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GRP78在卵巢癌顺铂耐药中作用的体外研究
目的:研究GRP78在卵巢癌顺铂耐药细胞中的表达及其与顺铂耐药的关系.方法:RT-PCR及Western blot法分别检测BAPTA-AM、A23187处理后SKOV3和SK-OV3/DDP细胞中GRP78 mRNA及其蛋白表达的变化；MTT法检测两种细胞对顺铂敏感性的变化.结果:SKOV3/DDP细胞中GRP78 mRNA及蛋白表达均显著高于SKOV3细胞(P均＜0.05).BAPTA-AM处理后,SKOV3和SKOV3/DDP细胞中GRP78 mRNA及蛋白表达均显著降低(P＜0.05)；A23187处理后则均显著增加(P＜0.05).BAPTA-AM处理后,SKOV3和SKOV3/DDP细胞对顺铂的敏感性分别增加了37.15％和52.91％；A23187药物作用后,两种细胞对顺铂的敏感性分别降低了54.86％和27.72％.结论:GRP78与卵巢癌的顺铂耐药性有关,下调GRP78表达能增强卵巢癌顺铂的敏感性.GRP78可能成为逆转卵巢癌顺铂耐药的新靶点.
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GRP78在肿瘤发生发展及化疗耐药中的作用
葡萄糖调节蛋白78(GRP78)作为内质网重要的分子伴侣,可被各种肿瘤微环境变化(如低糖、低氧等)诱导呈高表达.GRP78对肿瘤细胞增殖、凋亡、侵袭和转移以及血管形成至关重要.肿瘤组织中GRP78的表达与肿瘤的分期、分级以及预后等密切相关,并且其表达与肿瘤化疗耐药相关,而敲除GRP78可提高肿瘤对化疗药物的敏感性.GRP78不仅是预测肿瘤预后及对治疗反应的良好生物学标志物,针对肿瘤治疗普遍存在的化疗耐药,其有可能成为更具选择性的化疗靶点.
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八肽胆囊收缩素对脂多糖诱导的小鼠单核细胞 RAW264．7细胞内质网应激的影响
目的：探讨八肽胆囊收缩素（CCK-8）对脂多糖（LPS）诱导的单核细胞 RAW264．7细胞内质网应激（ERS）的影响。方法RAW264．7细胞分为对照组、LPS 组、CCK-8组、devazepide 组（DEV 组）、CCK-8＋LPS 组及 DEV＋CCK-8＋LPS 组，采用 RT-PCR 法检测 X 盒结合蛋白1的活性形式（XBP1s）的 mRNA 表达水平，Western blot-ting 检测 ERS 标志性蛋白葡萄糖调节蛋白78（GRP78）和 C ／EBP 同源蛋白（CHOP）的蛋白表达水平，ELISA 法检测细胞培养上清液中 IL-1β水平。结果与对照组相比，LPS 组的 XBP1s mRNA 表达水平、GRP78和 CHOP 的蛋白表达水平均升高（P ＜0．05）；与 LPS 组相比，CCK-8＋LPS 组的 XBP1s mRNA 表达水平、GRP78和 CHOP 的蛋白表达水平均降低（P ＜0．05）；与 CCK-8＋LPS 组相比，DEV ＋CCK-8＋LPS 组的 XBP1smRNA 和 GRP78、CHOP蛋白表达水平均升高（P ＜0．05）。IL-1β含量的变化趋势与 CHOP 蛋白表达的变化趋势一致。结论CCK-8通过1受体抑制 LPS 诱导的 ERS，减少 IL-1β的生成，从而发挥抗炎作用。
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GRP78对结直肠癌细胞RKO增殖的影响
目的 探讨葡萄糖调节蛋白78 (GRP78)对结直肠癌细胞RKO增殖的影响.方法 通过脂质体2000将靶向GRP78的质粒转入RKO细胞,Western-blot方法检测GRP78在RKO细胞中的表达,CCK-8方法检测细胞的增殖能力.结果 转染后,与对照组相比,RKO细胞GRP78蛋白表达明显降低(F=115.17,q=5.41、15.29,P＜0.05);同时,RKO细胞的增殖水平也明显降低(F=45.60,q=11.16、12.17,P＜0.05).结论 GRP78体外可促进结直肠癌增殖.
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肾癌组织中葡萄糖调节蛋白78的表达及意义
目的：探讨肾癌组织中葡萄糖调节蛋白78（GRP78）的表达及意义。方法采用免疫组化SP法检测108例肾癌患者癌组织及癌旁正常组织中GRP78表达。根据癌组织染色结果分为GRP78阳性表达和阴性表达，分析不同GRP78表达与患者临床病理特征的关系。采用Kaplan－Meier法计算不同GRP78表达者总生存期（OS），Log－rank检验进行比较。釆用Cox比例风险回归模型分析OS的影响因素。结果肾癌组织中GRP78阳性表达率为72．3％（78／108），癌旁正常组织的阳性表达率为19．4％（21／108），二者比较P＜0．05。 GRP78阳性表达与淋巴结转移、临床分期有关（P均＜0．05），与性别、年龄、肿瘤直径、病理类型、Fuhrman核分级无关（P均＞0．05）。肾癌组织GRP78阳性表达者与阴性表达者OS分别为（57．9±8．6）、（77．2±7．9）个月，二者比较P＜0．05。单因素Cox比例风险回归模型分析显示，GRP78表达、临床分期、Fuhrman核分级、淋巴结转移与OS有关（P均＜0．05）；多因素Logistic回归分析显示，GRP78阳性表达、Fuhrman核分级高、有淋巴结转移是OS的独立影响因素（P均＜0．05）。结论 GRP78在肾癌组织中表达升高，其高表达与患者OS有关。
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枳实含药血清对大鼠胃Cajal间质细胞内质网应激损伤的影响及机制
目的 探讨枳实含药血清对大鼠胃Cajal间质细胞(ICCs)内质网应激(ERS)损伤的影响及机制.方法 采用酶解法分离培养ICCs并行c-kit免疫荧光染色法鉴定细胞.使用衣霉素(Tm)构建ICCs内质网应激模型,4苯基丁酸(4-PBA)抑制内质网应激.血清药理学方法制备枳实含药血清.取对数生长期的ICCs,随机分为四组,ICCs组正常培养,ERS模型组予1μg/mL Tm处理,抑制剂组予含1μg/mL Tm和10 mmol/L 4-PBA处理,枳实组予1μg/mL Tm和20％枳实含药血清,每组作用时间均为24h.透射电子显微镜观察胃ICCs内质网的超微结构;实时荧光定量PCR法检测ERS相关因子葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、激活转录因子6(ATF6)mRNA表达.结果 成功分离、培养并鉴定ICCs.透射电子显微镜下正常ICCs的内质网结构正常,排列整齐;模型组ICCs细胞器减少,内质网肿胀,扩张、囊泡化改变、排列紊乱;枳实组ICCs内质网肿胀,呈局限性扩张.与ICCs组比较,ERS模型组GRP78、ATF6 mRNA表达升高(P均＜0.05);与ERS模型组比较,枳实组GRP78、ATF6 mRNA表达降低(P均＜0.05).结论 枳实含药血清可减轻ICCs细胞的ERS损伤,其机制可能与调控ERS ATF6通路有关.
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GRP78基因沉默对人卵巢癌SKOV3细胞增殖与凋亡的影响及机制
目的 探讨葡萄糖调节蛋白78(GRP78)基因沉默对人卵巢癌SKOV3细胞增殖与凋亡的影响及机制.方法 设计、合成针对GRP78基因的短发夹RNA干扰序列,构建GRP78载体质粒,将其转染入293T细胞,包装产生慢病毒(GRP78 shRNA).将培养好的SKOV3细胞随机分为对照组、空白载体组、实验组,将空白质粒、GRP78 shRNA分别转染至空白载体组、实验组.用MTT法检测各组细胞生长抑制率,用流式细胞术检测细胞凋亡率,用Western blotting法检测细胞内GRP78、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)及增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)蛋白表达.结果 转染24、48、72 h,与对照组、空白载体组比较,实验组细胞生长抑制率升高(P均<0.05);且实验组各时间点细胞生长抑制率比较差异有统计学意义(P均<0.05).转染72 h,与对照组、空白载体组比较,实验组细胞凋亡率升高(P均<0.05).转染72 h,与对照组、空白载体组比较,实验组GRP78蛋白相对表达量降低,CHOP、Caspase-3蛋白相对表达量升高(P均<0.05).结论 沉默SKOV3细胞内GRP78基因后,激活内质网应激凋亡信号通路,从而抑制细胞增殖、促进其凋亡.
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阿奇霉素对新生大鼠高氧肺损伤的防治作用及其机制
目的 观察阿奇霉素对新生大鼠高氧肺损伤的防治作用,并探讨其机制.方法 选用2d龄新生Wistar大鼠90只,随机分为对照组、模型组、实验组,每组30只.模型组和实验组大鼠暴露在高氧模型箱内制作高氧肺损伤模型,实验组大鼠同时腹腔注射阿奇霉素200 mg/(kg·d),连用14 d.各组分别于建模3、7、14 d各处死10只大鼠,测定肺组织湿/干重比(W/D),收集支气管肺泡灌洗液(BALF)测定白细胞总数,观察肺组织病理变化,采用Western blotting法检测肺组织中的Bcl-2蛋白、Bax蛋白、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)和葡萄糖调节蛋白78 (GRP78).结果 模型组建模3、7、14 d时肺组织W/D高于对照组和实验组(P均＜0.05).模型组建模3、7、14 d时BALF中白细胞总数高于对照组和实验组(P均＜0.05).对照组建模3、7、14 d时肺泡结构无明显改变,无间质水肿,见少许炎症细胞;模型组随建模时间延长,肺组织损伤加重;实验组建模后不同时间肺水肿程度、炎症细胞量、肺泡体积等均较模型组明显减轻.模型组建模3、7、14 d时肺组织中Bax蛋白相对表达量高于对照组和实验组,Bcl-2蛋白相对表达量低于对照组和实验组,Bcl-2/Bax低于对照组和实验组,CHOP、GRP78相对表达量高于对照组和实验组(P均＜0.05).结论 阿奇霉素可防治新生大鼠高氧肺损伤,这种作用可能与减少肺组织细胞凋亡及下调CHOP、GRP78表达有关.
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不同方法制备Ⅴ型心肾综合征小鼠模型的心肾损伤特点及内质网应激水平变化
目的 探讨急、慢性Ⅴ型心肾综合征小鼠模型的心脏、肾脏损伤特点及内质网应激水平变化.方法 70只C57BL/6小鼠随机分为盲肠结扎穿孔术组和阿霉素组各35只,盲肠结扎穿孔术组行盲肠结扎穿孔术制备急性Ⅴ型心肾综合征小鼠模型;阿霉素组腹腔注射阿霉素2.5 mg/kg,1周/次,连续8周,制备慢性Ⅴ型心肾综合征小鼠模型.盲肠结扎穿孔术组于术前及术后8、24、48、72 h,阿霉素组在注射阿霉素前及注射阿霉素后2、4、6、8周分别取3只小鼠处死,检测不同时间点血浆肌钙蛋白、脑钠肽、肌酐、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白水平;处死小鼠,取心脏、肾脏标本行HE、Masson染色观察组织病理变化,Western blot法检测肾脏组织葡萄糖调节蛋白78 (glucose regulated protein 78,GRP78)表达.结果 盲肠结扎穿孔术组小鼠HE染色24 h可见心肌细胞断裂,肌纤维排列紊乱,间质可见炎症细胞浸润,肾脏组织可见肾小管上皮细胞肿胀、变性,间质炎症细胞浸润;Masson染色未见明显间质纤维化;术后8、24、48、72 h血浆肌钙蛋白[(330.3±22.8)、(298.5±30.3)、(350.7±50.3)、(290.8±8.3)ng/L]较术前[(191.0±11.8)ng/L]增高,术后24 h血浆脑钠肽[(247.0±13.6)μg/L]、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白[(2 382.2±238.2)ng/L]较术前[(201.7±14.2)μg/L、(1 893.2±156.7)ng/L]增高,术后24、48 h血肌酐[(113.0±5.9)、(116.1±10.1)μmol/L]较术前[(85.2±9.0)μmol/L]增高(P＜0.05);内质网GRP78在术后24、48 h明显升高.阿霉素组HE染色显示注射第2周起小鼠心肌细胞出现肌纤维排列紊乱,肌纤维溶解,第8周出现明显心肌细胞断裂,注射第2周起肾小球系膜区细胞增生,基质增多;Masson染色显示第8周纤维化明显增多;注射第2、4、6、8周血肌酐[(117.5±2.5)、(114.5±4.0)、(126.4±6.1)、(312.4±24.3) μmol/L]、脑钠肽[(125.0±12.1)、(372.9±14.8)、(337.2±24.8)、(354.2±22.1)μg/L]较注射前[(56.1±3.1)μmol/L、(65.7±11.9)μg/L]增高(P＜0.05),注射第8周肌钙蛋白[(354.2±12.7)ng/L]较注射前[(271.7±15.3)ng/L]增高(P＜0.05);各时间点血浆中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白比较差异无统计学意义(P＞0.05);内质网GRP78水平无明显变化.结论 盲肠结扎穿孑孔术可使小鼠在术后8h出现心肌损伤,术后24h出现急性肾损伤;阿霉素腹腔注射8周小鼠出现心力衰竭、肾功能衰竭;急性Ⅴ型心肾综合征小鼠GRP78表达明显升高,慢性Ⅴ型心肾综合征小鼠GRP78表达无明显变化.
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GRP78在胃癌中表达水平及沉默表达后对人胃癌SGC-7901/DDP细胞增殖和凋亡的影响
目的 研究内质网分子伴侣葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78,GRP78)在人不同胃组织(正常胃组织和胃癌组织)和细胞(正常胃上皮GES1细胞、胃癌SGC-7901细胞、多耐药性胃癌SGC-7901/DDP细胞)中的表达水平;揭示GRP78沉默表达对SGC-7901/DDP细胞增殖和凋亡的影响.方法 利用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)和免疫印迹(Western blotting)方法 分别检测人正常胃组织、胃癌组织、人正常胃上皮GES1细胞、胃癌SGC-7901细胞、多耐药性胃癌SGC-7901/DDP细胞中GRP78 mR-NA和蛋白表达水平.利用LipfectamineTM2000将GRP78 siRNA转染至SGC-7901/DDP细胞中,同时设置未转染Control组和无义转染Control siRNA组.Real-time PCR和Western blotting方法 检测各组SGC-7901/DDP细胞转染效率;MTT方法 检测各组SGC-7901细胞的生长活力变化和不同浓度顺铂DDP作用下细胞增殖抑制率;流式细胞术检测各组SGC-7901细胞凋亡情况.结果 胃癌组织中GRP78 mRNA和蛋白表达水平显著高于正常胃组织(P<0.05);多耐药性胃癌SGC-7901/DDP细胞中GRP78 mRNA和蛋白表达水平显著高于胃癌SGC-7901细胞和正常胃上皮GES1细胞(P<0.05);GRP78 siRNA转染SGC-7901/DDP细胞后GRP78 mRNA和蛋白表达水平显著下降(P<0.05);与Control组和Control siRNA组相比,GRP78 siRNA转染组SGC-7901/DDP细胞生长活力显著下降,DDP作用下细胞增殖抑制率和细胞凋亡率显著增加(P<0.05).结论 GRP78 mRNA和蛋白在胃癌组织中高表达,在多耐药性胃癌SGC-7901/DDP细胞中也高表达,证实GRP78在胃癌中发挥促癌基因的作用.而GRP78 siRNA转染能够沉默SGC-7901/DDP细胞中GRP78基因表达,抑制SGC-7901/DDP细胞增殖并促进细胞凋亡.
关键词： 葡萄糖调节蛋白78 胃癌 细胞增殖 细胞凋亡 SGC-7901/DDP -
GRP78蛋白在胃腺癌组织中的表达及与细胞增殖和微血管密度的关系
目的 研究GRP78蛋白在胃腺癌组织中的表达及与临床病理特征、肿瘤增殖活性和血管形成的关系,探讨GRP78在胃腺癌发生、发展中的作用.方法 运用免疫组化的方法检测60例胃腺癌和20例癌旁组织中GRP78、Ki67的表达及微血管密度(MVD).结果 GRP78在癌旁组织多呈弱阳性表达,在胃腺癌组织中主要呈中强阳性表达,且在腺癌组织中的血管内皮细胞也有表达;GRP78在腺癌中的表达与性别、年龄无关,而与肿瘤大小、分化程度、浸润深度、有无淋巴结转移密切相关(P＜0.01).GRP78的表达与Ki67、MVD呈正相关(r=0.526,P＜0.01;r=0.843,P＜0.01).结论 GRP78在胃腺癌中高表达,与肿瘤的增殖活性和血管形成相关,在胃癌发生、发展中起重要作用.
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尼莫地平对惊厥持续状态幼鼠海马葡萄糖调节蛋白78、p38丝裂素激活蛋白激酶表达的影响
目的 探讨葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、p38丝裂素激活蛋白激酶(p38MAPK)相关信号通路在惊厥性脑损伤中的作用及尼莫地平对其的影响.方法 雄性SD幼年大鼠分为惊厥持续状态组(SC组)、尼莫地平组(NM组)、正常对照组(NC组).采用免疫组织化学法、反转录(RT)-PCR技术检测海马CA1区GRP78/Bip、p38MAPK蛋白、mRNA表达动态变化;采用原位末端标记(TUNEL)检测神经细胞的凋亡.结果 1.免疫组织化学:GRP78/Bip蛋白惊厥后4h开始增加,24 h达高峰,之后下降.p38MAPK蛋白惊厥后4h表达开始增加,24 h达高峰,48 h稍有下降.2.RT-PCR:SC组海马GRP78/Bip mRNA表达于惊厥后4h开始少量增加,24 h达高峰,48 h回到基线水平.NM组4h,24 h和48 h表达情况较SC组和NC组均明显升高(P均＜0.05).SC组p38MAPK mRNA于惊厥后4h开始表达,24 h达高峰,48 h后有所下降,但均高于NC组;NM组24 h时间点明显高于NC组(P＜0.01).3.TUNEL:SC组海马CA1区TUNEL阳性细胞于惊厥后4h已有少量表达,48 h达高峰,之后有下降趋势;且24 h、48 h2个时间点均明显高于NC组(P均＜0.05).NM组24 h、48 h时间点TUNEL阳性细胞表达水平较SC组明显降低(P均＜0.05);但仍高于NC组(P＜0.01).结论 GRP78信号通路可能通过激活p38MAPK介导细胞凋亡,尼莫地平预处理可影响GRP78/Bip和p38MAPK的表达,缓解内质网应激,减轻惊厥后海马病理损伤程度.
关键词： 惊厥持续状态 葡萄糖调节蛋白78 p38丝裂素激活蛋白激酶 -
CCAAT/增强子结合蛋白介导的内质网应激参与癫(痫)脑损伤的机制
目的 在建立戊四氮癫痫持续状态(SE)模型的基础上观察大鼠海马神经元的凋亡,内质网分子伴侣葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和内质网应激(ERS)特异性促凋亡因子即CCAAT/增强子结合蛋白(CHOP)在癫(痫)脑损伤(EBD)大鼠中的表达,探讨GRP78及CHOP在EBD中的作用,以及2-脱氧葡萄糖(2-DG)通过激活一定程度的ERS发挥脑保护作用的可能机制.方法 SD大鼠120只,雌雄各半,随机分为正常对照组、SE组和SE+ DG组,每组40只.采用腹腔注射戊四氮诱导大鼠SE.应用原位细胞凋亡检测法检测凋亡细胞,Western blot和Real-time PCR方法检测SE发作后3、6、12、24、48 h大鼠海马内GRP78及CHOP mRNA和蛋白的表达.结果 SE发作后12、24、48 h神经细胞凋亡增多,SE+ DG组凋亡细胞数在同一时间点较SE组明显减少；Western blot和Real-time PCR发现GRP78蛋白和mRNA的表达在SE发作后3、6、12 h均高于正常对照组,6h达峰值；SE+ DG组GRP78 mRNA和蛋白的表达在早期(3 h)较SE组明显增高,6h和12h明显减少；在SE发作后6h开始增多,12、24、48 h CHOP蛋白和mRNA的表达高于正常对照组,24 h达高峰；SE+ DG组在同一时间点均较SE明显减少.正常对照组各个时间点GRP78和CHOP蛋白和基因的表达均无差异.结论 SE发作后早期可能通过GRP78表达升高启动ERS以保护细胞功能；后期CHOP被激活,参与EBD发生过程；2-DG通过激活一定程度的ERS,保护脑细胞.内质网CHOP凋亡通路可能是EBD的又一机制.
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发育期大鼠反复热性惊厥激活内质网应激
目的 研究反复热性惊厥(FS)对发育期大鼠血浆促肾上腺皮质激素(ACTH)及脑组织葡萄糖调节蛋白78(Grp78)水平的影响,探讨FS与内质网应激的关系.方法 21日龄无特定病原体(SPF)的sD大鼠40只.采用热水浴诱导其惊厥,隔日1次,共10次.大鼠随机分为正常对照组(n=12,37.0℃水浴)和高热组(n=28,44.8℃热水浴),根据惊厥与否进一步将高热组分为高热对照组(n=12)和反复FS组(n=16).在10次处理后12 h,应用放射免疫分析法测定各组大鼠血浆ACTH水平,用免疫组织化学法和蛋白免疫印迹检测各组大鼠大脑皮层和海马神经元Grp78蛋白表达水平.应用SPSS 11.5软件进行统计学分析.结果 与对照和高热组比较,反复FS组大鼠血浆ACTH水平明显升高(P.<0.01).免疫组织化学结果 显示,海马和皮层的Grp78蛋白水平在对照组表达较弱,呈浅棕黄色,FS组海马和皮层Grp78蛋白表达显著高于对照及高热组,胞质可见大量深棕褐色颗粒.Westem blot结果 表明,3组大鼠海马及皮层均有Grp78蛋白表达,与对照组比较,FS组海马及皮层的Grp78蛋白水平增高明显,差异均有统计学意义(Pa<0.01).高热对照组Grp78蛋白水平与对照组比较增高,有显著性差异(P<0.01).结论 反复Fs可引起下丘脑-垂体-肾上腺皮质轴(HPA)激活,诱导脑内Grp78蛋白表达增加,导致内质网应激.
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二氧化硫对左向右分流大鼠心肌组织内质网应激蛋白表达的影响
目的 探讨二氧化硫(SO2)对左向右分流大鼠心肌组织内质网应激蛋白表达的影响.方法 雄性SD大鼠24只,用随机数字表法分为假手术组(8只)、手术组(8只)和手术+SO2组(8只).对手术组和手术+ SO2组大鼠通过腹主动脉-下腔静脉穿刺建立左向右分流动物模型.手术+SO2组于术后腹腔注射Na2SO3/NaHSO3.8周后,测定各组大鼠血氧饱和度,计算肺循环血量/体循环血量(Qp/Qs);计算心脏质量/体质量(HW/BW)、右心室/(左心室+室间隔)[RV/(LV+ SP)];ELISA法测定各组大鼠右心室心肌组织Ⅰ型胶原水平;采用高效液相色谱法测定各组大鼠右心室心肌组织SO2水平,分别采用实时荧光定量-多聚酶链式反应(RT-PCR)和Western blot法测定各组大鼠右心室心肌组织葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、c-jun氨基末端激酶(JNK)和磷酸化JNK(p-JNK) mRNA和蛋白表达水平的变化.结果 分流术后8周,手术组与手术+SO2组Qp/Qs值均较假手术组明显升高(P均＜0.05);手术组HW/BW、RV/(LV+ SP)及右心室心肌组织Ⅰ型胶原水平较假手术组明显升高(P均＜0.05),予SO2干预后,HW/BW、RV/(LV+ SP)及右心室心肌组织Ⅰ型胶原水平均明显降低(P均＜0.05).右心室心肌组织SO2水平在手术组较假手术组明显升高,而手术+SO2组明显高于手术组(P均＜0.05).右心室心肌组织GRP78、JNK和p-JNK的mRNA和蛋白表达在手术组明显高于假手术组(P均＜0.05);而应用SO2干预后,GRP78 、JNK和p-JNK在mRNA和蛋白表达水平明显降低(P均＜0.05).结论 SO2可能通过降低左向右分流大鼠右心室心肌组织内质网应激蛋白表达而对心肌组织发挥保护作用.
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缺氧、氧化应激对视网膜色素上皮细胞增殖及葡萄糖调节蛋白78表达的影响
目的 观察缺氧、氧化应激对体外培养的视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞增殖的影响及GRP78表达的变化.方法 体外培养人RPE细胞,采用CoCl2诱发细胞缺氧模型、H2O2诱发氧化应激模型.实验分为量-效关系组:细胞分别经浓度为100 μmol·L-1、200 μmol·L-1、400 μmol·L-1、800 μmol·L-的CoCl2、H2O2作用12h,用MTT法检测细胞增殖情况;时-效关系组:在CoCl2浓度为200 μmol·L-1、H2O2浓度为400 μmol·L-1的基础上,分别选取药物作用8h、12 h、16h3个时间点收集细胞,采用免疫细胞化学染色检测GRP78蛋白的表达情况.结果 量-效关系组:不同浓度CoCl2组RPE细胞活性与空白对照组相比均明显下降(均为P＜0.05);400 μmol·L-1及800 μmol·L-1H2O2组细胞存活率较空白对照组均明显下降(均为P＜0.05).时-效关系组:空白对照组GRP78表达阳性细胞率为(5.4±3.0)％;CoCl2作用8h、12 h、16 hGRP78阳性细胞率分别为(34.2±7.1)％、(54.4±9.1)％、(34.7±6.8)％;H2O2作用8h、12 h、16 h GRP78阳性细胞率分别为(37.8±7.1)％、(57.4±5.1)％、(42.5±3.9)％.经统计学分析,CoCl2、H2O2处理8h后,RPE细胞中GRP78表达均较空白对照组明显升高(均为P＜0.01),作用12h时GRP78的表达量高,作用16 h时GRP78的表达量又有下降.结论 GRP78可以作为RPE细胞缺氧、氧化应激的生化标志物,GRP78的表达变化与细胞应激状态有一定依赖关系.
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活血化瘀汤对急性高眼压大鼠视网膜内质网应激的影响
目的 研究急性高眼压大鼠视网膜的内质网应激反应(endoplasmic reticulum stress,ERS)以及活血化瘀汤对ERS的影响.方法 88只Wistar大鼠随机分为正常对照组(8只)、高眼压组(40只)、治疗组(40只).除正常对照组外所有大鼠均随机取一眼制作急性高眼压模型,治疗组在造模后给予活血化瘀汤(4 mL·d-1)灌胃,高眼压组和治疗组分别在造模后12 h、ld、3d、7d、14 d均等处死大鼠.HE染色观察各组视网膜组织结构变化,免疫组织化学染色观察视网膜GRP78、Thy-1表达变化,RT-PCR检测视网膜GRP78、Thy-1 mRNA变化.结果 光镜下见高眼压组视网膜早期水肿,后期萎缩；治疗组与高眼压组在各时间点的变化趋势相同,但程度均轻于高眼压组.免疫组织化学和RT-PCR结果显示高眼压组造模后12h,GRP78蛋白和mRNA的表达量迅速上调(0.291±0.012、1.534±0.143),与正常对照组(0.195±0.003、1.011±0.011)比较,差异均有统计学意义(均为P＜0.05)；造模后1d,表达量达到高峰(0.498±0.049、2.047±0.177)；造模后3d迅速降低,但仍高于正常对照组,差异均有统计学意义(均为P ＜0.05).治疗组GRP78蛋白和mRNA表达量在造模后12 h(0.274±0.023、1.398±0.031)较正常对照组显著增多,差异均有统计学意义(均为P＜0.05),较高眼压组低,但差异均无统计学意义(均为P＞0.05)；造模后1d达高峰(0.432 ±0.042、1.641 ±0.164),但增加量均少于同时间点高眼压组,差异均有统计学意义(均为P＜0.05)；造模后3d表达量降低(0.212±0.022、1.174±0.126),与正常对照组比较,差异均无统计学意义(均为P＞0.05),但低于同时间点高眼压组,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).造模后7d、14 d三组间GRP78蛋白和mRNA的表达量差异均无统计学意义(均为P＞0.05).造模后14 d,高眼压组和治疗组Thy-1蛋白和mRNA的表达量均降低,但治疗组Thy-1 mRNA表达量(0.754±0.053)明显高于高眼压组(0.627±0.069),差异有统计学意义(P＜0.05).结论 ERS参与了急性高眼压视网膜损伤过程,中药活血化瘀汤对该损伤有保护作用,可能与其抑制ERS有关.
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丝胶对糖尿病大鼠视网膜内质网应激特异性caspase-12凋亡途径的调节及其对细胞凋亡的抑制
背景 内质网应激(ERS)特异性caspase-12凋亡途径在细胞凋亡过程中发挥重要作用,细胞凋亡是糖尿病视网膜神经退行性病变的重要特征.研究证实,丝胶对视网膜神经细胞的凋亡具有保护作用,但其对糖尿病视网膜病变(DR)过程中与caspase-12凋亡途径相关的视网膜神经细胞是否具有保护作用仍有待研究证实. 目的 探讨丝胶是否能够通过影响ERS特异性caspase-12凋亡途径对糖尿病大鼠视网膜细胞凋亡发挥抑制作用.方法 采用高脂高糖饲料喂养联合链脲佐菌素(STZ)连续腹腔内注射3d对30只2～3月龄SPF级SD大鼠制备糖尿病模型,以大鼠空腹血糖≥16.7 mmol/L及出现多饮、多食、多尿特点为造模成功.将24只造模成功的糖尿病模型大鼠按照计算机数字随机分配法分为丝胶治疗组和糖尿病模型组,每组12只,另取同周龄12只正常大鼠作为正常对照组.丝胶治疗组大鼠于成模后给予丝胶溶液2.4 g/(kg·d)灌胃,连续35 d.各组大鼠采用过量麻醉法处死并制备视网膜标本,采用TUNEL法检测并计算各组大鼠视网膜神经细胞的凋亡指数(AI);分别采用Western blot法和逆转录PCR技术检测大鼠视网膜中ERS标志物葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、ERS特异性caspase-12凋亡途径和easpase-3蛋白及其mRNA的相对表达量,并对各组检测结果进行比较. 结果 大鼠糖尿病造模成功率为80％(24/36).正常对照组、糖尿病模型组和丝胶治疗组大鼠均可见视网膜神经细胞凋亡,阳性产物主要位于视网膜神经节细胞(RGCs)层和内核层,AI分别为0.028 4±0.002 3、0.215 1±0.020 9和0.1150±0.018 1,糖尿病模型组大鼠视网膜AI明显高于对照组,丝胶治疗组AI明显低于糖尿病模型组,差异均有统计学意义(均P＜0.05).丝胶治疗组大鼠视网膜中GRP78、caspase-12和easpase-3蛋白的相对表达量分别为0.523±0.029、1.118±0.051和0.315±0.024,较糖尿病模型组的0.924±0.039、1.468±0.037和0.554±0.032均明显下降,差异均有统计学意义(均P＜0.05),丝胶治疗组大鼠视网膜中GRP78、easpase-12和caspase-3 mRNA的相对表达量分别为0.816±0.022、0.216±0.023和0.322±0.022,较糖尿病模型组的1.218±0.033、0.407±0.012和0.531±0.029均明显下降,差异均有统计学意义(均P＜0.05). 结论 丝胶可以通过下调糖尿病模型大鼠视网膜中GRP78、caspase-12和caspase-3的表达改善内质网ERS,减少视网膜神经细胞的凋亡.
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5-羟色胺对肠炎小鼠结肠组织中 GRP78表达的影响
目的：观察5-羟色胺（5-HT）对肠炎小鼠结肠组织葡萄糖调节蛋白78（GRP78）表达的影响。方法：将7～8周龄的C57 BL／6小鼠随机分为6组（ n＝8）：正常对照组，低、高剂量5-HT组（分别给予1．0、2．0 mg／kg的5-HT灌肠，每3 d 1次），低、高剂量DSS组（分别饮用10或25 g／L DSS溶液），DSS＋5-HT组（给予10 g／L DSS＋1．0 mg／kg 5-HT），于第6天结束时处死小鼠。通过疾病活动指数评分、结肠长度测定和HE染色等方法评估肠道炎症程度，采用实时定量PCR技术检测小鼠结肠组织中IL-6、TNF-α和 GRP78 mRNA的表达水平，采用免疫组化法检测小鼠结肠组织中GRP78蛋白的表达。结果：正常对照组，低、高剂量5-HT组小鼠无肠炎，低剂量DSS组有轻微肠炎，高剂量DSS组和DSS＋5-HT组有严重肠炎。 IL-6和TNF-αmRNA的表达水平随炎症程度而增加。 GRP78 mRNA和蛋白在正常对照组、低剂量5-HT组和低剂量DSS组中的表达水平差异无统计学意义（P＞0．05），在高剂量5-HT组、DSS＋5-HT组和高剂量DSS组，尤其是高剂量DSS组表达增高（ P＜0．05）。结论：5-HT可能通过上调GRP78蛋白的表达激活内质网应激反应，参与肠道炎症反应。
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鞘内注射丹参酮ⅡA对CCI大鼠脊髓背角内质网应激蛋白GRP78表达的影响
目的:观察丹参酮ⅡA对坐骨神经慢性压迫大鼠脊髓背角内葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)的表达,探讨内质网应激与丹参酮ⅡA镇痛机制之间的关系.方法:30只SD雄性大鼠随机分为模型组(n=20)和假手术组(n=10).模型组又分为实验组和生理盐水组(n=10).实验组和生理盐水组分别在大鼠鞘内注射丹参酮ⅡA 20 mg·kg-1和生理盐水0.1 mL,在手术当日及术后,每日1次,连续注射14d.检测各组大鼠在手术前及术后14天d的机械痛阈和热痛阈;术后第14天,免疫组织化学法检测大鼠脊髓背角内GRP78的表达.结果:与假手术组比较,生理盐水组大鼠的GRP78的表达增多,机械痛阈和热痛阈明显降低;与生理盐水组比较,实验组的脊髓背角内GRP78的表达下降,机械痛阈和热痛阈明显升高,差异均有明显统计学意义(P＜0.05).结论:坐骨神经慢性压迫模型大鼠鞘内注射丹参酮ⅡA后的镇痛作用可能与降低模型大鼠脊髓背角内GRP78的表达有关.
