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CyclinD1与乳腺癌的相关研究
细胞周期的失调控是乳腺癌进展的一个早期事件,细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)是参与细胞周期进展的重要因素之一,它在正常乳腺组织中正常表达,在乳腺癌组织中过表达,导致细胞周期调控失调,它是参与乳腺癌细胞早期形成和生长的癌基因.乳腺癌中β联蛋白的异常表达可通过Cyclin D1来激活,并且Cyclin D1的过表达与雌激素受体阳性表达呈正相关.Cyclin D1在乳腺癌中的表达情况对乳腺癌的分期、分级、乳腺癌的治疗(包括放疗、化疗、靶向治疗)选择以及预后判断均有重要意义.
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雌二醇通过雌激素受体α／糖原合酶激酶-3β／β联蛋白信号通路调节成骨细胞增殖
目的：研究观察雌二醇对小鼠成骨细胞前体细胞增殖影响并研究经典w nt通路在其增殖过程中的作用。方法本研究利用小鼠胚胎成骨细胞前体细胞Mc3T3‐E1为细胞模型，不同浓度雌二醇处理Mc3T3‐E1细胞，四甲基偶氮唑蓝（MTT ）检测细胞增殖率，蛋白印迹法和免疫荧光技术检测经典W nt信号通路信号分子表达。结果研究表明不同浓度雌二醇处理Mc3T3‐E1细胞，MTT 显示随着雌二醇浓度增加，Mc3T3‐E1细胞增殖率增加，其中以10－7 mol／L浓度处理后细胞获得佳增殖率。蛋白印迹法结果显示随着雌激素浓度增加，小鼠Mc3T3‐E1细胞中p‐GSK‐3β，β联蛋白（catenin），细胞周期蛋白（Cyclin）D1的表达增加。经雌激素受体（ER）α沉默后，相对于空白对照组小鼠Mc3T3‐E1细胞p‐GSK‐3β，β‐catenin及Cyclin D1表达下降，而ERβ沉默后，同对照组相比成骨细胞中各分子表达则无明显变化。结论雌二醇可通过ERα／GSK‐3β／β‐catenin信号通路调节小鼠成骨细胞增殖。
关键词： 雌二醇 M c3 T 3-E1 cell 细胞周期蛋白 β联蛋白 细胞增殖 -
碱性成纤维细胞生长因子调节脑缺血再灌注大鼠海马及顶叶皮质神经元β-Catenin的表达
目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对脑组织缺血再灌注神经元β-Catenin的调节作用及机制.方法:应用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,大脑中动脉阻塞1 h再灌注损伤24 h,采用TUNEL法、免疫组织化学SABC法及显微图像分析检测海马及顶叶皮质内神经元凋亡和β-Catenin的表达.结果:大鼠缺血再灌注海马及顶叶皮质内神经元凋亡数增加而β-Catenin免疫阳性反应产物较正常组增加,注射bFGF后神经元凋亡数减少,β-Catenin免疫阳性反应产物明显多于缺血再灌注组.结论:bFGF抑制缺血神经元凋亡,参与β-Catenin的调节,对缺血神经元有保护作用.
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β联蛋白对过氧化氢诱导人皮肤成纤维细胞增殖活性及凋亡相关基因Bcl-2、Bax表达的影响
目的 观察高表达的β联蛋白对过氧化氢(H2O2)诱导衰老人皮肤成纤维细胞(HSF)增殖活性以及凋亡相关基因Bcl-2、Bax表达的影响.方法 实验分3组.HSF细胞分别转染pcDNA3.1-β联蛋白或空载体pcDNA3.1,然后150 μmol/LH2O2处理2h.噻唑蓝检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞凋亡水平,RT-PCR和Western印迹分析凋亡相关基因Bcl-2、Bax的表达.结果 HSF+空载体组、HSF+空载体+H2O2组、HSF+β联蛋白+H2O2组细胞增殖活性分别为0.792±0.012、0.462±0.012、0.521±0.015,细胞凋亡率分别为(3.407±0.217)％、(24.555±1.793)％、(15.360±0.755)％,各组比较,差异有统计学意义(均P＜ 0.01).HSF+空载体+ H2O2组Bcl-2 mRNA和蛋白水平(与GAPDH mRNA和蛋白的比值分别为0.333±0.003和0.336±0.004)明显低于HSF+空载体组(分别为0.507±0.013和0.514±0.021),两组比较,均P＜ 0.01.HSF+β联蛋白+H2O2组Bcl-2 mRNA和蛋白水平分别为0.404±0.006和0.411±0.005明显高于HSF+空载体+H2O2组,两组比较,均P＜ 0.01.HSF+空载体+H2O2组Bax mRNA和蛋白水平(与GAPDH mRNA和蛋白的比值分别为0.451±0.002和0.460±0.008)明显高于HSF+空载体组,两组比较,均P＜ 0.01.HSF+β联蛋白+H2O2组BaxmRNA和蛋白水平(分别为0.339±0.012和0.346±0.013)明显低于HSF+空载体+H2O2组,两组比较,均P＜0.01.结论 高表达的β联蛋白能够提高衰老人皮肤成纤维细胞增殖活性.
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毛母质瘤中β联蛋白的突变基因分析
目的 探讨β联蛋白的突变基因及其蛋白表达与毛母质瘤发生的关系.方法 选取67例毛母质瘤的组织标本进行β联蛋白的免疫染色,提取基因组DNA,进行β联蛋白的PCR扩增及测序,用克隆、测序及限制性内切酶的方法证实突变的存在.结果 毛母质瘤中嗜碱粒细胞β联蛋白免疫染色阳性率为81%(26/32),β联蛋白外显子3基因突变率为61%(14/23).其突变均位于β联蛋白外显子3的磷酸化位点或邻近位点.结论 β联蛋白的基因突变及其核阳性与毛母质瘤的发生有关.
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β联蛋白和淋巴样增强因子1在恶性黑素瘤中的表达
目的探讨β联蛋白、淋巴样增强因子1在恶性黑素瘤中的表达及意义.方法采用免疫组化PowerVisionTM二步法检测25例皮内痣、45例恶性黑素瘤中β联蛋白、淋巴样增强因子1的表达情况.结果β联蛋白在恶性黑素瘤中异常表达率为73%,皮内痣为36%,两组差异有统计学意义;淋巴样增强因子:1在恶性黑素瘤中阳性表达率为62.2%,皮内痣组为0,两组差异有统计学意义.肿瘤组织中淋巴样增强因子1高表达率与淋巴结转移、TNM分期密切相关(P＜0.05),而β联蛋白异常表达率与淋巴结转移及TNM分期无明显关系;β联蛋白异常表达与淋巴样增强因子1高表达之间存在正相关(P＜0.05).结论β联蛋白、淋巴样增强因子1异常表达可能与恶性黑素瘤发病相关.
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LSD1在神经母细胞瘤细胞中促进β-catenin在胞质中堆积
目的 本研究旨在证实在神经母细胞瘤细胞(neuroblastoma,NB)中赖氨酸特异性去甲基化转移酶1 (1ysine specific demethylase 1,LSD1)促进β-联蛋白(β-catenin)在胞质中堆积,证实LSD1通过激活Wnt通路,从而引起NB细胞的增殖和转移,并探索其分子机制.方法 将对数生长期的293T细胞,接种在6孔培养板上,感染时细胞密度控制在60％～80％,每孔 2×106个细胞.分别配置溶液A:cDNA 10μl+ cDNA质粒转染培养基90μl;溶液B:空载质粒转染试剂5μl+ cDNA质粒转染培养基95 λl,混合溶液A和溶液B,室温放置30 min形成转染复合物,在含有细胞的无抗生素培养基中加入转染复合物使终体积为2 ml.Quantitative real-time PCR(qPCR)检测LSD1在NB细胞株SH-SY5Y细胞中的表达.LSD1慢病毒过表达载体的构建上调LSD1在NB中的表达.Western blot方法检测在SH-SY5Y细胞株调控LSD1表达后β-catenin的变化.免疫组织化学方法检测在SH-SY5Y细胞株调控LSD1表达后β-catenin的变化.结果 利用Western bolt方法检测人上皮细胞、大鼠神经元细胞、NB细胞中LSD1的表达量,人上皮细胞、大鼠神经元细胞、NB细胞三者的灰度值分别为133.87±10.54、135.00±12.48、192.00± 13.23,三组进行单因素方差分析无明显统计学意义(P＞0.05);建立LSD1稳转细胞株前后,SH-SY5Y细胞表达LSD1量有变化,通过qPCR对SH-SY5Y细胞株中的LSD1基因的相对量进行检测,LSD1表达抑制组的阈值循环数为22.003±0.320,转染空白质粒慢病毒载体的SH-SY5Y细胞组的阈值循环数为17.330±1.166,转染LSD1过表达慢病毒载体组的阈值循环数为13.216±0.137三组进行单因素方差分析,差异具有统计学意义(P＜0.01).结论 在神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y细胞中,β-catenin随着LSD1的表达量的变化而变化,两者在SH-SY5Y细胞中的量呈正相关.
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靶向敲低肿瘤转移相关基因1可减缓裸鼠喉鳞癌移植瘤生长并降低其转移能力
目的 通过RNA干扰(RNAi)技术,观察肿瘤转移相关基因1(MTA1)对裸鼠喉鳞癌移植瘤生长和转移能力的影响.方法 设计MTA1的短发夹RNA (shRNA)慢病毒干扰载体,进行包装与转染Hep-2细胞.将无关shRNA对照组和MTA1shRNA感染的Hep-2细胞接种于裸鼠爪垫,每组5只.复制人喉癌移植瘤淋巴转移模型,9周后处死裸鼠,取下肿瘤组织及腹股沟淋巴结,进行HE染色形态学观察,反转录PCR检测MTA1、β联蛋白(β-catenin)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1) mRNA的水平,Western blot法检测MTA1、β-catenin、MMP-9、cyclin D1蛋白水平.结果 慢病毒MTA1干扰载体筛选成功;2组人喉癌裸鼠爪垫移植瘤100％成瘤;MTA1 shRNA转染细胞裸鼠肿瘤体积在同一时间点均明显小于无关shRNA对照组;MTA1 shRNA转染细胞5只裸鼠爪垫肿瘤未发现淋巴结转移;无关shRNA对照组5只裸鼠腹股沟淋巴结切片均可见喉癌细胞;与无关shRNA对照组相比,MTA1 shRNA转染细胞MTA1、β-catenin、MMP-9、cyclin D1的mRNA和蛋白水平明显降低.结论 抑制MTA1基因能够减缓裸鼠喉鳞癌的生长并降低其转移能力.
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Wnt7b/β-catenin信号通路分子在肺泡Ⅱ型上皮细胞转分化过程中的变化
目的 探讨Wnt7b邝联蛋白(β-catenin)信号通路分子在胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(fAEC2)分化过程中的变化.方法 取孕19 d胎鼠肺组织,分离、纯化得到fAEC2.培养细胞48、72、96 h,倒置显微镜观察fAEC2形态变化,免疫荧光染色观察β-联蛋白(β-catenin)的表达,实时定量PCR检测细胞中Wnt7b、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、表面蛋白C(SP-C)和水通道蛋白5(AQP5)的mRNA变化,Western blot法检测cyclin D1、细胞核β-catenin、SP-C、AQP5蛋白的表达.结果 fAEC2培养48 h,β-catenin在细胞膜表达;培养72 h,β-catenin在细胞膜的表达较前减弱,在细胞质、细胞核中表达增强;培养96 h,全细胞β-catenin表达下调.Wnt7b、cyclin D1 mRNA的表达在72 h时显著增高,96 h时下降明显;SP-C mRNA的水平随培养时间的延长逐渐下降,AQP5 mRNA的水平逐渐升高.Cyclin D1、细胞核β-catenin蛋白在72 h时表达上调,96 h时表达下调;SP-C蛋白的表达量逐渐降低;AQP5蛋白的水平逐渐升高.结论 Wnt7b/β-catenin信号通路可能在fAEC2转分化中起重要作用.
