首页 > 文献资料
-
单细胞二重巢式PCR扩增影响因素初探
目的: 对影响单细胞二重巢式PCR扩增的因素进行初步探讨.方法:针对β-珠蛋白基因CD41-42、IVS-Ⅱ654突变位点区域采用二重巢式PCR,分别以不同的引物浓度组合、不同的Taq DNA聚合酶、不同的中和缓冲液、PCR反应前采用或不采用98 ℃预变性扩增单个淋巴细胞和/或单卵裂球,了解这些因素对PCR扩增效率的影响.结果: 不同的引物浓度组中,终浓度为0.25 μmol/L R1+F1引物对与 0.3 μmol/L R2+F2引物对配对扩增效率高;不同的Taq DNA聚合酶中TaKaRa EX Taq的扩增效率高;中和缓冲液-1(200 mmol/L Tricine)的扩增效率显著高于中和缓冲液-2(900 mmol/L Tris·HCl, pH 8.3/300 mmol/L KCl/200 mmol/L HCl)的扩增效率(P<0.05);单细胞PCR反应前采用98 ℃预变性与不采用98 ℃预变性的扩增效率间差异无统计学意义.结论:不同引物浓度组合、不同的Taq DNA聚合酶、不同的中和缓冲液对单细胞的二重巢式PCR的扩增效率存在明显差异,而PCR反应前采用98 ℃预变性不能提高PCR扩增效率.
-
孕妇外周血胎儿游离DNA应用于β地中海贫血产前诊断
目的：探讨孕妇外周血胎儿游离DNA在β地中海贫血产前诊断中的应用情况。方法选取2011年3月～2013年3月到妇产科进行产前诊断的妊娠妇女中选取28例作为研究对象，并对妊娠妇女采取常规的基因诊断以及胎儿游离DNA检测。结果穿刺诊断结果显示，正常例数为9例，杂合子例数为12例，双重杂合子例数为7例；胎儿游离DNA检测结果显示，IVS-Ⅱ-654突变基因的携带者共有11例，检测结果为阴性的例数共有16例，实验失败的有1例。结论在产前诊断中应用胎儿游离DNA检测β地中海贫血是可行的，然而母源性的游离DNA会对检测结果有所影响。
-
重型β地中海贫血的输血治疗研究进展
地中海贫血(简称地贫)是一种世界范围内严重的公共卫生问题,在我国以广东、广西为高发区域.重型β地贫是由于β珠蛋白生成减少或缺失导致d珠蛋白链不平衡积累而产生的无效造血或溶血性贫血,为严重致死性疾病.患者出生3～6个月即开始出现慢性进行性溶血,并伴随发育迟缓、面色苍白、肝脾肿大等症状,随着病情的加重继而出现骨骼的膨胀,如果不输血治疗,其寿命只有5岁.尽管重型β地贫患者经规范输血治疗后寿命明显延长,但反复输血致使铁过载而发生甲状腺功能减退、糖尿病、性功能低下等并发症.规范的祛铁治疗能减轻患者的铁负荷,但是长期祛铁又严重影响患者的生活质量,故依从性较差.近年来,使用造血干细胞移植技术对重型β地贫的治疗取得一定的效果,是目前唯一根治重型β地贫的医疗手段.地贫患者进行干细胞移植后的生活质量明显高于传统的输血与祛铁治疗的患者,但仍然存在移植后发生各种危及生命的并发症以及治疗费用昂贵的问题.
-
1071例地中海贫血基因筛查结果分析
目的 了解来我院就诊的地中海贫血(简称“地贫”)筛查患者地贫基因类型并分析平均红细胞体积(MCV)、平均红细胞血红蛋白含量(MCH)在地贫筛查中的应用价值.方法 对2015年12月～2016年9月来我院就诊的1071例地贫筛查患者采用裂口PCR(gap-PCR)扩增法检测α地贫基因以及PCR-反向斑点杂交(PCR-RDB)技术检测β地贫基因,血细胞分析仪分析904例患者外周血的MCV、MCH.结果①1071例检测样本中男性556例,检出地贫230例(41.37％);女性515例,检出地贫238例(46.21％),不同性别组检测阳性差异无统计学意义(x2=2.55,P＞0.05).②儿童组(0～16岁)360例,检出地贫174例(48.33％);青壮年组(17～49岁)651例,检出地贫278例(42.7％);老年组(≥50岁)60例,检出地贫16例(26.67％),不同年龄组检测阳性差异有统计学意义(x2=10.48,P＜0.01).③1071例样本共检测α地贫293例(27.36％),其中以αα/--SEA、-α3.7/αα、αα/-α4.2基因型为主,占α地贫的93.86％;检测β地贫157例(14.66％),其中以CD41-42、IVS-Ⅱ-654、-28、CD71-72、CD17基因型为主,占β地贫的82.81％;α地贫复合β地贫18例,比例为1.68％.④MCV用于α地贫、β地贫和αβ复合型地贫的筛查的灵敏度分别为91.18％、99.21％、92.31％,特异度为54.18％;MCH用于α地贫组、β地贫组和αβ复合型地贫组的筛查的灵敏度分别为94.12％、99.21％、100.00％,特异度为51.90％;MCV+MCH用于α地贫组、β地贫组和αβ复合型地贫组的筛查的灵敏度分别为89.08％、99.21％、84.62％,特异度为49.24％;MCV与MCH的灵敏度差异无统计学意义(x2=1.77,P＞0.05),特异度差异无统计学意义(x2=0.55,P＞0.05).结论 1071例地贫患者中α地贫中以αα/--SEA基因型为常见,β地贫中以ββCD41-42基因型为常见,在地贫筛查中,MCV+MCH用于筛查效果好.
关键词： α地中海贫血 β地中海贫血 平均红细胞体积 平均红细胞血红蛋白含量 -
β地中海贫血伴椎管内髓外造血一例报告及文献复习
患者 女,24岁,半年前无明显原因出现双侧下肢乏力,感觉麻木,并进行性加重.患者既往有8地中海贫血史,父母及家人均体健.
-
β地中海贫血基因突变类型的研究及产前诊断
目的开展β地中海贫血的基因分析及产前基因诊断.方法应用PCR-RDB技术,完成了54例β地贫患者及双亲共216条染色体的基因突变类型及频率数据.并进行8个家庭的8例β地贫高风险胎儿的产前诊断.结果8例被检胎儿中4例为一种突变类型的杂合子,2例为双重杂合子,2例为正常胎儿.有6例出生后基因分析验证结果与产前诊断完全一致.结论显示,进行产前诊断能较准确地控制重型β地贫患儿出生,对实行优生具有重要意义.
-
高效液相层析法检查β地中海贫血应用评价
目的对高效液相层析法快速筛查β地中海贫血进行评价.方法用高效液相层析法测定血中血红蛋白A2(HbA2)、血红蛋白F(HbF)的含量,并与抗碱变试验法测得HbF、琼脂糖电泳法测得HbA2的含量进行比较;取低、中、高三种浓度值的标本进行重复性试验;在HbF含量为3.5%、5.7%和HbA2含量为5.9%、7.7%的两份标本中加入不同浓度的胆红素液及脂肪乳作干扰试验;与已知HbF浓度为33.0%和1.1%的两份标本按不同比例混合,分别进行测定,观察该法测定的线性范围.结果该法测定HbF与抗碱变试验法结果相符、HbA2与琼脂糖电泳法有良好相关(r=0.8656);HbF的线性范围可达33%;HbF和HbA2批内变异系数分别为1.5%～3.4%和3.7%～5.9%,批间变异系数分别为1.9%～4.2%和4.9%～7.5%;胆红素浓度在250μmol/L,甘油三酯浓度在22mmol/L以下时对测定结果无影响.结论高效液相层析法测定HbF和HbA2具有准确度高,重复性好,不受脂浊、黄胆标本的干扰,且检测速度快,对β地中海贫血具有较好的初筛作用.
-
构建反义RNA表达载体对β-地中海贫血进行基因治疗研究
β地中海贫血(简称β地贫)是常见的、严重危害人民身体健康的遗传性血液病,在我国南方(两广地区)的发病率约为1%.该病目前尚无有效的根治方法,患者只有依赖定期输血才能维持其生命,但输血过度将引起铁质大量沉积,终导致心力衰竭而过早地夭亡.因此,探索β地贫治疗途径是疾病防治工作的一项重要任务.
-
多重巢式聚合酶链反应在β地中海贫血植入前遗传学诊断中的应用
目的探讨应用多重巢式聚合酶链反应(PCR)技术在β地中海贫血(简称β地贫)植入前遗传学诊断(PGD)中的应用.方法获取β地贫基因携带者单个淋巴细胞,建立了稳定的单细胞多重巢式PCR检测技术,可同时检测β珠蛋白基因及与β珠蛋白基因紧密连锁的HumTHO1基因,并对4例已出生的重型β地贫患儿及双方均为β地贫基因携带者的夫妇应用多重巢式PCR进行了β地贫的PGD.结果利用单细胞多重巢式PCR,可以同时检测中国人常见的16种β地贫突变类型,单个淋巴细胞平均扩增效率为91.3%,平均等位基因脱扣(ADO)率为17.0%.对4对夫妇进行4个周期PGD,共活检33个胚胎,获得33个卵裂球,其中30个卵裂球扩增成功,扩增效率为90.9%,ADO率为13.3%.26个胚胎经PCR分析后获得明确诊断,移植了8个胚胎,获得1例临床妊娠.孕17周时经脐带血穿刺,证实为完全正常胚胎,现已出生1名正常女婴.结论应用单细胞多重巢式PCR技术可对β地贫进行植入前遗传学诊断,达到优生目的.
-
α和β地中海贫血无创产前诊断研究进展
地中海贫血是我国南方地区常见的一种单基因遗传病，难以治愈且代价昂贵，通过穿刺术采集高风险胎儿的遗传物质进行产前基因诊断，防止重型患儿出生是国内外公认的首选措施。通过穿刺手术采集绒毛、羊水或脐带血而获取胎儿遗传物质进行产前诊断的有创性操作，可能造成胎儿损伤、流产或宫内感染等。自从母体血浆中发现存在胎儿DNA，以此胎儿遗传物质为检测靶标的无创产前诊断技术迅速发展。基于此类游离胎儿DNA的无创产前诊断更安全，且易于被受试者接受，也避免了获取胎儿遗传物质的创伤性操作导致的不必要风险。综述地中海贫血无创产前诊断的技术策略及其应用。
-
武汉地区儿童β地中海贫血基因突变类型分析
目的 探讨武汉地区儿童β地中海贫血致病基因分布情况.方法 选择2013年1月至2015年1月在武汉市妇女儿童医疗保健中心就诊的经血细胞分析筛选出的疑似β地中海贫血患儿274例,其中男性178例,女性96例:年龄6个月～ 14岁,平均年龄为2.83岁.采集用乙二胺四乙酸二钾盐(EDTA)抗凝静脉血,提取白细胞DNA,采用PCR寡核苷酸探针反向斑点杂交法(PCR-RDB)进行β地中海贫血基因检测,对基因突变位点和基因型进行分析.结果 274例β地中海贫血初筛患儿中确诊152例,检出率为55.47％(152/274).共检出9种等位基因突变,分别为IVS-2-654、CD41-42、CD17、CD43、CD71-72、CD27-28、-28、-29、CD26;3种常见的突变位点IVS-2-654、CD41-42、CD17分别占到全部等位基因突变的43.81％(85/194)、23.20 ％(45/194)、12.89 ％(25/194).共检出26种β地中海贫血基因型,9种单纯杂合子110例(占72.37％,110/152),13种双重杂合子36例(占23.68％,36/152),4种纯合子6例(占3.95％,6/152).结论 β地中海贫血是武汉地区贫血患儿的重要原因之一;武汉地区β地中海贫血患儿以IVS-2-654位点的突变为常见.
-
红细胞指数鉴别轻型β地中海贫血和缺铁性贫血的作用评价
目的 评估红细胞指数对鉴别婚育年龄轻型β地中海贫血和缺铁性贫血患者的作用,并利用这些指数建立基于反向传播(BP)人工神经网络的诊断模型以提高预测准确率.方法 选择310例轻型β地中海贫血患者,其中男性131例,女性179例,年龄23～37岁,中位年龄25岁;125例缺铁性贫血患者作为对照,其中男性52例,女性73例,年龄20～ 34岁,中位年龄24岁.采用7种公式计算红细胞指数,分析它们对轻型β地中海贫血的预测灵敏度、特异度和约登指数.以此7种公式的计算值作为参数在MATLAB7.0程序上实现BP人工神经网络诊断模型.结果 轻型β地贫血红细胞和血红蛋白(Hb)水平比缺铁性贫血高,平均红细胞体积(MCV)、平均红细胞血红蛋白(MCH)比后者低.7种指数中,Green and King指数(GKI)对轻型β地中海贫血的预测灵敏度(90.6％)及约登指数(78.6％)高.BP人工神经网络诊断模型对轻型β地中海贫血的诊断准确率为96.77％.结论 GKI用于鉴别轻型β地中海贫血和缺铁性贫血可靠性相对较高.采用全部7种鉴别指数建立起来的BP人工神经网络诊断模型可明显提高轻型β地中海贫血的诊断准确率.
关键词： 红细胞 β地中海贫血 缺铁性贫血 反向传播(BP)人工神经网络 -
广东地区β地中海贫血复合缺失型α地中海贫血双重杂合子检出率
目的研究广东地区β地中海贫血(地贫)杂合子复合α地贫双重杂合子的检出率.方法采用反向点杂交法(RDB)诊断β地贫杂合子500例并进一步采用Gap-PCR法进行α地贫1基因检测,用α珠蛋白基因探针Southern印迹杂交限制性核酸内切酶酶谱分析法对其中400例β地贫杂合子进行缺失型α地贫2基因检测.结果在500例β地贫杂合子中,查出43例合并α地贫1(αα/--SEA),400例β地贫杂合子中有26例合并α地贫2, 其中17例为右侧缺失(αα/-α3.7),9 例为左侧缺失(αα/-α4.2).结论广东地区β地贫杂合子复合α地贫1的检出率为8.6%,复合α地贫2的检出率为6.5%,其中复合右侧缺失型α地贫2的检出率为4.2%,复合左侧缺失型α地贫2的检出率为2.2%.
-
大剂量环磷酰胺治疗β地中海贫血合并重型再生障碍性贫血一例报告附文献复习
目的 分析1例β地中海贫血合并重型再生障碍性贫血(SAA)患者的临床特征及治疗方法,以提高对该类疾病诊治方法的认识.方法 分析1例因全血细胞减少就诊患者的临床资料,并进行相关文献复习.结果 患者,女,14岁,自幼贫血,此次急性起病,血常规检查示WBC 1.28×109/L,HGB 65 g/L,PLT 18×109/L,网织红细胞计数2×109/L,中性粒细胞0.03 × 109/L,红细胞平均体积59.6 fl.骨髓液涂片检查示增生减低,粒系占0.010,红系占0.170,成熟红细胞胞体小,中心淡染区扩大,全片未见巨核细胞,外周血涂片易见靶形红细胞.DNA杂交方法检测β地中海贫血基因显示为17号杂合子(c.52 A＞T).确诊为β地中海贫血合并SAA,给予大剂量环磷酰胺(HD-CTX,1.2 g/d×4d)联合环孢素治疗12个月,患者达完全血液学反应.结论 该例患者为国际上首例报道β地中海贫血合并SAA,经HD-CTX联合环孢素治疗达完全血液学反应.
-
一种新的β地中海贫血基因突变类型的分子诊断和产前基因诊断
目的 对产前地中海贫血筛查确诊为β地中海贫血的一对夫妇进行β珠蛋白基因突变分析,并对胎儿进行产前基因诊断.方法 根据血常规和血红蛋白分析进行地中海贫血的筛查,对筛查诊断为β地中海贫血患者采用聚合酶链反应/寡核苷酸探针反向斑点杂交法检测中国人常见的17个β珠蛋白基因突变类型.对于未发现常见突变者采用β珠蛋白基因DNA测序和变性高效液相色谱分析.结果 丈夫为CD41/42(-TCTT)突变杂合子,妻子携带一种迄今在中国人中未见报道的β地中海贫血基因突变IVS-Ⅰ-110(G→A),产前诊断胎儿为IVS-Ⅰ-110(G→A)和CD41/42(-TCTT)突变双重杂合子,并进行引产.结论 β地中海贫血IVS-Ⅰ-110(G→A)突变的发现,丰富了中国人β地中海贫血基因突变种类,对遗传咨询和地中海贫血产前基因诊断具有重要意义.
-
孕妇血浆胎儿DNA的β地中海贫血产前基因诊断
我们对广西地区可能生育重型β地中海贫血(地贫)患儿的高危夫妇,通过分离和提取孕妇血浆中的胎儿DNA,应用荧光聚合酶链反应(PCR)和基因扫描(Genescan)分析方法,进行无创伤性β地贫产前基因诊断.
-
异基因外周血干细胞移植治疗骨髓移植失败后地中海贫血一例
我们在中国大陆首次用HLA不合的同胞外周血干细胞移植(PBSCT)治疗1例骨髓移植(BMT)失败的重型β地中海贫血(珠蛋白生成障碍性贫血,地贫)患儿,报告如下.
-
β地中海贫血伴环形铁粒幼细胞增多一例
患儿,男,2岁.出生3个月后发现黄疸、贫血,6个月时贫血严重,至今每个月输洗涤红细胞50 ml,血红蛋白高维持在80 g/L左右.
-
他克莫司、霉酚酸酯和甲泼尼龙联合治疗慢性移植物抗宿主病二例
例1,女,7岁,重型β地中海贫血,Pesaro临床Ⅲ期,血型为B型.供者为其胞兄,HLA全相合,血型为AB型,予G-CSF 5μg@kg-1@d-1×5 d皮下注射动员后采集外周血造血干细胞(PBSC).预处理方案:马利兰18 mg/kg,环磷酰胺200mg/kg,噻替哌6 mg/kg,抗胸腺细胞球蛋白1 10 mg/kg.急性移植物抗宿主病(aGVHD)预防用环孢菌素A(CsA).患儿获得的单个核细胞为10.6×108/kg,CD34+细胞为11.7×106/kg.移植后第13天ANC＞0.5×109/L,但从移植后第14～第39天白细胞不再上升,骨髓从增生活跃转为低下,DNA指纹图呈“供者型”.于移植后第39天进行“第2次移植”,单个核细胞为6.93×108/kg,CFU-GM为3.32×105/kg,CD34+细胞为9.0×106/kg.第2次移植后第9天,白细胞开始上升,第61天起血红蛋白从86g/L上升至正常水平.第42天出现肠道GVHD,从Ⅱ度渐发展至Ⅳ度,加用甲泼尼龙(MP)2 mg@kg-1@d-1,停止一切进食,全静脉营养,维持水电解质平衡.
-
地中海贫血治疗研究方向和药物治疗研究进展
地中海贫血(珠蛋白生成障碍性贫血)是由于珠蛋白肽链合成量之间不平衡所致,所以纠正珠蛋白肽链失衡成为地中海贫血治疗研究的关键.骨髓移植治疗重症地中海贫血成功的病例报告不断增加,预示基因治疗有望从根本上解决问题.目前基因治疗概念已从正常基因导入扩展至基因改造、RNA治疗、基因功能调整等方面,而使用药物调控基因表达来治疗β地中海贫血获得了低成本、低风险、疗效较明显的结果,利于临床推广应用.一些中成药、中药方剂辨证施治治疗地中海贫血疗效满意,显现祖国传统医药的应用优势和前景.我们重点综述这些药物对地中海贫血的治疗机制和用药方案,以供临床参考.
