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二甲双胍对人口腔癌KB细胞增殖及凋亡的影响
目的：研究二甲双胍(Metformin）对人口腔癌KB细胞增殖及凋亡的影响，以期为口腔癌的治疗开辟新的路径。方法 MTT法检测不同浓度（1.25、2.5、5、10、20 mmol/L）二甲双胍处理口腔癌KB细胞24、48、72 h后对细胞增殖的影响；分别用0.25、0.5、1 mmol/L的二甲双胍处理KB细胞，8 d后观察其对集落克隆形成的影响；5 mmol/L二甲双胍处理细胞24 h，线粒体膜电位检测试剂盒（JC-1）检测线粒体膜电位的变化；PI单染检测二甲双胍对KB细胞凋亡的影响；Western blot检测二甲双胍（5 mmol/L）处理KB细胞不同时间（0、6、16、24 h）GRP78以及caspase-3的表达。结果二甲双胍处理细胞后，对KB细胞的增殖有明显的抑制作用，并且呈药物浓度和时间依赖性。5 mmol/L的二甲双胍处理KB细胞24、48、72 h的存活率为68.0%、36.9%、14.5%，但24 h细胞凋亡率仅为11.99%，将浓度加大后凋亡率为24.11%，高于对照组；二甲双胍抑制KB细胞集落克隆的形成；JC-1荧光检测，红绿荧光的相对比例降低，提示膜电位下降；二甲双胍刺激口腔癌KB细胞GRP78的表达先上调后有减弱趋势，并且能诱导Caspase-3的激活。结论二甲双胍能显著抑制KB细胞的增殖并且诱导细胞凋亡，其机制与线粒体凋亡途径的激活以及过度的内质网应激有关。
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siRNA沉默葡萄糖调节蛋白78可增强乳腺癌细胞对顺铂的敏感性
目的 探讨siRNA沉默葡萄糖调节蛋白78(GRP78)增强顺铂对乳腺癌细胞凋亡的敏感性,以期为乳腺癌的临床治疗提供新的靶点.方法 MTT法检测不同浓度(0、1、2、4、8、16 μmol/L)顺铂对乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖抑制作用；PI/Annexin V双染检测顺铂(8 μmol/L)对siRNA转染沉默GRP78乳腺癌细胞MDA-MB-231凋亡的影响,同时将未转染和转染空质粒乳腺癌细胞MDA-MB-231作为空白和阴性对照；Western blot检测顺铂(8μmol/L)处理乳腺癌细胞MDA-MB-231不同时间(0、6、16、24 h)GRP78的表达以及siRNA转染沉默GRP78乳腺癌细胞MDA-MB-231中GRP78的表达.结果 8μmol/L顺铂作用于乳腺癌细胞MDA-MB-231 24,48、72 h细胞存活率分别为83.13％、54.22％,35.79％,但24 h细胞凋亡率仅为10.8％.将GRP78沉默后,细胞的凋亡率为24.6％,沉默GRP78并合用顺铂进行刺激,细胞的凋亡率为48.9％,明显高于单用顺铂组.用顺铂刺激乳腺癌细胞MDA-MB-231 GRP78表达先上调后有减弱趋势,而siRNA转染沉默GRP78后,GRP78表达明显下降.结论 抑制GRP78的表达可以增加乳腺癌细胞的凋亡率,为乳腺癌的临床治疗提供了新的靶点.
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衣霉素联合顺铂对人鼻咽癌细胞增殖和凋亡的影响
目的 探讨糖基化抑制剂衣霉素联合顺铂对人鼻咽癌细胞增殖和凋亡的影响及其相关的分子机制.方法 MTT法检测药物对细胞增殖抑制的影响；集落克隆形成法检测药物对细胞集落克隆形成的影响；碘化丙啶单染流式细胞仪检测药物作用前后细胞凋亡率的变化；caspase-3活性检测试剂盒检测药物作用后24 h caspase-3的活性变化；Western blot检测Bax、Bcl-2蛋白的表达及葡萄糖调节蛋白78的表达.结果 不同浓度衣霉素和/或顺铂对人鼻咽癌CNE-1、CNE-2细胞具有显著的增殖抑制作用,3 μmol/L衣霉素处理人鼻咽癌细胞的24、36、48 h后细胞的存活率分别为72.13％、51.97％、37.56％和85.61％、56.95％、43.66％,3 μmol/L衣霉素与6μmol/L顺铂对人鼻咽癌细胞CNE-1、CNE-2 24、36、48 h的存活率低于单用衣霉素、顺铂组,分别为67.97％、47.76％、34.68％和56.89％、37.05％、29.30％.0.3 μnol/L衣霉素可增强0.6 μmol/L顺铂抑制人鼻咽癌细胞CNE-1、CNE-2的集落克隆形成的作用.3 μmol/L衣霉素诱导CNE-l、CNE-2细胞48 h的凋亡率分别为8.89％、8.67％.3μmol/L衣霉素与6μmol/L顺铂联合刺激人鼻咽癌细胞CNE-1、CNE-2 48 h的凋亡率分别为37.02％、32.25％,分别高于顺铂本身诱导的凋亡率7.25％、6.36％.促进凋亡蛋白Bax的表达联合用药组高于单独用药组,抑制凋亡蛋白Bcl-2的表达联合用药组低于单独用药组.衣霉素上调GRP-78的表达以及增强联合用药组caspase-3的活性.结论 衣霉素增强顺铂对人鼻咽癌细胞的增殖抑制作用,衣霉素增强顺铂诱导人鼻咽癌细胞的凋亡作用,其机制可能是通过引起过度的内质网应激反应以及增加caspase-3的活性.
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内质网应激相关分子GRP78在高血压加重全脑缺血大鼠神经损伤中的作用
目的 观察常态大鼠和自发性高血压大鼠全脑缺血再灌注后海马区葡萄糖调节蛋白78(GRP78)表达变化,探讨其在高血压增加脑缺血再灌注神经易损性中的可能意义.方法 60只雄性Wistar-Kyoto(WKY)大鼠随机分为假手术组和全脑缺血再灌注组；另取30只雄性自发性高血压大鼠为高血压全脑缺血再灌注组.采用改良的Pulsineli 4血管阻断(4-VO)法制作全脑缺血再灌注模型.应用苏木伊红染色观察海马区神经细胞形态变化；免疫组织化学法和免疫印迹法检测海马区GRP78表达；八臂迷宫检测动物行为学变化.结果 与假手术组比较,全脑缺血再灌注组存活神经细胞密度降低；GRP78表达增高,24 h达高峰,与脑缺血再灌注组比较,高血压全脑缺血组各时间点存活神经细胞密度降低；GRP78表达6h增高,24、48 h持续减少；动物行为学评分与全脑缺血组差异显著.结论 高血压加重脑缺血再灌注神经损伤,其机制与下降GRP78表达、增加神经细胞丢失有关.
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葡萄糖调节蛋白78在人脑胶质瘤中的表达及意义
目的 探讨葡萄糖调节蛋白78(GRP78)在人脑胶质瘤中的表达及意义.方法 收集具有明确病理分级的胶质瘤标本76例为胶质瘤组,其中Ⅰ～Ⅱ级35例,Ⅲ～Ⅳ级41例,另收集脑外伤行内减压去除的脑组织39例为对照组.分别采用RT-PCR、Western blot和免疫组织化学法测定两组标本中GRP78 mRNA及蛋白表达水平.结果 胶质瘤组GRP78 mRNA及蛋白表达水平较对照组显著上调(P＜0.05);胶质瘤组Ⅲ～Ⅳ级者GRP78mRNA及蛋白表达水平较Ⅰ～Ⅱ级者显著上调(P＜0.05).结论 GRP78在人脑胶质瘤中呈高表达,且与胶质瘤的病理分级呈正相关趋势,可能参与人脑胶质瘤的发生和进展.
关键词： 葡萄糖调节蛋白78 人脑胶质瘤 RT-PCR Western blot 免疫组化 -
高同型半胱氨酸血症对 ApoE －／－鼠心脏内质网应激的影响
目的：探讨高同型半胱氨酸血症（ HHcy）对ApoE－／－鼠心脏内质网应激（ ERS）的影响及其可能机制。方法取5周龄雄鼠12只作为正常对照组；另取5周龄雄性ApoE－／－小鼠36只，随机分为3组，ApoE－／－对照组：ApoE－／－小鼠饲以普通饲料配方饮食；高蛋氨酸组：ApoE－／－小鼠饲以高蛋氨酸饮食；干预组：ApoE－／－小鼠饲以高蛋氨酸饮食同时加0.006％叶酸和0.0004％维生素B12。喂养20周后处死，行主动脉病理切片HE染色观察主动脉是否有斑块形成；取心脏，采用实时荧光定量PCR法检测GRP78、CHOP、Caspase－12 mRNA的变化；巢式降落式甲基化特异性PCR检测GRP78和CHOP启动子区DNA甲基化水平。结果正常对照组及ApoE－／－对照组斑块不明显，高蛋氨酸组动脉粥样硬化斑块面积明显增大，主动脉内膜可见灶性病变部位隆起突入动脉腔内，干预组动脉粥样硬化斑块面积较高蛋氨酸组有所减轻。与ApoE－／－对照组比较，高蛋氨酸组GRP78、CHOP、Caspase－12 mRNA水平明显升高（P＜0.05，P＜0.01），干预组GRP78、CHOP mRNA水平较高蛋氨酸组降低（P＜0.05）。与ApoE－／－对照组比较，高蛋氨酸组GRP78、CHOP启动子区DNA甲基化水平降低（P＜0.01），干预组GRP78、CHOP甲基化水平较高蛋氨酸组有所升高（ P＜0.05）。结论 HHcy可能通过影响DNA甲基化程度引起ERS相关基因表达改变，进而导致心肌细胞凋亡，补充叶酸与维生素B12可有效缓解HHcy所引起的ERS和凋亡。
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葡萄糖调节蛋白78在乳腺癌细胞侵袭及转移中的作佑
目的 探讨葡萄糖调节蛋白78(GRP78)在乳腺癌细胞(231)侵袭、转移过程所起的作用.方法 构建GRP78真核反义表达载体,转染入231细胞,利用PCR和蛋白印迹方法检测转染有反义GRP78的231细胞和MCF-7细胞的GRP78表达情况;并用伤口愈合实验和体外侵袭实验证验转染细胞转移和侵袭的变化.结果 转染反义GRP78的231细胞内GRP78RNA和蛋白表达明显低于未转染细胞;反义CRP78基因对乳腺癌细胞231细胞的侵袭和转移有抑制作用.结论 GRfr78是乳腺癌的一个促癌基因,下调GRP78基因表达能明显抑制乳腺癌细胞的侵袭和转移能力.GRP78为乳腺癌基因治疗的一个新靶点.
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硫酸乙酰肝素对MDA-MB-231内质网应激、肝素酶表达及凋亡的影响
目的:探讨硫酸乙酰肝素(heparin sufate,HS)以及HS与衣酶素(tunicamycin,TM)合用对乳腺癌MDA-MB-231细胞内质网应激、葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein,GRP78)表达、肝素酶(HPSE)表达及凋亡的影响.方法:用HS(1000 μg/mL)、TM(3 μmol/L)和HS(1000 μg/mL)+TM(3 μmol/L)分别处理MDA-MB-231细胞不同时间(0、6、12、24、36、48 h),Westem blot 法检测GRF78 和 HPSE表达的变化,溴化丙啶(propidium iodide,PI)染色法检测细胞凋亡率.结果:HS能提高MDA-MB-231细胞凋亡率达(29.71±1.24)%,并能下调GRP78以及HPSE的表达.TM能提高MDA-MB-231细胞细胞凋亡率达(22.62±0.78)%,但能上调GRP78以及HPSE的表达:HS与TM合用可使细胞凋亡率上升到(58.85±0.72)%,但对GRP78以及肝素酶的表达没有什么影响.结论:HS可抑制内质网应激状态下GRP78和HPSE的表达,并促进MDA-MB-231细胞的凋亡.
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葡萄糖调节蛋白78在人食管鳞状细胞癌中的表达及意义——附59例检测报告
目的:探讨葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)在人食管鳞状细胞癌中的表达情况,并了解其与食管鳞状细胞癌临床、病理特征的关系.方法:食管鳞状细胞癌手术切除标本59份,距癌组织5 cm以上的手术远端切缘的食管正常鳞状上皮组织20份,用免疫组织化学方法检测GRP78的表达情况,并分析GRP78的表达与临床、病理特征的关系.结果:食管鳞状细胞癌组织中GRP78的阳性表达率明显高于食管正常鳞状上皮组织(P<0.01);GRP78的表达程度随着浸润深度的增加而增高;随着分化程度的降低而增高;病理分期高者表达高于病理分期低者;有淋巴转移者明显高于无淋巴转移者(P<0.05～0.01).GRP78表达与患者性别及肿瘤长度无关(P>0.05).结论:食管鳞状细胞癌患者多呈GRP78的阳性表达,说明GRP78可能参与了人类食管鳞状细胞癌的发生、发展.
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内质网应激与急性肺损伤的研究进展
内质网应激（endoplasmic reticulum stress ，ERs）表现为内质网腔内错误折叠与未折叠蛋白聚集以及钙离子平衡紊乱，可激活未折叠蛋白反应、内质网超负荷反应和 caspase‐12介导的凋亡通路等信号途径，既能诱导葡萄糖调节蛋白78（glucose regulated protein 78 kD ，GRP78）、GRP94等内质网分子伴侣表达而产生保护效应，亦能独立诱导细胞凋亡。内质网应激直接影响应激细胞的转归，如适应、损伤或凋亡。急性肺损伤（acute lung injury ，ALI）是在严重感染、休克、创伤及烧伤等非心源性疾病过程中，肺毛细血管内皮细胞和肺泡上皮细胞损伤造成弥漫性肺间质及肺泡水肿，导致急性低氧性呼吸功能不全或衰竭。诱因包括肺内因素（直接因素）和肺外因素（间接因素），如肺炎、毒性物质吸入、淹溺等直接因素；脓毒症、休克、大量输血、急性胰腺炎等间接因素。国内外流行病学资料显示，ALI致病因素多，发病率和病死率高，临床上ALI患者难以救治的重要原因是当前仍未能完全明确ALI的病理生理具体过程及机制［1］。研究表明，内质网应激在急性肺损伤发生、发展的病理生理过程中具有重要的作用。现就内质网应激与急性肺损伤的相关性进行综述如下。
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内质网应激在大鼠缺血再灌注损伤心肌中的表达
目的 探讨内质网应激(ERS)在大鼠缺血再灌注损伤心肌中的表达以及小剂量衣霉素(TM)预处理对缺血再灌注损伤心肌的影响.方法 SD大鼠30只随机分为三组,假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(IR组)、衣霉素处理+IR组(TM+IR组),每组10只.Sham组单纯开胸,不结扎冠状动脉;IR组开胸,结扎前降支30 min,再灌注2 h;TM+IR组TM腹腔注射0.6 mg/kg,30 min后结扎前降支30 min,再灌注2 h.于开胸后,心肌再灌注2 h抽血,检测肌钙蛋白I(cTnI)含量,透射电镜观察再灌注2 h心肌的超微结构,检测再灌注2 h心肌的GRP78 mRNA及蛋白表达.结果 IR组和TM+IR组在再灌注2 h时,cTnI水平均明显上升;IR组心肌超微结构损伤严重,TM+IR组次之.再灌注2 h后,GRP78 mRNA及蛋白,IR组及TM+IR组明显升高.结论 MIRI可诱导ERS,小剂量TM预处理可减轻MIRI.
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内质网应激在大鼠重症急性胰腺炎肝损伤的临床意义
目的：探讨内质网应激相关分子葡萄糖调节蛋白78（GRP78）及CCAAT／增强子结合蛋白同源蛋白（CHOP），是否参与大鼠重症急性胰腺炎（SAP）并发肝损伤的发生和发展。方法采用5％牛磺胆酸钠建立大鼠SAP肝损伤模型，将80只成年雄性SD大鼠随机分为2组，假手术组（sham组）及模型组，各40只，每组又按时间点随机分为3、6、12、24、36 h 5个组。采用全自动生化仪检测血清淀粉酶（AMY）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST ）的含量变化，HE染色观察大鼠肝脏组织的形态学变化，免疫印迹（Western Blot）法检测大鼠肝脏组织GRP78及CHOP的表达水平。结果（1）模型组血清AMY、ALT及AST水平逐渐升高，且12 h达到峰值（P＜0．05）；模型组比对应的Sham组血清酶水平明显升高，差异有统计学意义（P＜0．05）。（2）HE染色结果显示，肝脏在24 h时损伤严重。（3）模型组GRP78及CHOP表达水平逐渐增加，且以24 h表达水平高（P＜0．05）；模型组比对应的sham组GRP78及CHOP表达显著增多，差异有统计学意义（P＜0．05）。结论 SAP肝损伤发病中24 h严重，GRP78及CHOP表达明显增加，其可能参与SAP肝损伤的发生和发展。
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内质网应激在大鼠酒精性肝病肝细胞凋亡中的作用
目的 探讨内质网应激在大鼠酒精性肝病肝细胞凋亡中的作用.方法 采用酒精灌胃的方法建立大鼠酒精性肝病模型,分别于4、8、12、16周随机处死动物,留取血清和肝组织,同时设置正常对照组.检测大鼠血清总同型半胱氨酸(tHcy)浓度,比色法测定大鼠肝组织胱硫醚β合成酶(CBS)活性,逆转录-聚合酶联反应和免疫组织化学法分别检测肝组织葡萄糖调节蛋白78 (GRP-78)、需钙蛋白酶2 (calpain-2)和caspase-12前体蛋白(procaspase-12)的mRNA和蛋白质表达情况;脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法检测肝细胞凋亡情况.组间数据比较用完全随机设计的方差分析(SNK法或Tamhane' s法),相关性分析用Pearson直线相关分析法.结果 模型组大鼠16周末出现肝细胞弥漫小泡性脂肪变性、窦周纤维化,汇管区纤维组织增生并有纤维间隔形成.正常对照组及造模4、8、12、16周时,大鼠血清tHcy浓度分别为(5.10±0.56)μmol/L、(6.95±0.17)μ mol/L、(8.36±0.17)μmol/L、(9.45±0.28)μmol/L和(9.85±0.12) μmol/L,肝组织匀浆CBS浓度分别为(613.92±17.09) U/g、(573.53±24.96) U/g、(503.42±44.67) U/g、(438.02±14.67) U/g和(390.45±31.17) U/g,随着造模时间的延长,tHcy浓度逐渐升高(F=338.60,P＜0.01),CBS活性逐渐降低(F=91.90,P＜0.01),且二者呈负相关关系(r=-0.632,P＜0.01).随着造模时间的延长,GRP-78、calpain-2和caspase-12的mRNA相对表达量逐渐升高(F值分别为216.19、128.91和95.印,P值均＜0.01),且GRP-78 mRNA的表达与tHcy浓度呈正相关(r=0.617,P＜0.01); GRP-78和calpain-2的蛋白质表达量逐渐增多,procaspace-12的蛋白质表达量逐渐减少.正常对照组及造模4、8、12、16周的大鼠肝细胞凋亡指数分别为2.17％+1.06％、29.59％±2.62％、加.91％+4.70％、57.39％±6.13％和65.71％±9.78％,呈上升趋势(F=188.30,P＜0.01).结论肝细胞凋亡可能与CBS活性降低导致高同型半胱氨酸血症,从而诱发内质网应激,进而激活calpain-2和caspase-12的信号转导通路有关,这可能为酒精性肝病发病的重要机制之一.
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2-脱氧葡萄糖对脑缺血再灌注模型大鼠脑组织中葡萄糖调节蛋白78及天冬氨酸半胱氨酸蛋白醇12的影响研究
目的:探讨2-脱氧葡萄糖(2-DG)对脑缺血再灌注(IR)模型大鼠脑组织中葡萄糖调节蛋白78(GRP78)及天冬氨酸半胱氨酸蛋白酶-12(caspase-12)的影响.方法:取大鼠随机分为假手术组、模型组和2-DG组(2-DG 100 mg·kg-1),每组60只,后2组建立局灶性脑IR模型,假手术组行手术但不插入线栓.建模前7d开始给药,每天1次,连续7d,考察建模后3、6、12、24、48 h各组大鼠海马CA1区细胞凋亡情况(阳性细胞率)、GRP78和caspase- 12蛋白及其mRNA的表达情况.结果:与假手术组比较,模型组和2-DG组阳性细胞率、GRP78和caspase- 12蛋白及其mRNA表达均明显升高(P均＜0.01)；与模型组比较,2-DG组阳性细胞率、caspase-12蛋白及其mRNA表达明显降低,GRP78蛋白及其mRNA表达明显升高(P＜0.05或P＜0.01).结论:2-DG可能通过上调GRP78和下调caspase- 12的表达来预防脑IR损伤.
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GRP78重组表达腺病毒的构建及在HepG2细胞的表达及其相关功能研究
目的:构建葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78,GRP78)重组表达腺病毒pAd-GRP78,并感染HepG2细胞建立能够高表达GRP78的细胞模型,同时在HepG2细胞中研究重组表达GRP78腺病毒对细胞增殖能力的影响.方法:利用腺病毒穿梭质粒pAdTrack-rO4构建载有GRP78基因的穿梭质粒pAdTrack-TO4-GRP78载体,并通过基因测序鉴定载体序列正确.将载体用PmeⅠ酶切线性化,与AdEasy-BJ5183感受态细胞进行基因同源重组.将重组后的腺病毒载体经PacⅠ酶切线性化后,转染到HEK293细胞中进行包裹,根据增强绿色荧光蛋白(enhance green fluorescent protein,EGFP)的表达判断重组腺病毒的包装情况.通过反复离心和低温裂解细胞提取GRP78重组表达腺病毒.以人肝癌HepG2细胞为目标,进行病毒感染.通过qRT-PCR检测GRP78基因表达情况,使用Western blot检测GRP78蛋白的表达.后感染HepG2细胞,通过MTS比色法检测重组表达GRP78腺病毒对细胞增殖的影响.结果:测序验证pAdTrack-TO4-GRP78构建成功,酶切验证重组腺病毒载体pAd-GRP78构建成功.在HEK293细胞中将pAd-GRP78包裹,GPF荧光检测结果表示病毒包装成功.使用pAd-GRP78感染人肝癌HepG2细胞,qRT-PCR检测到细胞中GRP78基因的过表达,Western blot方法检测到GRP78蛋白的高表达.MTS检测结果显示重组表达GRP78腺病毒对HepG2肝癌细胞有促增殖作用.结论:实验成功构建了GRP78重组表达腺病毒,并验证了构建的腺病毒载体可以收集并感染HepG2细胞表达GRP78蛋白.证明了重组表达GRP78腺病毒能够促进肝癌细胞的增殖.为进一步研究GRP78的功能奠定了基础.
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葡萄糖调节蛋白78与胃癌细胞化疗敏感性的关系
目的:探讨葡萄糖调节蛋白78(Glucose regulated protein 78,GRP78)在不同胃癌细胞株中的表达和对化疗药物敏感性的关系,并探讨其初步机制.方法:用RT-PCR及Western blot法检测分化程度不同的胃癌细胞株MKN45、SGC7901和NCI-N87中GRP78的表达,并分别观察经ca2+载体A23187和Ca2+螯合剂BAPTA-AM处理后的SGC7901中GRP78的表达,MTT法检测各组胃癌细胞株对多种化疗药物的敏感性.Western blot法检测SGC7901及分别经A23187和BAPTA-AM处理后细胞AKT/PKB蛋白表达水平,流式细胞仪检测细胞的凋亡率.结果:GRP78在3种胃癌细胞系中均有表达,在MKN45中为高表达,对化疗药物的敏感性低;在NCI-N87中为低表达,但对化疗药物的敏感性高.A23187组SGC7901细胞GRP78mRNA和蛋白及AKT/PKB蛋白的表达显著上调,对长春新碱(Vincristine,VCR)的敏感性降低;而在BAPTA-AM组则与之相反.结论:GRP78在不同分化的胃癌细胞株中表达水平不同,对化疗药物的敏感性亦不同.改变胃癌细胞GRP78的表达能影响其下游蛋白AKT/PKB的表达水平,从而影响胃癌细胞对化疗药物的敏感性.
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葡萄糖调节蛋白78在大鼠肠缺血再灌注损伤中的表达及其意义
目的:观察大鼠肠缺血再灌注损伤(intestine ischemia repeffusion injury,IIRI)过程中肠黏膜的组织损伤和细胞凋亡及内质网(endoplasmic reticulum,ER)分子伴侣葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78 kD,GRP78)的表达变化,并探讨ER应激在肠IIRI中的作用及机制.方法:45只雄性SD大鼠随机分成9组:缺血再灌注0、1、3、6、12、24、48、72 h组,以及假手术对照组,每组5只.实验组均用无创性动脉夹夹闭肠系膜上动脉1h后实施再灌注来建立再灌注模型,假手术组仅游离肠系膜上动脉,不夹闭.然后采用HE染色观察肠黏膜变化,TUNEL法检测细胞凋亡,Western blot和RT-PCR检测GRP78表达.结果:缺血再灌注后,肠黏膜损伤程度及细胞凋亡指数随再灌注时间延长而增加,于再灌注3h达峰值(与其他组各组比较均P＜0.001);再灌注后,GRP78的表达明显增加,于1h达第1个小高峰(与0h组和3h组比较P＜0.05),但随再灌注时间的延长,表达量逐步减少,再灌注12h后开始回升(与6h组比较P＜0.004),于24 h达峰值(与其他各组比较均P＜0.05),72 h降至对照组水平(与假手术对照组比较P ＞0.069).结论:GRP78在大鼠肠缺血再灌注过程中表达变化,可能与其对肠IIRI保护机制有关.
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葡萄糖调节蛋白78在大鼠非酒精性脂肪性肝炎中的表达及意义
目的 观察高脂饮食诱导大鼠非酒精性脂肪性肝炎(nonalcoholic steatohepatitis,NASH)过程中内质网应激标志物葡萄糖调节蛋白78的表达变化,探讨内质网应激在NASH发病机制中的作用.方法 建立大鼠高脂饮食诱导NASH模型,检测血清ALT、AST、FFA、TG和肝组织MDA的变化,用RT-PCR与Western blot方法 检测NASH形成过程中肝组织GRF78在基因和蛋白水平的表达变化.结果 NASH组大鼠血清ALT、AST、FFA、TG和肝组织MDA水平均较对照组有不同程度的升高.肝组织GRP78基因和蛋白表达也随NASH加重而增强,16周时升高为显著(P<0.01).结论 高脂饮食可诱导GRP78表达增强,启动内质网应激,导致脂质异常沉积,其可能与NAsH的发病机制密切相关.
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葛根素对HCY诱导的血管内皮细胞凋亡及GRP78表达的影响
目的:研究葛根素对同型半胱氨酸(homocysteinemia,HCY)诱导的血管内皮细胞凋亡及葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78,GRP78)基因表达的影响,探讨葛根素抗动脉粥样硬化的机制.方法:建立HCY诱导的人主动脉血管内皮细胞损伤模型,与不同浓度葛根素(10-7mol/L,10-6moL/L,10-5moL/L)共同培养48h,TUNEL法检测细胞凋亡,流式细胞仪测定DNA含量并分析细胞周期,RT-PCR检测GRP78mRNA表达;目的基因克隆、鉴定并测序.结果:荧光显微镜观察显示葛根素组细胞未见明显凋亡形态学改变;葛根素组G0/G1期细胞数明显减少,S期细胞数明显增多,且存在剂量依赖性,与HCY组相比,差异显著(P＜0.01);RT-PCR结果显示:葛根素处理组细胞GRP78mRNA表达明显减少,与HCY比较差异显著(P＜0.01);测序结果表明,来源于血管内皮细胞的全长648bp的基因片断与兔GRP78基因高度同源.结论:葛根素拮抗HCY诱导的血管内皮细胞凋亡,GRP78基因低表达可能是其抗动脉粥样硬化的作用机制之一.
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阿托伐他汀对2型糖尿病大鼠心肌GRP78和CHOP表达的影响
目的:探讨阿托伐他汀对2型糖尿病大鼠心肌组织内质网应激相关因子CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)和葡萄糖调节蛋白78(GRP78)表达的影响.方法:将Wistar大鼠随机分为正常对照组(NC组)、糖尿病心肌病模型组(DCM组)和阿托伐他汀治疗组(DCM+Ato组).采取高脂肪饲料喂养加一次性腹腔注射链脲佐菌素的方式制备2型糖尿病心肌病大鼠模型,DCM+Ato组大鼠予阿托伐他汀干预8周.采用左室插管评估大鼠心功能,HE染色观察心肌组织病理学改变,TUNEL法测定心肌细胞凋亡水平,Western blot检测心肌组织的GRP78和CHOP蛋白表达量.结果:DCM组较NC组细胞肥大,排列紊乱,形态不规则,DCM+Ato组较DCM组改善.与NC组比较,DCM组左室舒张末期压(LVEDP)显著升高,左室收缩压(LVSP)和左室压力上升或下降大速率(LV±dp/dtmax)显著降低,细胞凋亡率升高,GRP78、CHOP表达明显升高(P<0.05);与DCM组比较,DCM+Ato组LVEDP显著降低,LVSP和LV±dp/dtmax显著升高,细胞凋亡率降低,GRP78、CHOP表达明显下降(P<0.05).结论:阿托伐他汀能有效减轻2型糖尿病大鼠的心肌病理损伤及改善心功能,可能与下调内质网应激相关因子GRP78、CHOP的表达,减少心肌细胞凋亡有关.
