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色质联用仪确证化妆品中的氢醌和苯酚
氢醌及苯酚有祛斑增白的作用,但有一定的毒性,对皮肤刺激性大,人体接触过多易引起白血症和心脏病[1].为此国家标准规定祛斑类化妆品中禁止使用氢醌及苯酚.因此,建立快速、准确的氢醌及苯酚定性方法已非常必要.常规方法是通过液相色谱用保留时间定性,但干扰较多,不够准确.本文利用质谱的指纹和色谱的保留时间联合定性[2,3],定性准确,可信度高,实际应用效果显著.现介绍如下.仪器与试剂 (1)仪器:GCQ气相色谱-质谱联用仪配Xcarlibur软件(美国Finnigan-MAT公司);高效液相色谱仪配C18柱(美国WATERS公司);色谱柱:J＆W公司DB-5(30m×0.25mm×0.25μm);WX-80旋涡振荡器(上海第一医学仪器厂).(2)试剂:乙醚(分析纯);氢醌及苯酚为标准品(国家标准物质中心,99.99%).(3)标准溶液的配制:氢醌及苯酚标准品用乙醚做溶剂,配成毫克毫升级储备液,使用前稀释.
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L-02肝细胞对氢醌所致DNA损伤耐受实验模型的初步建立
目的 确定氢醌(hydroquinone,HQ)对L-02肝细胞的染毒剂量和染毒时间,从而为进一步的DNA损伤耐受机制研究提供科学依据.方法 采用噻唑蓝(MIT)比色法测定不同浓度(0、5、10、20、40、80、160和320 μmol/L)的HQ于不同时间(6、12、24和48 h)作用之后L-02肝细胞的相对存活率.结果 在相同的作用时间(6、12或24 h)条件下,在0～320 μmol/L范围内,随着HQ浓度的增加,各剂量组L-02肝细胞的存活率以剂量依赖性方式逐渐减少;其中160和32μmol/L组L-02肝细胞的存活率与对照组相比较有明显地减少(P＜0.01);而在48 h时间组内,HQ染毒剂量达到80μmol/L就可引起L-02肝细胞存活率的明显降低(P＜0.01).在相同浓度(5、lO、20和40 μmol/L)的HQ作用下,随着HQ作用时间的延长,各剂量组细胞的存活率之间差异没有统计学意义(P＞0.05);当HQ染毒时间达到48 h时,80、160和320 μmol/L的HQ染毒组L-02肝细胞的存活率与6 h对照组比较有明显地减少(P＜0.01).结论 可以将80 μmoL/L的HQ染毒24 h作为L-02肝细胞耐受DNA损伤的大剂量和长时间的界限.
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氢醌诱导下肝细胞PCNA、RAD6B及RAD18基因mRNA表达的时间效应
目的 研究氢醌(hydroquinone,HQ)诱导下L-02肝细胞PCNA、RAD6B及RAD18基因mRNA表达的时间效应,探讨PCNA、RAD6B及RAD18基因在HQ所致肝细胞毒性过程中的分子作用机制.方法 体外培养的L-02肝细胞经40 μmol/L的HQ诱导不同时间(6、12、24和48 h)后,用Trizol试剂从L-02肝细胞中分离总RNA,而后反转录为cDNA;利用Primer 3软件设计PCNA、RAD6B及RAD18基因及内参照β-ACTIN基因的引物,并进行标准曲线分析和熔解曲线分析,建立和优化定量检测各目的 基因在mRNA水平上表达的反应体系和反应条件;后采用实时荧光定量PCR法检测不同时间点PCNA、RAD6B及RAD18基因mRNA的表达状况.结果在各时间处理组(6、12、24和48 h)中,染毒组L-02肝细胞内PCNA、RAD6B及RAD18基因在mRNA水平上的表达均高于未染毒组.在24 h的时间范围内,PCNA基因在mRNA水平上的表达无论是染毒组(40 μmol/L)还是未染毒组(0 μmol/L),均具有随时间的延长而增加的趋势;到24 h时,相对表达量达到大值.RAD6B和RAD18基因在未染毒组中的表达在48 h范围内均有随时间的增加而升高的趋势,它们均在48 h时间点上表达高,其相对表达量分别为2.66和4.32;但在染毒组中,RAD6B基因和RAD18基因在48 h处的表达则有所下降,其相对表达量分别由3.74和4.83降至2.78和4.61.结论 HQ可以诱导PCNA、RAD6B及RAD18基因mRNA的表达上调,并且呈现一定的时序性.
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氢醌对造血干细胞毒效应的研究进展
氢醌(hydroquinone,HQ),又名对苯二酚[C6H4(OH)2],是一种用途广泛的化学物质,在工业上用于抗氧化剂、显影剂及阻聚剂等.在农业上,氢醌是国内外普遍应用的土壤脲酶抑制剂,可提高尿素氮的利用率,近年来用作动物饲料脲酶抑制剂的报道逐渐增多.职业接触可见于生产氢醌、抗氧化剂、照相显影剂、油漆等生产工人及照相显影操作工、塑料稳定剂操作工、橡胶涂料工等.氢醌在自然环境中同样广泛存在,许多动植物体内均含有,在香烟的主流烟雾中含量也很高,在日常生活中可通过食品、吸烟、某些化妆品及皮肤科用药接触.
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低剂量氢醌对大鼠骨髓间充质干细胞生物学性状及PARP-1表达的影响
目的:探讨低剂量氢醌(HQ)对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)生物学性状及聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(PARP-1)基因表达的影响,阐明低剂量HQ对骨髓的毒效应.方法:磷酸盐缓冲液(PBS)溶解HQ,以PBS处理组为对照组,分别以2.5、5.0和10.0 μmol·L-1HQ染毒大鼠BMSCs为处理组.应用Cell Counting Kit-8试剂盒检测细胞活力和细胞增殖能力,通过磷脂结合蛋白(Annexin V)/碘化丙啶(PI)标记的流式细胞技术检测细胞凋亡,用实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测PARP-1基因表达的改变.结果:与PBS对照组比较,各剂量组细胞增殖能力明显提高(P＜0.05)；染毒48 h后,5.0和10.0 μmol·L-1HQ组细胞的凋亡率均明显降低(P＜0.05);染毒48 h后,2.5、5.0和10.0 μmol·L-1 HQ组细胞PARP-1表达量分别为对照组0.92、0.56(P＜0.05)和0.45倍(P＜0.05).结论:低剂量HQ能抑制大鼠BMSCs凋亡和PARP-1基因表达,促进细胞增殖.
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益母草愈伤组织诱导与生物转化能力初探
目的:建立益母草愈伤组织培养体系,用于生物转化外源底物初探.方法:以MS为基本培养基,研究不同外植体及植物生长调节剂对益母草愈伤组织诱导及增殖的影响,并对获得的愈伤组织生物转化能力进行初探.结果:益母草子叶诱导率85.79％、真叶诱导率97.88％、下胚轴诱导率29.78％;诱导的适配方为MS +2,4-D 0.5 mg/L+6-BA 2 mg/L;初期增殖适配方为MS +2,4-D0.5 mg/L+6-BA 2 mg/L;长期继代适配方为MS +2,4-D 0.1 mg/L+6-BA 1 mg/L;佳继代周期10 d;获得的3种愈伤组织悬浮培养均具有转化外源氢醌生成熊果苷的能力.结论:益母草愈伤组织经优选增殖,有望成为转化外源物质的良好材料.
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氢醌对人骨髓间充质干细胞蛋白质表达谱的影响
[目的]了解氢醌(HQ)对人骨髓间充质干细胞蛋白表达谱的影响,筛选HQ骨髓毒性作用的靶蛋白.[方法]体外分离并培养人的骨髓间充质干细胞至第3代,随即将细胞分为实验组和对照组.实验组用5×10-5mol/L的HQ染毒24 h;对照组加入相同浓度的磷酸缓冲液处理24 h.染毒完毕后即刻抽提两组细胞的总蛋白,然后利用双向凝胶电泳技术和LC-Qq-TOF质谱技术进行蛋白表达谱分析,找到可能的HQ骨髓毒性靶蛋白.[结果]在3次重复实验中,对照组与HQ处理组相比较,均有约20个差异蛋白点.其中3次中有11个重复的差异蛋白点,质谱分析鉴定出膜联蛋白-Ⅱ、甲酰-谷胱苷肽水解酶、尿苷二磷酸葡萄糖脱氢酶和醛缩酶-A 4个蛋白点.[结论]HQ可诱导膜联蛋白-Ⅱ、醛缩酶-A和尿苷二磷酸葡萄糖脱氢酶表达下调及甲酰-谷胱苷肽水解酶表达的上调.
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氢醌致DNA甲基化改变及可能机制
苯是一种广泛使用的工业原料,同时是一种确定的遗传毒性致癌物,主要由其活性代谢产物——氢醌发挥毒性作用.氢醌本身普遍应用于黑白显影剂、橡胶防老剂、稳定剂和抗氧剂.氢醌可引起机体多系统毒性损伤,长期试验表明氢醌还是一种致癌剂.近年来有文献报道氢醌暴露可导致DNA甲基化水平发生改变,本文综述了氢醌可能通过调节DNA甲基化转移酶的活力、氧化应激损伤干扰、DNA损伤修复蛋白调控以及其他表观遗传学修饰的参与等影响DNA甲基化状态,旨在为预防氢醌乃至苯中毒提供参考依据.
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氢醌对L-02肝细胞损伤的研究
[目的]探讨氢醌(HQ)对L-02肝细胞损伤及其可能的作用机制.[方法]应用噻唑蓝(MTT)比色法检测浓度分别为0、5、10、20、40、80、160和320μmol/L的HQ作用24h后对L-02肝细胞存活率的影响;利用万能倒置显微镜观察不同浓度HQ染毒之后L-02肝细胞的形态学改变并摄影成像;利用全自动生化分析仪检测不同浓度HQ染毒24h后L-02肝细胞的乳酸脱氢酶(LDH)漏出率和丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性,以观察HQ对L-Y2肝细胞膜完整性的影响.[结果]在0～80 μmol/L浓度的范围内染毒24h后,HQ对L-02肝细胞的存活率没有明显的影响(P＞0.05);浓度≥160μmol/L时,染毒24h后,存活率则明显下降(P＜0.01),LDH漏出率、ALT和AST活性均有随着HQ浓度的增加而升高的趋势;160和320μmol/L组LDH漏出率与对照组比较有明显升高(P＜0.01).但ALT和AST活性只在320μmol/L组与对照组比较才有明显增加(P＜0.01).此外,160和320μmol/L组L-02肝细胞的形态与对照组相比发生了明显的改变.[结论]HQ可能是通过损伤细胞膜而对L-02肝细胞产生毒性影响.
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氢醌对TK6细胞周期的影响及其相关的调控机制探讨
[目的]探讨氢醌(hydroquinone,HQ)对细胞周期的影响及其相关的调控机制.[方法]磷酸盐缓冲液(PBS)处理人类淋巴母细胞(TK6细胞)为对照组,20.0 unol/L HQ为处理组,48h后通过碘化丙啶(PI)标记的流式细胞术检测细胞周期分布情况,用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测PTEN(抑癌基因)、p53基因mRNA表达的改变,流式细胞荧光标记法检测Rb蛋白的表达. [结果]与对照组比较,处理组G1期细胞比例明显增加,S期细胞比例明显减少,差异均有统计学意义(P＜0.05); HQ作用于TK6细胞后上调了Rb的表达,下调了p53的表达,其差异均有统计学意义(P＜0.05),而对PTEN的表达没有明显影响. [结论]HQ可能通过上调Rb的表达使细胞阻滞于G1期.
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双波长紫外分光光度法测定复方氢醌乳膏中氢醌的含量
目的:建立复方氢醌乳膏中氢醌的含量测定方法.方法:采用双波长紫外分光光度法测定氢醌的含量.结果:氢醌在4.06～24.36μg/mL范围内线性关系良好(r=0.999 8,n=6),平均回收率95.87%,相对标准偏差为0.51%.结论:该含量测定方法简便快速,结果准确.
关键词： 复方氢醌乳膏 氢醌 双波长紫外分光光度法 -
氢醌脂肪酸单酯的简便合成
氢醌脂肪酸单酯是一类皮肤祛色素剂，其作用机理与氢醌相同，即抑制皮肤组织中酪氨酸酶的活性，从而阻断黑色素形成。与氢醌相比，氢醌脂肪酸单酯具有对皮肤刺激性小，性质更加稳定，且祛色素性能更好等优点［1］。 氢醌脂肪酸单酯的合成方法，文献［2，3］报道较多的是以氢醌与酰氯在DMAP催化下反应制备。此方法反应复杂，所用试剂比较昂贵，反应副产物多，后处理较困难，且产率不高，文献［2］收率58%～65%，文献［3］收率>70%，因此不宜于大规模制备。本文参考文献［4］以氢醌单丙酸酯(1)为例，采用氢醌二丙酸酯(2)为原料，在甲醇/水的溶剂中，以氢氧化钾作为催化剂，经部分醇解脱酰化反应制备，并加入少量还原剂以防止1氧化，收率为82%。本法路线短，原料易得，产物简单，易于后处理，且收率较高。
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毛细管气相色谱法测定化妆品中苯酚和氢醌
苯酚和氢醌具有一定的美白功效,常添加于美白类化妆品中.由于苯酚和氢醌氧化性较强,具有一定的腐蚀性,因而卫生部<化妆品卫生规范(2002年版)>规定了用量和应用范围,并推荐检测方法为高效液相色谱法和填充柱气相色谱法.由于氢醌极性较大,且没有合适的前处理手段,在实际工作中很难将苯酚、氢醌与杂质达到满意的分离效果,影响测定结果的准确性.本文尝试采用毛细管气相色谱方法同时测定化妆品中苯酚和氢醌.
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空气中氢醌浓度安全性探讨
氢醌(HQ)又名对苯二酚,广泛应用于黑白显影剂、蒽醌染料、偶氮染料、合成氨助溶剂、橡胶防老剂、阻聚剂、涂料和香精中作为稳定剂和抗氧化剂,是一种常见的化工原料并具有一定毒性.国内外对HQ毒理研究结果多来源于动物试验,对人体危害研究尚不多见.本文通过对某HQ生产企业的职业卫生学调查,分析不同HQ接触浓度对人体靶器官的影响,研究国家职业卫生标准条件下工人长期接触HQ的健康状况,为今后国家卫生标准的修订提供人体健康研究的科学依据.
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甘草酸、熊果苷及氢醌对小鼠黑素瘤细胞黑素生成影响的比较研究
比较观察了18α-甘草酸双胺盐、熊果苷及氢醌对体外培养B16F10鼠黑素瘤细胞细胞形态、酪氨酸酶活性、黑素含量和细胞增殖率的影响,结果发现3种化合物均显示有抑制黑素生成的作用,其中以50μmol/L熊果苷对酪氨酸酶活性和黑素含量抑制作用为明显,其次是100μmol/L18α-甘草酸双胺盐, 但二者并无统计学上的差异(P>0.05).氢醌对酪氨酸酶活性的影响呈双向作用,即低浓度(0.1～0.5μmol/L)时下调酶活性,高浓度(1～10μmol/L)时则能轻度上调.细胞增殖率测定结果显示18α -甘草酸双胺盐、熊果苷在实验浓度(10～5000μmol/L)对细胞增殖率无明显抑制,而氢醌浓度超过5μmol/L时能明显抑制细胞增殖或呈现细胞毒性.细胞形态观察发现1～10μmol/L氢醌作用24 h,细胞胞体变小,树状突明显增多且变得细长,部分树状突呈串珠状改变.提示18α-甘草酸双胺盐、熊果苷的皮肤脱色作用机制与氢醌可能不同,后者低浓度时以抑制酪酸酶活性为主,高浓度时主要是细胞毒,且细胞早期的损伤部位可能发生在树状突.18α-甘草酸双胺盐能否成为一种无细胞毒酪氨酸酶抑制型皮肤脱色剂有待进一步临床加以验证.
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白术及茯苓提取物对豚鼠皮肤酪氨酸酶 mRNA基因表达水平的影响
哺乳动物黑素细胞黑素生成受多种因素调控。紫外线、促黑素、 8－甲氧补骨脂素等对黑素生成具有刺激作用 [1,2]，而氢醌、熊果苷、甘草酸等对黑素生成则有抑制作用。我们发现中药茯苓、白术能抑制酪氨酸酶活性 [3],使黑素细胞和黑素颗粒减少 [4]。为了研究它们对酪氨酸酶 (TYR) mRNA基因表达的影响，我们应用逆转录聚合酶链反应 (RT－ PCR)技术，检测药物干预前后豚鼠皮肤中 TYR mRNA表达水平。 一、材料与方法 (一 )动物：健康雄性棕黄色豚鼠 10只 (南京军区医学实验动物中心提供，普通级 )，体重 332～ 425 g，平均 380.2 g。每只实验动物背部取 6个相离区域， UVB照射后外涂药物。阳性对照外用 3％氢醌。
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HEK细胞中酪氨酸酶相关蛋白2对多巴胺及氢醌毒性的防御作用
在胚胎发育过程中,黑素细胞及神经元均发生于神经嵴,有着共同的细胞起源.这一关系还体现于分化过程中,因为它们在黑素细胞的黑素合成和多巴胺能及儿茶酚胺能神经元的神经递质合成过程中均是醌中间产物的活跃制造者.这些醌衍生物是极具氧化还原活性的复合物,同时也是高毒性的中间产物,必须被解毒物质迅速清除.
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氢醌毒性效应及其机制的研究进展
氢醌(HQ),又名对苯二酚(C6H6O2),是重要的工业化学物,在工业生产中用作抗氧化剂、阻聚剂、显影剂、制造染料的中间体及医院皮肤科外用制剂.HQ在自然界许多植物的茎、叶和汁内均存在,在人类吸烟的主流烟雾中也含有约110～300ug/支[1].HQ还是苯的代谢物之一,在苯毒性效应中发挥着重要作用.HQ的主要职业接触人群为HQ或者苯的生产工人,照相显影操作工,橡胶、塑料稳定剂操作工等.
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氢醌霜的配制研究
目的 本文试图找出氢醌霜的佳制备处方. 方法 通过制备9种不同处方的氢醌霜,6个月以后,测定氢醌在霜剂糸统中的含量. 结果与结论 药物分析结果显示氢醌的含量在高油相、甘油含量,在EDTA-2Na与Na2 SO3 联用,在氢醌研粉直接加入下,比其它处方高.
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复方氢醌制剂治疗黄褐斑疗效观察
我科于2002年3月～2004年5月,应用我院制剂3%氢醌、1%氢化可的松及重庆华邦制药有限公司生产的0.05%维A酸霜复方制剂,治疗36例黄褐斑患者,取得了较好疗效,现报道如下.
