前葡萄膜炎患者房水闪辉和炎性细胞的定量测量

目的探讨激光蛋白细胞检测仪定量测定前葡萄膜炎患者房水闪辉和炎性细胞的临床应用价值.方法采用FC-2000型激光蛋白细胞检测仪(1aserflare cell meter,LFCM)非接触性定量检测2001年12月至2002年4月于中山眼科中心就诊、复查的110例前葡萄膜炎患者(194只眼)和52例正常人(52只眼)的房水闪辉和炎性细胞出现情况,检测前所有患者均在裂隙灯显微镜下详细检查,并进行房水闪辉分级和定量检测细胞.结果LFCM检测前葡萄膜炎患者O～2级房水闪辉的平均值分别为7.9、29.5和189.O pc/ms;3～4级房水闪辉由于背景干扰大,检测结果显示为警告或无法检测.前葡萄膜炎患者的0～2级房水闪辉的裂隙灯显微镜检查与激光蛋白测定结果呈正相关性(r=0.75,P＜0.001);与正常人房水闪辉值(5.3 pc/ms)比较,均显著增高(t=5.872,P＜0.05).LFCM检测前葡萄膜炎患者(0～4级房水闪辉)房水中炎性细胞的平均值分别为1.5、12.1、33.9、84.9和193.1个/0.5 mm3;裂隙灯显微镜检查与激光蛋白细胞计数结果呈正相关性(r=0.72,P＜0.001);与正常人房水中炎性细胞值(0.9个/0.5 mm3)比较,均显著增高(t=7.351,P＜0.05).结论LFCM检测可确切判断轻、中度的血房水屏障破坏和炎性反应改变,此项检查对判断眼前段炎性反应和指导临床用药有重要价值.(中华眼科杂志,2004,40:510-513)

血管内皮生长因子及其受体在实验性脉络膜新生血管中的表达

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)及其FLK1受体在氪激光诱导的棕色挪威(BN)大鼠脉络膜新生血管(CNV)中的表达.方法应用氪激光对30只雄性BN大鼠实验眼进行视网膜光凝,创建CNV模型,分别于光凝后3、7、14、21、28及56 d行荧光素眼底血管造影(FFA),处死大鼠后摘除眼球,制作组织病理学标本观察,原位杂交检测VEGFmRNA,免疫组化检测VEGF和FLK1受体.结果正常BN大鼠视网膜神经节细胞层、内核层、色素上皮层、视网膜及脉络膜血管内皮细胞中均表达VEGFmRNA.实验眼光凝后3 d,光凝区视网膜神经节细胞层、内核层、外核层缺损区、视网膜及脉络膜血管内皮细胞均表达VEGFmRNA,此时视网膜下未形成CNV;3～21 d视网膜内VEGFmRNA表达水平逐渐下降(P＜0.01);21 d与28 d和56 d比较,VEGFmRNA表达水平差异无显著意义(P＞0.05).光凝后7 d,FFA检查可见光凝区有圆盘状荧光素渗漏.病理切片可见视网膜下形成CNV,CNV中VEGFmRNA表达阳性;7～21 d,CNV中VEGFmRNA阳性染色面积及吸光度(A)值逐渐增加(P＜0.01);21 d后VEGFmRNA表达水平差异无显著意义(P＞0.05).正常视网膜和脉络膜血管内皮细胞及视网膜神经节细胞层FLK1受体表达阳性;光凝后7 d,CNV中FLK1受体表达阳性;随CNV的增生,FLK1受体阳性染色面积及A值逐渐增加(P＜0.01);21 d与28 d和56 d比较,FLK1受体表达水平差异无显著意义(P＞0.05).结论VEGF和FLK1受体在视网膜和脉络膜损伤区聚集,经有效结合后,诱导内皮细胞分化和视网膜下CNV形成.(中华眼科杂志,2004,40:522-527)

鼠视网膜色素上皮显微移植方法的比较研究

目的比较不同的视网膜色素上皮(RPE)移植进入视网膜下腔的显微注射技术引起Lewis鼠宿主眼的医源性损伤.方法Lewis鼠45只眼分为3组,视网膜下腔注射转染荧光素蛋白的hTERT-RPE1细胞.第一组使用Hamilton注射器.第二组使用Eppendorf微量加样器.第三组使用输入泵注射器.光学显微镜下评价宿主眼的医源性损伤程度.结果使用注入泵注射器组12只眼无损伤,而使用Eppendorf微量加样器组和Hamilton注射器组均有14只眼发生了严重或者轻度损伤.结论注入泵注射器的低速电机泵可提供缓慢且可以控制的液体注入流,能够明显减少RPE移植入视网膜下腔时对宿主眼的医源性损伤.(中华眼科杂志,2004,40:549-551)

四种细胞因子对牛晶状体上皮细胞胶原合成的影响及对前胶原mRNA表达的调控

目的探讨表皮生长因子(EGF)、白细胞介素1(IL-1)、γ干扰素(IFN-γ)和生长抑素8肽(SS-8肽)在晶状体后囊膜混浊形成中的作用及影响胶原合成的机制.方法细胞接种于96孔培养板贴壁后分别加入含有浓度为10-2～102ng/ml的EGF、10～105ng/ml的IL-1、10-11～10-7mol/L的SS-8肽及10～105U/ml的IFN-γ细胞培养液,采用3H-脯氨酸掺入法检测对胶原合成的影响;用Northern blot技术检测对Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA表达的调控.结果EGF 10-1～102ng/ml、IL-1 102～105ng/ml显著促进胶原合成,IFN-γ 103～105U/ml、SS-8肽10-10～10-7mol/L显著抑制胶原合成;1 ng/ml的EGF及103ng/ml的IL-1可增加Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA表达,而103U/ml的IFN-γ及10-9mol/L的SS-8肽可减少Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA表达.结论EGF、IL-1参与了晶状体后囊膜混浊形成中的胶原合成,且对胶原合成的影响是作用于转录水平;IFN-γ、SS-8肽的作用提示其可用于防治晶状体后囊膜混浊.(中华眼科杂志,2004,40:545-548)

视网膜下间隙移植经基因修饰的视网膜色素上皮细胞对大鼠光感受器变性及视功能的保护作用

目的以RCS大鼠作模型,研究经基因修饰的永生化视网膜色素上皮细胞(RPE)视网膜下移植对光感受器变性的保护作用.方法在绿色荧光蛋白基因逆转录病毒感染的基础上,利用脂质体介导节状神经生长因子(CNTF)表达质粒转移,修饰成人RPE细胞系CRL-2302.将1×105个表达绿色荧光蛋白(GFP)或GFP及CNTF的RPE细胞移植到4～5周龄RCS大鼠右眼视网膜下间隙,左眼不移植或注射PBS作为对照.术后2、4、6、8、10和12周作荧光显微镜、光镜、电镜及电生理检查.结果荧光显微镜观察,术后1周移植的人RPE细胞在RCS大鼠视网膜下间隙已扩散到几乎整个眼底,但随时间延长移植的细胞逐渐减少,术后6周仅残留少量移植细胞.光镜及电镜观察显示移植眼保留的光感受器数量明显较对照眼多,凋亡细胞则较对照眼少.此外,移植眼宿主RPE细胞形态较正常,并可见吞噬小体.视网膜电图(ERG)检查结果表明部分移植眼视网膜功能明显较对照眼好.结论经过基因修饰的RPE细胞移植可延缓RCS大鼠视网膜光感受器变性,为治疗视网膜变性提供了新的途径.(中华腰科杂志,2004,40:552-556)

碱性成纤维细胞生长因子反义寡核苷酸及其脂质体对体外培养的大鼠晶状体上皮细胞增殖的抑制作用

目的探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)反义寡核苷酸及其脂质体对大鼠晶状体上皮细胞(LEC)增殖的抑制作用.方法体外培养大鼠LEC,细胞传代后分别加入bFGF反义和正义寡核苷酸及其脂质体,以营养液和无药脂质体为对照培养24 h后,用噻唑蓝(MTT)法测定细胞的增殖情况,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法测定细胞bFGF mRNA的表达情况.结果大鼠LEC原代培养24h可见细胞生长,形态为多边形,培养2～3周细胞汇合成片;传代培养细胞可在1～2周汇合成片.MTT法测定显示,bFGF反义寡核苷酸组(Ⅰ组)、正义寡核苷酸组(Ⅱ组)及营养液组(V组)的吸光度(A值)分别为0.138±0.074、0.325±0.097及0.370±0.079,Ⅰ组A值显著小于Ⅱ和V组(P=0.024,0.005);bFGF反义寡核苷酸脂质体组(Ⅲ组)、正义寡核苷酸脂质体组(Ⅳ组)及无药脂质体组(Ⅵ组)的A值分别为0.128±O.032、0.238±0.120及0.348±0.017,Ⅲ组A值显著小于Ⅵ组(P=0.000).RT-PCR法检测结果显示,以2μg总RNA为模板,循环30次,bFGF反义寡核苷酸、bFGF正义寡核苷酸及营养液的扩增产物的量分别为0.33、0.99及0.85μg;bFGF反义寡核苷酸脂质体、bFGF正义寡核苷酸脂质体及无药脂质体的扩增产物的量分别为O.23、0.48及0.56μg.结论大鼠LEC可在体外培养;bFGF反义寡核苷酸及其脂质体可减少bFGF的mRNA含量,并抑制体外培养的大鼠LEC增殖.(中华眼科杂志,2004,40:528-532)

视网膜色素上皮受体介导的内吞作用

目的研究视网膜色素上皮(RPE)细胞内吞光感受器细胞外基质(IPM)内大分子可溶性物质的可能性及其机制.方法采用荧光标记的甲醛作用后的血清白蛋白(F-FSA),作为清道夫受体配体的指示物,与组织块培养的猪RPE细胞共同孵育,用荧光显微镜和电子显微镜观察RPE细胞对F-FSA的内吞情况.结果RPE细胞能够摄入F-FSA;这一作用随配体浓度增加而提高,随孵育时间延长而增强;相同或相似的配体之间存在竞争作用;F-FSA进入RPE细胞后,以微囊泡的形式存在于细胞中.结论RPE细胞能够摄入携带负电荷的大分子物质,这一作用是通过受体介导的内吞作用完成的,清道夫受体可能是介导这一作用的受体;受体介导的RPE细胞的内吞作用可能是IPM内大分子物质代谢的重要机制.(中华眼科杂志,2004,40:539-544)

伏格特-小柳-原田综合征患者外周血淋巴细胞Fas和FasL mRNA的表达

目的探讨Fas、FasL mRNA在伏格特-小柳-原田(Vogt-Koyanagi-Harada,VKH)综合征患者外周血淋巴细胞的表达.方法于2000年1～6月抽取16例VKH综合征患者和19例正常人的外周血,提取淋巴细胞的总RNA,将RNA逆转录为cDNA,然后用荧光定量聚合酶链反应(fluorescent quantitative polymerase chain reaction,FQ-PCR)的方法实时检测Fas、FasL PCR扩增的全过程,计算样本中Fas、FasL mRNA的表达量.结果VKH综合征患者外周血淋巴细胞的Fas mRNA的表达量[(1.6±2.0)×106]显著高于正常对照组[(5.7±2.0)×105](t=4.50,P＜0.05),FasLmRNA的表达量[(1.8±1.5)×106]也显著高于正常对照组[(4.8±3.5)×105](t=9.57,P＜0.05).结论VKH综合征患者外周血中长期存在的大量Fas、FasL mRNA高表达的活化自身免疫性淋巴细胞,可能是其炎性反应反复发作、病情迁延不愈的重要原因之一.(中华眼科杂志,2004,40:507-509)

人脐带血清器官培养液保存猪角膜的实验研究

目的观察胎牛血清器官培养液和人脐带血清器官培养液对猪角膜内皮细胞形态学、组织学、超微结构、酶活性及代谢等的影响.方法器官培养方法:4周以内31℃密闭培养,之后脱水24h.选择猪眼113只,其中100只角膜分为两组进行配对器官培养保存.第1组(50只角膜):应用培养液Ⅰ(含10%胎牛血清);第2组(50只角膜,第1组的对侧角膜):应用培养液Ⅱ(含10%人脐带血清).13只角膜作为正常对照.器官培养每周每组各取出12只角膜进行内皮细胞形态学分析、HE染色、酶组织化学染色.保存2周、4周时行扫描电镜检查.检测保存前后培养液的pH值和葡萄糖、乳酸浓度.器官培养过程中行微生物学检测.结果器官培养期间角膜内皮细胞单层保持完整,多形性增加,两组之间角膜内皮细胞密度、细胞面积的变异系数和六边形细胞比例在保存4周内差异无显著意义.保存4周的猪角膜与正常猪角膜相比,平均内皮细胞丢失率第1组为10.98%,第2组为10.85%.两组角膜器官培养后的组织学、超微结构、酶活性无明显区别.扫描电镜显示内皮细胞层完整,细胞形态改变.酶组织化学染色显示上皮、内皮细胞酶活性旺盛,基质细胞的酶活性随保存时间的延长而降低.角膜代谢状态良好.器官培养液污染率为6%.结论两种器官培养液均可以保持角膜内皮活性达4周,推测人脐带血清能够替代胎牛血清作为角膜器官培养液的成分.(中华眼科杂志,2004,40:533-538)

眼前后段联合手术治疗复杂性眼病的远期疗效评价

目的探讨临时人工角膜下行前后段联合手术治疗复杂性眼病的远期疗效.方法1994年6月至2001年6月,107例(107只眼)眼前后段复杂病变的患者于我院在临时人工角膜下行玻璃体视网膜手术,再联合穿透性角膜移植术,术后局部及全身应用糖皮质激素,并随访观察患者视力、眼压、角膜植片及眼底情况.手术治愈标准:(1)植片透明;(2)视网膜复位;(3)眼压正常或经药物控制眼压正常.结果达到手术治愈标准者78只眼(72.9%),手术后眼球保存者92只眼(86.0%),术后发生植片免疫排斥者34只眼(31.8%),眼球萎缩13只眼(12.2%),继发性青光眼15只眼(14.0%).术前存在增生性玻璃体视网膜病变(PVR)患眼的视网膜手术治愈率与无PVR者比较,差异有显著意义(x2=3.90,P＜0.05).结论临时人工角膜下眼球前后段联合手术是治疗角膜明显混浊合并玻璃体视网膜病变的有效方法.远期失败的主要原因是角膜植片内皮功能失代偿和增生性玻璃体视网膜病变.(中华眼科杂志,2004,40:514-516)

水凝胶人工晶状体混浊一例

患者女,70岁.因右眼视物模糊3个月,于2001年12月来我院就诊.患者曾因双眼葡萄膜炎、屈光不正、并发性白内障,分别于2000年10月和12月在我院行左、右眼超声乳化白内障摘除后房型人工晶状体(intraocular lens,IOL)植入术.右眼术中使用美国Alcon公司的BSS和正大福瑞达公司的黏弹剂(玻璃酸钠注射液),植入美国博士伦公司的水凝胶Model H60M(产品序列号为SN:5WJ239)折叠式IOL .

准确诊断和合理治疗葡萄膜炎

葡萄膜炎是一类常见的致盲眼病,据报道,在美国约10%的盲目是由葡萄膜炎所致,在我国致盲眼病中约占第3～10位[1,2],因此受到眼科医生的广泛关注.但由于多种原因,对葡萄膜炎的诊断和治疗仍存在着诸多问题,主要表现为诊断的简单化、治疗的格式化及用药的复杂化[3-5].

α-晶状体蛋白分子伴娘功能的初步研究

α-晶状体蛋白作为晶状体的主要结构蛋白,具有分子伴娘特性,对长期维持晶状体的透明具有重要意义[1,2].为探讨其作用机制,我们对比观察了透明晶状体皮质和核、年龄相关性白内障不同年龄患者晶状体和不同混浊程度晶状体中α-晶状体蛋白对过氧化氢酶热凝聚的抑制作用.

折叠式人工晶状体植入术后术眼伪调节力的临床观察

1979年Sugitani等首先报道人工晶状体植入术后术眼存在约2.00D类调节作用,并称其为伪调节力.其后的有关研究多局限于单焦点硬性后房型人工晶状体.自2001年开始,我们对超声乳化白内障吸除折叠式人工晶状体植入术后术眼的伪调节力进行了相关研究,现将结果报告如下.

兔视网膜脉络膜经瞳孔温热疗法组织病理学改变

经瞳孔温热疗法(transpupillary thermotherapy,TTT)是一种治疗局部疾病的热疗技术.初步临床结果表明,TTT治疗脉络膜黑色素瘤、视网膜母细胞瘤、脉络膜血管瘤以及脉络膜新生血管(choroidal neovascularization,CNV)等疾病,具有效率高而组织损伤小的优点.

蛋白激酶C与糖尿病视网膜病变血-视网膜屏障破坏关系的实验研究

糖尿病视网膜病变是糖尿病微血管病变中的重要表现,是糖尿病的严重并发症之一,而高血糖则是糖尿病微血管并发症发生和发展的重要危险因素[1-3].

一氧化氮及其合酶在白内障形成过程中的作用

近年的研究发现一氧化氮(NO)是造成细胞氧化损伤的重要物质之一,与眼部多种疾患有关.本研究采用体外晶状体培养技术,检测在白内障形成过程中晶状体内NO和一氧化氮合酶(NOS)含量的变化,探讨其与白内障形成的关系,并观察牛磺酸的抑制作用.

盐酸川芎嗪腹腔注射在兔玻璃体中的药代动力学研究

川芎嗪(tetramethylpyrazine)是从伞科植物川芎中提取的有效成分之一,又名四甲基吡嗪,目前可人工合成,临床应用广泛,主要用于闭塞性脑血管疾病脑血栓的治疗[1],在眼科方面对改善青光眼患者的视功能、单纯性糖尿病视网膜病变和视网膜静脉阻塞有较好疗效[2-4].本研究采用盐酸川芎嗪腹腔注射,探讨其在家兔玻璃体中的药代动力学变化.现将结果报道如下.

葡萄膜炎的常见实验室检查项目与选择

葡萄膜炎是一类常见的自身免疫性眼病,目前我国葡萄膜炎患者约300～400万,占致盲眼病的第3～10位[1].美国因葡萄膜炎致盲的患者约占盲人总数的10%～15%[2].由于葡萄膜炎的诊断主要依据临床表现,缺乏特异的病因学检查方法;所以眼科医生诊断和鉴别诊断疾病、选择相关实验室检查项目时,常感到非常棘手[3-5].鉴于此,我们对常用的实验室检查项目及其适应证作以阐述、分析.

Phakic 6H2前房型人工晶状体可用于矫正有晶状体眼的屈光状态

全国糖尿病眼部病变的基础和治疗新进展学习班

山东省眼科医院于2004年在济南开业