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葡萄糖调节蛋白78对人肝癌细胞HepG2增殖和侵袭能力的影响
目的:分析葡萄糖调节蛋白78(GRP78)对人肝癌细胞HepG2增殖及侵袭能力的影响.方法:通过小干扰RNA(siRNA)技术特异性下调GRP78表达,筛选佳siRNA.将人肝癌细胞HepG2分为空白对照、阴性对照组及siGRP78三组,分别通过MTT法、Western blot法测定GRP78对HepG2肝癌细胞株生长的影响及GRP78对肝癌细胞蛋白表达的影响;Transwell行侵袭实验,计算各组光密度(OD)值及生长抑制率;另外分别经由GST-pull down法、荧光素标记法检测RhoA活性及FAK磷酸化水平.结果:HepG2细胞转染GRP78 siRNA各片段后,GRP78蛋白均不同程度下调,siGRP78-1为佳干扰片段;SiGRP78组OD值、视野细胞数平均数均显著低于空白对照组、阴性对照组,生长抑制率显著高于阴性对照组;SiGRP78组RhoA-GTP水平显著高于、FAK磷酸化水平显著低于空白对照组、阴性对照组.结论:对GRP78特异性下调能明显抑制HepG2细胞增殖及侵袭,其可能机制为增强RhoA活性,抑制FAK磷酸化水平.
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自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤增强鼻咽癌细胞对放射和化学治疗的敏感性
目的:探讨白噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)增强鼻咽癌细胞对放射治疗(放疗)和化学治疗(化疗)敏感性的作用及其相关的分子机制.方法:采用MTT法检测3-MA对细胞的增殖抑制作用;集落克隆形成法检测3-MA对细胞集落克隆形成的影响;Annexin V/PI双染法、线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)、DAPI染色检测细胞凋亡;Western印迹检测内质网应激相关蛋白葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)、白噬相关蛋白beclin1和微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)表达.结果:不同体积浓度或剂量的顺铂(cisplatin,DDP)、电离辐射(ionizing radiation,IR)、衣霉素(tunicamycin,TM)、3-MA对鼻咽癌细胞HONE-1均具有增殖抑制作用,且随着体积浓度或剂量的增加和作用时间的延长,对HONE-1细胞增殖抑制作用随之增加.经1.00 mmol/L 3-MA预处理细胞后,再次给予6.00 μmol/L DDP,4.00 Gy IR,1.00μmol/L TM处理,细胞存活率明显降低,均低于单用组,与空白对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).3-MA增强DDP,IR,TM抑制细胞集落克隆形成作用.用6.00μmol/L DDP或4.00 Gy IR处理HONE-1细胞24 h后,细胞凋亡率分别为5.8％和6.7％,与阴性对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).JC-1和DAPI染色显示3-MA增强DDP,IR或TM诱导的细胞凋亡作用;Western印迹结果显示DDP,IR或TM处理组GRP78,beclin1表达呈时间依赖性上调,LC3 Ⅰ向LC3 Ⅱ转化,3-MA预处理组beclin1表达明显降低,LC3 Ⅰ向LC3 Ⅱ的转化.结论:自噬抑制剂3-MA可增强鼻咽癌细胞对放化疗的敏感性,其机制可能与3-MA抑制内质网应激诱导的白噬所产生的保护作用相关.
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胃癌中葡萄糖调节蛋白78的表达及其临床病理学意义
目的：检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)在胃癌组织中的表达,分析其临床病理学意义,探讨GRP78在胃癌发生发展中的作用。方法收集48例不同临床分期及不同分化程度胃腺癌及28例癌旁正常胃黏膜组织标本,分别应用RT-PCR、Western Blotting和免疫组化检测GRP78 mRNA和蛋白质的表达。结果与正常胃黏膜组织相比,胃癌组织中GRP78 mRNA及蛋白表达水平显著增加(P<0.05)。免疫组化检测GRP78阳性表达定位于胞浆,在正常胃粘膜组织中GRP78阳性表达率为10.7‰(3/28),高、中分化与低分化胃癌组织阳性表达率分别为59.4‰(19/32)和93.8‰(15/16)；直径≥5 cm的胃癌组织中GRP78阳性表达率(88.9‰,16/18)高于直径<5 cm的胃癌组织(60‰,18/30),Ⅲ、Ⅳ期(TNM分期)病例胃癌组织中GRP78阳性表达率(90.5‰,19/21)高于Ⅰ、Ⅱ期病例(55.6‰,15/27)；5年内病情复发或者死亡病例胃癌组织中GRP78阳性表达率(82.8‰,24/29)高于5年内病情无复发病例(52.6‰,10/19)；淋巴结转移胃癌组织中GRP78阳性表达率(96.2‰,25/26)明显高于非淋巴结转移胃癌组织(40.9‰,9/22),各组间差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论 GRP78在胃癌组织中高表达,其表达水平与胃癌肿瘤大小、分化程度、淋巴结转移、临床分期及预后密切相关。
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蛋白酶体抑制剂通过内质网应激诱导DU145细胞凋亡机制的探讨
目的 探讨蛋白酶体抑制剂(EPO)诱导前列腺癌DU145细胞凋亡机制是否与内质网应激(Er-stress)有关.方法 用不同浓度的EPO处理DU145细胞,MTS检测细胞生长情况;流式细胞仪检测细胞凋亡率;实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测Er-stress相关分子同源蛋白质(CHOP)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、X盒结合蛋白1(XBP-1)、剪接型X盒结合蛋白1信使核糖核酸(XBP-1s mRNA):Western blot检测CHOP和GRP78的表达.结果 EPO抑制DU145细胞生长,并且呈现浓度梯度依赖性,处理组细胞凋亡率高于未处理组,高剂量组凋亡率高于低剂量组.EPO处理后,CHOP、剪接型X盒结合蛋白1(XBP-1s)、GRP78 mRNA明显升高,72h明显.低剂量组与高剂量组48h CHOP和XBP-1s的表达比较差异均有统计学意义,两组48和72 h GRP78比较差异均有统计学意义.EPO处理后,XBP-1和XBP-1s基因转录水平升高,而XBP-1s随处理时间增长基因转录水平变化不明显.EPO处理后,CHOP和GRP78不断增加,72 h两种蛋白质均达到高值,并且低剂量组与高剂量组在72 h比较差异有统计学意义.结论 EPO能抑制DU145细胞生长,诱导凋亡,其机制可能与激活Er-stress,诱发内质网的相关分子CHOP、XBP-1s、XBP-1、GRP78的表达有关.
关键词： 蛋白酶体抑制剂 同源蛋白质 葡萄糖调节蛋白78 剪接型X盒结合蛋白1 内质网应激 -
内质网应激凋亡相关基因 mRNA 在矽肺患者肺泡巨噬细胞表达研究
目的：探讨矽肺患者肺泡巨噬细胞（ AM）中内质网应激（ ERS）凋亡相关基因的表达规律和意义。方法采用单纯随机抽样方法，选择矽肺壹期、贰期和叁期男性患者23、25、24例分别设为矽肺壹期、贰期、叁期组，以8例诊断为观察对象的男性矽尘作业工人为对照组，收集研究对象的支气管肺泡灌洗液，分离、纯化和培养AM后，提取RNA，采用实时定量荧光聚合酶链式反应分析AM中葡萄糖调节蛋白78（ GRP78）、CAAT区／增强子结合蛋白同源蛋白（ CHOP）、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶（ Caspase）－4和Caspase－3的mRNA表达水平。结果矽肺壹期、贰期和叁期组患者AM中GRP78、CHOP、Caspase－4和Caspase－3的mRNA相对表达水平均高于对照组（P＜0．05），矽肺贰期组GRP78 mRNA相对表达水平分别高于矽肺壹期和叁期组（P＜0．05），矽肺贰期和叁期组患者AM中的CHOP、Caspase－4和Caspase－3的mRNA相对表达水平均高于矽肺壹期组（ P＜0．05）。多重逐步线性回归分析结果显示，矽肺患者AM中GRP78、CHOP、Caspase－4和Caspase－3的mRNA相对表达水平均与矽肺期别呈正相关（ P＜0．05）。结论 ERS在矽肺患者AM凋亡的发生与发展中可能发挥重要作用。
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内质网应激及自噬相关蛋白在矽肺患者肺泡巨噬细胞中表达研究
目的：研究矽肺患者肺泡巨噬细胞（ AM）内质网应激（ ERS）和自噬相关蛋白的表达规律。方法采用单纯随机抽样方法，选择矽肺壹期、贰期、叁期男性患者20、28、22例分别设为矽肺壹期、贰期和叁期组，以6例诊断为观察对象的男性矽尘作业工人为对照组。收集研究对象的支气管肺泡灌洗液，分离、纯化和培养AM，经裂解后提取蛋白，采用免疫印迹法检测AM中葡萄糖调节蛋白78（ GRP78）、Beclin1和微管相关蛋白1轻链3（ LC3）蛋白的相对表达水平。结果矽肺壹期、贰期和叁期患者AM中GRP78、Beclin1和LC3的蛋白相对表达水平均高于对照组（P＜0．05），矽肺贰期和叁期组患者上述3个指标均高于矽肺壹期组（P＜0．05），矽肺叁期组患者AM中GRP78蛋白相对表达水平低于矽肺贰期组（P＜0．05）；矽肺叁期组患者AM中Beclin1和LC3的蛋白相对表达水平均高于矽肺贰期组，但差异均无统计学意义（ P＞0．05）。多重逐步线性回归分析结果显示，矽肺患者AM 中GRP78、Beclin1和LC3的蛋白相对表达水平均与矽肺期别呈正相关（P＜0．01）。结论不同期别矽肺患者AM中ERS和自噬的相关蛋白表达程度不同，AM的ERS和自噬在矽肺纤维化发生发展中可能发挥重要作用。
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荔枝核有效部位群改善实验性2型糖尿病胰岛素抵抗的作用及机制
目的:研究荔枝核有效部位群(含总皂苷、黄酮和鞣质)改善2型糖尿病胰岛素抵抗的作用及机制.方法:建立高脂饮食加链脲佐菌素诱导2型糖尿病大鼠动物模型,随机分为模型组、荔枝核有效部位群高剂量组(1.87 g/kg)、荔枝核有效部位群低剂量组(0.47g/kg)及盐酸罗格列酮组(3.87×10-3 g/kg),另设正常对照组,给药4 w,观察荔枝核有效部位群对实验大鼠糖脂代谢、胰岛素抵抗和胰组织病理改变及超微结构的影响,检测各组大鼠胰组织GRP78、CHOP mRNA表达变化.结果:荔枝核有效部位群高剂量可降低大鼠空腹血糖(FBG)和血清甘油三酯(TG)水平并提高口服糖耐量(P＜0.05或P＜0.01);荔枝核有效部位群高、低剂量能显著提高胰岛素敏感指数(ISI),降低稳态胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)(P＜0.05或P＜0.01),明显改善大鼠胰腺组织的病理损伤,并促进内质网、线粒体等损伤细胞器的修复;与模型组比较,荔枝核有效部位群高、低剂量组胰腺组织GRP78 mRNA及高剂量组CHOP mRNA表达水平均显著降低(P＜0.01).结论:荔枝核有效部位群具有改善糖脂代谢、提高胰岛素敏感性、改善胰岛素抵抗和治疗2型糖尿病作用,其机制与抑制胰组织内质网应激关键基因GRF78及CHOP的mRNA表达有关.
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bFGF对局灶性脑缺血大鼠脑组织GRP78表达的影响
目的 研究大鼠脑缺血再灌注后对葡萄糖调节蛋白78 (glucose-regulated protein78,GRP78)表达的影响,探讨碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)对脑组织缺血再灌注神经元GRP78的调节作用及机制.方法 应用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,大脑中动脉阻塞2h再灌注损伤12h,采用TUNEL法、免疫组化检测海马及皮质内神经元凋亡和GRP78的表达.结果 sham组,海马及皮质偶见凋亡细胞,皮质及海马神经元内少见GRP78免疫反应阳性细胞；I/R组,海马及皮质神经元凋亡增加,缺血再灌注损伤后皮质及海马神经元内GRP78阳性表达明显高于假手术组.bFGF组,海马及皮质神经元凋亡减少,皮质及海马神经元内GRP78表达较I/R组明显增加.结论 bFGF显著减少缺血神经元凋亡,上调脑缺血诱导的GRP78表达,对脑缺血再灌注海马及皮质神经元的具有保护作用.
关键词： 脑缺血 碱性成纤组细胞生长因子 葡萄糖调节蛋白78 海马 凋亡 -
葡萄糖调节蛋白在肿瘤的表达和治疗中的作用
葡萄糖调节蛋白78 (glucose-regulated protein 78,GRP78)是内质网应激(endoplasmic reticulum stress)相关的重要分子伴侣,涉及到多种肿瘤的增殖、存活、转移等演化过程.作为一种应激蛋白,GRP78在机体正常组织中几乎不表达,而在处于缺氧应激状态下的肿瘤组织中高表达,常常预示着不良的预后.GRP78还增强肿瘤对多种化疗的抵抗.因此GRP78的表达可作为预测肿瘤预后及化疗反应敏感度的标志物.此外,该蛋白质位于癌细胞表面的特性使它成为了一个很好的分子治疗靶点.
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巴戟天寡糖单体HexB减轻HUVECs缺氧复氧损伤
目的:研究巴戟天寡糖单体HexB减轻缺氧复氧(H/R)损伤诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡的分子机制.方法:HUVECs分别用HexB、内质网应激(ERS)抑制剂4-苯基丁酸(4-PBA)和ERS诱导剂毒胡萝卜素(TG)干预,并将培养的HUVECs分为:对照组、HexB组、H/R组、HexB+H/R组、4-PBA+H/R组、TG组和HexB+TG组.CCK-8法和流式细胞术检测细胞活性及凋亡率,Western blot法检测ERS标志分子葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和C/EBP同源蛋白(CHOP)、凋亡相关蛋白caspase-12及磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)的蛋白水平.结果:与对照组比较,H/R组和TG组的细胞凋亡率明显增加,细胞活力明显降低,GRP78、CHOP、caspase-12及p-JNK的蛋白水平上调(P<0.05);与H/R组比较,HexB+H/R组及4-PBA+H/R组的细胞凋亡率显著降低,细胞活力升高,GRP78、CHOP、caspase-12及p-JNK的蛋白水平降低(P<0.05);与TG组比较,HexB+TG组的细胞凋亡率显著降低,细胞活力升高,GRP78、CHOP、caspase-12及p-JNK的蛋白水平降低(P<0.05);HexB+H/R组与4-PBA+H/R组比较,细胞凋亡率、细胞活力及GRP78、CHOP、caspase-12、p-JNK蛋白水平的差异无统计学显著性.结论:通过抑制内质网应激,HexB可以减轻H/R诱导的HUVECs凋亡,其机制可能与下调GRP78、CHOP、p-JNK及caspase-12的水平有关.
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β1-肾上腺素受体自身抗体通过激活内质网应激诱导心肌细胞凋亡
目的:探讨内质网应激在β1-肾上腺素受体自身抗体(β1-AA)引起心肌细胞凋亡中的作用.方法:采用β1-肾上腺素受体细胞外第二环抗原肽段主动免疫大鼠,应用SA-ELISA法检测大鼠血清中β1-AA的水平,TUNEL染色检测心肌组织的凋亡水平,Western blot法和免疫组化法检测心肌组织中葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、C/EBP同源蛋白(CHOP)及caspase-12的蛋白表达.利用亲和层析法纯化的β1-AA处理H9c2心肌细胞,CCK-8法检测细胞活力,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测心肌细胞凋亡;采用内质网应激抑制剂4-苯基丁酸(4-PBA)预处理H9c2心肌细胞,再给予β1-AA干预,CCK-8法和流式细胞术分别检测细胞活力及凋亡的变化情况.结果:与对照组相比,主动免疫大鼠血清中β1-AA水平在免疫2周时显著增加,进一步增加至8周,并且主动免疫2周大鼠心肌组织凋亡率明显升高,持续升高至8周.与对照组相比,主动免疫大鼠心肌组织中GRP78、CHOP及caspase-12的蛋白表达在免疫4周和8周时均明显增加.β1-AA引起H9c2心肌细胞活力持续降低,凋亡明显增加.与β1-AA单独处理组相比,内质网应激抑制剂4-PBA预处理H9c2心肌细胞可以有效逆转β1-AA诱导的细胞凋亡增加和活力下降.结论:β1-AA可以通过激活内质网应激诱导心肌细胞凋亡.
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葡萄糖调节蛋白78促进肝硬化大鼠心肌细胞凋亡及其机制
目的:探讨葡萄糖调节蛋白78/免疫球蛋白重链结合蛋白(GRP78/BiP)是否促进肝硬化大鼠心肌细胞凋亡及其发生机制.方法:采用复合致病因素法建立肝硬化大鼠模型,在4周、6周和8周分别取材.实验1:取心脏称重并测量左室壁厚度,计算左室壁厚度与心脏重量比值及心脏指数.实验2:TUNEL法观察心肌细胞凋亡情况；免疫组化方法检测心肌组织中GRP78/BiP蛋白以及凋亡相关蛋白CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白/生长停滞及DNA诱导蛋白153(CHOP/GADD153)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12(caspase-12)、核转录因子κB p65(NF-κB p65)、B细胞淋巴瘤/白血病蛋白2(Bcl-2)的表达.结果:随肝硬化病程进展,左室壁厚度与心脏重量比值以及心脏指数逐渐增加,8周组增加显著(P＜0.05)；心肌细胞凋亡指数、CHOP/GADD153和caspase-12阳性蛋白表达指数逐渐升高,8周组差异显著(P＜0.05)；NF-kB p65和Bcl-2阳性蛋白表达指数呈一致性变化,在4周组较其它组明显增高(P＜0.05)；GRP78/BiP蛋白阳性表达指数与心肌细胞凋亡指数、CHOP/GADD153、caspase-12蛋白阳性表达指数呈显著正相关,CHOP/GADD153与NF-κB p65、Bcl-2蛋白阳性表达指数呈显著负相关.结论:GRP78高表达在内质网应激介导的肝硬化心肌病发病中可能发挥重要作用.
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肝纤维化大鼠肝细胞内质网形态及GRP78表达的研究
目的:观察四氯化碳(CCl4)致大鼠肝纤维化过程中内质网形态及内质网应激标志性蛋白--葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的表达变化,探讨内质网应激在肝纤维化发病机制中可能的作用.方法:雄性Wistar大鼠皮下注射CCl4制备肝纤维化模型,分别在4周及8周处死大鼠测定肝脏指数、血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)活性,观察肝组织病理改变和肝细胞内质网形态,免疫组化和real-time PCR分别检测肝组织GRP78蛋白及mRNA表达变化.结果:肝纤维化组大鼠肝脏指数、血清ALT和AST活性显著高于正常对照组(P＜0.01),肝纤维化明显,电镜下见肝细胞内质网扩张,数量明显减少;肝细胞胞浆中GRP78蛋白表达量及mRNA表达量较正常组显著增加(P＜0.01).结论:在CCl4诱导的肝纤维化发生过程中肝细胞内质网形态有明显损伤性变化,内质网应激蛋白GRP78蛋白及基因表达水平明显增加,提示内质网应激参与肝纤维化发生发展.
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脑缺血及后适应对树鼩海马内质网应激信号分子 PERK 及 GRP78的影响
目的：探讨脑缺血及后适应对树鼩海马内质网应激信号分子蛋白激酶R样内质网激酶（ PERK）及葡萄糖调节蛋白78（GRP78）的影响及后适应的脑保护机制。方法：光化学反应诱导树鼩局部血栓性脑缺血，于脑缺血后3．5 h夹闭、打开缺血侧颈总动脉交替3个循环（每次5 min）以复制缺血后适应模型。 HE染色观察缺血侧海马神经元损伤及超微结构变化，RT－PCR检测脑缺血及后适应不同时间海马组织PERK及GRP78 mRNA表达的变化，免疫组织化学法与Western blot法检测PERK及GRP78的蛋白定位及表达变化。结果：海马神经元随脑缺血时间延长而损伤加重，缺血24 h损伤为严重，后适应可减轻损伤。脑缺血4 h、24 h及72 h PERK的mRNA及蛋白表达较假手术组增高（P＜0．05），后适应组与相应的缺血组相比，PERK 的mRNA及蛋白表达减少，4 h、24 h差异显著（ P＜0．05）；脑缺血4 h、24 h及72 h GRP78的mRNA及蛋白表达与假手术组无明显差异，后适应24 h组较缺血24 h组表达增高（ P＜0．05）。结论：树鼩局部血栓性脑缺血可激活缺血侧海马内质网应激反应，引起PERK／eIF2α信号转导通路中相关分子PERK 的mRNA及蛋白表达增高。缺血后适应处理通过下调PERK、上调GRP78的表达，减轻内质网应激反应，减少神经元损伤，具有一定的脑保护作用。
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羟基酪醇保护造影剂诱导的肾脏损伤并抑制内质网应激
目的 研究造影剂肾病大鼠肾脏中葡萄糖调节蛋白78(GRP78)及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12(Caspase-12)的表达情况,探讨内质网应激在造影剂肾病发病中的作用及羟基酪醇的干预作用.方法 84只大鼠随机分为3组:对照组(n=28)、模型组(n=28)和羟基酪醇干预组(n=28).分别于造模后12 h、24 h、48 h、72 h处死部分大鼠,检测各组大鼠血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr);ELISA法检测血清中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的含量;HE染色观察肾脏病理改变;原位末端转移酶标记法(TUNEL)检测肾小管上皮细胞凋亡;实时荧光定量PCR法检测肾组织GRP78 mRNA及Caspase-12mRNA的表达;免疫组化和Western印迹法检测各组大鼠肾组织GRP78及Caspase-12蛋白的表达.结果 对照组大鼠肾组织无明显病理损伤,GRP78、Caspase-12在mRNA水平及蛋白水平均无明显表达.与对照组相比,模型组大鼠肾组织病理损伤明显,细胞凋亡严重,且以上指标均显著升高(P＜0.05).羟基酪醇干预组大鼠肾组织病理损伤、细胞凋亡较模型组减轻,且GRP78、Caspase-12在mRNA水平及蛋白水平表达均较模型组明显降低(P＜0.05),但仍高于对照组(P＜0.05).结论 GRP78及Caspase-12介导的内质网应激可能参与大鼠造影剂肾病的发生发展;羟基酪醇在造影剂诱导的肾脏损伤中发挥保护作用,这可能与其减轻内质网应激有关.
关键词： 造影剂 内质网应激 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12 葡萄糖调节蛋白78 羟基酪醇 -
瘦素对局灶性脑缺血后内质网应激相关蛋白的作用
目的 探讨瘦素对大鼠局灶性脑缺血后内质网应激相关蛋白的影响.方法 SD大鼠40只,随机分为假手术组、脑缺血组、脑缺血瘦素预处理组,线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,在闭塞血管前3 h皮下注射瘦素,于闭塞血管6 h后采用Longa 5分制量表进行神经功能评分、称量体重及脑水肿变化,并灌注取脑,采用免疫荧光化学法检测内质网应激相关蛋白葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)及C/EBP同源蛋白(C/EBP-homologous protein,CHOP)表达.结果 脑缺血瘦素预处理组和脑缺血组体重变化未见差异(P>0.05);脑缺血瘦素预处理组神经功能评分(1.90±0.31 vs.2.50±0.52,P<0.05)和脑水肿程度(3.60±0.52 vs.7.70±0.94,P<0.001)明显轻于脑缺血组,同时脑缺血瘦素预处理组GRP78表达明显高于脑缺血组(48.69±5.06 vs.35.78±4.35,P<0.01),CHOP表达明显低于脑缺血组(38.81±5.34 vs.60.24±4.11,P<0.01).结论 瘦素可减少神经功能缺损并可能与其上调GRP78蛋白,下调CHOP蛋白来减弱脑缺血导致的内质网应激有关.
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产前应激促进慢性应激诱导的子代鼠海马β-淀粉样蛋白形成
目的 探讨产前应激是否能促进慢性应激诱导的6月龄雄性子代鼠海马β-淀粉样蛋白(Aβ)形成及其作用机制. 方法 以APPswe/PS1 dE9双转基因小鼠为研究对象,将雄性APPswe/PS1 dE9双转基因子代鼠根据产前是否应激和子代鼠是否慢性应激分为产前应激-子代慢性应激(TT)组、产前应激-子代正常处理(TC)组、产前正常处理-子代慢性应激(CT)组和产前正常处理-子代正常处理(CC)组,每组18只.采用刚果红染色检查子代鼠脑组织的淀粉样斑块;采用Western blotting检测海马组织磷酸化真核翻译起始因子2的α亚单位(p-eIF2α)、磷酸化蛋白激酶R样内质网激酶(p-PERK)、葡萄糖调节蛋白78(Grp78)和淀粉样前体蛋白β位点分裂酶1(BACE1)的表达水平;采用ELISA法检测Aβ1-40和Aβ1-42表达水平;采用荧光酶标仪检测BACE1活性. 结果 与CC组相比,CT组、TT组、TC组小鼠脑组织淀粉样斑块数目增多.与CC组相比,CT组小鼠海马组织p-eIF2α、p-PERK、Grp78、BACE1、Aβ1-40和Aβ1-42表达水平明显升高,差异均有统计学意义(P＜0.05).与CT组相比,TT组海马组织p-eIF2α、p-PERK、Grp78、BACE1、Aβ1-40和Aβ1-42表达水平进一步升高,差异均有统计学意义(P＜0.05).各组小鼠海马组织BACE1活性比较差异无统计学意义(P＞0.05). 结论 产前应激可促进慢性应激诱导的6月龄雄性APPswe/PS1 dE9双转基因小鼠子代鼠Aβ生成增多,其机制可能是产前应激通过促进子代鼠海马神经元内质网应激,激活PERK,引起eIF2α磷酸化,促进BACE1表达增加,从而促进Aβ生成.
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阿托伐他汀对局灶性脑缺血大鼠脑组织血管新生的影响
目的 观察阿托伐他汀对局灶性脑缺血大鼠脑组织血管新生的影响并探讨相应机制.方法 选用雄性SD大鼠90只,按照随机数字表法分为假手术组、模型组、治疗组,每组再分为3个亚组:1d组、3d组、7d组,每亚组10只.模型组及治疗组大鼠按照大脑中动脉栓塞法制备局灶性脑缺血模型,假手术组只分离血管,不结扎,不插线.建模后3h,治疗组给予阿托伐他汀钙片4 mg/(kg·d)灌胃,其余2组在相应时间给予等量生理盐水灌胃.大鼠建模后3h及给药后1d、3d、7d给予神经功能评分;同时间点采用免疫组化染色法检测新生血管内皮细胞标志物CD105、葡萄糖调节蛋白78(GRP78);RT-PCR检测血管内皮细胞生长因子(VEGF) mRNA;Western blotting检测凋亡蛋白Caspase-12.结果 (1)模型组和治疗组大鼠建模后3h神经功能评分差异无统计学意义(P＞0.05),其余时间点评分差异均有统计学意义(P＜0.05).(2)各时间点模型组大鼠微血管密度均较假手术组大鼠增加,治疗组大鼠均较模型组大鼠增加,差异均有统计学意义(P＜0.05).(3)VEGFmRNA表达随时间延长逐渐升高;各时间点模型组大鼠均较假手术组大鼠表达增加,治疗组大鼠均较模型组大鼠表达增加,差异有统计学意义(P＜0.05).(4) GRP78、Caspase-12表达随时间延长逐渐降低;各时间点模型组大鼠均较假手术组大鼠表达增加,治疗组大鼠均较模型组大鼠表达降低、较假手术组表达增加,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 局灶性脑缺血大鼠脑组织血管新生明显,且阿托伐他汀可增强此效应,其机制可能为减弱内质网应激,减少内皮细胞凋亡.
关键词： 阿托伐他汀 血管新生 葡萄糖调节蛋白78 Caspase-12 -
GRP78在口腔黏膜下纤维性变组织中的表达及意义
目的 通过检测口腔黏膜下纤维性变(oral submucous fibrosis,OSF)组织中GRP78的表达,初步探讨内质网应激在OSF发病中的作用.方法 选取OSF患者30例(早、中、晚期各10例)为试验组,健康人5例为对照组,每例取其口腔颊黏膜,免疫组织化学二步法检测2组GRP78的表达情况.结果 正常口腔颊黏膜组织中GRP78呈阳性表达,而OSF组织中GRP78表达明显增强,主要表达于上皮层的角质形成细胞,两者的差异具有统计学意义(P＜0.05).OSF早、中期组织中GRP78的表达明显高于OSF晚期组织GRP78的表达(P＜0.05).结论 与正常口腔黏膜相比,OSF组织中GRP78的表达明显增高,提示内质网应激可能参与了OSF的纤维化过程.
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氯尼达明诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡的作用及机制
目的：探讨氯尼达明诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的作用及其可能机制。方法 MTT法及集落形成实验检测氯尼达明对乳腺癌细胞MCF-7增殖的抑制作用；PI/Annexin-V双染检测细胞凋亡；ATP检测试剂盒检测细胞内ATP水平；Western blot检测葡萄糖调节蛋白78（GRP78）、凋亡抑制蛋白家族cIAP1及caspase-8蛋白的表达。结果 MTT结果显示，50~250 mmol · L-1氯尼达明可抑制MCF-7细胞的增殖活性，且呈浓度和时间依赖性。集落形成实验同样证明了上述结果。PI/Annexin-V双染结果表明，随着氯尼达明浓度的增加，MCF-7细胞的凋亡率也随之增加。50、150和250 mmol · L-1氯尼达明作用于MCF-7细胞5 h后，细胞内ATP水平与对照组相比分别为80.67%、62.78%和30.73%。Western blot检测发现，随着氯尼达明作用时间的延长， GRP78蛋白表达上调，cIAP1蛋白表达下调，同时增强了caspase-8的活性。结论氯尼达明可以抑制乳腺癌细胞MCF-7的增殖活性，诱导其产生凋亡，其机制可能与减少细胞内ATP的产生诱导内质网应激反应，并下调cIAP表达及增强caspase-8的活性有关。
