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难治性哮喘的药物治疗
支气管哮喘是由多种细胞(如嗜酸性粒细胞、肥大细胞、T细胞、中型粒细胞、气道上皮细胞)和细胞组分参与的慢性炎症性疾病.这种慢性炎症导致气道反应性增加,通常出现广泛多变的可逆性气流受限,并引起反复发作的哮喘、气急、胸闷或咳嗽等症状,常在夜间或清晨发作、加剧,多数患者可自行缓解或经治疗缓解.
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依巴斯汀片联合消风止痒颗粒治疗慢性荨麻疹疗效观察
慢性荨麻疹是由各种原因导致肥大细胞释放组胺,引起皮肤黏膜和血管发生暂时性充血与大量液体渗出,出现局部水肿性损害的一种常见的过敏性皮肤病.临床表现为经常不定时在全身出现斑块和水肿性皮疹,伴瘙痒、越抓越痒、越抓越水肿、发作次数由数天1次到每天数次不等,病程6周以上,临床治疗难度较大.我所2011年11月-2013年1月应用依巴斯汀片联合消风止痒颗粒治疗68例,取得了较好的临床疗效,现报告如下:
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肥大细胞与皮肤基底细胞癌PCNA表达的研究
目的:探讨肥大细胞在人皮肤基底细胞癌中的意义及对PCNA表达的影响.方法:分别采用免疫组化及改良甲苯胺蓝染色观察24例皮肤基底细胞癌PCNA表达,瘤巢间质肥大细胞数及两者相关性.结果:发现本组病例皮肤基底细胞癌PCNA增殖指数增高,瘤巢间质内肥大细胞均呈脱颗粒状态,其密度占15.80±7.23,与正常对照组相比差异有显著性意义(P<0.01).相关分析表明瘤巢间质内肥大细胞数与肿瘤PCNA表达无相关性(P>0.05).结论:皮肤基底细胞癌组织内肥大细胞增多可以是机体局部抗肿瘤反应形式,但其确切机制不清楚,且与瘤细胞PCNA表达高低无关.
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艾叶挥发油对兔耳痤疮模型的作用及其机制的实验研究
目的 建立兔耳实验性痤疮模型,观察各组兔耳痤疮组织病理学改变、皮肤肥大细胞改变及艾叶挥发油对模型兔的痤疮治疗作用.方法 将2％煤焦油溶液外涂于家兔右耳内侧,2周后按实验步骤随机分为空白对照组、基质组、艾叶挥发油乳膏高、中、低浓度组和0.025％维A酸乳膏对照组共6组.在显微镜下观察各组兔耳痤疮组织病理学改变和皮肤肥大细胞改变.结果 外涂煤焦油2周后,肉眼可见兔耳出现人类粉刺样改变;在光镜下呈现与人类痤疮类似的病理改变;肥大细胞数目明显增多,经艾叶挥发油治疗后有所减少.结论 艾叶挥发油对实验性痤疮治疗效果较好,减轻炎症反应,减少肥大细胞数量.艾叶挥发油治疗痤疮的作用机制可能与抑制肥大细胞增殖、趋化及脱颗粒有关.
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过敏性哮喘的脱敏治疗
支气管哮喘是由肥大细胞、嗜酸性粒细胞和T淋巴细胞等多种细胞参与的慢性气道炎症,这种炎症可引起反复发作的喘息、气促、胸闷和(或)咳嗽等症状,多在夜间和(或)凌晨发生.
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过敏性鼻炎用药有讲究
过敏性鼻炎的治疗除了尽量避免接触过敏源外,主要依靠药物治疗.过敏性鼻炎的对症治疗药物可分为5类,包括抗组胺药、减充血剂、抗胆碱药、糖皮质激素和肥大细胞膜稳定剂等.这些药物的给药途径有口服、滴鼻和鼻腔喷雾等几种.在过敏性鼻炎的治疗中以糖皮质激素和抗组胺药物为首选,而减充血剂、抗胆碱药和肥大细胞膜稳定剂在治疗过敏性鼻炎时多为辅助用药,用于改善某些症状.下面是几种治疗过敏性鼻炎药物的注意事项.糖皮质激素糖皮质激素是治疗过敏性鼻炎的一线药物,特别是对长期暴露于过敏源而引发的延期反应和慢性炎症有效.鼻用皮质类固醇药物发挥作用需要一定的时间,快也要3小时左右,用药时须注意以下事项:1.以早晨用药为好.该药应在30℃以下保存,用药前摇匀.2.激素过敏者要禁用,对于呼吸道结核感染者、儿童、孕妇、哺乳妇女要慎用.
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胎鼠皮肤来源肥大细胞的分离培养和鉴定
目的 分离并诱导培养胎鼠皮肤来源肥大细胞.方法 分离14～16 d胎鼠皮肤细胞并加入重组小鼠白细胞介素3(IL-3)和重组小鼠干细胞因子共同诱导其中的肥大细胞分化成熟.细胞培养14 d后,经密度梯度离心法得到成熟肥大细胞.采用甲苯胺蓝染色或类胰蛋白酶免疫荧光细胞化学染色检测判断肥大细胞纯度,流式细胞术检测IgE的高亲和力受体(FcεRI)和CD117进一步鉴定肥大细胞纯度.结果 培养14 d并纯化后,细胞经甲苯胺蓝及免疫荧光染色可见胞质内大量颗粒,FcεR I+CD117+细胞达97％.结论 成功从胎鼠皮肤分离并获得大量高纯度成熟的肥大细胞.
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人鼻病毒感染肥大细胞促进其凋亡并增加炎性细胞因子释放
目的 研究人鼻病毒(HRV)感染对HMC-1肥大细胞先天免疫应答功能的调控作用.方法 实时定量PCR检测HRV在肥大细胞上的复制水平,流式细胞术检测肥大细胞的凋亡,ELISA检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、α干扰素(IFN-α)、白细胞介素6(IL-6)和IL-8水平.结果 HRV感染HMC-1肥大细胞后,病毒的拷贝数明显升高,凋亡细胞明显增加,TNF-α、IFN-α、IL-6和IL-8释放增加.结论 HRV感染促进肥大细胞凋亡、增加炎性细胞因子释放.
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蛋白激酶CβⅡ(PKCβ2)抑制剂LY333531减少心肌梗死后心肌肥大细胞浸润
目的 探讨蛋白激酶CβⅡ(PKC β2)特异性抑制剂LY333531对心梗后心衰大鼠心肌组织中肥大细胞浸润的影响.方法 利用左冠状动脉降支(LAD)结扎制备大鼠心梗模型,将手术4周后出现心衰的大鼠分为对照组和LY333531治疗组,分别给予生理盐水和LY333531处理6周,同时设置假手术组.检测各组大鼠体质量和各项心功能指标,采用天狼星红染色观察心肌组织胶原沉积情况,甲苯胺蓝染色观察肥大细胞密度,ELISA检测血清中组胺和白细胞介素4(IL-4)的含量.结果 与假手术组大鼠相比,手术后4周心衰大鼠(生理盐水组和LY333531组)左心室短轴缩短率(FS)显著减少,左心室收缩末期内径(LVESD)、左心室舒张末期内径(LVEDD)以及左心室后壁厚度(PWT)明显增加;心肌组织可观察到胶原沉积、肥大细胞浸润,血清中组胺和IL-4的含量增加.与生理盐水对照组相比,经LY333531治疗6周后,FS、.LVESD以及PWT明显改善;但是LVEDD的改善无显著性差别,胶原蛋白沉积降低约50％,心肌组织肥大细胞数减少,血清中组胺和IL-4的含量降低.结论 使用LY333531选择性抑制PKCβ2能够通过抑制心肌炎症反应,改善心梗后心力衰竭模型大鼠心脏功能和抑制病理性心肌重塑.
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IL-33刺激原代培养的小鼠骨髓来源肥大细胞脱颗粒并分泌IL-1β、IL-6及TNF-α
目的 检测白细胞介素33(IL-33)对小鼠骨髓来源肥大细胞(BMMC)脱颗粒及细胞因子分泌的影响.方法 原代培养小鼠BMMC,用(0、10、20、50) ng/mL的IL-33进行刺激,分别收集细胞及培养上清.Western blot法检测c-Kit表达水平;于收集的各IL-23处理组培养上清中分别加入β己糖胺酶底物,通过底物与β己糖胺酶反应所得产物吸光度值,间接测定上清中β己糖胺酶含量.ELISA测定细胞上清液中组织胺含量评估肥大细胞脱颗粒情况;ELISA检测培养细胞上清液中IL-1β、IL-6及肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平.结果 IL-33促进BMMC的c-Kit表达.不同剂量的IL-33作用于BMMC 30 min后,可浓度依赖性地促进β己糖胺酶及组织胺的释放.IL-33作用于BMMC 24 h可促进IL-1β分泌,以50 ng/mL IL-33时作用显著;IL-33可促进IL-6分泌,以50 ng/mL浓度时作用显著;IL-33可促进TNF-α分泌,以20 ng/mL浓度时作用显著.结论 IL-33可刺激BMMC脱颗粒,并分泌IL-1β、IL-6及TNF-α.
关键词： 肥大细胞 白细胞介素33(IL-33) 脱颗粒 细胞因子 -
肥大细胞对布鲁菌S2株的模式识别及活化效应的体外研究
目的 探讨体外培养的肥大细胞对猪布鲁菌S2株的模式识别及活化效应.方法 骨髓来源的肥大细胞在体外感染猪布鲁菌S2株,瑞氏-姬姆萨染色法观察肥大细胞形态学变化,甲苯胺蓝染色法观察肥大细胞脱颗粒情况；间接ELISA检测S2株感染后1h和12 h肥大细胞释放组胺、IFN-γ、IL-12的含量；激光共聚焦显微镜检查肥大细胞对S2株的摄取状态；RT-PCR法观察S2株感染后12h和24h肥大细胞TLR4和TLR8基因的mRNA的表达；流式细胞术观察S2株感染后24h肥大细胞TLR4和TLR8蛋白的表达.结果 感染猪布鲁菌S2株的肥大细胞形态出现了明显的变化,S2株感染后1h即出现明显的脱颗粒现象；S2株感染后1h、12 h肥大细胞上清中组胺含量明显高于正常对照组(P＜0.05),未检测到IFN-γ、IL-12;共聚焦显微镜检查发现感染30 min和1hS2株主要黏附在肥大细胞表面,而未被肥大细胞摄入到细胞内；S2株感染12 h后肥大细胞TLR4mRNA的表达明显高于正常对照组,24h时表达又减弱,和正常对照组相比,S2株感染24 h时肥大细胞TLR4蛋白的表达增加；S2株感染12 h和24 h后肥大细胞TLR8 mRNA和蛋白的表达无变化.结论 S2株能黏附在肥大细胞的表面并能激活肥大细胞,引起其脱颗粒,释放组胺,但在实验观察的时间点内未见IFN-γ和IL-12的分泌,其机制可能是S2株通过TLR4被肥大细胞识别,但不能被肥大细胞摄取.
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鸡胚发育中免疫器官肥大细胞类胰蛋白酶的研究
目的 研究不同日龄鸡胚免疫器官中肥大细胞(MC)与类胰蛋白酶阳性细胞(TPC)的形态、分布及出现时间.方法 取不同日龄鸡胚胸腺、脾脏和法氏囊,用Carnoy's液固定,阿尔新蓝-藏红O复染(AB/SO)法与免疫组织化学SABC法观察MC和TPC的分布.结果 13～14日龄鸡胚的胸腺、法氏囊、脾脏中早出现MC.随着日龄的增加,MC数量逐渐增多.16日龄鸡胚胸腺、脾脏和法氏囊组织中早观察到TPC,且与MC的形态与分布十分相似,但出现的时间晚于MC.结论 16日龄以后的鸡胚免疫器官中的MC内含有类胰蛋白酶,主要存在于结缔组织的MC中.
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TNF刺激肥大细胞IL-6分泌的信号转导通路
目的:检测TNF对肥大细胞IL-6、IL-10分泌和组胺释放的影响并探讨其可能的信号转导途径.方法:用不同浓度TNF激发肥大细胞系P815后收集细胞和上清,细胞用细胞激发信号ELISA(CASE)方法检测信号转导通路蛋白ERK、p38、和STAT3磷酸化水平,上清用ELISA检测组胺、IL-6和IL-10的水平.结果:ELISA结果显示TNF促进P815肥大细胞IL-6分泌(P＜0.05),但对IL-10分泌和组胺释放无明显影响.ERK信号转导通路抑制剂PD98059和U0126抑制TNF引起的P815肥大细胞IL-6分泌(p＜0.05),而p38信号转导通路抑制剂SB203580和STAT3信号转导通路抑制剂AG490不能抑制TNF引起的P815肥大细胞IL-6分泌.CASE结果显示ERK信号转导通路抑制剂PD98059,U0126抑制TNF引起的P815肥大细胞内ERK蛋白磷酸化(P＜0.05)而p38信号转导通路抑制剂SB203580和STAT3信号转导通路抑制剂AG490不能抑制TNF引起的P815肥大细胞内p38和STAT3蛋白磷酸化.结论:TNF刺激小鼠肥大细胞P815分泌IL-6可能与ERK信号转导通路的激活有关的.
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IL-12调节蛋白酶激活受体在肥大细胞的表达
目的:探讨IL-12对肥大细胞蛋白酶激活受体(PARs)表达的影响.方法:不同浓度IL-12刺激肥大细胞后, 在不同时间点, 用实时定量逆转录聚合酶链式反应(q-RT-PCR)和流式细胞术(FCM), 在mRNA水平和蛋白水平检测PAR-1、 PAR-2、 PAR-3和PAR-4在肥大细胞P815表面和胞内的表达情况.结果:IL-12下调肥大细胞膜表面PAR-2蛋白的表达, 上调肥大细胞膜表面和胞质内PAR-4蛋白的表达, IL-12抗体的应用可阻断IL-12对肥大细胞PARs蛋白表达的影响;IL-12上调肥大细胞PAR-1、 3、 4 mRNA的表达, 下调PAR-2 mRNA的表达.结论:IL-12在过敏性炎症反应中的调节作用可能与IL-12调节肥大细胞PARs表达有关.
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组胺、类胰蛋白酶、β-己糖胺酶在肥大细胞体外释放过程中的相互关系
目的:探索组胺、类胰蛋白酶、β-己糖胺酶在肥大细胞体外释放过程中的相互关系,筛选反映肥大细胞体外释放的优指标.方法:肥大细胞体外致敏、激发,分光光度法检测组胺、类胰蛋白酶、β-己糖胺酶3种细胞介质.结果:组胺、类胰蛋白酶、β-己糖胺酶在肥大细胞体外释放的过程中能够实现平行释放,但是组胺的释放不够稳定、重复性较差和另外两种细胞介质相比有统计学差异(P<0.05).类胰蛋白酶和β-己糖胺酶二者释放的相似度较高,稳定性较好,其中类胰蛋白酶在细胞上清中含量高,检测更为容易.结论:以类胰蛋白酶、β-己糖胺酶来反映肥大细胞脱颗粒程度比组胺更精确、更稳定,类胰蛋白酶是优指标.
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大鼠IgE依赖组胺释放因子基因的克隆表达及其功能研究
目的:获得原核表达的可溶性大鼠IgE依赖组胺释放因子(rHRF),并检测其诱发大鼠致敏肥大细胞释放组胺的功能.方法:克隆Wistar大鼠rHRF基因完整编码区序列并在BL21细胞中进行原核表达,纯化的可溶性重组rHRF刺激卵清蛋白变应原致敏的大鼠肺肥大细胞,利用荧光分光光度法测定组胺释放量.结果:测序证实克隆基因与GenBank中大鼠IgE依赖组胺释放因子(又称翻译控制肿瘤蛋白)mRNA序列的一致性为97%,推测的氨基酸序列一致性为95%.SDS-PAGE显示重组rHRF相对分子质量(Mr)约为24 000;重组rHRF诱发大鼠致敏肥大细胞释放组胺不依赖变应原,且呈剂量依赖关系. 结论:rHRF具有不依赖变应原诱发大鼠致敏肥大细胞释放组胺的功能,可能在Ⅰ型超敏反应过程中发挥重要作用,为进一步研究rHRF的免疫学功能打下基础.
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类胰蛋白酶抑制剂对人大肠肥大细胞组胺释放的影响
目的: 研究类胰蛋白酶抑制剂(TPI)对人大肠肥大细胞释放组胺的影响.方法: 大肠组织经胶原酶和透明质酸酶消化后, 将细胞成分用全HBSS重新悬浮.肥大细胞在LP4试管中于37℃条件下与各种刺激剂反应15 min而完成激发过程.激发液中的组胺水平用以玻璃纤维为基础的荧光方法测定.结果: 4种TPI中, 高浓度的亮抑酶肽素和鱼精蛋白可刺激人大肠肥大细胞释放组胺; 而TLCK和乳铁蛋白则无明显的刺激作用.4种TPI均可以剂量依赖的方式抑制抗IgE抗体诱导的大肠肥大细胞释放组胺. 大浓度的亮抑酶肽素(200 mmol/L)、 TLCK(100 mmol/L)、乳铁蛋白(30 mmol/L)和鱼精蛋白(100 mg/L), 可分别抑制48.7%、 36.7%、 40.2%和34.1%的组胺释放.在37℃条件下, 将4种TPI同大肠肥大细胞预培养20 min, 与未进行预培养相比较, 它们对抗IgE抗体诱导的组胺释放无明显改变.4种TPI还可抑制CI诱导的组胺释放, 抑制范围在25%～32%之间.与抗IgE抗体诱导的组胺释放则不同, 与大肠肥大细胞预培养20 min, 与未进行预培养相比较, 亮抑酶肽素和TLCK对CI诱导的组胺释放的抑制作用明显增强; 而鱼精蛋白则无此作用.结论: 我们首次发现TPI可抑制人大肠肥大细胞IgE抗体依赖和非IgE抗体依赖的组胺释放, 提示TPI可望成为炎症性肠病或其他肥大细胞相关疾病治疗的一个新途径.
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特异性脱颗粒肥大细胞的形态学研究
目的观察特异性脱颗粒肥大细胞的形态特征.方法通过抗IgE单抗(抗IgEmAb-HRP)与已致敏的肥大细胞相结合,用 DAB加中性红双染色法对肥大细胞进行染色.结果发现无论肥大细胞是否脱颗粒,只有被IgE致敏的肥大细胞才能被染成棕褐色;而非特异性(即未被IgE致敏的肥大细胞),无论其脱颗粒与否,都呈现中性红的颜色,即胞浆内呈现砖红色的颗粒.结论该实验为评价患者当前所处状态(是高敏体质还是非高敏体质?是疾病缓解期抑或发作期等?)、预测哮喘等 I型变态反应的病程转归、判断疗效,以及进行一些与肥大细胞脱颗粒有关的科学实验,提供了一种新的更客观的方法.
关键词： 特异性脱颗粒 肥大细胞 DAB+中性红双染法 -
细胞因子体外诱导脐带血单个核细胞向成熟肥大细胞分化
目的 分离脐带血单个核细胞并进行体外定向诱导培养,获得人源化、纯度高的成熟肥大细胞.方法 用重组人干细胞生长因子(rhSCF)、重组人白细胞介素6(rhIL-6)定向诱导从脐带血中分离的单个核细胞,使其分化成为成熟的肥大细胞.收集不同时间段的细胞,进行甲苯胺蓝染色并用流式细胞术检测其膜上FcεRⅠ受体,以鉴定其成熟程度.成熟的肥大细胞经过敏原激发后,检测细胞上清中的组织胺及类胰蛋白酶.结果 在加入rhSCF和rhIL-6诱导2周以后,肥大细胞即开始表达FcεRⅠ受体,诱导3周后达到高峰,同时细胞质内嗜碱性颗粒增多.诱导成熟后的细胞经过敏原激发后,能有效释放类胰蛋白酶和组织胺.结论 脐带血单个核细胞可定向诱导成为成熟的肥大细胞,可用于过敏原性的体外评价试验.
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肝组织中Chymase浓度在酒精性肝纤维化中的意义
目的:探讨肝组织中Chynmse浓度在酒精性肝纤维化中的意义.方法:采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测48例酒精性肝纤维化患者肝组织中Chymase浓度,与28例急性肝炎做对比;用免疫组织化学染色法观察Chymase单克隆抗体(mAb)标记的肥大细胞分布情况.结果:酒精性肝纤维化患者肝组织中Chymase浓度为(17.5±4.4)μg/g,明显高于急性肝炎(2.8±1.0)μg/g,P<0.01;免疫组化染色结果,Chymase标记的肥大细胞主要分布于纤维化旺盛的肝细胞周围及中心静脉周围,其分布与纤维化部位相一致,且肝组织中Chymase浓度高的患者,其肝组织内Chymase标记的肥大细胞分布增多.结论:肝组织中Chymase浓度可能与酒精性肝纤维化关系密切.
