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EGFRvⅢ的表达对吉非替尼作用卵巢癌SKOV3细胞敏感性的影响
目的:探讨EGFRvⅢ的表达与卵巢癌SKOV3细胞对化疗药吉非替尼敏感性之间的关系,为临床治疗并合理选用抗肿瘤药物提供参考.方法:将质粒pcDNA4/TO-EGFRvⅢ稳定转染入SKOV3细胞,并用zeoein抗生素筛选出稳定表达EGFRvⅢ蛋白的细胞株(命名为SKOV3-EGFRvⅢ),用MTT法检测转染稳定株和原始株在吉非替尼作用下细胞的存活能力.然后,以吉非替尼分别对2株细胞建立的裸鼠异体肿瘤模型进行治疗,通过测量肿瘤体积大小评价肿瘤模型对吉非替尼的敏感性.结果:通过Western blot鉴定,SKOV3-EGFRvⅢ稳定株建立成功:MMT法结果表明SKOV3 EGFRvⅢ细胞在吉非替尼的作用下,其死亡率低于原始细胞株,且吉非替尼对SKOV3-EGFRvⅢ细胞建立的裸鼠肿瘤模型的抑制效果明显低于原始细胞株.结论:EGFRvⅢ的过表达导致卵巢癌SKOV3细胞及其体外移植肿瘤模型对化疗药吉非替尼的敏感性减弱.
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原花青素对卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的影响
目的 探讨葡萄籽提取物原花青素对卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的影响和机制.方法 体外培养的SKOV3细胞与25、50、100、200、400 μg/ml的葡萄籽提取物原花青素共孵育,分别在24、48、72 h时观察细胞形态学变化,MTT检测细胞增殖抑制率,流式细胞和TUNEL分析细胞凋亡,RT-PCR检测survivin在mRNA的表达情况,Western blot检测SKOV3细胞survivin在蛋白水平的表达.结果 不同浓度(25、50、100、200、400 μg/ml)原花青素对SKOV3细胞作用48 h 的细胞增殖抑制率分别为48.67%、53.85%、67.03%、73.78%、77.39%.流式细胞和TUNEL检测经25 μg/ml原花青素处理24、48 h后SKOV3细胞凋亡率分别为31.98%、45.78%.葡萄籽原花青素还可以明显降低survivin的mRNA和蛋白水平的表达.这些作用均随原花青素浓度和作用时间的延长而增强.结论 原花青素可能通过降低survivin的表达,在体外抑制SKOV3细胞增殖,并促进其凋亡.
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晶状体蛋白αB对卵巢癌细胞恶性行为的影响
目的 研究晶状体蛋白αB(αB-crystallin)在卵巢癌组织中的表达及其对卵巢癌细胞SKOV3增殖及迁移侵袭能力的影响.方法 免疫组织化学法检测人正常卵巢组织和上皮性卵巢癌组织中αB-crystallin表达;针对蛋白αB-crystallin的基因(CRYAB基因)设计合成靶向小干扰RNA(smallinterfering RNA,siRNA)重组慢病毒,并感染人卵巢浆液性乳头状囊腺癌细胞株SKOV3;流式细胞仪、平板克隆、MTT检测细胞凋亡和增殖;Transwell检测细胞迁移和侵袭能力;Western blot检测基质金属蛋白酶-2 (MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达.结果 αB-crystallin在卵巢癌组织中表达高于正常卵巢组织,在Ⅱ型卵巢癌组织中呈明显高表达(P＜0.01),稳转CRYAB siRNA慢病毒后SKOV3细胞内αB-crystallin蛋白表达降低64％,其凋亡和增殖无明显改变,但SKOV3细胞迁移和侵袭能力明显受到抑制(P＜0.01),同时蛋白MMP-2和MMP-9表达下调(P＜0.01).结论 αB-crystallin能够影响卵巢癌SKOV3细胞浸润转移,其在Ⅱ型卵巢癌组织中的高表达可能与其高侵袭潜能相关.
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过氧麦角甾醇对人卵巢癌SKOV3细胞增殖的影响及机制
目的:观察橙盖鹅膏菌中过氧麦角甾醇对人卵巢癌SKOV3细胞增殖的影响及其可能机制.方法:MTT法测试过氧麦角甾醇对细胞增殖的抑制情况,倒置显微镜下观察细胞形态,DAPI染色法观察细胞核形态,Annexin V/PI双染流式细胞术测定细胞早期凋亡率,PI单染流式细胞术测定细胞周期.结果:在93.95 ～3003.00μg/ml范围内,不同浓度过氧麦角甾醇对SKOV3细胞增殖具有明显抑制作用.187.90、375.38、750.75μg/ml过氧麦角甾醇作用48小时后,细胞出现边缘皱缩,呈梭形生长,脱落及坏死细胞增多,细胞S期比例、细胞早期凋亡率显著增加.结论:过氧麦角甾醇187.90～750.75μg/ml对人卵巢癌SKOV3细胞增殖具有明显抑制作用,可能与其阻滞细胞周期和诱导细胞凋亡有关.
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利用巢式PCR扩增目的基因构建hsa-miR-200c真核表达载体及鉴定
目的 用巢式PCR从人类基因组获取miR-200c及侧翼序列,构建hsa-miR-200c重组体,转染卵巢癌细胞系SKOV3,检测其对E-钙粘蛋白表达的影响,为miR-200c对肿瘤细胞基因表达调控奠定基础.方法 据microRNA数据库设计人miR-200c及侧翼引物,提取人细胞基因组进行PCR和巢式PCR获得miR-200c及侧翼共307个碱基序列,连接到pIRES2-EGFP载体中,测序鉴定后再将的miR-200c基因经慢病毒载体系统转染SKOV3细胞,检测miR-200c过表达对卵巢癌细胞E-钙粘蛋白表达的影响.结果 成功扩增出miR-200c及侧翼共307个碱基序列,构建的重组体pIRES2-EGFP-miR-200c测序正确,转染SKOV3细胞后miR-200c过表达引起E-钙粘蛋白表达增多.结论 巢式PCR技术能有效地从基因组中扩取miR-200c及侧翼片段用以构建miR-200c表达载体,miR-200c过表达可引起卵巢癌SKOV3细胞E-钙粘蛋白表达增多,可能导致细胞间黏附性增高.
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活性氧影响SKOV3细胞间充质转化及其机制研究
目的:探讨活性氧(ROS)对卵巢上皮性癌细胞株SKOV3细胞的间充质转化的影响及其中可能存在的分子机制.方法:①通过采用ROS生成剂大黄素(Emodin)、ROS清除剂二硫苏糖醇(DTT)调节卵巢上皮性癌细胞株SKOV3细胞内ROS水平,采用PCR技术及蛋白印迹法测定3组(Emodin组、DTT组、对照组)细胞中间充质转化标志分子E钙黏蛋白(E-cadherin) mRNA及蛋白的表达,比较细胞株侵袭转移能力.②结合改变活性氧水平,构建缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的化学合成,小干扰RNA(SiRNA)沉默HIF-1α表达(HIF-1α SiRNA组、DTT组、对照组),比较HIF-1αmRNA的表达.③使用赖氨酰氧化酶(LOX)抑制剂β-氨基丙腈(β-APN)抑制LOX表达,观察各组(Emodin组、DTT组、β-APN组、Emodin+ β-APN组、对照组)细胞HIF-1α、LOX、E-cadherin mRNA及蛋白表达.结果:①SKOV3细胞Emodin组ROS水平较对照组明显升高[(164.85±8.93)％vs(97.42±6.47)％,P＜0.01,E-cadherin mRNA及蛋白的表达均较对照组显著降低(P＜0.05),Emodin组的细胞侵袭率高于对照组[(19.48 ±0.49)％ vs(10.74±2.38)％,P＜0.01],而DTT组结果与之相反,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).②HIF-1α SiRNA作用下,HIF-1αSiRNA组的HIF-1αmRNA表达较对照组降低(0.20 ±0.09 vs 0.87 ±0.10,P＜0.05),LOX mRNA表达较对照组降低(0.40±0.08 vs 3.76±0.66,P＜0.05),而E-cadherin mRNA表达较对照组增高(1.01 ±0.15 vs0.30±0.09,P＜0.05).DTT组的效果较HIF-1α SiRNA组更为显著,两组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).③3-APN作用下,[β-APN组的HIF-1α蛋白表达较对照组无明显变化(0.92 ±0.19 vs 0.94±0.09,P＞0.05),LOX蛋白表达较对照组降低(0.35 ±0.11 vs 0.81±0.13,P＜0.05),而E-cadherin蛋白表达较对照组增高(4.65 ±0.90 vs 2.23 ±0.61,P＜0.05).结论:使ROS升高,上调HIF-1α,使LOX过表达,进而下调E-cadherin,ROS可能介导卵巢癌细胞间充质转化,继而发生侵袭转移.
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低氧状态下芹黄素通过抑制HIF-1α下调卵巢癌SKOV3细胞GluT-1表达的实验研究
目的 研究在低氧状态下芹黄素能否通过抑制HIF-1α下调卵巢癌SKOV3细胞GluT-1表达.方法 将卵巢癌SKOV3细胞分为常氧组、低氧组和低氧十芹黄素组.在低氧状态下对卵巢癌SKOV3细胞使用终浓度为50 μM的芹黄素进行干预,在不同时间点(0h、24h和72 h)使用MTT法对SKOV3细胞活性进行检测;同时在干预24h后,分别使用qPCR法和western blot法对卵巢癌SKOV3细胞GluT-1和HIF-1α mRNA和蛋白表达水平进行检测.结果 低氧环境下SKOV3细胞活性呈时间依赖性下降,差异均有显著统计学意义(P均＜0.05);且在各时间点低氧十芹黄素组活性较低氧组下降更加明显,差异均有显著统计学意义(P均＜0.05).同时,在干预24h后卵巢癌SKOV3细胞GluT-1和HIF-1α mRNA和蛋白的表达水平较非干预组细胞明显降低,差异均有显著统计学意义(P均＜0.05).结论 在低氧状态下,芹黄素可以通过抑制HIF-1α的合成下调卵巢癌SKOV3细胞GluT-1的表达,从而抑制肿瘤细胞的增殖.该基础研究为芹黄素应用于卵巢癌等恶性肿瘤的治疗奠定了一定的理论基础.
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桑皮素通过抑制STAT3磷酸化下调卵巢癌SKOV3细胞Cyclin D1表达的实验研究
目的 探讨桑皮素对卵巢癌SKOV3细胞的抑制作用和对Cyclin D1表达的调节作用及潜在的分子机制.方法 使用不同浓度的桑皮素(0μM、10μM和50μM)对卵巢癌SKOV3细胞进行干预.在不同时间点(0h、24h和48h)使用MTT法对SKOV3细胞活性进行测定.在干预48h后,使用qPCR对在不同浓度桑皮素干预的SKOV3细胞Cyclin D1 mRNA的表达水平进行测定.使用western blot对在不同浓度桑皮素的SKOV3细胞Cyclin D1蛋白表达水平和STAT3磷酸化水平进行测定.结果 使用不同浓度桑皮素对卵巢癌SKOV3细胞进行干预后,细胞活性呈时间依赖性和浓度依赖性降低,差异均存在显著统计学意义(P均＜0.05).桑皮素干预48h后,卵巢癌SKOV3细胞Cyclin D1 mRNA和蛋白的表达水平以及STAT3磷酸化水平水平呈浓度依赖性的下降,差异均存在显著统计学意义(P均＜0.05).结论 本实验表明桑皮素可以通过抑制STAT3磷酸化显著抑制卵巢癌SKOV3细胞的增殖并下调Cyclin D1的表达.
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纳米雄黄混悬液诱导卵巢癌SKOV3细胞凋亡及其对Bcl-2/Bax表达的影响
目的 探讨纳米雄黄混悬液对卵巢癌SKOV3细胞增殖抑制作用、凋亡诱导效应及其对Bcl-2/Bax表达的影响.方法 应用不同质量浓度(6.25 mg·L-1、12.5 mg·L-1、25 mg·L-1、50 mg·L-1)的纳米雄黄混悬液作用于SKOV3细胞不同时间(12 h、24 h、48 h、72 h)后,倒置显微镜下观察各实验组和对照(不加药物)组细胞的形态学变化;MTT比色法测定细胞生长抑制情况;流式细胞仪检测细胞凋亡率;荧光定量PCR法检测Bc1-2/Bax的表达.结果 6.25 mg·L-1、12.5 mg·L-1、25 mg·L-1、50 mg·L-1不同浓度纳米雄黄混悬液对卵巢癌SK-OV3细胞的增殖有抑制作用,这种增殖抑制作用在一定范围内呈时间剂量依赖关系.25 mg·L-1、50 mg·L-纳米雄黄混悬液作用48h后,SKOV3细胞出现凋亡细胞的形态学改变;25 mg·L-1、50 mg·L-1纳米雄黄混悬液处理SKOV3细胞48h后,流式细胞术检测呈现明显的凋亡峰,凋亡率分剐为(14.62±0.96)％、(25.83±1.42)％;50 mg·L-1纳米雄黄混悬液处理SKOV3细胞48h后Bcl-2基因表达减弱,Bax基因表达增强.结论 纳米雄黄混悬液可抑制卵巢癌SKOV3细胞的生长、增殖,并有明显的诱导凋亡作用,而下调Bcl-2表达及上调Bax表达可能是其诱导凋亡的机制.
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化学合成siRNA对卵巢癌SKOV3细胞中STAT3基因表达的抑制作用
目的:观察小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)对卵巢癌SKOV3细胞STAT3表达的抑制作用及其诱导凋亡作用的机制.方法:将STAT3 siRNA经LipofectamineTM2000脂质体介导的方法将其转染到卵巢癌细胞株SKOV3.实验分为以下3组:空白对照组(未经转染的人卵巢癌SKOV3细胞)、阴性对照转染组(阴性干扰STAT3)及特异性转染组(干扰STAT3).用MTT法检测siRNA转染后SKOV3细胞增殖活性；流式细胞仪检测其对细胞凋亡的影响,免疫荧光法检测STAT3蛋白水平的变化,qRT- PCR和Western blot方法分别检测STAT3 mRNA和蛋白表达水平的变化.结果:成功转染STAT3干扰片段,转染率达90％.siRNA干扰STAT3组明显抑制卵巢癌细胞增殖活性,细胞凋亡率33.7％,并且下调STAT3蛋白在SKOV3细胞中的表达.RT - PCR和Western blot结果显示:siRNA STAT3组明显抑制人卵巢癌细胞SKOV3中STAT3 mRNA和蛋白的表达,与对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:特异性转染组48h后能有效地抑制SK-OV3细胞内STAT3的表达、抑制细胞增殖,其抑制卵巢癌细胞的机制可能与抑制了STAT3信号通路,促进细胞凋亡有关,为卵巢癌的生物治疗提供了一定的依据.
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内皮抑素抑制卵巢癌细胞生长的初步研究
目的:内皮抑素是一种特异性血管内皮生长抑制因子,本研究目的在于探讨人内皮抑素对卵巢癌SKOV3细胞生长的抑制作用及其机制.方法:MTT法观测内皮抑素对SKOV3细胞的生长抑制作用;透射电镜观察内皮抑素处理SKOV3细胞后细胞的凋亡情况,流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期;RT-PCR法检测内皮抑素处理SKOV3细胞后凋亡调控基因bcl-2和bax mRNA的表达.结果:内皮抑素具有体外抑制SKOV3细胞增殖的作用,15μg/ml 内皮抑素组的A490值(0.454)明显低于PBS对照组(0.686)(P<0.01);内皮抑素能诱导SKOV3细胞凋亡;内皮抑素对SKOV3细胞中bcl-2和bax的表达无明显改变;结论:人内皮抑素具有抑制SKOV3细胞生长的作用,其机制可能与诱发细胞凋亡相关.
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AG490联合DDP对人卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的影响
目的 探讨应用专题讨论法教学模式对培养护理本科生创新能力的效果.方法 采取便利抽样的方法,将2014级护理本科一合班(102人)作为观察组,二合班(103人)作'对照组.选取专业课内科护理学进行教学,观察组采用专题讨论法教学模式,对照组采用传统教学模式.自制调查问卷,在学期末对两组学生的创新能力、教学模式满意度进行评价.结果 观察组学生在创新行为、专业知识创新、实验创新、临床实践创新、创新科研活动方面的评分高于对照组(P<0.01),对教学模式满意度明显优于对照组(P<0.01).结论 专题讨论法教学模式有助于提升学生的创新能力、提高护理本科生的教学满意度,效果优于传统教学模式.
