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采用9对引物检测假肥大型肌营养不良症的基因缺失
目的研究快速、准确检测假肥大型肌营养不良(DMD/BMD)基因缺失的方法.方法采用9对引物的多重链式聚合酶反应(mPCR)检测169例DMD/Bmd基因缺失.结果169例患者中85例检测出基因缺失,总缺失率为50.3%.结论9对引物的mPCR在DMD/BMD基因缺失诊断中具有快速、准确、经济、实用等特点,便于推广.
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Duchenne型肌营养不良患儿共患注意缺陷多动障碍的临床分析
目的 评估Duchenne型肌营养不良(DMD)患儿合并注意缺陷多动障碍(ADHD)的共患率,分析相关影响因素及ADHD对DMD患儿生存质量的影响.方法 选取2017年3—10月在武警总医院DMD多学科联合门诊就诊,经基因检测及临床表现确诊为DMD患儿102例.采用美国《精神障碍诊断与统计手册》第4版(DSM-Ⅳ)标准评定DMD患儿是否合并ADHD.采用中文版PedsQLTM3.0神经肌肉疾病模块(PedsQLTM3.0 NMM)和PedsQLTM4.0普适性核心量表对5~7岁的DMD患儿进行生存质量调查.结果 DMD患儿合并ADHD共患率为34.31%(35/102),其中注意缺陷型14例(40.0%),多动/冲动型10例(28.6%),混合型11例 (31.4%).多因素Logistic回归分析结果显示,年龄、主要看护者为祖父母是DMD患儿共患ADHD的影响因素(P<0.05).ADHD组患儿角色功能、心理功能评分均低于无ADHD组(P<0.05).结论 ADHD在DMD患儿中患病率高,年龄和家庭环境因素对共患ADHD有影响,共患ADHD的患儿生存质量较差.
关键词： 肌营养不良 杜氏 注意力缺陷障碍伴多动 生命质量 -
骨髓和脐血间质干细胞联合移植治疗杜氏型进行性肌营养不良症269例疗效研究
目的 观察骨髓间质干细胞(BMSCs)和脐血间质干细胞(CMSCs)联合移植治疗杜氏型进行性肌营养不良症(DMD)的临床疗效.方法 2007年6月-2009年3月对269例DMD患者行自体BMSCs和CMSCs联合移植方案进行治疗,患者均使用重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF),5～10 μg/kg,2次/d,皮下注射动员骨髓干细胞4 d,于第5天行骨髓采集术,局部麻醉下从髂后上棘抽取骨髓100～180 ml.将采集的骨髓液经Ficoll密度梯度离心后,分离单个核细胞2.0×109,用Uitra cul Ture 培养液调节细胞数量为1×105/ml～1×106/ml,接种于75 mm2培养瓶中,24 h换液,7～10 d后收集全部细胞,总数为4.0×108/ml～1.5×109/ml.将BMSCs移植到患者四肢近端肌肉内.采集脐血80～160 ml,Ficoll密度梯度离心,分离单个核细胞并诱导分化为CMSCs.将CMSC(1.0～4.8)×107细胞悬液,经静脉缓慢输注,每5～7 d 1次,共3次.移植后6个月对患者的肌力、步行10 m和推轮椅10 m所需时间、肌酸激酶水平、肌电图等进行观察.结果 269例患者移植后6个月时随访,218例患者(81.0%)肌力有不同程度的增加.干细胞移植后235例患者复查心肌酶谱,其中188例(80%)患者步行10 m及推轮椅10 m所需时间明显缩短,与移植前比较差异有统计学意义(P<0.05),干细胞移植后患者肌酸激酶水平较移植前明显下降(P<0.01).51例患者复查肌电图,32例(62.7%)患者波幅不同程度增高,运动单位增多,多相波减少.47例患者复查大腿肌肉磁共振成像,肌肉影像较移植前变化不明显.结论 BMSCs和CMSCs移植治疗DMD,对肌肉组织有一定的修复作用,使DMD患者的运动功能得到改善,肌力有所提高,肌酸激酶较移植前下降.移植后复查肌电图波幅不同程度增高,运动单位增多,多相波减少.MSCs移植无不良反应,患者依从性好,是治疗DMD的新手段.
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Duchenne肌营养不良研究进展
Duchenne肌营养不良(DMD)是儿童时期常见的严重肌营养不良,为X连锁隐性遗传病,病因为基因突变所致抗肌萎缩蛋白先天缺陷,主要病理过程为肌肉纤维进行性变性、坏死、脂肪填充,可累及多系统.本文就DMD的基因诊断、临床诊断及治疗方面近年来国内外研究进展情况综述如下.
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维生素E新用途三则
治腿肚抽筋腿肚抽筋(腓肠肌痉挛)一般认为由缺钙引发.近年研究证明,中老年人肌营养不良,导致肌纤维兴奋增高,也会引起.
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强直性肌营养不良症的基因诊断
目的 探讨强直性肌营养不良症(DM)1型和2型基因诊断准确和有效的方法.方法 以20例无血缘关系的DM疑似患者为研究对象,应用长模板聚合酶链反应(PCR)扩增和地高辛标记PCR来源的片段作为探针行DNA印迹法杂交诊断DM1型和DM2型患者.结果 确诊4例DM1型患者,未发现DM2型患者,其余患者排除DM1型和DM2型疾病.结论 用长模板PCR扩增和地高辛标记探针行DNA印迹法杂交对受检者进行DM基因诊断的准确性和有效性高,适用性广,对于DM的早期诊断和预防,降低DM发病率有重要价值.
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强直性肌营养不良症的基因诊断
目的 探讨强直性肌营养不良症(DM)1型和2型基因诊断准确和有效的方法.方法 以20例无血缘关系的DM疑似患者为研究对象,应用长模板聚合酶链反应(PCR)扩增和地高辛标记PCR来源的片段作为探针行DNA印迹法杂交诊断DM1型和DM2型患者.结果 确诊4例DM1型患者,未发现DM2型患者,其余患者排除DM1型和DM2型疾病.结论 用长模板PCR扩增和地高辛标记探针行DNA印迹法杂交对受检者进行DM基因诊断的准确性和有效性高,适用性广,对于DM的早期诊断和预防,降低DM发病率有重要价值.
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肌营养不良症一例治验
肌营养不良症,是一组原发于肌肉的遗传性变性疾病.主要临床特征为受累骨骼肌肉的进行性无力和萎缩.目前尚无特殊治疗,基因治疗仍趋实验阶段.我们采用中药、针灸治疗1例肌营养不良患儿,取得满意疗效,现报告如下.
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一例伴肌营养不良乙状结肠癌患者的麻醉体会
患者，男，62岁。身高170cm，体重61kg。因乙状结肠癌入院。40年前四肢肌肉开始萎缩，无力。20年前四肢萎缩无力逐渐加重，以致生活不能自理，不能行走、持物。否认家族有遗传病史，否认有高血压及心脏病史(具体治疗及用……
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镍铬钴混合物对心肌线粒体酶毒性的研究
镍、铬、钴广泛应用于工业生产,它们既是重要的工业元素,又是环境污染物之一.据报道接镍人群的心肌损伤与接镍剂量、时间呈正相关[1];六价铬动物急性毒性可出现心肌退行性变、心肌纤维肿胀、横纹消失[1];急性和亚急性钴化合物中毒的动物,可出现心肌营养不良和灶性心肌炎[2].甘肃富产镍矿,金川矿区矿石镍、铬、钴平均含量百分比为0.26∶0.30∶0.02,矿石中矿物构成以镍、铬、钴含量较高.本文通过对心肌线粒体酶活性的检测.拟从亚细胞水平探讨混合物的心脏毒作用机理,为早期防治镍、铬、钴联合毒性所致的心肌损伤提供理论依据.
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肌营养不良症模型鼠神经元型一氧化氮合酶抑制蛋白的表达及定位
目的:观察肌营养不良症模型鼠(mdx)肌肉组织神经元型一氧化氮合酶抑制蛋白(protein inhibitor of nNOS,PIN)的表达及定位,以及与dys-trophin复合物及神经元型一氧化氮合酶(nNOS)的关系.方法:取mdx鼠(18只,实验组)和C57BL/10ScSn鼠(15只对照组)骨骼肌作常规染色,比较其组织学改变;同时对mdx鼠,C57BL鼠骨骼肌作Northern blot和固定化蛋白质印迹法(Western blot)及免疫组化分析.结果:Northern blot分析发现,mdx鼠肌肉组织PIN mRNA显著高于C57BL/10ScSn鼠,对照组骨骼肌有少量PIN mRNA表达,其杂交斑点A值为1 352.4±219.7,mdx组杂交斑点灰度A值为2 724.2±394.6,两者差异有非常显著性意义(t=11.985,P＜0.05);固定化蛋白质印迹法(Western blot)显示,PIN蛋白的杂交信号在mdx组与对照组均出现在约8 ku处,两者的吸光度平均值(A)几乎相等,mdx组的杂交斑点灰度A值为2 378.2±486.7,对照组PIN蛋白的杂交斑点灰度A值为2 438.5±494.9,两者差异无显著性意义(t=0.352,P＞0.05);免疫组化及激光共聚焦扫描显微镜均揭示,在C57BL/10ScSn鼠肌纤维中,PIN蛋白在肌膜、周边核附近呈强阳性表达,肌质中弱表达,而mdx鼠的PIN蛋白在肌膜及中心核附近呈强阳性表达,细胞质中亦弱表达;PIN于mdx鼠肌纤维表达明显,而nNOS及dystrophin复合物表达明显减少.结论:PIN并非是骨骼肌纤维内dystrophin复合物的一个组成部分;mdx鼠肌纤维PIN的表达受到诸多因素的调控,不同于nNOS及dystrophin复合物.
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骨髓间充质干细胞移植治疗mdx鼠:3个月疗效
背景:干细胞移植治疗肌营养不良症是目前的研究热点,相对造血干细胞移植,间充质干细胞移植风险较小.目的:观察骨髓间充质干细胞移植治疗Duchenne型肌营养不良鼠(mdx鼠)的疗效.方法:4周龄mdx鼠16只,随机分为治疗组与对照组,每组8只,经静脉移植及肌肉局部注射C57BL/6小鼠的骨髓间充质干细胞或等量生理盐水.结果与结论:移植3个月后,治疗组较对照组血清肌酸激酶水平下降,骨骼肌肌膜部分有dystrophin蛋白表达,而对照组检测不到dystrophin蛋白表达.但是两组的运动功能无明显改善.结果初步表明骨髓间充质干细胞移植对mdx鼠有一定的治疗作用,可能使肌细胞膜破坏减少,延缓病情发展.
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在Dystrophin基因大内含子上定位缺失突变位点的策略
目的:探讨在Dystrophin基因大内含子上准确定位缺失突变位点的方法.方法:实验于2005-02/05南方医科大学南方医院神经内科实验室内完成.选择2例临床证实为男性假肥大型肌营养不良症患者,通过外显子聚合酶链反应检测证实其5'端断裂点分别位于Dystrophin基因庞大的44号和2号内含子.在44号和2号内含子上先各设计5对引物将内含子序列人为地分成长度大致均等的6个待查区域,经第一次聚合酶链反应检测确认断裂点所在区域后继续在该区域每3kb序列设计1对引物,在第2次聚合酶链反应步移法检测中若相邻2对内含子引物1对扩增出正常阳性结果而另1对扩增为阴性结果,即为内含子上断裂点的近似位置.结果:以5对初步定位引物进行聚合酶链反应检测后确定以上2例假肥大型肌营养不良症患者5'端断裂点位于44号内含子第5区和2号内含子第6区,在该2个区域进行第二次聚合酶链反应步移法检测,准确定位断裂点分别大致位于44号内含子178kb左右以及2号内含子153kb左右的位点处.结论:分次聚合酶链反应步移法定位Dystrophin基因大内含子上缺失突变位点的方法更为简便,对位于大内含子上基因缺失连接片段的准确快速克隆具有重要意义.
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骨髓间充质干细胞移植后迪谢内肌营养不良模型鼠的肌肉病理学改变
目的:观察骨髓间充质干细胞移植治疗迪谢内肌营养不良模型鼠后肌肉病理改变,及迪谢内肌营养不良致病基因dystrophin蛋白表达变化.方法:实验于2003-07/2004-07在华中科技大学同济医学院同济医院神经科实验室进行.取4～6周龄C57BL/6雄性小鼠的股骨和胫骨,采用密度梯度分离和贴壁培养相结合的方法分离培养骨髓间充质干细胞.①正常组:2周龄C57BL/6小鼠4只,不干预.②对照组:2周龄mdx鼠4只,左后腿腓肠肌注射50μL磷酸盐缓冲液.③移植组:2周龄mdx鼠4只,左后腿腓肠肌注射50 μL骨髓间充质干细胞细胞悬液(约1×106).16周后3组小鼠麻醉下取左腿腓肠肌中部肌肉,苏木精-伊红染色后观察核内移肌纤维占总肌纤维百分率,及dystrophin免疫组化染色计算阳性纤维与总肌纤维百分率.结果:12只小鼠均进入结果分析.①核内移肌纤维占总肌纤维百分率:正常组肌纤维少核内移(1.2%);对照组肌纤维大小不等,大量核内移(75%);移植组肌纤维核内移明显减少(23.3%).②dystrophin染色阳性纤维与总肌纤维百分率:正常组为100%,移植组显著高于对照组(75%,23.3%).结论:骨髓间充质干细胞移植治疗迪谢内肌营养不良模型小鼠mdx,可使其骨骼肌细胞膜骨架蛋白dystrophin恢复,肌肉病理改变好转,且疗效持续到治疗后4个月以上,提示骨髓间充质干细胞移植对mdx小鼠治疗有效.
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毛细管电泳定量聚合酶链反应法对杜氏/贝氏进行性肌营养不良携带者的评估价值
目的:评估毛细管电泳定量聚合酶链反应法对杜氏/贝氏进行性肌营养不良携带者的诊断价值.方法:于2002-05/2004-02选择杜氏/贝氏进行性肌营养不良家系女性成员10例为观察对象,为携带者组,来自中山大学附属第三医院神经科门诊收集的杜氏/贝氏进行性肌营养不良男性患儿7例的家系(编号A-G),其中一级亲属9例(患儿母亲、同胞姐妹),二级亲属1例;以健康青年女性10例为对照组.用毛细管电泳定量分析7例杜氏/贝氏进行性肌营养不良家系中的10例女性亲属和10名正常对照的18对引物的二步多重聚合酶链反应产物,计算计量系数(DQ值).DQ=(携带者组检测峰面积/参照峰面积)/(对照组检测峰面积/参照峰面积).若DQ值约等于1.0,受检位点外显子为双拷贝;若DQ约等于0.5,受检位点外显子为单拷贝,据此判断为携带者.结果:纳入受检者20例,均进入结果分析.①杜氏/贝氏进行性肌营养不良患儿基因缺失类型:患儿A缺失外显子45～50;患儿B缺失外显子45;患儿C缺失外显子51;患儿D缺失外显子51;患儿E缺失外显子45～48;患儿F缺失外显子45～52;患儿G缺失外显子12,13.②毛细管电泳结果表明家系成员AⅡ1,BⅡ1,DⅡ1,GⅡ1(均系患儿的母亲)在缺失位点上的峰较对照组相应位点上的峰明显降低.而家系成员AⅡ2(患儿姨母),CⅡ1,EⅡ1,FⅡ1(患儿母亲),FⅢ1,GⅢ1(患儿姐妹)在缺失位点上的峰较对照组相应位点上的峰一样高.③毛细管电泳定量分析表明AⅡ1在外显子45,47,48,50处的DQ值为其余位点的一半,系单拷贝,故判断AⅡ1缺失外显子45～50;其他受检者BⅡ1缺失外显子45;DⅡ1缺失外显子51;GⅡ1缺失外显子12,13,毛细管电泳对AⅡ1,BⅡ1,DⅡ1,GⅡ1定量诊断的基因缺失位点与其先证者的基因缺失位点一致,故诊断为肯定携带者.结论:毛细管电泳定量聚合酶链反应法是一种准确、快速、简便的杜氏进行性肌营养不良携带者的诊断方法.
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杜氏肌营养不良的治疗进展
杜氏肌营养不良(Duchenne muscular dystrophy,DMD)是常见的X连锁隐性遗传性肌肉病,以进行性、致残、致死性为特点.DMD目前尚无治愈方法.经典的糖皮质激素治疗,结合康复锻炼及多学科综合管理可有效延缓病程、延长患儿存活期,但不能改变患儿结局.新型细胞治疗如骨髓间充质干细胞移植有一定作用,但存在多种并发症且疗效不确定;骨骼肌卫星细胞移植后细胞存活及迁移的问题尚未解决.基因治疗是目前有前景的DMD治疗手段.传统的研究方法包括病毒介导的mini-或micro-DMD基因替代技术、外显子跳跃技术.基因编辑技术CRISPR/Cas9有望彻底治愈DMD.此外,DMD治疗新靶标如Jaggedl基因、P2RX7基因,以及小分子疗法如ARM210、SMT C1100也有一定疗效.该文就DMD的治疗进展进行综述.
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反义寡核苷酸在杜氏肌营养不良基因治疗中的应用
杜氏肌营养不良(DMD)是一种致死性X染色体连锁隐性遗传病,发病率高,患者多在30岁左右因心力衰竭和呼吸衰竭而死亡.近年来,在众多对DMD基因治疗方案中,反义寡核苷酸凭借其在肿瘤治疗和病毒控制中显示出的良好应用前景而受到研究人员的关注,他们利用反义寡核苷酸诱导基因中的特异外显子缺失以调控突变基因的表达,以此达到恢复具有功能的抗肌萎缩蛋白表达,并使DMD得到控制和治愈的目的.
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假肥大型肌营养不良基因携带者检测方法的研究进展
假肥大型肌营养不良(DMD)在儿童神经肌肉系统疾病中发病率高,预后差,目前尚无有效的治疗方法,故携带者的检出对预防患儿出生具有重要意义.传统的检测方法漏诊率高,使用有限,近年来在基因检测方面取得了一定进展.文章主要介绍假肥大型肌营养不良基因携带者的基因检测方法,并将携带者分为缺失型和非缺失型分别进行综述.
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进行性肌营养不良患儿肌肉标本金属蛋白酶组织抑制剂-1的表达及临床意义
目的探讨金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)在进行性肌营养不良(PMD)发病中的作用.方法中国医科大学附属第一医院等单位于2002年4月至2003年3月,借助免疫组织化学、双免疫荧光标记和Western印迹分析的方法,检测Duchenne型肌营养不良(DMD)、Becker型肌营养不良(BMD)和先天性肌营养不良(CMD)患儿活检肌肉标本中TIMP-1的表达和细胞定位.结果免疫组织化学和双免疫荧光标记结果显示TIMP-1在正常肌肉的血管内皮细胞处表达;免疫组织化学和Western印迹分析均显示在PMD萎缩的肌肉中TIMP-1的表达明显增强;双免疫荧光标记进一步显示TIMP-1在再生肌肉纤维、巨噬细胞和巨噬细胞浸润的坏死纤维中明显表达,DMD和CMD肌肉中的肌内膜和肌束膜中某些激活的成纤维细胞也强烈表达TIMP-1.结论在PMD病变部位TIMP-1产生增多及其分布类型提示TIMP-1可能参与了PMD的发病.
关键词： 肌营养不良 金属蛋白酶组织抑制剂-1 -
杜氏肌营养不良携带者的诊断与早期干预
杜氏肌营养不良(Duchenne muscular dystrophy,DMD)是儿童常见的遗传性肌肉病,患儿常在成年后死于心肺并发症,目前尚无有效治疗手段,准确的患者和携带者基因检测和产前筛查,是根本上降低发病率的关键所在.
