCR检测10份临床血清,6份为阳性,阳性率为60%.结论:实时PCR方法是一个快速、特异性强、敏感性高的检测登革病毒的方法,适用于登革热的临床早期诊断,具有很好的社会效益和经济效益.
-
人端粒酶催化亚单位mRNA的实时荧光RT-PCR定量检测
目的:建立可定量测定人端粒酶催化亚单位(hTERT)mRNA的实时荧光反转录PCR方法.方法:用Trizol 试剂从HepG2细胞中分离总RNA,然后反转录为cDNA.利用一对基因特异引物和一条TaqMan MGB探针,以实时荧光PCR定量hTERT的cDNA.同时定量测定人β-肌动蛋白(hBA)的mRNA作为内对照.用梯度稀释的克隆的人β-肌动蛋白基因制作标准曲线.结果:标准曲线的相关系数为1.00.实时荧光反转录PCR方法的平均变异系数为7.1%.HepG2细胞hTERT mRNA与hBA mRNA的比值为(1.3±0.3)×10-4.结论:建立了可定量测定人端粒酶催化亚单位(hTERT)mRNA的实时荧光反转录PCR方法.本方法的建立将有助于研究端粒酶的生物功能.
-
实时荧光PCR检测γ-干扰素对大鼠神经干细胞versican基因表达的调控
目的 建立检测硫酸软骨素蛋白多糖versican不同亚型 mRNA的SYBR Green实时PCR方法,观察炎症因子γ-干扰素对大鼠神经干细胞中不同versican亚型基因表达的调控.方法 分离孕大鼠胚胎的神经干细胞,在含有营养因子的基质中进行体外培养.当加入处理因素γ-干扰素并作用48 h后,收集细胞,抽提RNA进行反转录.同时根据versican不同亚型的基因序列,设计特异性不同的引物,利用ABI7900PCR仪和SYBR Green,建立优化的实时荧光PCR反应条件,通过比较Ct (△△Ct)进行基因表达的相对定量分析.结果 熔解曲线分析和琼脂糖凝胶电泳结果证实了PCR反应的特异性;相对定量结果显示,γ-干扰素可以上调versican V2基因的表达,但对versican V1的表达无影响.结论 应用SYBR Green 实时荧光PCR可以特异、准确、快速地分析versican不同亚型的基因表达差异,为系统研究其复杂的调控机制创造了有力条件.
关键词： SYBRGreen荧光染料 实时PCR Versican 神经干细胞 -
HPV DNA病毒载量检测在亚临床型女性宫颈癌筛查中的应用价值
目的 探讨人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)DNA的病毒载量检测在亚临床型女性宫颈癌筛查中的应用价值.方法 拟设计4条分别针对HPV16,18,33,58与人β-球蛋白的特异性引物与探针,建立一种新型的荧光定量PCR方法,对541例亚临床型女性宫颈组织细胞进行HPV型别和病毒载量检测.结果 541例样本中β-球蛋白结果阳性的标本521例,其中56例HPV DNA阳性.HPV16,HPV18型以及多重感染的阳性检出率分别为46.42%(26/56),23.21%(13/56),30.36%(17/56);感染的低病毒载量分别为≥103拷贝/"细胞",≥104拷贝/"细胞",≥102拷贝/"细胞";单一型别HPV感染的病毒载量高于多重感染的病毒载量,且二者之间差异有统计学意义(P<0.05).结论 HPV16,HPV18是亚临床女性感染HPV的主要型别,HPV DNA病毒载量的检测为宫颈癌的常规筛查提供了一个动态监测手段.
-
核心蛋白聚糖和光蛋白聚糖在体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞中的表达
目的:研究体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞中两种小分子蛋白聚糖(核心蛋白聚糖和光蛋白聚糖)的表达水平,探讨这两种蛋白聚糖与瘢痕疙瘩发生机制的关系.方法:采用实时PCR(Real-time PCR)和Western Blot方法,研究体外培养的瘢痕疙瘩和正常皮肤成纤维细胞中核心蛋白聚糖和光蛋白聚糖的mRNA和蛋白表达水平,并进行比较分析.结果:不同患者来源的瘢痕疙瘩成纤维细胞中核心蛋白聚糖的mRNA表达水平差异较大,高表达水平是低表达水平的5.6倍.瘢痕疙瘩和正常皮肤的培养成纤维细胞中,核心蛋白聚糖和光蛋白聚糖在基因和蛋白表达水平上无显著性差异.结论:核心蛋白聚糖和光蛋白聚糖在体外培养的单层瘢痕疙瘩和正常皮肤成纤维细胞中的表达无特异性改变,它们在瘢痕疙瘩形成过程中所起的作用尚有待进一步研究.
关键词： 瘢痕疙瘩 核心蛋白聚糖 光蛋白聚糖 实时PCR Western blot -
Rsf-1在非小细胞肺癌中的表达及意义
目的:分析Rsf-1在非小细胞肺癌中的表达及与临床病理因素的关系.方法:应用Real-time PCR和免疫组化法检测非小细胞肺癌中Rsf-1的mRNA及蛋白表达情况.结果:有84％(21/25)肺癌组织病例中Rsf-1的mRNA含量明显高于对应的正常肺组织(P＜0.001),肿瘤组织中Rsf-1的mRNA平均值是其癌旁正常肺组织均值的2.37倍.免疫组化结果显示68.4％ (67/98)病例存在Rsf-1蛋白过表达,其过表达与肺癌患者的年龄、性别、肿瘤类型、原发肿瘤分级和淋巴结转移等未发现明显的相关性,而与肺癌的低分化和高p-TNM分期呈正相关(P=0.001;P=0.020).结论:肺癌中存在Rsf-1基因的扩增和蛋白的高表达,并与低分化和高p-TNM分期相关.
-
纳米银对多菌种生物膜中粪肠球菌的杀菌作用
目的:研究纳米银对多菌种生物膜中粪肠球菌的杀菌作用.方法:用粪肠球菌、产黑色素普雷沃菌以及具核梭杆菌构建多菌种生物膜85 个.分别用0.1%(12~15 nm、100 nm)纳米银悬浊液以及2%的次氯酸钠溶液处理,然后通过qPCR方法检测样本中粪肠球菌的活菌量和粪肠球菌的细菌总量.配对t检验比较各组细菌样本临界循环数(Ct).结果:各个实验组使用和不使用PMA之间粪肠球菌的细菌计数有着差别(P=0.000);将3 个实验组使用和不使用PMA qPCR检测到的Ct值的差值进行比较:纳米银(12~15 nm)实验组大,纳米银(100 nm)实验组次之,次氯酸钠实验组小(P<0.05).结论:纳米银对于多菌种生物膜中的粪肠球菌有着较强的杀菌作用,直径较小的纳米银杀菌作用较强.
关键词： 纳米银 叠氮溴化丙锭 实时PCR 多菌种生物膜 粪肠球菌(E.faecalis) -
完善根管充填后治疗失败感染根管中粪肠球菌的活菌研究
目的：将叠氮溴化丙锭（PMA）与定量 PCR（qPCR）技术结合，用于计算根管治疗失败感染根管中粪肠球菌活菌数量。方法：选取34名根管治疗失败患者，提取感染根管内细菌 DNA，每个样本分成2份，一份经 PMA 处理（实验组），一份未用PMA 处理（对照组），然后通过 qPCR 方法检测样本中粪肠球菌的活菌数量和细菌总量。结果：20例患者（58．8％）细菌样本中检测出粪肠球菌。实验组和对照组 Ct 值分别为25．12±2．04和24．62±2．02（P ＝0．001）。结论：对于根管治疗失败感染根管内活菌的研究使用 PMA 结合定量 PCR 可能是一种有效的方法。
-
TIP30对ACC-M裸鼠移植瘤抑制作用
目的:观察肿瘤抑制基因TIP30对涎腺腺样囊性癌高转移细胞(ACC-M)致裸鼠移植瘤生长的抑制作用.方法:设计CMV启动子序列的特异引物及Taqman探针进行实时PCR,制备AdTIP30/ACC-M病毒液.BALB/c nu/nu鼠30只(4周龄,体重18～20 g),随机分3组,各10只,AdTIP30/ACC-M、ACC-M及AdLaeZ/ACC-M分别注射小鼠背部皮下,观察肿瘤生长情况.结果:实时PCR测定AdTIP30/ACC-M病毒滴度为3.01×1010/ml,AdTIP30/ACC-M组移植瘤出现时间要比ACC-M组及AdLacZ/ACC-M组推迟4 d,肿瘤生长缓慢(P＜0.01).结论:实时PCR测定重组腺病毒滴度快速、简便、滴度高.抑癌基因TIP30能够显著抑制涎腺腺样囊性癌高转移细胞在裸鼠体内生长.
-
甲型H1N1流感病毒核酸检测试剂盒的质量评价
目的 对5种国产甲型H1N1流感病毒核酸检测试剂盒进行质量评估.方法 应用甲型H1N1流感病毒核酸国家参考品,按照各自试剂盒说明书的方法进行检测.结果 5种试剂盒在特异性、低检出限及精密度方面均符合国家标准,不同厂家及同一厂家不同批次试剂盒之间在低检出限及精密度方面都存在差异.结论 5种国产甲型H1N1流感病毒核酸检测试剂盒性能可靠,为此类试剂的生产研究以及临床评价提供依据.
关键词： 甲型H1N1流感病毒 国家参考品 实时PCR -
基于RNA扩增的登革热病毒快速检测
登革热(DF)是热带亚热带地区为严重蚊虫传播的疾病,在我国南方如广东、海南等地区频繁发生.由于至今没有有效的疫苗可用于临床,而疾病的治疗大多依赖于早期医疗护理,所以实验室诊断显得尤其重要.登革热病毒基因组及编码蛋白的诊断在疾病早期检测方面发挥重要作用.基于核酸扩增技术的快速检测在病毒检测中占重要地位,因此,本文综述了近年来基于核酸扩增的登革热病毒实验窜快速检测.
-
人乳头瘤病毒全基因组基因分型国家参考品在评价人乳头瘤病毒核酸检测试剂中的应用
目的:使用人乳头瘤病毒全基因组基因分型国家参考品对人乳头瘤病毒核酸(分型)检测试剂盒进行评价.方法:采用建立的人乳头瘤病毒全基因组基因分型国家参考品,以参考盘包含的20种不同型别的人乳头瘤病毒全基因组重组质粒DNA和5份阴性参考品为样本,按照各个试剂盒要求进行检测.结果:检测人乳头瘤病毒全基因组基因分型国家参考品,试剂A、C、D检测结果全部符合,试剂B在特异性检测试验时HPV 31、59型有交叉,试剂E在特异性检测时HPV 6、26、66、67、82型有交叉.结论:包含20种不同型别的人乳头瘤病毒全基因组基因分型国家参考品能可靠评价人乳头瘤病毒核酸(分型)检测试剂盒.
-
单管实时PCR快速检验ABO基因型
目的 建立快捷特异的ABO基因分型检测方法.方法 根据ABO基因结构特点,设计特异性引物和四色双链探针,采用单管实时PCR方法检测ABO基因,结果与传统免疫学方法相对比. 结果该方法可检出常见的3个等位基因,区分常见的6种基因型,全部检测过程可在100min内完成.110例中国人的随机个体定型结果与传统免疫学方法一致.结论 实时PCR法进行ABO基因分型,简便快捷,灵敏度高,可以有效地为侦查破案服务.
-
分子信标法与血清学方法检测肺炎支原体的比较
[目的]建立检测肺炎支原体的分子信标方法并与血清学方法进行比较,探讨其临床应用价值.[方法]建立实时定量分子信标方法,检测150例患者标本,并与不同时期的血清学结果进行比较.[结果]150例呼吸道感染患儿中57例(38%)分子信标法阳性,就诊当日和7d后血清学阳性例数分别为15(10%)和42(28%),与分子信标法比较,均有显著性差异(P＜0.01和P＜0.05).[结论]分子信标法检测肺炎支原体的灵敏度显著高于血清学方法,可以应用于肺炎支原体感染的早期诊断.
