小鼠尾静脉注射与心肌注射腺病毒载体转染效率的比较

目的：比较小鼠尾静脉注射或心肌注射腺病毒载体后心脏组织和肝脏组织中靶基因的转染效率。方法构建表达绿色荧光蛋白 GFP 的腺病毒载体（GFP－Ad）。 C57BL／6小鼠20只随机分为尾静脉注射腺病毒载体组与心肌注射腺病毒载体组各10只，用实时定量 PCR 检测不同时间点小鼠心肌组织和肝脏组织中 GFP 的mRNA 表达水平，并且通过荧光显微镜观察 GFP 荧光表达情况。结果心肌注射腺病毒载体组心脏组织中 GFP 的mRNA 表达水平明显高于尾静脉注射腺病毒载体组，心肌注射腺病毒载体组心脏组织中荧光强度明显增强。同时，我们发现两组的肝脏组织中 GFP 的 mRNA 表达水平和荧光强度均明显高于心脏组织中；且在尾静脉注射腺病毒载体组，肝脏组织中 GFP 的 mRNA 表达水平和荧光强度在7 d 达高峰，而心肌注射腺病毒载体组则在3 d 达高峰。结论提高心脏组织中靶基因的转染效率宜采用心肌注射腺病毒载体的方法；对于肝脏组织转染效率，两种注射方法均可，鉴于尾静脉注射腺病毒载体的方法创伤小，宜采用。

单层间质干细胞移植成功修复大鼠心肌梗死后瘢痕心肌

心肌梗死可导致心肌组织的丢失和左室功能的下降,为心功能衰竭的主要原因之一.修复瘢痕心肌对于心功能衰竭的治疗有着重要意义.虽然已有研究发现心肌注射骨髓干细胞可以促进心肌再生,但很难在梗死变薄的瘢痕区重建足够的心肌容量.间质干细胞(MSC)为存在于骨髓微环境的多能成年干细胞,除了能分化成为格根包尔氏细胞、软骨细胞、神经元和骨骼肌细胞外,也能分化为血管内皮细胞和心肌细胞.MSC可从脂肪组织中分离.日本大阪国立心血管中心研究所Yoshinori Miyahara为首的学者从脂肪组织分离培养MSC并采用细胞板技术研究单层MSC对于心肌梗死后心肌重建治疗的可行性,研究结果发表于近期的《自然医学》杂志(Nature Medicine,2006,12:459-465).

超声引导下经胸穿刺心肌注射血管生成素1基因联合超声靶向破坏微泡治疗犬心肌梗死疗效及安全性评价

目的 超声引导下经胸穿刺心肌注射血管生成素1 (Ang1)基因联合超声靶向破坏微泡(UTMD)转染犬梗死心肌,评价其疗效及安全性.方法 39只杂种犬随机平分为3组(每组13只):①心肌梗死(心梗)组(心梗造模但未经治疗);②静脉注射组(心梗造模后经静脉注射+UTMD);③心肌注射组(心梗造模后经胸超声引导下心肌注射+UTMD).4周后比较各组犬的存活率及常见并发症发生率;超声心动图测量左室内径和收缩功能;Masson染色评价梗死纤维化程度;免疫荧光CD31评估新生毛细血管密度;Western blotting检测Ang1蛋白表达量.结果 ①三组间存活率及并发症比较,差异无统计学意义(P＞0.05);②与心梗组比较,静脉注射组左室收缩末期内径(LVESD)减小,左室射血分数(LVEF)增大,心肌注射组左室舒张末期内径(LVEDD)和LVESD均减小,LVEF增大(均P＜0.05);③心肌注射组较心梗组和静脉注射组纤维化程度减轻,新生毛细血管数量明显增多(P＜0.05);④Ang1蛋白表达量在心肌注射组较心梗组和静脉注射组增加,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 超声引导下经胸心肌注射联合UTMD是一种安全、有效的基因转染方式,其介导Ang1转染可促进心肌血管新生,改善左室功能.

自体骨髓单个核细胞在心脏介入治疗的应用及护理

急性心肌梗死导致大量心肌细胞变性、坏死,使心脏功能受损.病人早期进行血管重建有助于减少梗死区面积,保护心功能,显著降低早期病死率并改善预后.但是心肌梗死后心功能下降甚至心力衰竭仍是目前的主要问题.所以心肌梗死的近期病死率虽有降低,但远期病死率却未见明显改善[1].2001年以来,国外已经尝试利用心肌梗死病人自体骨髓单个核细胞对急性心肌梗死病人进行辅助治疗并取得了和动物实验一致的疗效.细胞注入途径包括经冠状动脉移植[2,3]、经心外膜心肌注射和经心内膜心肌注射[4].在国外成功经验的基础上利用冠状动脉造影导管将自体骨髓单个核细胞直接注入到病人的病变冠状动脉血管内,目前来自临床的报道显示,接受自体骨髓细胞移植的心肌梗死病人症状改善、梗死部位灌注增加、心功能恢复,而且没有发现明显的不良反应[5].

心肌注射碱性成纤维细胞生长因子促进犬侧支血管形成的实验研究

自体干细胞移植治疗心血管疾病的研究进展

冠心病、心肌梗死、高血压病、心肌病、心瓣膜病等心血管疾病的终结局都是心力衰竭,其共同特点是有完整舒缩功能的心肌细胞数量相对和绝对减少,受损心肌由纤维组织瘢痕修复[1],患者对于常规的药物治疗反应性极差,心脏移植虽能代替受损心脏,但供体难以选择,费用高,临床难以推广.如果能够在体外培育出大量可以转化为心肌细胞的干细胞,并把这些细胞通过静脉注射、经导管从心内膜向心肌注射或开胸直接注射的方法移植给心脏病患者,并使之具有成熟心肌细胞功能,在心脏中发挥作用,就能使患者的心功能得以恢复.自体干细胞移植因无免疫排斥及伦理道德之争等特点,因而具有更为广阔的应用前景.

大鼠气管插管直视下心肌注射方法

目的:建立大鼠气管插管后开胸直视下心肌注射模型,探讨心血管疾病治疗研究的新兴方法.方法:大鼠开胸后心肌内注射腺相关病毒,并与同期对照组比较,观察大鼠术后存活率、一般状况及病毒感染情况.结果:手术组术后存活率84%,心肌切片可见荧光.结论:该法有效且重复性好,可较理想的将药物注射入心肌,对治疗心血管疾病的相关研究有重要意义.

CTRP3通过抑制Smad3通路和肌成纤维细胞转化减轻心肌梗死后心肌纤维化

目的：观察CTRP3在心肌纤维化中的作用并探讨其可能的分子机制。方法：结扎冠状动脉左前降支制备大鼠心肌梗死模型，采用马松三色法评价心肌纤维化程度；培养大鼠心肌成纤维细胞，采用real－time PCR与免疫印迹法检测纤维化相关指标。结果：心肌梗死大鼠心脏CTRP3表达水平降低；心肌注射腺病毒过表达CTRP3可以减轻心肌梗死引起心肌肥大，抑制间质纤维化，减少肌成纤维细胞数量。 CTRP3孵育心肌成纤维细胞可以显著抑制TGF－β1诱导的SMA表达，减少结缔组织生长因子、胶原I和胶原III的生成。 siRNA敲低CTRP3的表达进一步增加TGF－β1诱导的SMA和胶原分子的表达。 CTRP3激活大鼠心脏和培养的成纤维细胞中AMPK的磷酸化；AMPK抑制剂AraA预孵育可消除CTRP3抑制TGF－β1诱导的Smad3磷酸化、核转位以及与p300结合的作用，逆转CTRP3的抗纤维化作用。结论：CTRP3通过激活AMPK抑制TGF－β1诱导的Smad3核转位和与p300的结合，抑制肌成纤维细胞表型转化，从而抑制心肌梗死大鼠的心肌纤维化。

单宁酸缓释微球延缓大鼠心室重构的实验研究

目的 探讨单宁酸(tannic acid,TA)缓释微球心肌注射对急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)后心室重构的影响. 方法 制备TA缓释微球,检测其体外释放药物参数.制备大鼠心肌梗死模型,将80只大鼠按随机数字表法分为空白微球组[聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)组,n=24]、TA缓释微球(PLGA-TA)组(n=24)、TA组(n=16)和生理盐水(NS)组(n=16).术后用超声心动图评价心功能；术后4周,观察心肌梗死边缘组织的心肌细胞外基质(ECM)排列；术后2周和4周,测定心肌梗死区胶原蛋白含量. 结果 TA持续从微球载体中释放1个月.术后2周PLGA-TA组、TA组的左心室射血分数(LVEF)、左心室短轴缩短率(LVFS)、左心室舒张期末内径(LVEDD)和左心室收缩期末内径(LVESD)指标均明显优于其它两组(P＜005)；术后4周,PLGA-TA组的LVEF、LVFS、LVEDD、LVESD指标均明显优于其它3组(P＜0.05).术后4周PLGA-TA组心肌ECM排列较TA组更为有序整齐.术后4周PLGA-TA组的心肌梗死区胶原蛋白含量高于TA组[(88.88±7.28) μg/mg心肌干重vs.(72.43±9.02) μg/mg心肌干重]、PLGA组[(88.88±7.28) μg/mg心肌干重vs.(71.97±6.06) μg/mg心肌干重]和NS组[(88.88±7.28)μg/mg心肌干重vs.(68.86±7.55) μg/mg心肌干重],差异有统计学意义(F=7.162,P=0.003)；而TA组、PLGA组、NS组之间比较差异无统计学意义(P＞0 05). 结论 TA缓释微球心肌注射可较长时间遏制AMI后ECM的降解,有效延缓心室重构的发生.