首页 > 文献资料
-
铝对大鼠脑内Aβ蓄积及α-分泌酶各亚型表达变化的影响
目的 探讨α-分泌酶在铝引起脑内β-淀粉样蛋白(amyloid-β,Aβ)蓄积中的作用.方法 健康雄性SD大鼠32只,按体重随机分为4组,对照组(生理盐水组),低剂量组(0.4 mg/kg),中剂量组(0.8 mg/kg)和高剂量(1.2 mg/kg)组,每组8只.染毒结束后,采用ELISA检测大鼠皮质和海马Aβ的量.用Western-blot检测大鼠脑皮质和海马中α-分泌酶各亚型(ADAM9、ADAM10及ADAM17)的表达情况.结果 随染毒剂量的增高,皮质和海马内Aβ总量增高,与对照组相比,皮质内高剂量组Aβ总量(Aβ40和Aβ42总和)增高有统计学意义(P＜0.05),在海马内中、高剂量组Aβ总量增高有统计学意义(P＜0.05);其中Aβ40变化不明显,在皮质和海马内各染毒组与对照组相比,差异无统计学意义(P＞0.05);而Aβ42有显著增高,与对照组相比,皮质内高剂量组Aβ42增高,差异有统计学意义(P＜0.05),海马内低、中、高剂量组Aβ42增高,差异均有统计学意义(P＜0.05).与对照组相比,各染毒组大鼠脑皮质ADAM9表达量差异无统计学意义(P＞0.05),在海马内中、高剂量组ADAM9表达量显著降低(P＜0.05);在皮质和海马内,ADAM10表达量在低、中、高剂量组均显著降低(P＜0.05),ADAM17表达量在脑皮质和海马内中、高剂量组显著降低(P＜0.05).结论 铝可以引起大鼠脑皮质和海马Aβ水平升高,α-分泌酶水平的降低是铝引起大鼠脑内Aβ蓄积的重要原因之一.
-
早孕滋养细胞膜型及可溶性趋化因子CXCL16表达调控
目的 探讨趋化因子CXCL16在人早孕滋养细胞表达和释放的调控机制.方法 原代培养人早孕滋养细胞,实时定量RT-PCR、免疫化学和ELISA方法分析CXCL16的表达和分泌;ELISA方法分析细胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-4刺激前后滋养细胞CXCL16的表达和分泌水平;ELISA方法分析ADAM10治疗前后滋养细胞CXCL16的表达及分泌水平.结果 滋养细胞表达并分泌趋化因子CXCL16;IFN-γ治疗后滋养细胞表达和分泌CXCL16水平均显著上升(P<0.01),但TNF-α和IL-4并不影响CXCL16的表达或分泌;ADAM10可以加速CXCL16自滋养细胞的脱落,但并不上调CXCL16的合成.结论 IFN-γ和ADAM10参与调控母胎界面滋养细胞趋化因子CXCL16的合成和分泌.
-
金属蛋白酶ADAM10在胶质瘤中的表达及意义
目的 探讨ADAM10基因mRNA及蛋白在胶质瘤细胞中的表达及生物学意义.方法 我院2007年6月至2010年7月共计43例脑胶质瘤患者标本,低级别胶质瘤22例,高级别胶质瘤21例,取脑膜瘤5例作为阴性对照组,采用RT-PCR、免疫组织化学实验方法检测ADAM10基因及蛋白的表达,进行半定量分析和细胞形态学观察.结果 单因素方差分析三组平均灰度值结果如下:阴性对照组为4.8,低级别组为22.1,高级别组为32.3,高级别组和低级别组比较差异有统计学意义(P＜0.05),低级别组和阴性对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01)；免疫组化染色提示蛋白主要定位于肿瘤细胞膜、瘤组织内血管壁上.结论 胶质瘤恶性度越高,肿瘤侵袭性越强,ADAM10表达也越多,推测其可能参与胶质瘤侵袭生长；ADAM10同时也在血管壁上有较多表达,推测其可能与瘤周水肿形成有关.
-
miR-140-5p通过下调ADAM10表达对下咽癌细胞的迁移和侵袭能力的影响
目的 分别检测miR-140-5p(微小RNA-140-5p)和ADAM10(去整合素金属蛋白酶10)在下咽癌组织中的表达,并探讨miR-140-5p对下咽癌FaDu细胞迁移和侵袭能力的影响及可能的调控机制.方法 应用real-time PCR(荧光定量PCR)检测miR-140-5p及ADAM10 mRNA在33例下咽癌患者肿瘤组织和癌旁组织中的表达;利用转染技术分别上调miR-140-5p、下调miR-140-5p和下调ADAM10的表达;采用transwell迁移和侵袭实验检测miR-140-5p上调、miR-140-5p下调和ADAM10下调对FaDu细胞迁移和侵袭能力的影响;采用Western blot技术检测33对临床标本和FaDu细胞ADAM10蛋白的表达.结果 MiR-140-5p在下咽癌肿瘤组织中明显下调(t=-4.016,P＜0.01),ADAM10 mRNNA及蛋白在下咽癌肿瘤组织中明显上调(t=3.960,P＜0.01;t=12.089,P＜0.01).实验组FaDu细胞干扰ADAM10表达后,ADAM 10在mRNA和蛋白水平较siRNA-NC阴性对照组明显下调(t=8.653,P＜0.05;t =5.191,P＜0.05).空白对照组和阴性对照组差异无统计学意义(P＞0.05).Transwell迁移和侵袭实验显示,hsa-mir-140-5p实验组细胞迁移和侵袭细胞数明显低于hsa-mir-NC阴性对照组(t=3.255,P＜0.05;t =2.942,P＜0.05),anti-mir-140-5p实验组细胞迁移和侵袭细胞数明显高于对照组(t=-13.521,P＜0.05;t=-6.223,P＜0.05),si-ADAM10实验组细胞迁移和侵袭细胞数明显低于对照组(t =4.759,P＜0.05;t =3.663,P＜0.05).ADAM10下调能够部分逆转miR-140-5p下调对细胞迁移和侵袭能力的促进作用.Western blot显示,hsa-mir-140-5p实验组ADAM10蛋白的表达量较对照组明显降低,Anti-mir-140-5p实验组ADAM10蛋白较对照组明显升高.结论 miR-140-5p在下咽癌肿瘤组织中低表达且与下咽癌患者的肿瘤T分期及淋巴结转移N分期显著相关,且ADAM10在肿瘤组织中高表达.MiR-140-5p能够调控ADAM10的表达,miR-140-5p抑制下咽癌细胞迁移和侵袭能力,可能是通过下调ADAM10蛋白实现的.MiR-140-5p可能成为下咽癌治疗的新靶点.
-
成年小鼠大脑神经细胞特异性ADAM1O基因敲除的认知功能研究
目的 探讨成年小鼠大脑神经细胞特异性ADAM10基因缺失后对小鼠行为的影响.方法 通过Y迷宫、高架十字迷宫以及旷场实验,了解ADAM10基因敲除后,对小鼠的自主活动能力、探究学习能力的影响.结果 行为学实验结果显示ADAM10基因敲除小鼠的自主活动能力较对照组小鼠有所下降,其在新环境中探索的次数、时间和路程较对照组明显减少.说明了脑内神经细胞ADAM10基因的缺失对成年小鼠的自主活动能力和探究学习能力都产生了一定的影响.
-
NR2 B－Wnt3α－ADAM10信号通路与糖尿病脑病关系的研究进展
糖尿病脑病（ DE）是糖尿病引起的中枢神经系统损害，可引起认知功能障碍。糖尿病时大脑N－甲基－D－天冬氨酸受体（ NMDARs）表达异常，人们由此推断NMDARs在DE的发展过程中可能发挥重要作用〔1〕。 NMDARs的激活通过Wnt信号通路引起去整合素金属蛋白酶10（ADAM10）的变化，与认知功能密切相关〔2，3〕。本文就近年来关于NR2B－Wnt3α－ADAM10信号转导通路与DE的研究进展作一简要概述。
-
ADAM10基因RNA干扰重组慢病毒的转导对H9C2细胞N型钙粘蛋白的解整合素金属蛋白酶10加工途径的影响
目的 构建ADAM10基因RNA干扰重组慢病毒,观察其在N型钙粘蛋白底物加工过程中的重要性,为探求该加工途径在维持心肌组织结构形态和完整性中的作用打下基础.方法 筛选确定ADAM10基因RNA干扰有效靶序列,合成靶序列的Oligo DNA,与LentiLox 3.7载体连接,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定.用重组慢病毒转导心肌细胞(H9C2),通过Western blotting检测心肌细胞N型钙粘蛋白及其C-端的CTF1片段的蛋白表达,流式细胞学实验检测N型钙粘蛋白在心肌细胞表面的表达,利用黏附实验检测转染前后心肌细胞黏附能力的变化.结果 成功构建ADAM10 shRNA慢病毒载体,包装慢病毒,转导心肌细胞.与阴性对照组相比,转染组心肌细胞N型钙粘蛋白表达提高,CTF1片段表达减少；细胞表面N型钙粘蛋白的表达增多；心肌细胞黏附能力提高.结论 初步证明心肌细胞中ADAM10在N型钙粘蛋白的加工水解过程中发挥重要作用,为进一步明确该水解途径在维持心肌细胞形态结构和完整性方面所起的作用打下了实验基础.
-
解聚素与金属蛋白酶10功能研究进展
解聚素与金属蛋白酶10(ADAM10)是细胞膜上一种重要的调节分子.它通过调节性膜内蛋白水解(regulated intramembrane proteolysis),引起底物分子的胞外功能区的脱落,释放各种生长因子,或者调节细胞内的蛋白水解,进一步启动细胞内的信号转导途径.ADAM10通过这种方式参与了中枢神经系统的发育和生长、炎症反应以及肿瘤的形成和侵袭.本文仅就ADAM10的分子结构,4类主要的作用底物和发挥的功能作一简要介绍.
-
ADAM1O蛋白对口腔鳞状细胞癌转移的促进作用
目的:研究ADAM10蛋白表达与口腔鳞状细胞癌淋巴结转移的相关性,并探讨其促进肿瘤细胞转移的可能机制.方法:采用免疫组织化学方法检测ADAM10蛋白在58例口腔鳞状细胞癌中的表达情况,并分析其与肿瘤淋巴结转移发生的相关性;采用Transwell法检测高、低转移潜能的HN-12和HN-4口腔鳞状细胞癌细胞系的迁移能力,并通过实时定量PCR法和蛋白质免疫印迹实验分别检测2株细胞中ADAM10基因和蛋白的表达水平;采用RNA干扰技术,沉默高转移潜能细胞HN-12中的ADAM10的表达水平,观察其对细胞迁移能力的影响.采用SPSS 16.0软件包对实验数据进行统计学分析.结果:ADAM10蛋白的高表达与口腔鳞状细胞癌发生淋巴结转移相关;在高转移潜能细胞系HN-12细胞中,ADAM10基因及蛋白表达水平较低转移潜能细胞系HN-4显著增高(P＜0.01);HN-12细胞中沉默表达ADAM10基因后,细胞迁移能力显著降低(P＜0.01).结论:ADAM10蛋白的高表达与口腔鳞状细胞癌淋巴结转移相关;ADAM10促进肿瘤细胞的迁移能力是其影响肿瘤转移的可能机制.ADAM10有望成为治疗口腔鳞状细胞癌转移的新靶点.
-
ADAM9、ADAM10基因沉默对腺样囊性癌高转移潜能细胞生物学行为的影响
目的:探讨ADAM9、ADAMl0基因沉默对腺样囊性癌高转移潜能细胞生物学行为的影响.方法:采用免疫组化检测15例腺样囊性癌原发灶和相应淋巴结转移组织中ADAM9、ADAM10蛋白的表达情况;采用RNA干扰方法抑制腺样囊性癌高转移潜能细胞系ACC-M、SACC-LM中ADAM9、ADAM10基因的表达,检测该基因沉默后对肿瘤细胞周期及体外增殖、转移能力的影响.采用SPSS11.0软件包对数据进行单因素方差分析及Fisher确切概率检验.结果:ADAM9、ADAM10蛋白在腺样囊性癌淋巴结转移组织中的表达比在原发灶组织中显著增高(P<0.05);ADAM9、ADAM10基因沉默后细胞增殖能力下降(P<0.05),肿瘤细胞出现S期阻滞;并且ADAM9、ADAM10基因沉默后,肿瘤细胞的体外侵袭能力显著下降(P<0.01).结论:ADAM9和ADAM10基因表达与腺样囊性癌的转移有关.ADAM9、ADAM10基因沉默可改变腺样囊性癌细胞体外增殖能力、侵袭能力等生物学特性.
-
Notch信号通路基因JAG1、ADAM17和ADAM10与先天性心脏病(CHD)的相关性
目的 探索Notch通路的配体JAG1和限速酶ADAM10和ADAM17与先天性心脏病(congenital heart disease,CHD)发病的相关性.方法 选取来自山东、上海两地的1 053例CHD患者血液样本和1 000例对照样本,对这3个基因的5 '启动子区和3'-UTR区进行了全测序,并进行统计分析及简要功能验证.结果 检测到7个SNP(含2个新发SNP位点Ch2:9695908T/C和Ch20:10655928T/C)和1个单倍型组合具有显著性频率差异.双荧光素酶报告基因试验表明其中ADAM17启动子区的rs3811592M rs13415726M rs3811591M这个连锁单倍型可显著下调基因表达;而JAG1启动子区的rs7264849M则可显著上调基因表达.结论 这些SNP突变可能影响Notch信号的强弱,从而与心脏发育异常相关.
关键词： 先天性心脏病(CHD) Notch信号通路 JAG1 ADAM17 ADAM10 -
结肠癌组织中MICA和ADAM10的表达及其相关性
目的 研究MHC I类相关分子A(MHC class Ⅰ chain-related A,MICA)及ADAM10在结肠癌中的表达及其与临床病理学参数之间的关系,并探讨两者的相关性,为结肠癌细胞表面MICA蛋白脱落机制的研究提供组织学依据.方法 应用免疫组织化学方法,采用SP法检测有完整资料的90例结肠癌组织及30例癌旁组织中MICA和ADAM10的表达差异.结果 在癌组织和癌旁组织中,MICA蛋白表达阳性率分别为67.8%和7.1%,ADAM10蛋白表达阳性率分别为82.2%和20%,差异均具有显著性(P<0.01),并且与淋巴结转移有关(P<0.05),MICA与ADAM10表达呈负相关性(r=-0.258,P<0.05).结论 MICA的表达降低与ADAM10的表达升高,可能共同参与了肿瘤的免疫逃逸及肿瘤的转移;且ADAM10在膜型MICA的脱落机制中发挥重要作用.
关键词： 结肠肿瘤 MHC I类相关分子 A ADAM10 免疫组织化学 -
肾病综合征氧化低密度脂蛋白脂质肾损伤的实验研究
目的 通过观察氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)对系膜细胞(Mesangial Cells,MCs)分泌炎症介质功能的影响及MAPK信号通路和核因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)活性的改变,进一步阐明脂质在肾损伤中的作用机制.方法 利用ox-LDL诱导大鼠系膜细胞增殖,分别采用ELISA、real-time PCR、western blot技术检测MCs炎症介质、MAPK通路相关蛋白(p38、JNK、ERK)及NF-κB的表达水平.结果 利用ox-LDL诱导大鼠系膜细胞增殖并加入CXCR6受体后,其表面炎症因子[CXCL16、CD36、ADAM10、ADAM17、干扰素(IFN)、白细胞介素(IL6)、肿瘤坏死因子(TNF-α)]的表达水平以及MAPK信号通路(p38、JNK、ERK)、NF-κB的磷酸化水平显著升高(P<0.01).结论 ox-LDL可促使系膜细胞释放CXCL16、CD36、ADAM10、ADAM17、IFN、IL6、TNF-α等炎症介质,CXCR6可介导这一途径.ox-LDL激活MAPK信号转导通路,使p38、ERK1/2、SAPK/JNK的磷酸化水平升高,激活了NF-κB p65的活性,CXCR6-CXCL16介导MAPK信号途径.
-
选择性敲除小鼠神经细胞 Adam10基因导致大脑皮质发育不良
目的：研究 Adam10基因在小鼠神经系统发育中的作用。方法：利用 Cre-loxp 转基因鼠技术，将 Gfapcre转基因鼠和 Adam10lox/lox 转基因鼠杂交，得到神经细胞特异性 Adam10基因敲除鼠（Gfapcre-Adam10lox/lox），在出生后第14天对大脑切片行 HE 染色，观察 Adam10基因敲除后神经系统发育情况。结果：选择性敲除小鼠神经细胞 Adam10基因（Gfapcre-Adam10lox/lox），小鼠可存活至出生后3周左右，部份小鼠大脑皮质单侧或双侧缺失，未出现皮质缺失的小鼠大脑皮质经 HE 染色提示出现层次结构紊乱。结论：Adam10基因在小鼠神经系统发育中具有重要作用，选择性敲除神经细胞 Adam10基因后导致小鼠大脑皮质缺失或层次结构紊乱。
-
α-分泌酶ADAM10对APP转基因小鼠情绪和学习行为的影响
目的 探讨α-分泌酶ADAM10对阿尔茨海默病发生的作用.方法 采用开场实验、高架十字迷宫和水迷宫实验测试并比较APP转基因小鼠和APP/ADAM10双转基因小鼠的行为学差异.结果 与对照组小鼠相比,APP转基因小鼠焦虑性增高,自主活动力减弱,空间学习记忆力下降,差异有显著性(P＜0.05);而APP/ADAM10双转基因小鼠各种行为和对照组相比无显著性差异(P＞0.05).结论 α-分泌酶ADAM10能显著改善小鼠的情绪,提高APP转基因小鼠的自主活动力和学习、记忆能力,开发激活ADAM10酶活性的药物或者在神经细胞表达ADAM10可望成为治疗阿尔茨海默病的新途径.
-
ADAM1O在舌癌中的表达及其意义
目的:研究ADAM10在舌鳞状细胞癌(tongue squamous cell carcinomas,TSCC)中的表达及其与临床病理因素的关系.方法:应用S-P免疫组织化学法检测49例舌鳞癌中ADAM10蛋白表达情况,并分析临床特征及病理学特点.结果:ADAM 10蛋白的阳性表达主要定位于胞浆和胞膜.舌鳞癌伴淋巴结转移ADAM10表达高于未发生淋巴结转移者(P＜0.05).ADAM10表达与肿瘤组织分化程度和临床参数无关.结论:ADAM10在舌癌组织中的表达与淋巴结转移相关,有可能成为新的临床观察指标.
-
靶向沉默ADAM10基因对心肌细胞N-cadherin加工的影响
目的:研究心肌细胞中解整合素金属蛋白酶家族(ADAMs)成员ADAM10在神经型钙黏蛋白(N-cadherin)底物加工过程中的重要性,为探求该加工途径在维持心肌组织结构形态和完整性中的作用打下基础.方法:将质粒sc-270165 ADAM10 siRNA (r)转染入大鼠心肌细胞(H9c2),建立ADAM10稳定沉默的心肌细胞株.通过Western blotting检测心肌细胞N-cadherin及其C末端片段(CTF)的蛋白表达,流式细胞术检测心肌细胞表面N-cadherin的表达.利用黏附实验检测其对细胞黏附能力的影响.结果:与阴性对照组相比,ADAM10基因沉默组心肌细胞N-cadherin蛋白表达提高,CTF蛋白表达减少;细胞表面N-cadherin的表达增多,心肌细胞黏附能力提高.结论:心肌细胞中ADAM10在N-cadherin的加工水解过程中可能发挥了作用.
-
ADAM10在肺癌中的表达及其临床病理学意义
目的 观察ADAM10在肺癌中的表达及其与肺癌淋巴结转移的相关性.方法 采用MaxVisionTM快捷免疫组化染色法对78例原发性肺癌进行免疫组化研究.结果 肺癌伴淋巴结转移者的ADAM10表达高于未发生淋巴结转移者(P<0.05).在小细胞肺癌中,未见ADAM10表达;在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期非小细胞肺癌中ADAMl0的阳性表达率分别为45.0％、50.0％、53.3％和63.6％,尽管有逐渐升高的趋势.但Ⅲ、Ⅳ期和Ⅰ、Ⅱ期之间ADAM10表达在统计学上无显著性差异(P0.05).ADAM10在腺癌中的表达较鳞癌和小细胞癌高(P<0.05),ADAM10表达与病理类型是相关的,但与肿瘤组织分化程度和临床参数无关.结论 ADAM10表达与肺癌临床分期无相关性.而与病理类型有相关性,ADAM10阳性表达者易发生淋巴结转移,预后差.
-
肝癌中ADAM10、EGFR和E-cadherin的表达分析及其与临床病理关系的研究
目的 探讨肝癌中ADAM10、EGFR和E-cadherin的表达分析及其与临床病理的关系.方法 运用免疫组化法和实时定量PCR检测ADAM10、EGFR和E-cadherin在肝癌组织中的表达,并分析及其与临床病理关系的研究.结果 EGFR和ADAM10在癌组织中的阳性表达率显著高于癌旁组织,而E-cadherin表达低于癌旁组织.ADAM10、EGFR和E-cadherin在肝癌组织中的表达与门静脉癌栓形成、肝内转移、分化程度有关.结论 ADAM10、EGFR和E-cadherin的检测对了解肝癌的发生发展,指导治疗和判断预后有重要意义.
关键词： 肝癌 ADAM10 EGFR E-cadherin 表达 -
ADAM10真核表达载体的构建及其对MCF-7增殖迁移的影响
目的 构建ADAM10真核表达载体,观察稳定转染乳腺癌细胞MCF-7后对其增殖和迁移的影响.方法 利用PCR技术扩增人ADAM10的基因片段,克隆人pcDNA3.1真核表达载体,阳性克隆通过PCR、酶切和测序鉴定.脂质体法将重组质粒转染MCF7细胞,通过C418筛选出稳定转染ADAM10的细胞株,通过Western blot检测细胞ADAM10的表达,通过MTT法和Tramwell法分别检测细胞的增殖和迁移变化.结果 经PCR、酶切和测序鉴定证明ADAM 10真核表达载体构建成功,Western blot结果显示稳定转染细胞的ADAM10蛋白高表达,MTT实验显示转染细胞增殖速度稍快于对照(P＜0.05),Transwell结果 显示转染细胞迁移能力比对照强(P＜0.01).结论 成功构建ADAM10真核表达载体,稳定转染MCF-7细胞后可增强细胞的增殖和迁移,为进一步研究ADAM10生物学作用奠定基础.
