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高分辨率融解曲线技术检测冠心病患者IL-1β和IL-1Ra基因多态性
目的 为探讨白细胞介素1β(IL-1β)和白细胞介素1受体拮抗剂(IL-1Ra)基因单核苷酸多态性(SNP)与冠心病(CHD)易感及其血清学指标的相关性,应用高分辨率融解曲线分析(HRM)技术建立IL-1β和IL-1Ra基因SNP的分子诊断方法.方法 建立IL-1B-511C ＞T、IL-1B-31C＞T、IL-1B+ 3954C＞T和IL-1RNT＞C这4个SNP位点的PCR-HRM检测方法,对260例CHD患者和274例健康对照进行比较研究,分析其与CHD易感及血清学指标的关系.结果 上述4个SNP位点未发现与CHD易感有统计学差异,性别分层后发现男性IL-1B-31C＞T位点和女性IL-1B+ 3954C＞T位点的等位基因频率,在病例组和对照组间存在差异;单倍型分析发现IL-1B-511T/IL-1B-31C/IL-1B+ 3954C/IL-1RN T (TCCT)单倍型增加CHD发病风险(OR=1.217,95％ CI:0.950～1.559,P=0.123),CTCC和TTCT单倍型降低CHD发病风险(OR=0.612,95％ CI:0.376～0.994,P=0.046;OR =0.365,95％CI:0.154～0.862,P=0.017);病例组血清学指标的相关性分析未发现其与SNP位点之间有关联性.结论 应用HRM技术建立的4个SNP位点PCR-HRM检测方法经测序验证和临床标本检测均能正确基因分型,实现了快速基因分型的均相检测.IL-1B-31C＞T、IL-1B+ 3954C＞T位点和单倍型CTCC和TTCT与中国兰州地区汉族人群CHD易感性有关.
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脑梗死患者炎性细胞因子变化与神经功能缺损的关系
目的:探讨脑梗死患者血清中炎性细胞因子水平与病情严重程度的关系.方法:收集2006-01/2008-12脑梗死患者82例为研究组, 80例同期门诊体检的健康人为对照组, 检测其外周血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)和可溶性细胞间黏附分子1(sICAM-1)水平.结果:急性期、恢复期脑梗死患者血清IL-1β、 TNF-α及sICAM-1水平均较对照组显著增高(P ＜0.01或P＜0.05), 脑梗死组急性期较恢复期明显增高(P＜0.01);中度损伤组和重度损伤组患者血清IL-1β、 TNF-α及sICAM-1水平均较轻度损伤组显著增高(P＜0.01或P＜0.05), 重度损伤组患者TNF-α及sICAM-1水平较中度损伤组明显增高(P＜0.01);多元线性回归分析结果显示, IL-1β、 TNF-α及sICAM-1表达水平与脑梗死患者的神经功能缺损程度评分呈线性正相关, 标准回归系数依次为0.618、 0.613和0.606.结论:IL-1β、 TNF-α及sICAM-1互相作用参与了急性脑梗死的炎症反应和再灌流损伤.对它们的监测可为早期临床治疗及康复干预提供试验指标, 以便控制脑卒中的进展及复发.
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MRP8通过TLR4/NF-κB信号途径刺激培养星形胶质细胞分泌IL-1β
目的:探讨MRP8刺激星形胶质细胞(astrocyte,AS)释放IL-1β的信号途径.方法:利用MRP8刺激培养AS,运用Lip02000脂质体转染发卡样小干扰RNA(shRNA)使TLR4沉默、二硫代氨基甲酸吡略烷(PDTC)预处理阻断NF-κB,运用免疫印迹(Western Blot)、电泳迁移率变动分析(EMSA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、间接荧光免疫双标法等实验方法检测TLR4、NF-κB以及IL-1β的表达变化及相互作用关系.结果:利用MRP8刺激培养AS,细胞内的TLR4、NF-κB以及IL-1β表达增加,并且NF-κB由胞浆向胞核内转移,IL-1β在细胞上清液中含量增加;抑制TLR4可以下调MRP8所致的NF-κB和IL-1β表达增加,NF-κB向胞核内转移;抑制NF-κB只能下调MRP8所致的IL-1β表达增加.结论:MRP8可能通过TLR4/NF-κB信号途径促进刺激星形胶质细胞分泌IL-1β.
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西吡氯铵含片对牙菌斑抑制效果的临床试验研究
目的：探讨西吡氯铵含片（CCBT）对控制牙面菌斑堆积和牙龈炎症的效果。方法：采用随机单盲对照试验，纳入60名患有慢性龈炎、轻、中度慢性牙周炎患者。对全部患者卫生宣教后随机分为3组，对照组不用药，试验组使用CCBT，阳性对照组使用复方氯己定（CHX）含漱液。治疗前、治疗后第2周记录Quigley-Hein菌斑指数（PI）及出血指数（BI）；酶联免疫吸附试验法检测龈沟液中肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素1β（IL-1β）表达水平的改变。结果：治疗前3组间比较PI、BI、龈沟液TNF-α和IL-1β含量均无显著差异（P＞0．05）。治疗后CCBT组和CHX组PI和BI均明显下降（P＜0．01），2组的下降值均无显著差异（P＞0．05）；龈沟液中TNF-α含量均下降（P＜0．05）。对照组治疗后PI下降（P＜0．05），其他指标无变化（P＞0．05）。结论：西吡氯铵含片有抑制牙菌斑堆积作用，可改善牙龈炎症，降低龈沟液中TNF-α表达。
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IL-1β mRNA和TNFα mRNA在慢性根尖周病损组织中的表达
目的:检测白细胞介素1β(interleukin-1 beta, IL-1β) mRNA和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor alpha, TNFα)mRNA在慢性根尖周病损中的表达以及它们与病理学表现之间的关系,探讨IL-1β和TNFα在慢性根尖周炎发病中的作用.方法: 采用RT-PCR法,从mRNA水平检测IL-1β及TNFα在10例慢性根尖周肉芽肿及3例根尖周囊肿中的表达,3例因阻生拔除的健康第三磨牙牙周膜组织作为对照,分析IL-1β mRNA和TNFα mRNA的表达与慢性根尖周病损的病理学表现(包括病损的病理分型、炎症细胞浸润程度)之间的关系.结果: IL-1β mRNA在根尖周肉芽肿病损组明显增高,表现为与β-actin水平的比值(1.36±0.12)增高,在根尖周囊肿病损组(0.87±0.30)较对照组(0.64±0.02)有增高的趋势,但统计学分析无显著性差异.IL-1β mRNA在轻、重度炎症细胞浸润组较中度炎症细胞浸润组明显增高(P＜0.05).TNFα mRNA水平在根尖周肉芽肿组和根尖周囊肿组均显著高于对照组(P＜0.05),但两组间并无显著性差异.TNFα mRNA水平在轻、中、重度炎症细胞浸润组之间也无显著性差异.IL-1β mRNA和TNFα mRNA水平未发现有明显的相关关系.IL-1β mRNA和TNFα mRNA水平与病损大小无关. 结论:IL-1β和TNFα在慢性根尖周炎的发病中具有重要的作用,但也存在其他细胞因子的协同作用.
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前列腺素E2、肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β不同组合对培养骨器官钙代谢的作用
目的：观察不同浓度组合的前列腺素E2(PGE2)、肿瘤坏死因子α(TNF-2)、白细胞介素1β(IL-1β)对培养骨组织钙代谢的作用。方法：原子吸收分光光度计检测骨组织培养上清液中Ca2+浓度。结果：①PGE2+IL-1β：在0.01～1.0ng/ml浓度组合时，有促进钙吸收的作用，此作用随组合浓度的加大而减弱。②PGE2+TNF-α：0.01～0.1ng/ml浓度时，有钙吸收作用，而在1.0ng/ml浓度组合时，有明显的钙释放作用。③IL-1β+TNF-α：0.01ng/ml浓度组合时，有钙吸收作用。0.1ng/ml浓度组合时，钙吸收、释放作用不明显。1.0ng/ml浓度组合时，强刺激脱钙。④PGE2+TNF-α+IL-1β：0.01～1.0ng/ml浓度组合时显示钙吸收作用，且随剂量增加而增加。结论：3种细胞因子不同组合后，有交互作用、拮抗作用和协同作用。PGE2主要表现为协同因子而发挥作用。
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阿尔茨海默病患者血清IL-1β,IL-6含量测定及其意义
目的: 探讨阿尔茨海默病(AD)患者血清IL-1β, IL-6水平的变化,及其与AD严重程度的关系. 方法: 严格按照1∶1配对的原则选择AD患者、健康老人各28例,采用ELISA法测定血清IL-1β, IL-6含量. 结果: 血清IL-1β含量AD组(24±13 ng/L)明显高于正常对照(NC)组(7±5 ng/L),差异有显著性(P<0.01),而血清IL-6 含量AD 组(49±23 ng/L)虽高于NC组(44±23 ng/L)但两组间差异无显著性(P>0.05). 不同严重程度AD组之间血清IL-1β, IL-6含量差异无显著性(P>0.05). 结论: AD患者血清IL-1β水平高于正常对照,可能与AD脑内炎症反应有关. 而外周IL-6水平与AD脑组织炎症反应的关系还有待于进一步探讨.
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硫酸镁对重型颅脑损伤患者血清IL1β、TNFα浓度的影响
目的 研究硫酸镁对sTBI患者血清IL1β和TNFα浓度的影响,进一步探讨镁离子保护创伤神经元的机制.方法 将入选病例随机分为治疗组和对照组,每组30例.对照组按常规治疗,治疗组加用硫酸镁.正常组20例,为成年健康献血员.按预设时间抽取肘静脉血,采用原子分光光度法和放射免疫法分别测定血清Mg2+与IL1β、TNFα浓度.应用SPSS13.0软件包分析数据.结果 sTBI后血清IL1β和TNFα浓度24h内即明显升高,3d达到高峰,以后逐渐下降;治疗组患者血清IL1β浓度于伤后2、3、7d和TNFα于伤后2、3d明显低于对照组(P<0.01或P<0.05).结论 sTBI患者伤后早期即出现血清IL1β和TNFα浓度升高;早期应用硫酸镁治疗能明显抑制sTBI患者急性期炎症反应,保护神经功能.
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突出腰椎间盘组织中NO、TNF-α、IL-1β、IL-6的表达及其意义
目的研究NO、TNF-α、IL-1β、IL-6在突出腰椎间盘组织中的表达,并探讨其意义.方法用免疫组化方法,对20例腰椎间盘突出症患者的突出椎间盘组织iNOS、 TNF-α、IL-1β、IL-6的表达进行检测,并取12例健康成人(尸体)正常椎间盘作为对照.结果 20例突出腰椎间盘组织中,iNOS、TNF-α、IL-1β、 IL-6表达阳性分别为16、15、12、11例, 其中9例为四种细胞因子均表达阳性.12例正常椎间盘组织中无表达阳性细胞.结论突出腰椎间盘可产生上述细胞因子,阳性细胞主要以成纤维细胞、软骨细胞及淋巴细胞为主,这些细胞因子可能在椎间盘退变中发挥作用.
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白细胞介素-1β对体外培养的牛眼小梁细胞MMP3和TIMP-1表达的影响
目的:观察白细胞介素-1β对体外培养的牛眼小梁细胞MMP3和TIMP-1表达的影响,探讨原发性开角型青光眼的发病机制.方法:①对牛眼小梁细胞进行原代及传代培养,应用免疫组化方法(NSE,Ⅷ因子相关抗原染色)鉴定细胞,化学及电子透射电镜对细胞进行形态学及生长特性的观察.②对传三代的小梁细胞分别施加含IL-1β终浓度为0,12.5,25,50ng/ml的培养液,48h后行MMP3免疫组化SP染色,结果进行计算机图像分析并进行统计学检验.③分组提取细胞培养液用ELASA检测TIMP-1量的变化.结果:体外培养的牛眼小梁细胞表达MMP3,IL-1β可增加MMP3的表达,并且抑制TIMP-1的表达.结论:IL-1β在一定范围内通过增加MMP3的表达,抑制TIMP-1的表达来减少小梁细胞细胞外基质的堆积,使房水引流通畅,降低眼内压.
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马铃薯外敷药膏对膝关节创伤性滑膜炎白细胞介素1β表达的影响
目的:探讨马铃薯外敷药膏对兔膝关节创伤性滑膜炎关节液中白细胞介素1β(IL-1β)水平变化的影响.方法:将40只雌雄各半新西兰大白兔,随机分为正常组、模型组、马铃薯外敷药膏组和扶他林乳胶剂4组,每组各10只.通过电针造模法建立膝关节创伤性滑膜炎兔模型,各治疗组分别给予相应的药物,正常组和模型组不给予任何干预,2次/d,连续5天.实验结束时,观察大白兔膝关节皮色、关节液色质、滑膜厚度及关节肿胀程度;酶联免疫吸附法(ELISA法)检测关节液中IL-1β的表达.结果:与正常组相比,模型组关节肿胀程度和IL-1β的表达明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05);与模型组相比,马铃薯外敷药膏组和扶他林乳胶剂组关节肿胀程度和IL-1β的表达明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:马铃薯外敷药膏能明显减轻滑膜炎大白兔关节肿胀,其机制可能与调控IL-1β的表达有关.
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槐定碱致痫大鼠模型的建立及血清TNF-α和IL-1β含量变化的研究
目的 建立槐定碱(Sophoridien,SRI)诱导大鼠癫痫模型,同步观察槐定碱致痫大鼠行为和脑电的变化,探讨细胞因子与癫痫发病之间的关系.方法 采用序贯法测定SRI大鼠腹腔注射的半数致死量(LD50).将SD大鼠随机分为生理盐水对照组和实验组,实验组又分为6个剂量组,依照寇氏法安排SRI剂量.腹腔注射SRI后,观察大鼠行为变化并描记大鼠海马脑电图,用改进寇氏法测定SRI致癫痫的半数有效量(ED50);同时运用放射免疫法,检测大鼠血清TNF-α、IL-1β的水平.结果 SRI腹腔注射的LD50值为46.66mg/kg;腹腔注射SRI后,大鼠出现痫性行为发作,海马EEG表现为典型的痫样脑电变化;SRI腹腔注射致癫痈的EDso为40.66mg/kg;实验组大鼠血清中TNF-α、IL-1β含量均明显高于对照组(P<0.01).结论 槐定碱腹腔注射可在大鼠引发典型的痫样发作行为和痫样脑电;TNF-α、IL-1β在槐定碱所致的癫痫发病中起促进作用,是癫痫发病的基础之一.
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新疆准噶尔乌头对佐剂性关节炎大鼠治疗作用的实验研究
目的:观察新疆准噶尔乌头对佐剂性关节炎(AA)大鼠的作用,并探讨其作用机制.方法:设正常对照组、模型对照组、阳性药对照组(醋酸泼尼松片6mg/kg)、新疆准噶尔乌头高、中、低剂量组(剂量分别为30.65,15.32,7.66mg/kg)；除正常对照组外,其余各组均采用弗氏完全佐剂(CFA)诱导大鼠AA模型；各组于造模当天灌胃给药,连续23d;观察该药对AA大鼠踝关节足肿胀程度的影响；采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测各组血清中白介素-1β(IL-1β)和皮质醇(CORT)含量.结果:1)模型组大鼠踝关节足肿胀高于对照组(P＜0.01),各治疗组踝关节足肿胀度和关节炎指数均有显著降低(P＜0.01或P＜0.05).2)与正常对照组比较,模型组大鼠血清IL-1β、CORT水平均高于正常组(P＜0.01),表示造模成功；与模型组比较,阻性组、新疆准噶尔乌头高、中、低剂量组可降低白细胞介素1β、皮质醇含量,有统计学差异(*P＜0.05或**P＜0.01).结论:新疆准噶尔乌头可能是通过免疫调节机制,对佐剂性关节炎发挥治疗作用,高,中,低剂量的新疆准噶尔乌头可以通过抑制炎症细胞因子,从而实现对AA大鼠的治疗作用.
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内皮祖细胞对兔急性肺损伤的保护作用
目的 评价不同数量内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)对兔急性肺损伤(acute lung injury,ALI)的保护作用. 方法 40只雄性新西兰兔按随机数字表法分为:EPCs低剂量组、中剂量组、高剂量组、ALI组、对照组,每组8只.低剂量、中剂量、高剂量组和ALI组均注射乳化油酸建立ALI模型,对照组注射等渗盐水乳化液.低剂量、中剂量、高剂量组分别注射含1 ×105、1×106、1×107个EPCs的PBS,ALI组和对照组注射PBS.检测各组肺湿/干重比值(W/D)、肺通透性指数(pulmonary permeability index,PPI)在实验前、后的变化;Western blot法测定TNF-α、IL-1β蛋白表达情况;RT-PCR法检测NF-κB表达. 结果 与ALI组PPI值(17.1±1.5)、W/D值(5.21 ±0.05)比较,EPCs低剂量、中剂量、高剂量组PPI值(15.0±1.1,13.8±0.7,13.7±0.7)、W/D值(5.04 ±0.11,4.80 ±0.13,4.87 ±0.08)均降低(P＜0.05);EPCs低剂量、中剂量、高剂量组NF-κB(0.75 ±0.04,0.41 ±0.05,0.42±0.03)、TNF-α(0.364 ±0.020,0.312±0.015,0.310 ±0.013)、IL-1β(0.230±0.017,0.206±0.010,0.210±0.018)表达均较ALI组(0.87±0.11,0.387 ±0.018,0.262 ±0.019)降低(P＜0.05).EPCs不同剂量组各指标比较,高、中剂量组均显著低于低剂量组(P＜0.05),但高、中剂量组差异无统计学意义. 结论 EPCs可通过减轻肺水肿、改善肺通透性及抑制炎症反应对ALI起到一定的保护作用,呈剂量依赖性,但具有封顶效应.
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白细胞介素1β基因单核苷酸多态性分析
目的检测中国人白细胞介素1(interleukin-1,IL-1)β基因多态性,并初步预测调控区单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms, SNPs)对IL-1β功能的影响. 方法对来自中国人群有代表性的10个民族27名个体的基因组DNA作为样本,采用直接测序的方法检测IL-1β基因的5'区、编码区、部分内含子区和3'区序列,以确定中国人群中IL-1β基因多态性的位置和类型,用生物信息学方法对5'区SNPs的功能进行初步预测. 结果在4 610 bp的测序片段中,共发现了6个SNPs,包括5'区3个,内含子区3个,其中5'区的-511T/C、-31C/T SNP国内外已有报道,而-1 470G/C SNP未见相关报道.生物信息学分析其中5'区的3个SNP均不在5区的重复区,且3个位点都是与IL-1β转录有关的核因子结合的区域. 结论 IL-1β调控区3个SNPs可能对IL-1β表达产生影响,有待进一步深入研究.
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早产儿血清白细胞介素1β和白细胞介素6变化及其与脑血流的关系
目的 探讨早产儿血清白细胞介素1β(IL-1β)和白细胞介素6(IL-6)水平变化及其与脑血流的关系.方法 选择2010年10月至2011年10月我院新生儿重症监护病房收治、胎龄28 ～ 33周的单胎早产儿100例,根据是否发生脑室周围-脑室内出血(PIVH)分为观察组和对照组,并根据出血严重程度将观察组分为轻度组和重度组,全部研究对象均在生后第3天、第10天采血应用双夹心酶联免疫吸附法测定血清IL-1β和IL-6的浓度,同期进行头颅彩超检测收缩期血流速度与舒张末期血流速度比值(S/D值)和阻力指数(RI).结果 纳入的100例早产儿中77例发生PIVH,其中轻度组65例,重度组12例,未发生PIVH对照组23例.胎龄28 ～31周早产儿PIVH发生率与32～33周早产儿差异无统计学意义(P＞0.05),但重度PIVH比例高于32 ～ 33周早产儿(27.6％比8.3％,P＜0.05).出生体重≤1500 g和1501～2000 g早产儿PIVH发生率高于＞2000 g早产儿(90.0％、88.5％比46.4％,P＜0.05),重度PIVH比例高于＞2000 g早产儿(33.3％、4.3％比15.4％,P＜0.05).生后第3天重度组患儿血清IL-1β (μg/L)、IL-6 (μg/L)及头颅彩超S/D值、RI水平高于轻度组和对照组[IL-1β:(90.1±7.4)比(42.7±4.0)、(16.5±4.7),IL-6:(102.5±8.2)比(55.3±7.2)、(20.2±4.4),S/D:(6.65±1.32)比(4.12±0.11)、(2.89±0.13),RI:(0.85±0.12)比(0.72±0.08)、(0.66±0.05),P＜0.05];第10天,轻度组患儿血清IL-1β、IL-6及头颅彩超S/D值、RI水平已恢复至对照组水平(P＞0.05),重度组患儿仍高于轻度组及对照组(P＜0.05);轻度组及重度组生后第10天血清IL-1β、IL-6及头颅彩超S/D值、RI水平与第3天相比均明显降低(P＜0.05).PIVH患儿血清IL-1β、IL-6水平与S/D值、RI水平均呈正相关(r＞0.5,P均＜0.05).结论 血清IL-1β、IL-6水平与颅内出血病情及脑血流有关,动态监测血清IL-1β、IL-6水平有利于判断病情,指导临床诊治.
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脑室周围白质软化新生大鼠脑组织炎症因子变化
目的 探讨脑室周围白质软化(PVL)新生大鼠的炎症损伤情况.方法 选择3日龄SD大鼠80只,随机分为假手术组和PVL组各40只,每组又分为12、24、48、72 h4个亚组各10只.PVL组通过单侧颈总动脉结扎及术后吸入8％氧气+92％氮气混合气2.5h制备缺血缺氧型PVL新生大鼠动物模型;假手术组仅游离左侧颈总动脉,不予结扎及缺氧.两组大鼠于4个时间点分别断头取脑组织,应用苏木精-伊红(HE)染色观察脑组织病理改变;实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β) mRNA表达水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测TNF-α及IL-1β3蛋白含量.结果 HE染色可见PVL组大鼠脑组织较假手术组明显充血、水肿,左侧脑室扩大,脑室周围白质结构稀疏、紊乱.PVL组TNF-α及IL-1β mRNA表达上调,均出现随时间推移先升高,24h达高峰,随后逐渐降低的趋势,且12、24、48 h两两比较,差异均有统计学意义(P ＜0.05);72 h后TNF-α及IL-1β mRNA表达水平均下调,与同组48 h相比差异无统计学意义(P＞0.05).PVL组各时间点TNF-α及IL-1β蛋白含量比较差异有统计学意义(P＜0.01),且各时间点TNF-α蛋白含量均高于假手术组[12 h(189.2 ±20.4) pg/ml比(131.4 ±5.2) pg/ml、24h(213.8±16.7)pg/ml比(127.7±7.4) pg/ml、48 h(181.7±15.0)pg/ml比(126.3±6.0)pg/ml、72 h(159.6±25.3)pg/ml比(131.4±6.0) pg/ml,P＜0.01];IL-1β蛋白含量仅在24、48 h与假手术组相比差异有统计学意义[(121.8±30.0) pg/ml比(67.4±13.7) pg/ml、(83.3±15.7) pg/ml比(65.3±14.9)pg/ml,P＜0.05)].假手术组TNF-α及IL-1β蛋白含量各时间点比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 TNF-α与IL-1β共同参与缺血缺氧诱导的PVL,且具有先升高后降低的时间趋势,动态监测其变化有望成为PVL早期诊断、疗效观察、预后及评估的重要手段.
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BAY11-7082对严重烧伤大鼠急性肺损伤及早期肺炎症反应的干预作用
目的 探讨BAY11-7082对严重烧伤大鼠急性肺损伤及早期肺炎症反应的干预作用.方法 (1)实验1.取12只SD大鼠,按随机数字表法分为正常对照组3只、烧伤组9只.正常对照组大鼠不行特殊处理;烧伤组大鼠背部造成30％体表总面积Ⅲ度烧伤,伤后即刻腹腔注射生理盐水50 mL/kg.烧伤组于伤后12、24、48 h分别取3只大鼠采集腹主动脉血并取肺组织,酶联免疫吸附测定法检测血清中白细胞介素1β(IL-1β)、IL-18含量,实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测肺组织中IL-1β、IL-18 mRNA表达.正常对照组大鼠同前采样检测.(2)实验2.取18只SD大鼠,按随机数字表法分为正常对照组、单纯烧伤组、BAY11-7082干预组,每组6只.正常对照组大鼠不行特殊处理;单纯烧伤组和BAY11-7082干预组大鼠同实验1致伤,伤后即刻分别腹腔注射生理盐水、终质量浓度为8 mg/mL BAY11-7082溶液50 mL/kg.于实验1结果得出的佳观察时间点收集烧伤各组大鼠肺组织及肺泡灌洗液,苏木素-伊红染色观察肺组织形态并进行肺组织病理损害评分,酶标仪检测肺组织中髓过氧化物酶(MPO)含量及肺泡灌洗液中总蛋白含量,蛋白质印迹法检测肺组织中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1和核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NLRP3)的蛋白表达,实时荧光定量RT-PCR法检测肺组织中IL-1β、IL-18、NLRP3、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1 mRNA表达.正常对照组大鼠同前采样检测.对数据行单因素方差分析、LSD-t检验. 结果 (1)烧伤组大鼠伤后12、24、48 h血清中IL-1β和IL-18含量显著高于正常对照组(t=10.55、22.05、12.47、10.60、15.22、11.94,P＜0.01).烧伤组大鼠伤后12、24、48 h肺组织中IL-1β和IL-18 mRNA表达量明显高于正常对照组(t =3.62、7.19、5.28、3.20、12.62、7.31,P＜0.05或P＜0.01).伤后24 h为后续实验佳观察时间点.(2)伤后24 h,与单纯烧伤组比较,BAY11-7082干预组大鼠炎性细胞浸润及肺泡内红细胞渗出明显减少,肺间质水肿明显消退.单纯烧伤组大鼠肺组织病理损害评分为(9.00±1.00)分,显著高于正常对照组的(1.10±0.26)分(t=13.23,P＜0.01).BAY11-7082干预组大鼠肺组织病理损害评分为(4.93 ±0.70)分,虽仍高于正常对照组(t=8.84,P＜0.01),但较单纯烧伤组明显降低(t=5.76,P＜0.01).伤后24 h,单纯烧伤组大鼠肺组织中MPO含量[(1.83±0.15) U/mg]及肺泡灌洗液中总蛋白含量[(1.39±0.20) mg/mL]均显著高于正常对照组[(0.51±0.10) U/mg、(0.44±0.05) mg/mL,t=12.50、7.86,P＜0.01],BAY11-7082干预组大鼠肺组织中MPO含量[(0.91±0.12)U/mg]及肺泡灌洗液中总蛋白含量[(0.60 ±0.10) mg/mL]显著低于单纯烧伤组(t=8.36、6.06,P＜0.01).伤后24 h,单纯烧伤组大鼠肺组织中NLRP3和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1蛋白表达量分别为3.10 ±0.09、2.99 ±0.30,显著高于正常对照组的1.00、1.00(t=9.06、11.28,P ＜0.01);BAY11-7082干预组大鼠肺组织中NLRP3和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1蛋白表达量分别为1.13±0.08、1.81±0.11,显著低于单纯烧伤组(t=7.24、3.91,P＜0.05或P＜0.01).伤后24 h,单纯烧伤组大鼠肺组织中IL-1β、IL-18、NLRP3和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1的mRNA表达量分别为5.0±0.4、3.32±0.21、3.54±0.42、6.3±1.0,明显高于正常对照组的1.0、1.00、1.00、1.0(t=13.97、14.14、11.78、7.13,P＜0.01);BAY11-7082干预组大鼠肺组织中IL-1β、IL-18、NLRP3和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1的mRNA表达量(2.6±0.5、2.00±0.28、1.39 ±0.21、2.5±0.5)显著低于单纯烧伤组(t=7.11、5.80、9.99、4.65,P＜0.05或P＜0.01). 结论 严重烧伤大鼠急性肺损伤早期使用BAY11-7082可通过抑制NLRP3,减少半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1的表达,显著降低IL-1β和IL-18的水平,同时减少肺组织中MPO含量及肺泡灌洗液中总蛋白含量,从而减轻肺炎症反应,减轻肺损伤.
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活化沉默信息调节因子1对大鼠严重烫伤早期心肌损害的影响
目的 探讨活化沉默信息调节因子1(SIRT1)对大鼠严重烫伤早期心肌损害的作用.方法 取24只健康雄性SD大鼠,按照随机数字表法分为假伤组、单纯烫伤组、白藜芦醇治疗组,每组8只.单纯烫伤组和白藜芦醇治疗组大鼠背部于95℃热水浴18s,制成30％ TBSAⅢ度烫伤模型,2组大鼠即刻分别腹腔注射生理盐水10 mL(50 mL/kg)与相同剂量生理盐水+白藜芦醇10 μL(1 g/mL,50 mg/kg);假伤组大鼠仅背部于20℃室温水浴18s模拟烫伤过程.伤后6h收集3组大鼠心脏组织及腹主动脉血,HE染色观察组织形态,ELISA法检测血清肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)含量,蛋白质印迹法和实时荧光定量RT-PCR法检测组织中SIRT1、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)的蛋白和SIRT1、caspase-3、IL-1β、TNF-α mRNA表达水平(蛋白水平以灰度值表示).对数据行单因素方差分析、LSD-t检验. 结果 (1)假伤组大鼠心肌纤维呈不规则圆柱形、排列整齐、横纹清晰.单纯烫伤组大鼠心肌间质水肿,心肌纤维排列紊乱并断裂、溶解.白藜芦醇治疗组大鼠心肌间质水肿、心肌纤维排列紊乱及溶解程度均较单纯烫伤组减轻.(2)单纯烫伤组大鼠血清CK、LDH含量分别为(2 385 ±712)、(2 551±196)U/L,显著高于假伤组的(290±59)、(759±60) U/L(￡值分别为9.466、25.452,P值均小于0.01).白藜芦醇治疗组大鼠血清CK、LDH含量[(1 336±149)、(2 209±133)U/L]显著低于单纯烫伤组(￡值分别为-4.506、-4.860,P值均小于0.01).(3)单纯烫伤组大鼠心脏组织SIRT1、caspase-3蛋白表达量分别为0.47±0.11、0.48 ±0.12,显著高于假伤组的0.18±0.06、0.09 ±0.05(t值分别为4.813、9.014,P值均小于0.01).白藜芦醇治疗组大鼠心脏组织SIRT1蛋白表达量(0.74±0.18)显著高于单纯烫伤组(t=4.561,P＜0.01),caspase-3蛋白表达量(0.21 ±0.08)显著低于单纯烫伤组(￡=-6.239,P＜0.01).(4)单纯烫伤组大鼠心脏组织中SIRT1、caspase-3、IL-1β、TNF-α的mRNA表达量分别为2.33 ±0.24、1.96 ±0.20、2.46 ±0.21、1.89±0.37,显著高于假伤组的1.00±0.07、1.00±0.06、1.00±0.08、1.00±0.09(t值分别为14.961、12.823、18.559、6.679,P值均小于0.01).白藜芦醇治疗组大鼠心脏组织中SIRT1的mRNA表达量(2.89±0.31)显著高于单纯烫伤组(t=3.997,P＜0.01),caspase-3、IL-1β、TNF-α的mRNA表达量(1.31±0.08、1.64 ±0.09、1.25 ±0.08)显著低于单纯烫伤组(￡值分别为-8.264、-10.245、-4.818,P值均小于0.01). 结论 SIRT1在大鼠严重烫伤早期的心脏内表达增高,使用白藜芦醇进一步活化SIRT1后,可以减轻心肌组织损伤,减少心肌细胞凋亡,降低IL-1β和TNF-α表达.
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枸橼酸铁铵与α-syn对C6细胞释放炎性因子影响
目的 观察枸橼酸铁铵(FAC)对细胞外α-突触核蛋白(α-syn)作用的C6胶质瘤细胞释放炎性因子的影响.方法 分别用α-syn、FAC、α-syn+ FAC处理C6细胞,以无血清培养液孵育C6细胞作为对照组,采用实时荧光定量PCR方法检测各组细胞白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α) mRNA表达.结果 α-syn组细胞IL-1β、TNF-α的表达较对照组显著增加(F=5.43～67.19,q=4.07～16.25,P＜0.05),10 μmol/L FAC组细胞二者的表达与对照组比较无明显变化(P＞0.05),100 μmol/L FAC组二者的表达较对照组显著增加(q=14.48、4.14,P＜0.05),α-syn+FAC组IL-1β、TNF-α的表达与α-syn组比较无明显变化(P＞0.05).结论 外源性α-syn可以促进C6细胞释放炎性因子,高铁对α-syn引起的炎性因子释放无明显影响.
