首页 > 文献资料
-
KIR3DL1基因在92例造血干细胞供者中的表达
目的 研究造血干细胞供者NK细胞表面的KIR3DL1表达水平.方法 对92例造血干细胞供者采用序列特异性引物PCR、基因测序法进行KIR和HLA基因分型,流式细胞术检测KIR3 DL1的表达,并分析不同KIR基因型、单倍型、KIR/HLA受配体模式组KIR3 DL1表达水平的差异性.结果 92例供者中KIR-A/A、Bx1、Bx2基因型的频率分别为46.74％ (43/92)、18.48％(17/92)、9.78％(9/92);KIR-A、B1、B2、B3单体型频率分别为70.33％(128/182)、10.99％(20/182)、7.14％(13/182)、4.39％(8/182);KIR3DL1识别HLA-BW4/BW4、HLA-BW4/BW6、HLA-BW6/BW6配体的频率分别为13.79％、67.81％、18.39％ (P＜0.001).在基因型KIR-A/A、KIR-A/B、KIR-B/B组KIR3DL1的中位表达水平分别为18.77％(3.11％～49.24％)、13.14％(1.70％～63.32％)、0.37％(0.20％～2.60％),两两比较差异均有统计学意义(P＜0.05).KIR-A/A组KIR3DL1的中位表达水平高于KIR-Bx基因型且着丝粒端2DL2阴性组[11.20％(3.50％～36.08％)] (P=0.019).KIR3DL1识别HLA-BW4/BW4纯合和HLA-BW4/BW6杂合组KIR3DL1中位表达水平[17.61％(1.40％～49.24％)]高于HLA-BW6/BW6纯合不识别组[10.60％(3.50％～18.56％)] (P=0.006).结论 KIR3 DL1的表达水平在不同KIR基因型、单倍型以及不同HLA配体组中均存在差异.
-
转录因子E2F1调控KIR3DL1基因表达的分子机制
目的 研究转录因子E2F1对KIR3DL1基因启动子转录活性的影响,明确其调控KIR3DL1基因表达的分子机制.方法 采用PCR方法 从K562细胞基因组DNA中扩增突变型KIR3DL1基因启动子序列,将产物连接到pGL3-Basic荧光素酶载体,构建报告重组子;采用染色质免疫共沉淀方法 检测E2F1与KIR3DL1启动子在细胞内的结合;采用阳离子脂质体SuperFect包裹突变型和野生型KIR3DL1启动子-荧光素酶报告重组子,然后转染K562细胞,染色质免疫共沉淀方法 检测E2F1与重组子在细胞内的结合,双荧光素酶检测试剂盒测定荧光素酶活性;将E2F1真核表达载体与野生型KIR3DL1启动子-荧光素酶报告重组子共转染K562细胞,双荧光素酶检测试剂盒测定荧光素酶活性.结果 成功构建突变型KIR3DL1启动子-荧光素酶报告重组子,测序证实,在K562细胞KIR3DL1启动子区1个潜在的转录因子E2F1结合位点有1个自然发生的点突变(TTTGGCGC→TTCGGCGC);E2F1完全不能与K562细胞中突变型KIR3DL1启动子结合,但能与NK-92MI细胞中没有突变的野生型KIR3DL1启动子结合;突变型KIR3DL1启动子.荧光素酶报告重组子保留了部分与E2F1的结合能力,但其相对荧光素酶活性较野生型降低了50%;共转染E2F1真核表达载体使野生型KIR3DL1启动子-荧光素酶报告重组子的相对荧光素酶活性增加为对照组的2倍以上.结论 转录因子E2F1参与调控KIR3DL1基因转录激活,E2F1结合位点上CpG二核苷酸的数量和甲基化模式可能影响转录因子E2F1与靶序列的结合.
-
两种不同HLA-B分子对NK细胞表面受体表达的研究
目的:探讨两种HLA-B分子(HLA-B51和HLA-B39)对NK细胞表面活化性受体CD16和抑制性受体KIR3DL1表达的调节.方法:采用流式细胞仪检测NK细胞分别与转染HLA-B51和HLA-B39分子的K562细胞相互作用后,CD16和KIR3DL1的表达情况.结果:外周血淋巴细胞与K562细胞作用24小时后,CD56+CD16+细胞数、KIR3DL1+细胞数均明显增加.与表达HLA-B39的K562细胞相比,表达HLA-B51的K562细胞与外周血淋巴细胞作用后,CD56+CD16+细胞数、KIR3DL1+细胞数均明显下降.结论:NK细胞杀伤靶细胞时,活化性受体CD16表达上调后会伴有抑制性受体KIR3DL1的上调;HLA-B51分子表达在K562细胞后,表达外源性HLA-B51分子的K562细胞与NK细胞作用,NK细胞表面受体KIR3DL1的表达可下调,同时伴有CD16的表达下调.
-
实时定量 PCR 检测 KIR 转录水平的方法构建
目的：构建可定量检测杀伤细胞免疫球蛋白样受体（KIR）转录水平的方法。方法筛选 KIR3DS1和KIR3DL1保守区特异性引物，利用 RT-PCR 和熔解曲线法对引物特异性进行检验，建立可定量的标准内参，应用SYBR Green RT-PCR 方法检测标本中 KIR3DS1和 KIR3DL1的 mRNA 含量。结果通过电泳和实时定量 PCR 的熔解曲线明确了 KIR3DS1和 KIR3DL1引物，其特异性好，无杂带。应用 TA 克隆建立的 KIR 定量标准品线性关系好，可检测待测物的范围大。应用临床标本可检测出两组标本有显著差异，符合临床预期。结论本文建立的 KIR mRNA 定量检测方法，可以定量检测活化和抑制性 KIR，可以进一步研究不同疾病进展的机制以及预测疾病的临床转归。
-
KIR3DL1分子遗传多态性及其与疾病关联的研究进展
杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIRs)是表达于人类NK细胞和部分T细胞表面的一类重要受体，KIR分子配体主要为HLA-I类分子，二者共同调节NK细胞的活性。 KIR基因家族包含了14个功能性框架基因和2个假基因。功能性KIR3DL1框架基因编码抑制型受体，该受体与靶细胞表面的HLA-Bw4-80I结合，传导抑制信号；其分子遗传多态性主要体现在等位基因、单倍型组成、群体差异等不同水平层次。当前KIR3DL1常规检测方法包括序列特异性引物-PCR(PCR-SSP)、流式磁珠序列特异性寡核苷酸探针(Flow-rSSO)分析及测序分型技术(PCR-SBT)。迄今已发现KIR3DL1框架基因与乙型肝炎、HIV-1感染等病毒感染性疾病相关联。
-
宫颈癌与KIR3DL1基因的相关性研究
目的 探讨宫颈癌与KIR3DL1基因的相关性.方法 采用序列特异性引物-聚合酶链反应(PCR-SSP)及Touchdown-PCR方法 扩增KIR3DL1基因.结果 病例组KIR3DL1基因频率显著低于对照组(P<0.05).结论 KIR3DL1基因缺失可能与宫颈癌的发生存在相关性.
-
HIV感染后CD4+T细胞表面NK相关受体表达的变化
目的 研究人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)感染后CD4+T细胞表面NK相关受体表达的变化.方法 选取25例未经高效抗逆转录病毒治疗的HIV感染者、11例AIDS患者、15例进行高效抗逆转录病毒治疗(highly active antiretroviral therapy,HAART)者和13例HIV抗体阴性健康对照,用流式细胞仪检测研究对象外周血CD4+T细胞表面NKG2D、NKG2A和KIR3DL1的表达.结果 AIDS患者CD4+T细胞表面NKG2D表达的百分比显著高于其他各组,且NKG2D表达的百分比与CD4+T细胞的绝对数量呈负相关(R=-0.352,P＜0.05),与HIV病毒载量呈正相关(R=0.426,P＜0.05).AIDS患者CD4+T表面NKG2A表达的百分比显著高于其他各组,NKG2A+NKG2Dˉ表达的百分比显著高于其他各组,且NKG2A表达的百分比与CD4+T细胞的绝对数量呈负相关(R=-0.432,P＜0.01).结论 HIV感染机体后,CD4+T细胞NK相关受体表达变化与疾病进展相关.
-
HIV感染后CD8+T细胞表面NK相关受体表达的变化
目的 深人了解人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)感染后CD8+T细胞表面NK相关受体表达的变化.方法 选取25例未经高效抗逆转录病毒治疗的HIV感染者、11例AIDS患者、15例进行高效抗逆转录病毒治疗highly active antiretmviral therapy,HAART)者和13例HIV抗体阴性健康对照,用流式细胞仪检测研究对象外周血CD8+T细胞表面NKG2D、NKG2A和KIR3DL1的表达.结果 、HIV感染后CD8+T细胞表面NKG2D表达的百分比显著低于健康对照,NKC2D+NKG2A-表达的百分比随疾病进展逐渐下降,且NKC2D+NKG2A-表达的百分比与CD4+T细胞的绝对数量呈正相关.AIDS患者CD8+T细胞表达NKG2A显著高于其它各组,随着疾病的进展CD8+T细胞表达NKG2A+NKG2D-百分比逐渐上升,AIDS患者显著高于其它各组,经抗逆转录病毒治疗后下降至健康对照的水平,且NKG2A+NKG2D-表达的百分比与CD4+T细胞的绝对数量呈负相关.HIV感染后CD8+T细胞KIR3DL1+表达的百分比较健康对照并无显著差异.结论HIV感染机体后,CD8+T细胞NK相关受体表达变化与疾病进展相关,抗病毒治疗后可恢复其变化.
-
HLA-Bw4及其KIR与宫颈癌的相关性研究
目的 了解江苏汉族人群HLA-Bw4及其相应的抑制性杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)和激活性KIR与宫颈癌是否存在关联性.方法 收集117例宫颈内皮样瘤变3级(CIN3)/宫颈癌患者和124例相匹配的无血缘关系健康女性外周血标本,采用PCR-SSP方法进行HLA-Bw4检测和SYBR Green Ⅰ real-time PCR方法进行KIR3DL1和3DS1分型,分析HLA-Bw4及其KIR在2组人群间的差异.结果 宫颈癌组与对照组相比,HLA-Bw4、KIR3DL1和3DS1的频率分布无显著性差异(P＞0.05).HLA-Bw4与KIR3DL1和3DS1形成的不同配对组合在病例组与对照组中的频率分布,差异也无统计学意义(P＞0.05).结论 江苏汉族人群HLA-Bw4及其KIR3DL1和KIR3DS1可能与宫颈癌的发生无关.
-
云南汉族和蒙古族人群中KIR3DL1基因功能性亚型分析
目的 分析汉族和蒙古族人群中KIR3DL1功能性等位基因的分布特征,探讨不同民族和地理环境因素与KIR3DL1等位基因分布的关联性.方法 采用PCR-SSP法检测云南地区360例汉族和108名蒙古族、内蒙古地区48名蒙古族的KIR3DL1功能性等位基因,比较KIR3DL1功能基因亚型在不同民族和不同地区的分布特征.结果 在云南的蒙古族和汉族之间,低表达等位基因KIR3DL1* 007的携带率分别为45.54％和30.56％,KIR3DS1* 013分别为3.70％和23.89％,分布有显著差异;在云南和内蒙古的蒙古族之间,无表达等位基因KIR3DL1* 004的携带率分别为7.14％和37.50％,低表达等位基因KIR3DL1* 005分别为2.86％和16.67％,功能等位基因分布有显著差异;高表达等位基因型KIR3DL1* 001和*016在云南和内蒙古民族人群之间无明显差异.结论 KIR3DL1基因功能亚型的分布在不同民族之间、以及同一民族不同地区之间的分布呈现明显差异,KIR3 DL1功能等位基因多态性分布特征与民族源流相关,并可能与环境选择因素相关.
