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番石榴叶总黄酮对慢性胰腺炎小鼠纤维化的影响
目的:探讨番石榴叶总黄酮(total flavonoids from Psidium guajava leaves,TFPGL)对慢性胰腺炎(chronic pancreatitis,CP)小鼠纤维化的影响及其机制.方法:将50只C57BL/6小鼠随机均分为正常组,CP模型组,oxidized ATP (oxATP)组,TFPGL低、高剂量组.后4组小鼠腹腔注射雨蛙素50μg·kg-·1h-1(溶于200μL生理盐水),每天6次,每周3d,连续6周,建立慢性胰腺炎小鼠模型.6周后,oxATP组腹腔注射oxATP(15μg·kg-·1d-1,溶于200μL生理盐水)2周,TFPGL低、高剂量组分别予以TFPGL 0.186,0.372g·kg-1·d-1灌胃2周.同时,正常组小鼠腹腔注射与模型组等体积、等频率的生理盐水.苏木素-伊红(HE)染色评估胰腺损伤程度;天狼星红染色检测胰腺组织胶原含量;免疫组化检测α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA),核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(nucleotide binding oligomerization domain-like receptor 3,NLRP3),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(cysteinyl aspartate specific proteinase-1,Caspase-1)的蛋白表达水平;酶联免疫吸附法测定胰腺组织中IL-1β(interleukin-1β),IL-18水平.结果:与正常组比较,雨蛙素注射后胰腺损伤加重(P <0.01),Caspase-1,NLRP3,α-SMA,IL-1β,IL-18水平升高(P<0.01).天狼星红染色显示胰腺组织细胞周围胶原Ⅰ(ColⅠ),胶原Ⅲ(ColⅢ)含量较正常组升高(P<0.01).与模型组比较,oxATP组及TFPGL低、高剂量组炎症损伤及纤维化程度均减轻,表现为天狼星红染色程度减轻(P<0.05,P<0.01),Caspase-1,NLRP3,α-SMA,IL-1β,IL-18水平均降低(P<0.05,P<0.01).结论:TFPGL可通过抑制P2X7R介导NLRP3炎性体信号途径活化显著减轻慢性胰腺炎模型小鼠的慢性炎症及纤维化程度.
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核苷酸结合寡聚化结构域样受体3炎症复合体在疾病中的作用
核苷酸结合寡聚化结构域样受体3（NLRP3）炎症复合体属于一种常见的模式识别受体，在调节先天免疫和保护性免疫中均发挥重要作用。近年来，大量文献报道，NLRP3炎性复合体及其激活的下游信号级联，例如白细胞介素（ IL）1β、IL－18等，可以有效地阻止病毒和微生物的入侵，并帮助修复损伤细胞和组织。然而，近来也有文献报道IL－1β等活动的异常调节可以参与多种疾病的发生、发展。炎症复合体通过激活一系列下游信号转导通路，参与多种炎症疾病的发展。因此，NLRP3炎症复合体在机体疾病的发生中的起关键作用。
关键词： 炎症复合体 固有免疫 白细胞介素1 核苷酸结合寡聚化结构域样受体3 -
NALP3炎性通路与非酒精性脂肪性肝炎的研究进展
核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NALP3)又称NLRP3,NALP3炎性小体作为固有免疫的重要组分在机体天然免疫和获得性免疫反应中具有重要作用,它能被多种类型的病原体或危险信号所激活,是活化胱天蛋白酶1(caspase-1)的分子平台,进而调控白细胞介素(IL)1β、IL-18等促炎细胞因子的成熟和分泌.近年来,NALP3炎性小体在非酒精性脂肪性肝炎(NASH)中的作用和意义日益受到关注,该文就NASH中NALP3-caspase-1-IL-1β炎性通路的研究进展予以综述.
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发酵虫草菌粉对糖尿病大鼠心肌NLRP3表达的影响
目的 探讨发酵虫草菌粉对糖尿病心肌病的治疗作用及其对心肌核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(Caspase-1)、白细胞介素-1β(IL-1β)表达的影响.方法 雄性SD大鼠45只,随机分为正常对照组(CON组)、糖尿病组(DM组)和发酵虫草菌粉治疗组(CS组,1 g·kg-1·d-1),每组15只.DM组和CS组大鼠通过尾静脉注射链脲佐菌素(45 mg/kg)诱导糖尿病模型.CS组每日给予1次发酵虫草菌粉溶液灌胃,CON组和DM组给予相同体积生理盐水灌胃.灌胃18周后取材.HE染色观察心肌组织形态学改变;电镜观察心肌超微结构改变;Western blotting法检测心肌NLRP3的表达;免疫组化法检测各组大鼠心肌NLRP3、Caspase-1、IL-1β的表达水平.结果 (1)电镜下,DM组大鼠出现局部心肌纤维变性坏死、部分线粒体损伤;CS组大鼠心肌病变较DM组明显减轻.(2)Western blotting结果显示,DM组和CS组大鼠心肌NLRP3表达均较CON组显著上升,CS组大鼠心肌NLRP3表达较DM组降低.(3)免疫组化结果显示,DM组和CS组大鼠心肌NLRP3、Caspase-1、IL-1β表达均较CON组显著上升,CS组均较DM组降低.结论 发酵虫草菌粉能减轻糖尿病大鼠心肌病变,该作用可能与其抑制心肌NLRP3、Caspase-1、IL-1β的表达有关.
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P2X7R拮抗剂对小鼠慢性胰腺炎的作用及机制研究
目的：探讨嘌呤能P2X7受体（P2X7R）拮抗剂——氧化三磷酸腺苷（OxATP）和亮蓝G（BBG）在抑制下游靶蛋白——核苷酸结合寡聚化结构域样受体3（NLRP3）炎性体活化和慢性胰腺炎（CP）胰腺纤维化进程中的作用及可能机制。方法40只C57BL/6小鼠随机均分为正常对照组、CP模型组、OxATP组和BBG组。除正常对照组腹腔注射与处理组等体积的生理盐水外，其余组均通过腹腔注射雨蛙素法制作CP小鼠模型（6周）。造模结束后，CP模型组、OxATP组和BBG组分别予以腹腔注射生理盐水、OxATP（20μL，300μmol/L）和BBG（20μL，10μmol/L）处理，连续注射2周。然后处死各组小鼠并取胰腺组织，行病理学检查，以HE染色对胰腺病理组织学（炎性细胞浸润、腺泡萎缩及纤维化程度）进行评分，天狼星红染色和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）免疫组化染色分别对胰腺纤维化程度进行评估；免疫组化法检测胰腺P2X7R、NLRP3和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1（Caspase-1）中的累积光密度（IOD）值。结果与正常对照组比，CP模型组炎症损伤组织学评分增加，胰腺纤维化程度显著增加，P2X7R、NLRP3和Caspase-1免疫组化IOD值显著升高（P<0.05）；与CP模型组相比，OxATP和BBG组炎症损伤组织学评分降低，HE染色纤维化评分、天狼星红染色和α-SMA免疫组化染色均显著减轻（P<0.05），胰腺P2X7R、NLRP3和Caspase-1 IOD值均明显降低（P<0.05）。结论 P2X7R拮抗剂OxATP 和BBG能够显著减轻CP小鼠模型的慢性炎症和纤维化程度，阻断P2X7R-NLRP3炎性体信号通路，这有望成为治疗CP及其纤维化进程的一种潜在新策略。
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高温高湿条件下劳力性热射病致病特点与肝损伤机制
目的 探讨高温高湿条件下劳力性热射病(EHS)致病特点与肝损伤机制.方法 40只SD大鼠随机分为高温高湿EHS组(n=24,再分为建模后0、12、24 h共3个亚组,每个亚组8只)、常温常湿EHS组(n=8)和正常对照组(n=8)三组.高温高湿EHS组和常温常湿EHS组通过计算机控制大鼠转轮式跑步机分别于高温高湿[舱温(35±2)℃,湿度(80±10)％]和常温常湿[舱温(25±2)℃,湿度(50±10)％]条件下进行跑步运动,建立EHS模型.参照肛温达到42℃ 为EHS标准,记录两组达到EHS时的跑步时间,计算建模过程中肛温上升速率、热负荷指标.建模成功后采集心尖血分离血清,采用全自动生化仪检测丙氨酸氨基转移酶(ALT)和门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平,酶联免疫吸附法测定白介素(IL)-1β 和IL-18水平.光镜下观察肝脏组织病理学变化,Western blot测定肝脏组织中高迁移率族蛋白B1(HMGB1)和核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NLRP3)炎症复合体表达水平.结果 高温高湿EHS组大鼠肛温达到42℃ 时的运动时间显著少于常温常湿EHS组[(15.8±1.3)min vs(57.2±6.4)min,P<0.05],肛温上升速率显著高于常温常湿EHS组[(42.5±3.3)％vs(11.9±1.2)％,P<0.05],热负荷显著低于常温常湿EHS组[(8.3±0.9)℃ ·min vs(29.5±8.3)℃ ·min,P<0.05].高温高湿EHS组建模成功后0、12 h血清ALT、AST、IL-1β 和IL-18水平均高于正常对照组(P均<0.05),24 h时AST和IL-18水平显著高于正常对照组(P均<0.05).光镜下,高温高湿EHS组肝脏组织病理学改变较常温常湿EHS组更加明显.高温高湿EHS组和常温常湿EHS组肝组织中HMGB1蛋白表达水平均高于正常对照组(P<0.05),高温高湿EHS组建模后12、24 h肝组织中NLRP3炎症复合体蛋白表达水平显著高于正常对照组及常温常湿EHS组(P<0.05).结论 高温高湿条件下大鼠运动耐力下降、核心体温上升速率加快、肝损伤加重.HMGB1蛋白和NLRP3炎症复合体可能在高温高湿条件下劳力性热射病相关肝损伤致病中发挥作用.
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非布司他联合秋水仙碱对高尿酸血症患者血清NALP3、IL-1β的影响
目的 探讨非布司他联合秋水仙碱对高尿酸血症患者核苷酸结合寡聚化结构域样受体3 (NALP3)、IL-1β的影响.方法 将86例高尿酸血症患者按照随机数字表法分为两组,每组43例.观察组采用非布司他联合秋水仙碱治疗,对照组采用别嘌醇联合秋水仙碱治疗.比较两组患者治疗前后血尿酸(BUA)、血肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)、NALP3、IL-1β水平.记录治疗过程中两组不良反应发生情况.结果 观察组的疗效显著优于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);两组治疗后BUA、NALP3、IL-1β水平较治疗前均明显降低(均P＜0.05);治疗后,观察组BUA、NALP3、IL-1β水平显著低于对照组,差异均有统计学意义(均P＜0.05);两组患者治疗前后Scr、BUN水平未发生明显改变,差异无统计学意义(P＞0.05);观察组不良反应的发生率(16.28％)显著低于对照组(25.58％),差异有统计学意义(P＜ 0.05).结论 非布司他联合秋水仙碱能显著降低高尿酸血症患者血清NALP3、IL-1β的水平,疗效较别嘌醇更好.
关键词： 非布司他片 秋水仙碱 高尿酸血症 核苷酸结合寡聚化结构域样受体3 IL-1β -
炎症小体与非酒精性脂肪性肝炎
非酒精性脂肪性肝炎(nonalcoholic steatohepatitis,NASH)的发病机制除了"二次打击"学说外,还涉及多种炎症小体及其下游信号通路的参与.炎症小体为多蛋白复合体,作为模式识别受体,识别内源性及外源性危险信号,诱发炎症级联反应,加剧肝脏损伤.核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NALP3)炎症小体、NALP6炎症小体和黑色素瘤缺乏因子2(AIM2)炎症小体信号通路与NASH发生关系密切.
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P2X7R/NLRP3信号通路在酒精性肝损伤中的作用
目的 探讨嘌呤P2X7R及其介导的NLRP3炎性体信号通路在酒精诱导的肝损伤中的作用.方法 采用NIAAA法建立小鼠急性酒精性肝损伤模型,将30只♂ C57BL/6小鼠随机分为3组(n=10):对照组、模型组、P2X7特异性阻断剂A438079干预组,后1周,分组进行以下处理,对照组和模型组:给予等剂量的生理盐水腹腔注射(每只约0.2 mL),每日1次;A438079组:根据小鼠体质量,腹腔注射200 μmol ·kg-1的A438079(按7 g·L-1配制 A438079,每只约0.2 mL),每日1次.后1天清晨给予单次31.5%酒精溶液灌胃,剂量为10 mL·kg-1.9 h后小鼠眼眶取血,测定谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、胆固醇(TCHO)、甘油三酯(TG).HE染色观察肝脏病理变化;免疫组化方法检测肝组织中P2X7R的表达;Western blot法检测肝组织中的P2X7、NLRP3、ASC、IL-1β、IL-18水平.结果 与对照组相比,模型组ALT、AST、TG、TCHO含量明显增强,且肝组织损伤明显;与模型组相比,A438079组ALT、AST、TG、TCHO含量明显降低.与对照组相比,模型组P2X7、NLRP3、ASC、IL-1β、IL-18的表达明显升高;与模型组相比,A438079组P2X7、NLRP3、ASC、IL-1β、IL-18的表达水平明显降低.结论 酒精诱导的肝损伤可能与P2X7R-NLRP3信号通路有关.
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动脉粥样硬化患者外周血单核细胞中 NLRP3 mRNA表达及血浆 IL-1β、IL-18水平变化
目的：观察动脉粥样硬化患者外周血单核细胞中核苷酸结合寡聚化结构域样受体3（ NLRP3） mRNA的表达情况，及患者血浆IL-1β、IL-18水平变化。方法动脉粥样硬化患者45例（病例组），健康查体者42例（对照组），采集两组外周静脉血，淋巴细胞分离液分离单核细胞，real-time PCR法检测单核细胞中的NLRP3 mRNA。采用ELISA法检测两组血浆中的IL-1β、IL-18。分析NLRP3 mRNA表达与IL-1β、IL-18水平的相关性。结果对照组单核细胞中NLRP3 mRNA表达为1，病例组NLRP3 mRNA表达量为对照组的（1．76±0．35）倍，两组相比，P＜0．05。对照组血浆IL-1β、IL-18水平分别为（12．35±3．89）、（25．14±5．67）pg／mL，病例组分别为（17．56±4．66）、（32．81±7．08）pg／mL，两组血浆IL-1β、IL-18水平比较，P均＜0．05。病例组单核细胞中NLRP3 mRNA表达与血浆IL-1β、IL-18水平均呈正相关关系（r分别为0．48、0．53，P均＜0．05）。结论动脉粥样硬化患者外周血单核细胞中NLRP3 mRNA表达上调，血浆IL-1β、IL-18水平升高；NLRP3可能与动脉粥样硬化的发生发展有关。
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蜂胶黄酮对炎症反应单核细胞中 NLRP3炎性小体活性的影响
目的：观察蜂胶黄酮对氧化型低密度脂蛋白（ ox-LDL）诱导的炎症反应单核细胞中核苷酸结合寡聚化结构域样受体3（NLRP3）炎性小体活性的影响。方法培养单核细胞THP1并分为5个组。实验1、2、3组及模型组加入ox-LDL 100μg／mL制作单核细胞炎症反应模型；实验1、2、3组在加入ox-LDL前分别给予5、10、15μg／mL蜂胶黄酮处理1 h；对照组不添加药物。各组培养24 h后，采用Western blotting 法检测细胞中的NLRP3蛋白，采用ELISA法检测细胞培养液上清中的IL-1β、IL-18。结果对照组、模型组、实验1组、实验2组、实验3组细胞中NL-RP3蛋白相对表达量分别为0．26±0．04、1．12±0．15、0．98±0．11、0．65±0．07、0．52±0．06，模型组与对照组相比， P均＜0．05；实验2组、实验3组与模型组相比，P均＜0．05。模型组培养液上清中IL-1β、IL-18水平高于对照组，实验2组、实验3组培养液上清中IL-1β、IL-18水平低于模型组（P均＜0．05）。结论蜂胶黄酮可下调ox-LDL诱导的单核细胞炎症反应模型中NLRP3蛋白的表达，降低IL-1β、IL-18分泌水平，抑制NLRP3炎性小体的活性。
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参芍口服液对糖尿病肾病大鼠肾脏NLRP3炎症复合体相关蛋白表达的影响
目的 探讨参芍口服液对糖尿病肾病(DN)模型大鼠肾脏核苷酸结合寡聚化结构域样受体3炎症性复合体(以下简称NLRP3炎症体)表达的影响及对肾脏的保护作用.方法 选择健康雄性Wistar大鼠45只,随机分为模型组、治疗组、对照组各15只.模型组、治疗组予一次性腹腔注射STZ制备DN模型,对照组腹腔注射等剂量的生理盐水.造模成功后,治疗组给予参芍口服液250 mg/(kg·d)灌胃,对照组和模型组给予等量生理盐水灌胃,均干预12周.各组大鼠干预12周后,以代谢笼收集24 h尿液,检测24 h尿量及尿蛋白定量(PRO),断尾取血测定血糖、血清Scr、血BUN.采用Masson染色法观察肾脏组织病理改变.采用免疫组化法检测肾脏组织NLRP3炎症体成分核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(Caspase-1)、IL-1β蛋白定性表达,采用Western blot法检测肾脏组织NLRP3、Caspase-1、IL-1β蛋白表达量.结果 治疗组、对照组血糖、24 h尿量、PRO、血Scr、血BUN均低于模型组(P均＜0.05).模型组肾小球中重度纤维化,系膜基质重度增生,基底膜明显增厚;治疗组病理改变较模型组明显减轻.模型组肾脏组织中NLRP3、Caspase-1及IL-1β的定性及定量表达均高于对照组及治疗组(P均＜0.05).结论 参芍口服液可降低DN大鼠血糖水平、减轻肾脏纤维化、保护肾功能,其机制可能与降低肾脏组织中NLRP3炎症体相关蛋白NLRP3、Caspase-1、IL-1β3的表达有关.
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核苷酸结合寡聚化结构域样受体3在结肠癌组织的表达及其对结肠癌细胞增殖和迁移的影响
目的 观察核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NLRP3)在结肠癌组织的表达及对结肠癌细胞HCT116和SW480生物学行为的影响.方法 采用免疫组织化学法检测NLRP3在56例结肠癌组织及8例正常组织中蛋白的表达.实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测NLRP3在20例结肠癌组织中mRNA的表达.采用Kaplan-Meier法进行生存分析,Log-rank法进行显著性检验,Cox回归进行多因素分析.采用Lipofectamine 2000进行p-NLRP3表达载体转染,RT-qPCR 和Western blot检测NLRP3 mRNA及蛋白的表达,噻唑蓝(MTT)和Transwell法检测其对结肠癌细胞增殖和迁移能力的影响.结果 56例肿瘤组织中NLRP3高表达组10例,低表达组46例,在正常结肠黏膜组织中呈阳性表达.NLRP3 mRNA在癌旁组织的表达为癌组织表达的2.51倍.NLRP3 表达与肿瘤浸润深度(P=0.024)、淋巴结转移(P=0.009)、肝转移(P=0.038)及TNM分期(P=0.024)相关.NLRP3低表达组总生存率显著低于高表达组(P=0.010).NLRP3低表达为结肠癌预后不良独立风险因素(P=0.047).p-NLRP3转染SW80细胞,72h对照组和p-NLRP组吸光度(A)值分别为0.63±0.06和0.91±0.03(P=0.010),96h分别为1.07±0.05和1.48±0.05(P=0.003).p-NLRP3转染HCT116细胞,72h对照组和p-NLRP组A值分别为0.80±0.05和1.20±0.08(P=0.005),96h分别为1.02±0.08和1.64±0.05(P=0.003).过表达NLRP3,SW480细胞对照组和p-NLRP组穿膜细胞数分别为(104±8)和(30±4)个(P=0.008);HCT116细胞对照组和p-NLRP组穿膜细胞数分别为(123±6)和(36±3)个(P=0.022).结论 NLRP3低表达与结肠癌进展密切相关,是其独立预后不良风险因素.
关键词： 结肠癌 核苷酸结合寡聚化结构域样受体3 增殖 迁移 -
托吡酯抑制偏头痛模型大鼠三叉神经节内NALP3炎性小体和白介素-1β的表达
目的 探讨托吡酯对偏头痛模型大鼠三叉神经节内核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NALP3)炎性小体及白介素-1β(IL-1β)表达的影响. 方法 40只雄性成年SD大鼠按随机数字表法分为8组:空白组、生理盐水组、模型组、预防对照组、10 mg/kg托吡酯组、30 mg/kg托吡酯组、60 mg/kg托吡酯组和90 mg/kg托吡酯组,每组5只.采用致炎剂反复刺激硬脑膜法建立偏头痛模型,其中空白组不做任何处理,生理盐水组给予生理盐水刺激硬脑膜,不同浓度托吡酯组给予模型大鼠不同浓度托吡酯处理,预防对照组给予模型大鼠含1％Tween80的生理盐水处理.后一次给药后3h,采用Western blotting检测各组大鼠三叉神经节内NALP3、胱天蛋白酶1前体(pro-Caspase-1)、胱天蛋白酶1(Caspase-1)、IL-1β的表达量,并选择出佳托吡酯浓度行后续实验.10只雄性成年SD大鼠按随机数字表法分为对照组(与预防对照组干预相同)和托吡酯组(与60mg/kg托吡酯组干预相同),每组5只.采用免疫荧光染色观察三叉神经节内NALP3、Caspase-1、IL-1β的表达情况. 结果 与空白组比较,生理盐水组NALP3、pro-Caspase-1、Caspase-1、Ⅱ-1β表达量差异均无统计学意义(P＞0.05);与生理盐水组比较,模型组NALP3、pro-Caspase-1、Caspase-1、IL-1β表达量明显增加,差异均有统计学意义(P＜0.05);与预防对照组比较,60 mg/kg托吡酯组、90mg/kg托吡酯组NALP3、pro-Caspase-1、Caspase-1、IL-1β表达量明显降低,差异均有统计学意义(P＜0.05).与对照组比较,托吡酯组NALP3、Caspase-1、IL-1β免疫荧光染色强度明显减弱. 结论 托吡酯能够抑制偏头痛模型大鼠三叉神经节内NALP3炎性小体和IL-1β表达,其可能是偏头痛预防治疗的重要机制之一.
关键词： 托吡酯 偏头痛 三叉神经节 核苷酸结合寡聚化结构域样受体3 白介素-1β -
肠道免疫因子GM-CSF,NLRP3和TLR4在原发性肝癌中的表达
目的 通过检测健康志愿者、肝硬化患者和原发性肝癌患者血清中粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、核苷酸结合寡聚化结构域样受体3 (NLRP3)和Toll样受体4(TLR4)的含量,探讨GM-CSF、NLRP3和TLR4在原发性肝癌疾病过程中的可能作用.方法 收集肝癌手术切除的50例肝癌组织及癌旁组织标本,以及肝硬化和肝癌患者血清标本各12例,健康志愿者12例.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和实时荧光定量PCR方法分别检测血清中mRNA水平上GM-CSF、NLRP3和TLR4的表达.结果 正常肝细胞GM-CSF、NLRP3和TLR4 mRNA的表达水平均显著高于肝癌细胞(P＜ 0.001);原发性肝癌组织GM-CSF、NLRP3和TLR4 mRNA的表达水平均明显低于癌旁组织(P＜0.001);健康志愿者血清GM-CSF、NLRP3和TLR4的含量显著高于肝硬化及肝癌患者(P＜ 0.001),但肝硬化患者和肝癌患者血清GM-CSF、NLRP3和TLR4的含量差异无统计学意义(P＞0.05).结论 肝癌组织及癌细胞系GM-CSF、NL-RP3和TLR4与癌旁组织及人正常肝细胞相比表达显著降低,GM-CSF、NLRP3和TLR4信号途径可能参与了原发性肝癌的免疫过程.
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BAY11-7082对严重烧伤大鼠急性肺损伤及早期肺炎症反应的干预作用
目的 探讨BAY11-7082对严重烧伤大鼠急性肺损伤及早期肺炎症反应的干预作用.方法 (1)实验1.取12只SD大鼠,按随机数字表法分为正常对照组3只、烧伤组9只.正常对照组大鼠不行特殊处理;烧伤组大鼠背部造成30％体表总面积Ⅲ度烧伤,伤后即刻腹腔注射生理盐水50 mL/kg.烧伤组于伤后12、24、48 h分别取3只大鼠采集腹主动脉血并取肺组织,酶联免疫吸附测定法检测血清中白细胞介素1β(IL-1β)、IL-18含量,实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测肺组织中IL-1β、IL-18 mRNA表达.正常对照组大鼠同前采样检测.(2)实验2.取18只SD大鼠,按随机数字表法分为正常对照组、单纯烧伤组、BAY11-7082干预组,每组6只.正常对照组大鼠不行特殊处理;单纯烧伤组和BAY11-7082干预组大鼠同实验1致伤,伤后即刻分别腹腔注射生理盐水、终质量浓度为8 mg/mL BAY11-7082溶液50 mL/kg.于实验1结果得出的佳观察时间点收集烧伤各组大鼠肺组织及肺泡灌洗液,苏木素-伊红染色观察肺组织形态并进行肺组织病理损害评分,酶标仪检测肺组织中髓过氧化物酶(MPO)含量及肺泡灌洗液中总蛋白含量,蛋白质印迹法检测肺组织中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1和核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NLRP3)的蛋白表达,实时荧光定量RT-PCR法检测肺组织中IL-1β、IL-18、NLRP3、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1 mRNA表达.正常对照组大鼠同前采样检测.对数据行单因素方差分析、LSD-t检验. 结果 (1)烧伤组大鼠伤后12、24、48 h血清中IL-1β和IL-18含量显著高于正常对照组(t=10.55、22.05、12.47、10.60、15.22、11.94,P＜0.01).烧伤组大鼠伤后12、24、48 h肺组织中IL-1β和IL-18 mRNA表达量明显高于正常对照组(t =3.62、7.19、5.28、3.20、12.62、7.31,P＜0.05或P＜0.01).伤后24 h为后续实验佳观察时间点.(2)伤后24 h,与单纯烧伤组比较,BAY11-7082干预组大鼠炎性细胞浸润及肺泡内红细胞渗出明显减少,肺间质水肿明显消退.单纯烧伤组大鼠肺组织病理损害评分为(9.00±1.00)分,显著高于正常对照组的(1.10±0.26)分(t=13.23,P＜0.01).BAY11-7082干预组大鼠肺组织病理损害评分为(4.93 ±0.70)分,虽仍高于正常对照组(t=8.84,P＜0.01),但较单纯烧伤组明显降低(t=5.76,P＜0.01).伤后24 h,单纯烧伤组大鼠肺组织中MPO含量[(1.83±0.15) U/mg]及肺泡灌洗液中总蛋白含量[(1.39±0.20) mg/mL]均显著高于正常对照组[(0.51±0.10) U/mg、(0.44±0.05) mg/mL,t=12.50、7.86,P＜0.01],BAY11-7082干预组大鼠肺组织中MPO含量[(0.91±0.12)U/mg]及肺泡灌洗液中总蛋白含量[(0.60 ±0.10) mg/mL]显著低于单纯烧伤组(t=8.36、6.06,P＜0.01).伤后24 h,单纯烧伤组大鼠肺组织中NLRP3和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1蛋白表达量分别为3.10 ±0.09、2.99 ±0.30,显著高于正常对照组的1.00、1.00(t=9.06、11.28,P ＜0.01);BAY11-7082干预组大鼠肺组织中NLRP3和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1蛋白表达量分别为1.13±0.08、1.81±0.11,显著低于单纯烧伤组(t=7.24、3.91,P＜0.05或P＜0.01).伤后24 h,单纯烧伤组大鼠肺组织中IL-1β、IL-18、NLRP3和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1的mRNA表达量分别为5.0±0.4、3.32±0.21、3.54±0.42、6.3±1.0,明显高于正常对照组的1.0、1.00、1.00、1.0(t=13.97、14.14、11.78、7.13,P＜0.01);BAY11-7082干预组大鼠肺组织中IL-1β、IL-18、NLRP3和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1的mRNA表达量(2.6±0.5、2.00±0.28、1.39 ±0.21、2.5±0.5)显著低于单纯烧伤组(t=7.11、5.80、9.99、4.65,P＜0.05或P＜0.01). 结论 严重烧伤大鼠急性肺损伤早期使用BAY11-7082可通过抑制NLRP3,减少半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1的表达,显著降低IL-1β和IL-18的水平,同时减少肺组织中MPO含量及肺泡灌洗液中总蛋白含量,从而减轻肺炎症反应,减轻肺损伤.
