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17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素增强慢性粒细胞白血病细胞对伊马替尼敏感性的机制研究
目的 探索伊马替尼(IM)联合使用17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素(17-AAG)增加慢性粒细胞白血病(CML)细胞株K562 和 K562A02凋亡率的机制.方法 采用四甲基偶氮唑蓝法观察细胞增殖抑制率,Annexin V/PI双染色法检测细胞凋亡率,逆转录-聚合酶链反应法检测Bcr-abl、MDR1、Bcl-2 mRNA的表达及Westem blot法检测Bcr-abl、p-gp、Bcl-2蛋白的表达.结果 0.31 μg·mL-1伊马替尼联合1.25μg·mL-117-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素分别作用于K562和K562A02细胞48 h,增殖抑制率分别为(70.78±1.01)％和(39.27±1.52)％,凋亡率为(48.74±2.51)％和(45.0±0.4)％.2.5 μg· mL-1伊马替尼联合10 μg·mL-117-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素作用于K562A02细胞48 h,增殖抑制率达(65.63±0.93)％.逆转录-多聚酶链反应和Westemblot结果显示,联合用药后K562细胞的Bcr-abl和Bcl-2基因显著降低,MDR1呈弱表达,无明显变化.而K562A02细胞中,Bcr-abl、Bcl-2和MDR1基因的表达均有明显下调(P＜0.05).结论 伊马替尼联合17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素可有效抑制K562和K562A02细胞增殖和诱导凋亡,两者联合应用具有克服伊马替尼耐药的作用.
关键词： 17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素 伊马替尼 慢性粒细胞白血病 耐药 凋亡 -
131I-17-AAG对荷H460人非小细胞肺癌裸鼠的抗癌效应
目的 观察131I标记17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素(17-KAG)对荷H460人非小细胞肺癌裸鼠移植瘤的抑癌效应.方法 过氧化氢法制备131I-17AAG.建立荷H460人非小细胞肺癌BALB/c裸鼠模型,28只荷瘤裸鼠按随机数字表法分为7组(n=4),瘤内和尾静脉注药各3组,剂量依次为5.5 MBq×2(间隔8 d)、11.0 MSq和5.5 MBq及空白对照组.另设Na131I瘤内给药对照组.8组分别于注药后2,6,24 h及2,3,7,10,16 d各取2只鼠行γ显像.观察肿瘤生长情况,16 d后处死全部小鼠,计算抑瘤率,并做光学显微镜、电镜及免疫组织化学检测.计量数据以x±s表示,采用SPSS 13.0软件进行统计分析.结果 SPECT显像证实131I-17-AAG靶向定位好,能较长时间聚集在瘤体内;各治疗组存在不同程度抑瘤效应,以瘤内间隔给药(5.5 MBq×2)组疗效好,抑瘤率高达(86.77±4.57)%,尾静脉给药5.5 MBq×2组和11.0 MBq组间差异无统计学意义(q=1.67,P>0.05),余各组间抑瘤率差异均有统计学意义(q=3.16～24.34,P均<0.05);形态学显示抑瘤效应越好,瘤组织破坏越明显;免疫组织化学显示瘤内及尾静脉注药组热休克蛋白90(HSP90)a阳性率[分别为(26.01±3.71)%、(61.57±5.98)%]均较空白对照组[(84.13±5.71)%]下降(t值分别为20.91和6.68,P均<0.05).结论 131I-17-AAG能有效抑制裸鼠非小细胞肺癌的生长,以瘤内注药及间隔给药抑癌效应佳.
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131I-17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素对人乳腺癌细胞生长的抑制作用
目的 探讨131I-17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素(17-AAG)对人乳腺癌细胞生长的影响及其相关机制.方法 采用过氧化氢标记法制备131I-17-AAG.细胞杀伤实验分为5组:二甲基亚砜(DMSO)对照(A)组,Na131I 370 kBq(B)组,17-AAG 2.5 mg/L(C)组,131I-17-AAG 370 kBq(D)组,131I-17-AAG 370 kBq+17-AAG 2.5 mg/L(E)组.用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各种药物对人乳腺癌细胞MCF-7的生长抑制作用,流式细胞术分析细胞凋亡及细胞周期变化,RT-PCR检测药物处理前后MCF-7细胞中Akt2基因的mRNA表达情况.结果 131I-17-AAG的标记率为83%,放化纯为96.6%,比活度为1.48×105 MBq/μmol.各组药物对细胞的杀伤呈时间效应,随着时间的延长,细胞的抑制率都呈明显上升趋势,尤以E组趋势明显.A～E组药物作用48 h后,通过亚G1峰检测MCF-7细胞凋亡率分别为(1.54±0.13)%,(5.72±1.05)%,(12.97±1.44)%,(20.65±1.36)%,(35.39±4.15)%,各组细胞凋亡率差异有统计学意义(P均＜0.05).C组,D组及E组Akt2基因的mRNA表达均比A组降低,其中E组降低尤为明显.结论 131I-17AAG能够抑制MCF-7细胞的生长并促进其凋亡,且能有效抑制Akt2基因的mRNA表达,和17-AAG联合应用能够增强肿瘤细胞对放疗的敏感性.
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131I标记热休克蛋白90抑制剂17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素的方法学研究
目的:建立131I标记热休克蛋白90抑制剂17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素(17-AAG)的方法,探讨其标记条件.方法:采用放射性碘标记氯胺-T法标记17-AAG,并研究其在ICR正常小鼠体内的生物分布.结果:131I氯胺-T法标记17-AAG 的佳条件为:17-AAG乙醇溶液40μl(含17-AAG 5μg),0.5mol·L-1磷酸盐缓冲液50μl(pH 7.5),Na 131I溶液20μl,氯胺-T 30μg·(15μl)-1(用pH 7.5的0.05mol·L-1 PB溶解),25℃反应50s,偏重亚硫酸钠40μg·(20μl)-1(用pH 7.5的0.05mol·L-1 PB溶解)中止反应.标记率约为53.1%,经乙酸乙酯纯化后所得标记物的放射化学纯度>90%;其生理盐水溶液4℃放置5d,放射化学纯度大于90%.小鼠尾静脉注射131I-17-AAG后0.5h 131I-17-AAG在胆囊达到高峰(369.44±147.81) %ID·g-1,肝脏中仅有(2.23±0.50)%ID·g-1,说明对肝脏毒性小.结论:热休克蛋白90抑制剂17-AAG的标记方法操作简便,反应时间短.
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17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素对乳腺癌细胞的杀伤作用
目的:对一种热休克蛋白90抑制剂即17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素(17-AAG)对人乳腺癌细胞生长的影响及相关机制进行初步探讨.方法:MTT法检测药物对人乳腺癌细胞SKBr3的生长抑制作用;流式细胞术分析细胞凋亡及细胞周期变化;免疫组化法检测药物处理前后SKBr3细胞中HER2的表达变化情况.结果:17-AAG对人乳腺癌细胞株SKBr3生长有抑制作用,随着用药浓度的增加,抑制作用明显增强,呈明显的剂量依赖性,其IC50浓度为3.09μg/ml.SKBr3细胞经17-AAG处理48h后,流式细胞仪分析可见在0、0.625、1.250、2.500、5.000和10.000μg/ml浓度下,SKBr3细胞的凋亡率分别为(1.03±0.08)%、(3.68±0.67)%、(7.06±1.12)%、(11.23±1.36)%、(20.32±1.98)%和(31.65±2.96)%;G0/G1期细胞分别为58.61%、54.34%、49.55%、43.73%、35.52%和27.46%;S期细胞分别为:29.57%、25.21%、19.65%、22.98%、19.71%和15.46%;G2/M期细胞分别为11.82%、20.45%、30.18%、33.29%、44.77%和57.08%;同时17-AAG处理后的SKBr3细胞人类表皮生长因子受体2(HER2)表达明显减少.结论:17-AAG能够抑制人乳腺癌细胞SKBr3的生长并促进其凋亡,提示17-AAG是一种很有前景的抗肿瘤药物.
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Survivin在PC12细胞对抗化学性缺氧损伤中的作用
目的 探讨存活素(survivin)在PC1_2细胞对抗氯化钴(CoCl_2) 诱导损伤中的作用.方法 应用不同浓度的CoCl2处理PC12细胞不同时间,建立化学性缺氧诱导PC12细胞损伤的实验模型.应用CCK-8比色法检测细胞存活率;Western-blot法检测CoCl_2诱导缺氧与survivin表达间的量效(200～1 000 μmol·L~(-1))和时效(0～48 h)关系.结果 CoCl_2可明显抑制PC12细胞的存活率,且呈浓度和时间依赖性.应用不同浓度CoCl_2处理PC12细胞24 h,在200～600 μmol·L~(-1)浓度范围内,呈浓度依赖性地促进survivin表达,600 μmol·L~(-1) CoCl_2诱导survivin表达达高峰,超过此浓度,则随着CoCl_2浓度的增加,survivin表达逐渐下降,CoCl_2浓度达1 000 μmol·L~(-1)时,survivin基本不表达;应用600μmol·L~(-1) CoCl_2处理PC12细胞,在0～36 h时间范围内,呈时间依赖性地促进PC12细胞survivin的表达,但随着处理时间的延长,survivin的表达逐渐下降;加入2 μmol·L~(-1) Hsp90抑制剂17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素(17-AAG),不仅可以降低600μmol·L~(-1) CoCl_2诱导的survivin高表达,而且加重了600 μmol·L~(-1) CoCl_2对PC12细胞的损伤作用,使细胞存活率降低.结论 survivin表达上调可能是PC12细胞对抗化学性缺氧损伤的内在防御机制之一.
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17-AAG通过抑制Erk信号通路增强奥沙利铂诱导结肠癌细胞凋亡
目的 研究17-AAG与奥沙利铂是否存在协同效应,并探讨PI3K/Akt、Erk信号通路在奥沙利铂联合17-AAG诱导人结肠癌细胞凋亡过程中的作用.方法 四甲基偶氮唑盐比色实验(MTT法)检测17-AAG、奥沙利铂对细胞增殖的抑制作用;流式细胞术分析细胞凋亡情况;Western blot法检测相关蛋白的表达水平.结果 17-AAG能抑制RKO细胞的增殖;17-AAG联合奥沙利铂作用于RKO细胞24 h后,G2/M期细胞比例及凋亡率明显增加;奥沙利铂抑制p-Akt、p-Erk的活化,上调Bax,下调Bcl-2蛋白表达,活化裂解Caspase-3,联合使用17-AAG后可进一步增强上述作用,但对PI3K/Akt信号通路影响不大.结论 本实验表明17-AAG具有增强奥沙利铂诱导结肠癌RKO细胞凋亡的作用,同时也说明17-AAG与奥沙利铂存在协同效应;17-AAG上调Bax,下调Bcl-2蛋白表达及增强奥沙利铂对Erk信号通路的抑制作用可能是其促进凋亡的重要机制之一.
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17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素诱导鼻咽癌细胞凋亡的实验研究
目的:研究17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素(17-allylamino-17-demethoxygeldanamycin,17-AAG)对人鼻咽癌细胞株(Human nasopharyngeal carcinoma cell line,HNE1)增殖抑制和诱导凋亡的作用,探讨17-AAG在鼻咽癌临床治疗中的意义.方法:采用噻唑蓝(Thiazolyl blue,MTT)检测17-AAG对HNE1细胞的增殖抑制作用,流式细胞仪检测细胞凋亡率的变化,Hoechst33528染色观察细胞的凋亡形态学变化并进行核碎片计数.结果:17-AAG抑制HNE1的增殖,诱导了细胞的凋亡,抑制作用具有浓度和时间依赖性.结论:17-AAG可诱导HNE1的凋亡,研究结果对药物治疗鼻咽癌有一定的临床指导意义.
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缺氧条件下 Hsp90抑制剂17-AAG对 RPE细胞整联蛋白连接激酶表达的影响
目的：研究热休克蛋白(heat shock protein 90,Hsp90)抑制剂17-AAG对缺氧诱导的视网膜色素上皮( retinal pigment epithelial,RPE)细胞整联蛋白连接激酶( integrin - linked kinase,ILK)表达的影响。
方法：利用200μmol/L氯化钴( cobalt chloride, CoCl2)建立体外RPE细胞的化学缺氧模型。不同浓度的Hsp90抑制剂17-AAG预处理RPE细胞1 h后给予12 h缺氧处理。实验分为缺氧对照组、二甲基亚砜( DMSO)对照组和17-AAG预处理组。其中17-AAG预处理组根据浓度不同又分为6组：0.01,0.10,0.50,1.00,5.00,10.00μmol/L。应用RT-PCR和Western blot 方法检测ILK表达变化情况。
结果：缺氧对照组、DMSO对照组和17-AAG预处理组ILK mRNA与内参β-actin mRNA 光密度比值分别为1.32依0.04,1.29依0.03,0.93依0.06,0.70依0.05,0.53依0.03,0.44依0.04,0.32依0.04,0.30依0.03；ILK 蛋白与内参β-actin蛋白光密度比值分别为2.16依0.04,2.13依0.04,1.65依0.04,1.13依0.05,0.74依0.03,0.41依0.06,0.35依0.04,0.35依0.03。与缺氧对照组比较,17-AAG预处理组ILK mRNA和蛋白的表达明显降低( P<0.05),呈浓度依赖性。
结论：Hsp90抑制剂17-AAG能够降低缺氧条件下RPE细胞ILK的表达。
