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蝎毒多肽提取物对人卵巢癌SKOV3细胞增殖及血管内皮生长因子和凝血酶敏感蛋白表达的影响
目的 观察蝎毒多肽提取物(简称蝎毒多肽)对人卵巢癌SKOV3细胞增殖及血管内皮生长因子(VEGF)、凝血酶敏感蛋白(TSP-1)表达的影响,进一步探讨蝎毒多肽的抗肿瘤作用机制.方法 MTT法检测蝎毒多肽对SKOV3细胞增殖的影响；免疫细胞化学法及Western blotting测定蝎毒多肽对SKOV3细胞VEGF、TSP-1蛋白表达的影响.结果 蝎毒多肽12.5～200 μg/mL对SKOV3细胞增殖有抑制作用,且呈明显的质量浓度相关性,质量浓度大于50 μg/mL时细胞增殖抑制作用显著(P＜0.01).随着蝎毒多肽质量浓度的增加,SKOV3细胞TSP-1蛋白表达增加,VEGF蛋白表达下降(P＜0.01).结论 蝎毒多肽能显著抑制VEGF的表达,促进TSP-1的表达,其抗肿瘤作用机制可能是通过抑制肿瘤细胞增殖、影响肿瘤细胞血管生成过程中关键因子的表达来实现的.
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HOTAIR通过靶向抑制miR-519d促进人卵巢癌SKOV3细胞增殖
目的 研究HOTAIR对人卵巢癌SKOV3细胞增殖的影响以及可能机制.方法 使用LipofectamineTM2000试剂将HOTAIR过表达慢病毒载体以及HOTAIR沉默慢病毒载体分别稳定转染SKOV3卵巢癌细胞后,应用Real-time PCR验证其转染效率;应用CCK-8法检测HOTAlR对人卵巢癌SKOV3细胞增殖的影响;应用Real-time PCR检测人SKOV3卵巢癌细胞中miR-519dmRNA表达变化.应用双荧光素酶报告基因验证HOTAIR和miR-519d存在靶向结合并明确其结合位点.结果 和对照组相比,HOTAI过表达显著促进了人卵巢癌SKOV3细胞的增殖,极大降低了miR-519d在SKOV3细胞中的mRNA水平;HOTAIR和miR-519d存在靶向结合,并明确了其结合位点;miR-519d过表达显著抑制了人卵巢癌SKOV3细胞增殖能力;miR-519d过表达有效阻断了HOTAI促进SKOV3细胞增殖的作用.结论 HOTMR能够通过靶向抑制miR-519d,提高人卵巢癌SKOV3细胞的增殖能力.
关键词： HOTAIR miR-519d 增殖 人卵巢癌SKOV3细胞 -
莪术油注射液致人卵巢癌SKOV3细胞胀亡形态变化研究
目的 研究莪术油注射液对人卵巢癌SKOV3细胞形态学改变的影响.方法 以不同的药物浓度作用人卵巢癌SKOV3细胞株后,采用光学显微镜和透射电镜观察卵巢癌SKOV3细胞形态学变化.结果 光镜下可见莪术油低浓度组部分细胞体积开始变大,细胞胞浆空泡化,胞浆内出现致密颗粒,细胞核开始变形.细胞胞泉出现大面积的空泡,细胞核变形明显,细胞质出现颗粒脱落,出现细胞质空泡,核内染色质分散.高浓度组细胞肿胀,胞浆减少,核浆比例增加,细胞质大量颗粒脱落,细胞质空泡明显,有胞膜崩解、细胞核溶解;电镜下可见卵巢癌SKOV3细胞胀亡,且呈浓度依赖性.结论 莪术油注射液诱导SKOV3细胞胀亡是其抑制肿瘤细胞生长的机制之一.
关键词： 莪术油注射液 人卵巢癌SKOV3细胞 形态变化 胀亡 -
岩大戟内酯B对人卵巢癌Skov3细胞的增殖抑制作用
目的 探讨岩大戟内酯B(JB)对人卵巢癌Skov3细胞的增殖抑制作用及可能机制.方法 采用不同浓度的JB处理卵巢癌Skov3细胞48 h,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测Skov3细胞的增殖抑制率,Hoechst法检测Skov3细胞凋亡指数,Western blot检测Akt、P-Akt(Ser473)、Bax、Caspase-3和Bcl-2蛋白水平.结果 0.1,1.0,5.0,10.0,20.0,50.0μmol/L的JB可呈剂量依赖的方式抑制Skov3细胞的增殖,IC50为5.28μmol/L;20.0 μmol/L JB和30.0 μmol/L LY294002(PI3K抑制剂)均可增加Skov3细胞凋亡指数,降低P-Akt(Ser473)/Akt水平,增加促凋亡基因(Bax、Caspase-3)的蛋白水平,降低抑制凋亡基因(Bcl-2)的蛋白水平,且均与对照组有显著差异;而LY294002可增强JB的效应,且与JB组有显著差异.结论 JB可抑制人卵巢癌Skov3细胞的增殖,促进细胞凋亡,可能是通过抑制PI3K/Akt信号通路和诱导死亡受体表达来发挥抗肿瘤作用的.
关键词： 岩大戟内酯B 人卵巢癌SKOV3细胞 增殖抑制 PI3K/Akt途径 -
胡桃醌对人卵巢癌SKOV3和IOSE80细胞增殖和侵袭的抑制作用及其机制研究
目的:研究胡桃醌对人卵巢癌SKOV3和IOSE80细胞增殖和侵袭的抑制作用,并从信号通路深入探讨其作用机制.方法:体外培养人卵巢癌SKOV3细胞和IOSE80细胞,给予不同浓度的胡桃醌溶液干预,MTT比色法检测细胞增殖,划痕实验检测细胞迁移,Transwell检测细胞转移,流式细胞术检测细胞凋亡,Western Blot检测AKT、ERK、NF-κB信号通路蛋白表达,RT-PCR检测波形蛋白(vimentin)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9) mRNA表达.结果:不同浓度胡桃醌可抑制SKOV3细胞和IOSE80细胞增殖活力,降低细胞侵袭能力,加速细胞凋亡,且随浓度的增加对细胞增殖、侵袭和凋亡的作用越明显,差异均有统计学意义(P＜0.05).不同浓度胡桃醌均可抑制SKOV3细胞和IOSE80细胞AKT、ERK、NF-κB信号通路蛋白的表达,且随浓度的增加信号通路蛋白表达减少,差异均有统计学意义(P＜0.05).不同浓度胡桃醌均可减少SKOV3细胞和IOSE80细胞Vimentin、MMP-2、MMP-9 mRNA的表达,且随浓度的增加mRNA表达减少,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:胡桃醌可抑制SKOV3和IOSE80细胞体外增殖、转移,促进凋亡,其机制与抑制AKT、ERK、NF-κB信号通路表达和下调Vimentin、MMP-2、MMP-9mRNA表达有关.
关键词： 人卵巢癌SKOV3细胞 胡桃醌 细胞增殖 侵袭 信号通路 -
柚皮苷对人卵巢癌SKOV3细胞环氧化酶2mRNA及蛋白表达水平的影响
目的:研究中药柚皮苷对人卵巢癌SKOV3细胞环氧化酶2(COX-2)mRNA及蛋白表达水平的影响.方法:常规培养人卵巢癌SKOV3细胞,分为空白对照组、柚皮苷10 μmol/L组、柚皮苷20 μmol/L组、柚皮苷40 μmol/L组、阳性对照组(塞来昔布80 μmol/L).MTT法测定柚皮苷对人卵巢癌SKOV3细胞增殖的影响,运用Real-time PCR和Western Blot法测定培养48 h后各组细胞中COX-2 mRNA和蛋白表达水平的变化.结果:MTT检测法显示,柚皮苷各浓度处理组,时间依赖性和剂量依赖性地抑制人卵巢癌SKOV3细胞生长.经药物处理48 h后,Real-time PCR结果显示,与空白对照组(1.094±0.053)比较,10、20 μmol/L柚皮苷即对SKOV3细胞COX-2 mRNA表达抑制作用(0.828±0.006,0.753±0.011,P＜0.05),而40μmol/L柚皮苷则明显下调COX-2 mRNA的表达(0.412±0.216,P＜0.01),与塞来昔布组(0.321±0.017)的抑制程度相近.Western Blot法检测结果显示,与空白对照组(1.7325±0.0826)相比,10 μmol/L柚皮苷组相对表达量(1.7925±0.0880)虽略有上调,但无统计学差异,20、40 μmol/L柚皮苷组均可明显下调SKOV3细胞COX-2蛋白的表达(1.2225±0.0822,1.2725±0.0763,P＜0.05),塞来昔布组也明显抑制COX-2蛋白的表达.结论:柚皮苷可抑制人卵巢癌SKOV3细胞体外增殖并抑制COX-2 mRNA和蛋白的表达.
关键词： 柚皮苷 环氧化酶2 人卵巢癌SKOV3细胞 -
慢病毒介导干扰 LSD1基因的卵巢癌稳转细胞株的构建及鉴定
目的：构建并鉴定慢病毒介导干扰赖氨酸特异性去甲基化酶1（ LSD1）基因的卵巢癌稳转细胞株，为深入研究以LSD1为靶点的表观遗传学抗肿瘤治疗奠定基础。方法扩增并抽提所需质粒，紫外分光光度计检测质粒纯度，计算A260／A280。采用Lipofectamine 2000脂质体转染法将质粒转染入人肾上皮细胞293T，取转染THM质粒后的293T细胞，在倒置荧光显微镜下观察转染情况；分别取转染目的质粒和PLKO空载体质粒后的293T细胞，收集病毒上清液，感染人卵巢癌SKOV3细胞（分别记为观察组和对照组），筛选出稳转细胞株。观察组经浓度梯度（0、1、10、100、1000 ng／mL）多西环素诱导，以及两组均经100 ng／mL多西环素诱导后，采用Western blotting法检测LSD1及其特异性反应底物H3K4me1、H3K4me2蛋白相对表达量。结果目的质粒A260／A280在2．0左右，说明纯度较高；THM质粒转染293T细胞呈绿色荧光，为真核载体表达的绿色荧光蛋白，表明成功转染。随着多西环素浓度的升高，观察组诱导后LSD1蛋白相对表达量均逐渐降低，H3K4me1、H3K4me2蛋白相对表达量逐渐升高，各浓度间比较有统计学差异（P均＜0．01）。观察组经100 ng／mL多西环素诱导后LSD1蛋白相对表达量均明显低于同组诱导前及对照组诱导后，H3K4me1、H3K4me2蛋白相对表达量明显高于同组诱导前及对照组诱导后（P均＜0．01）。结论成功构建慢病毒干扰下调LSD1基因表达的卵巢癌稳转细胞株，并经不同浓度多西环素诱导鉴定；该细胞株可用于以LSD1为靶点的表观遗传学抗肿瘤治疗研究。
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莪术油注射液对人卵巢癌SKOV3细胞体外生长的影响
目的 探讨莪术油注射液对人卵巢癌SKOV3细胞株体外生长的影响.方法 以不同的药物浓度作用人卵巢癌SKOV3细胞株后,采用MTT法检测对其抑制增殖作用,并通过倒置显微镜观察细胞形态学变化.结果 莪术油注射液可明显抑制SKOV3细胞的生长,其抑制率与药物浓度、作用时间呈量-效、时-效关系;倒置显微镜观察到细胞密度明显减少,胞体变长,细胞内颗粒感增强,细胞界限模糊,胞浆减少, 细胞脱落呈悬浮状,存活细胞减少,细胞核出现裂解,可见细胞碎片,随着莪术油作用浓度的增加上述现象更加明显.结论 莪术油注射液对人卵巢癌SKOV3细胞株具有明显抑制作用.
关键词： 莪术油注射液 人卵巢癌SKOV3细胞 抑制增殖 -
活体成像动态观察黄芪多糖对裸鼠卵巢癌细胞休眠的维持作用
目的:利用活体成像技术观察黄芪多糖对裸鼠卵巢癌细胞休眠的维持作用.方法:选取建立成功的卵巢癌细胞休眠裸鼠模型30只随机分成3组:即对照组、黄芪多糖组、顺铂组,每组10只,连续给药14天;利用活体成像系统分别在给药前1天、给药后第7天、第14天监测各组裸鼠卵巢癌细胞休眠情况.结果:与对照组比较,黄芪多糖组给药后第7天、第14天,裸鼠体质量无明显变化;而顺铂组在给药后第7天、第14天,体质量明显降低,差异均有统计学意义(P＜0.01).对照组裸鼠卵巢癌休眠细胞光子量随着时间而升高.与对照组比较,黄芪多糖组和顺铂组在给药第7天、第14天时,裸鼠肿瘤休眠细胞光子量明显降低,差异均有统计学意义(P＜ 0.05,P＜0.01).结论:黄芪多糖具有较好的维持裸鼠卵巢癌细胞休眠的作用,活体成像技术可动态地观察肿瘤细胞休眠的情况,为黄芪多糖应用于临床提供理论依据.
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异甘草素诱导人卵巢癌细胞株SKOV3凋亡及自噬的研究
目的：观察异甘草素（ISL）对人卵巢浆液性乳头状腺癌细胞株SKOV3体外增殖的抑制作用，并探讨其可能存在的分子机制。方法四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法观察ISL对SKOV3细胞生长的抑制作用；吖啶橙／溴化乙锭双荧光染色后观察细胞形态变化；流式细胞术AnnexinⅤ‐FITC／PI双染检测ISL对细胞凋亡的影响；Westernblot检测凋亡相关蛋白Bcl‐2、Bax及自噬相关蛋白Beclin1、LC3的表达水平。结果ISL能够抑制SKOV3细胞的增殖，呈时间、剂量依赖性；荧光染色后可见细胞核变圆，碎裂，染色质浓缩；流式细胞仪检测ISL（5、10、20μg／mL）作用于SKOV3细胞48h后，凋亡率明显高于ISL0μg／mL组，差异具有统计学意义（P＜0．05）；Westernblot结果显示ISL（5、10、20μg／mL）作用于SKOV3细胞48h后Bcl‐2蛋白的表达下调，Bax、Beclin1、LC3蛋白的表达上调，差异有统计学意义（P＜0．05）。结论ISL对人卵巢癌SKOV3细胞具有明显的抑制增殖和诱导凋亡的作用，其抗体外肿瘤机制可能与激活线粒体凋亡通路及自噬通路相关。
关键词： 卵巢肿瘤 异甘草素 人卵巢癌SKOV3细胞 凋亡 自噬 -
紫草素对人卵巢癌细胞SKOV3细胞增殖和凋亡的影响
目的:研究紫草素对人卵巢癌SKOV3细胞的影响,并对其机制进行初步研究.方法:以不同浓度的紫草素干预人卵巢癌SKOV3细胞,采用MTT法观察紫草素对肿瘤细胞增殖的影响;流式细胞术检测经紫草素干预48 h后SKOV3细胞的凋亡情况和细胞周期,并以Western blot法测定Bax及Bcl-2蛋白表达.结果:紫草素(0.5,1.0,2.0,4.0,8.0,16.0 μg/ml)经过24h,48 h及72 h对肿瘤细胞增殖的抑制率分别为6.90％,12.11％,20.82％,30.20％,41.69％,56.81％;7.28％,12.16％,20.18％,40.81％,51.23％,70.51％;10.50％,15.90％,28.16％,46.86％,59.01％,78.58％,呈剂量依赖性和时间依赖性的关系.流式细胞术检测结果显示,人卵巢癌SKOV细胞经紫草素(3.0,6.0,12.0 μg/ml)处理48 h后,其凋亡率分别为20.58％,35.10％及51.26％,G0/G1期细胞的比例分别62.10％,63.91％及83.86％.Western blotting检测结果显示,人卵巢癌SKOV细胞经紫草素(3.0,6.0,12.0μg/ml)处理48 h后,Bcl-2蛋白水平表达随紫草素浓度递增减少,而Bax蛋白水平随紫革素浓度递增而递增.结论:紫草素可抑制人卵巢癌细胞SKOV-3的体外增殖并诱导其凋亡,其机制可能为上调Bax表达和下调Bcl-2表达有关.
关键词： 紫草素 人卵巢癌SKOV3细胞 增值 凋亡
