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二氯乙酸对ras基因的DNA损伤作用
目的 研究二氯乙酸(dichloroacetic acid,DCA)对ras基因的DNA损伤作用,探讨其致癌作用分子机制.方法 制备各ras基因外显子单链探针;DCA染毒TK6细胞,提取基因组DNA,再经RDPCR扩增,扩增产物与探针杂交显色.结果 成功制备各ras基因外显子单链探针,Southern杂交检测到DCA对N-ras基因外显子2和H-ras基因外显子2的DNA损伤片段杂交条带,未检测出其对N-ras基因外显子1和H-ras基因外显子1的DNA损伤作用.结论 DCA可造成ras基因DNA损伤,可能与其致癌作用机制密切相关,属于遗传毒性物质.
关键词： 二氯乙酸 ras基因 DNA损伤 依赖随机化末端连接物聚合酶链式反应 -
3-氯-4-二氯甲基-5-羟基-2(5氢)-呋喃酮对L-02细胞DNA损伤与ras基因表达的影响
目的研究饮水氯化消毒副产物3-氯-4-二氯甲基-5-羟基-2(5氢)-呋喃酮(MX)对人胚肝细胞(L-02)DNA损伤与ras基因表达的诱导,初步探讨MX致癌的分子机制.方法以L-02细胞作为靶细胞,应用彗星试验(SCGE)和原位杂交试验(ISH)研究MX诱导L-02细胞DNA损伤与ras基因表达.MX设10、30、100和300μmol/L4个剂量,二甲基亚砜(DMSO,10 mL/L)为溶剂对照,H2O2(300 μmol/L)和B(a)P(200 μmol/L)分别为SCGE和ISH的阳性对照.结果与溶剂对照相比,30、100和300μmol/L的MX能明显增加L-02细胞的DNA迁移度(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.001);同时也明显增加ras基因表达水平(P＜0.001,P＜0.001,P＜0.01).MX在10～100 μmol/L的浓度范围内,诱导的ras基因表达水平和DNA迁移度呈正相关(r=0.79).结论饮水氯化消毒副产物MX可诱导L-02细胞DNA损伤与ras基因表达,ras基因表达水平可能与DNA损伤程度有关.
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氯化饮水有机提取物诱导人胚肝细胞(L-02)DNA损伤与RAS基因表达的研究
目的 研究武汉市主要水源D湖氯化饮水有机提取物对人胚肝细胞(L-02)DNA损伤与RAS基因表达的诱导,探讨氯化饮水有机提取物诱导遗传损伤的分子机制.方法 以L-02细胞作为靶细胞,应用单细胞凝胶电泳试验(SCGE)测定DNA链断裂及用原位杂交试验(ISH)测定RAS基因表达.氯化饮水有机提取物设0.167、1.67、16.7、167水样ml/ml培养液4个剂量,DMSO(10ml/L)为溶剂对照,B(a)P(200μmol/L)为阳性对照.结果 与溶剂对照相比,氯化饮水有机提取物在较高剂量组(16.7和167 L/L水样培养液)能引起DNA链断裂程度的明显增加;不同浓度的氯化饮水有机提取物均可使RAS基因表达水平明显增加.氯化饮水有机提取物在0.167、1.67、16.7L/L水样培养液的浓度范围内,其RAS基因表达水平和DNA迁移度呈高度正相关(r=0.99).结论 氯化饮水有机提取物可诱导L-02细胞DNA损伤与RAS基因表达,RAS基因表达水平可能与DNA损伤程度有关.
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研究发现人母乳中某种成分能杀40种癌细胞
研究人员发现，25％的卵巢癌患者体内都存在KRAS基因的一个变种，而普通人只有6％拥有这一变种；这一变种还在61％有乳腺癌及卵巢癌家族病史的卵巢癌患者体内出现。
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胎儿肺Ⅱ型肺泡细胞发育中相关活性物质的表达及其意义
目的探讨诸细胞因子对肺泡Ⅱ型细胞发育、分化和成熟的调控作用.方法12～35周胎儿肺组织共13例,常规石蜡包埋、切片,用免疫组织化学技术检测FGFR、Ras-p21蛋白、BMP-4、SP-B和TTF-1的表达特征.结果FGFR率先在发育早期近端支气管上皮表达.Ras蛋白于16周在近端和远端的支气管上皮有较弱表达,18周时与FGFR一样达到表达的高峰.随着FGFR表达的增强,BMP-4开始表达.发育后期,这三者均不表达.TTF-1因子自16周起定位于上皮细胞核内,远端支气管的反应总是较近端者强.SP-B蛋白在18周胎儿肺Ⅱ型肺泡细胞内出现,伴随着TTF-1的表达,其反应由呼吸道近端逐渐往远端迁移.发育末期至成肺中,TTF-1和SP-B阳性反应均在肺泡Ⅱ型细胞中稳定表达.结论FGF-10、Ras蛋白和BMP-4对Ⅱ型肺泡细胞的作用,是通过细胞外间质的途径促使Ⅱ型肺泡细胞正常增殖分化和达到形态结构的成熟;而TTF-1因子和SP-B的表达,则为Ⅱ型肺泡细胞在胎肺发育晚期已逐渐达到功能成熟的标志,与胎儿一出生即具有自主呼吸的功能相适应.
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超声引导下细针穿刺胰腺腺癌基因诊断
目的:探讨超声引导下细针穿刺与基因检测相结合早期诊断胰腺癌的临床应用.方法: 应用超声引导下细针穿刺技术对38例可疑胰腺癌及其邻近器官占位性病变患者进行穿刺活检, 同时采用聚合酶链反应-限制性酶切片段长度多态性技术, 对所取得的标本c-ki-ras基因第12密码子突变进行检测, 应用于胰腺癌的诊断.结果:22例胰腺癌中有21例有c-ki-ras基因第12密码子突变, 多为GGT变成GAT、GCT、GTT, 阳性率达95.4%;而16例慢性胰腺炎, 壶腹癌、胰岛素瘤等均无c-ki-ras基因第12密码子突变.结论:将超声引导下细针穿刺与胰腺癌c-ki-ras基因第12密码子突变检测相结合是诊断和鉴别诊断胰腺癌的有效方法.
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胃癌端粒酶活性及ras基因突变的研究
目的检测胃癌及癌前病变组织、胃炎组织端粒酶活性及ras基因变异,了解胃癌发生的生物学特性.方法应用TRAP法对32例胃癌、16例异形增生、13例肠上皮化生、8例萎缩性胃炎、12例浅表性胃炎进行端粒酶活性及ras基因变异的测定.结果胃癌组织28例 (87.5%)端粒酶表达阳性,ras基因变异27例 (84.4%)阳性;异形增生阳性分别为4例(25.0%)和5例(31.3%);肠上皮化生阳性分别为4例(30.8%)和 4例(30.8%);萎缩性胃炎阳性分别为 1例(8.4%)和2例(16.7%);胃炎组织阳性分别为0和1例(8.3%) .端粒酶及ras基因阳性表达与胃癌的部位、分化度、是否有淋巴转移无关.端粒酶活化与ras基因密切相关.结论端粒酶活化及ras 基因变异均与胃癌发生有关,可为胃癌的诊断提供可靠的指标.
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奥替普拉在阻断细胞恶性转化时对某些基因表达的影响
奥替普拉(oltipraz)来源于十字花科(Cruciferase)蔬菜,全称5-(2-吡嗪基)-4-甲1,2-2羟基-3-硫酮,文献报道它为一种防癌抑癌剂[1].我们用致癌素香烟凝聚物(cigarette smoking condensate CSC)诱发人胚肺组织恶性转化,提取DNA转染Rat-1细胞,在诱使Rat-1细胞恶性转化时加入奥替普拉,观察恶性转化情况,并比较分析了C-Ha-ras基因突变和谷胱甘肽-S-转移酶-π(GST-π)基因表达情况.
关键词： 奥替普拉 谷胱甘肽-S-转移酶-π ras基因 -
西妥昔单抗治疗KRAS或全RAS野生型转移性结直肠癌的疗效及预后分析
目的 探索影响西妥昔单抗治疗KRAS或全RAS野生型转移性结直肠癌(mCRC)患者疗效及预后的因素.方法 从北京协和医院肿瘤内科2007年11月至2016年12月病理确诊为mCRC并行基因检测为KRAS野生型(2013年11月前)或全RAS野生型(2013年11月后)的患者中,筛选出接受西妥昔单抗联合化疗至少2周期的病例,回顾性分析临床病理特征与疗效的关系.结果 共入组60例患者,其中一线接受西妥昔单抗治疗34例,客观缓解率(ORR)为55.9％,中位无进展生存期和总生存期(OS)分别为10和24个月.一线治疗患者中,全RAS野生型较仅KRAS野生型者疾病进展风险降低69.5％ (P=0.012),左半结肠癌ORR明显高于右半结肠癌(62.1％比0;x2=5.46,P=0.033).一线治疗疾病缓解或稳定的8例患者跨线使用西妥昔单抗时中位OS可达35.0 (95％CI:23.6～46.4)个月.结论 全RAS野生型、左半部位mCRC患者一线应用西妥昔单抗时疗效更优.一线获益患者继续跨线应用西妥昔单抗生存时间长.
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Ras基因和c-myc基因在结节性甲状腺肿合并甲状腺癌中的表达
目的:探讨正常甲状腺组织和结节性甲状腺肿合并甲状腺癌中Ras基因和c-myc基因的表达. 方法:采用LSAB法作免疫组化染色检测了20例结节性甲状腺肿旁正常甲状腺组织和40例结节性甲状腺肿、40例结节性甲状腺肿合并甲状腺癌中Ras和c-myc基因的表达. 结果:Ras和c-myc基因在甲状腺正常组织中均呈阴性.在40例结节性甲状腺肿合并甲状腺癌中Ras和c-myc基因的阳性表达率分别为52.5% 和77.5%.结节性甲状腺肿合并甲状腺癌中Ras和c-myc基因的表达呈明显正相关(P<0.05). 结论:Ras和c-myc基因在结节性甲状腺肿合并甲状腺癌的发生、发展中起到重要作用.
关键词： 结节性甲状腺肿合并甲状腺癌 ras基因 c-myc基因 免疫组织化学 -
Livin Caspase-9与胃癌关系的研究进展
胃癌的发生、发展是一个多因素、多基因相互作用的复杂过程,如RAS基因家族、MYC基因家族、ERBB基因家族、p53、RB等[1,2].Livin是IAPs(inhibitors of apoptosis proteins)蛋白家族的新成员[3],能够与Caspases蛋白结合,抑制其介导的细胞凋亡.
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ID4基因的研究进展
癌基因的活化(如ras基因、bcr-abl基因)或/和抑癌基因的失活(如P53基因、Rb基因)与肿瘤的发生密切相关.ID4基因是1994年Riechmann等首次从小鼠中分离鉴定的,发现该基因在胚胎发育的9.5d -13.5d是上调的,且在成人的脑、睾丸和肾脏器官高表达[1].在1995年,人的ID4基因被成功定位在染色体6p21.3-p22,同时发现通过增强ID4蛋白的表达可以抑制肌酸激酶E-box增强子的活化作用.ID4在不同肿瘤和同一肿瘤的不同阶段可能具有不同的作用,本文对ID4基因的研究现状做一小结.
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p21ras在绝经前、后子宫内膜腺癌中的表达分析
目的:探讨p21ras在绝经前、后子宫内膜腺癌中的不同表达及意义.方法:ABC免疫组织化学方法.结果:子宫内膜腺癌组织中p21ras阳性表达率为59.38%,而正常组织仅一例弱阳性;绝经后妇女子宫内膜腺癌组织中p21ras阳性表达率(69.57%)及表达强度明显高于绝经前妇女(P<0.05).结论:提示p21ras有作为子宫内膜腺癌尤其是绝经后子宫内膜腺癌诊断标志物及临床应用的可能性.
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DNAzyme抑制H-ras基因表达的研究
目的研究DNAzyme特异切割H-ras mRNA的效率.方法针对H-ras mRNA序列,设计并合成了7个10-23DNAzyme,分别进行DNAzyme的细胞外酶切反应;通过荧光显微镜观察脂质体介导DNAzyme的转染效果,利用实时定量PCR、MTT法在细胞水平检测DNAzyme对H-ras基因表达的抑制.结果合成的7个10-23 DNAzyme均可以细胞外近生理条件下对H-ras mRNA进行有效切割.利用LipofectamineTM可将荧光标记的DNAzyme No.1转染Hep-2细胞.转染后DNAzyme在细胞核及细胞质内均存在,且在细胞质中多位于核周围.实时定量PCR检测,DNAzyme No.1在转染后24 h及48 h能显著降低Hep-2细胞中H-ras RNA的含量,从而抑制ras基因的表达.利用MTT检测到DNAzyme No.1在转染Hep-2细胞24 h及48 h后对细胞增殖及分化均产生明显的抑制作用.结论DNAzyme在细胞内外均能够有效抑制H-ras基因的表达.
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胃癌细胞中Ras基因的表达、突变分析及新剪接型Kras△E2的发现
目的:传统Ras家族由Kras,Hras和Nras基因组成,这类基因的点突变经常在人类肿瘤中发现,突变热点位于12,13,61位密码子.ERas基因是2003年在鼠胚胎干(ES)细胞中发现的,其cDNA编码的蛋白与Kras,Hras和Nras分别有46％,43％和47％的相似性,故属于新的Ras家族成员,近几年发现ERas基因的表达与胃癌密切相关,而传统Ras基因在胃癌细胞中的表达及突变情况系统报道较少,本文旨在研究传统Ras基因Kras,Hras,Nras及其家族新成员ERas基因在胃癌细胞中的表达和突变情况.方法:选用7株不同来源不同分化程度的胃癌细胞系,利用RT-PCR及real-timePCR检测Ras基因在这些胃癌细胞系中的表达,并通过测序对传统Ras基因突变热点12,13,61位密码子及ERas基因全长进行突变分析.结果:①Ras基因在这些胃癌细胞系中均有不同程度的表达,其中Hras和Nras基因在各株细胞中表达水平均一,而Kras和ERas基因则呈差异性表达;②在这些胃癌细胞中传统Ras基因突变热点12,13,61位密码子不存在突变,ERas基因全长亦未检测到突变.③发现Kras基因一新的剪接型,特点为第一、三外显子直接拼接,缺失第二外显子,命名为Kras△E2.结论:与在其他肿瘤中不同,传统Ras基因在胃癌细胞中不存在突变热点,家族新成员ERas基因全长亦无突变,在国际上首次报道新剪接型Kras△E2,从而得出创新性结论:Ras基因家族在胃癌细胞中并不是通过热点突变导致持续活化而致癌,而可能是通过ERas基因表达量的调节或形成新的剪接型Kras△E2而致癌.另外,Kras基因是一被受国际关注的肿瘤基因,新剪接型的发现可能会对Kras基因致癌机制产生新的认识,意义重大.
关键词： ras基因 胃癌 突变 新剪接型Kras△E2 -
p21-ras、p53和VEGF在甲状腺乳头状癌中的表达及意义
目的研究原癌基因Ras、抑癌基因p53及血管内皮生长因子(VEGF)在甲状腺乳头状癌中的表达及相关性.方法应用免疫组织化学S-P法对40例甲状腺乳头状癌中p21-ras、p53及VEGF的表达进行研究.结果甲状腺乳头状癌中存在p21-ras、p53及VEGF的过度表达;VEGF的表达与p21-ras、p53的表达显著相关(P<0.05);VEGF的表达与甲状腺乳头状癌淋巴结转移显著相关(P<0.05).结论 p21-ras、p53、VEGF在甲状腺乳头状癌的发生发展过程中起重要作用;VEGF的表达与p21-ras、p53表达显著相关,可能受其调控.
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ras基因 P53基因与胰腺癌研究近况
癌基因ras、抑癌基因P53在肿瘤的发生发展过程中起重要作用.本文就其在胰腺癌中的研究和应用作一综述,以便寻求胰腺癌诊断、估计预后的新手段.
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结肠直肠癌RAS及BRAF基因突变检测的意义
结肠直肠癌的发病率位居全球恶性肿瘤第二位,每年有超过100万例的新增患者,且每年约有608 000例患者死于转移性结肠直肠癌及其相关的临床并发症[1].即使采用细胞毒药物联合方案化疗,转移性结肠直肠癌患者的中位生存时间也仅从6个月延长至约2年.分子靶向治疗开启了肿瘤诊疗的个体化时代,同时也为转移性结肠直肠癌患者的治疗提供了新选择.仅2005年至2010年,美国临床肿瘤学会年度进展报告中就有5项与结肠直肠癌相关的靶向治疗研究入选年度重大研究进展,其中又以RAS及BRAF基因检测具代表性.
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ras基因与儿童急性髓细胞性白血病关系研究
目的 探讨ras基因在儿童急性髓细胞性白血病(AML)中的表达及其与治疗和预后的相关性.方法 用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)半定量方法检测raas基因家族(K-ras,N-ras,H-ras)的表达水平,结合细胞形态学、流式细胞仪免疫分型检测、染色体R带显带核型分析,对36例初诊AML及部分病例进行跟踪.同期采集30例特发性急性血小板减少性紫癜(ITP)患儿骨髓标本作为对照.结果 实验组与对照组相比,N-ras、K-ras的平均表达水平明显升高,差异有统计学意义,其中N-ras更具显著意义.AML患儿中ras基因突变多见于M2、M4及M5型.对2例M2患儿进行跟踪检测(1例为不同时期包括初诊和缓解期及复发前的测定,另1例为长期无病生存),ras基因水平异常活化可见于复发前,也可见于长期缓解患儿.结论 初诊儿童AML ras基因表达水平异常增高.ras检测可作为判断儿童AML疗效、预后及随访指标之一.
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口腔粘膜鳞癌和癌前病变p53、ras基因突变的检测及p53、p21蛋白的表达
目的探讨p53、ras基因改变在口腔粘膜鳞癌及癌前病变发生过程中的意义.方法应用聚合酶链反应和免疫组织化学法检测23例口腔粘膜鳞癌和15例癌前病变p53、ras基因突变和p53、p21蛋白的表达.结果 43.5%(10/23)的口腔粘膜鳞癌存在p53基因第8外显子突变,47.8%(11/23)ras基因有突变;口腔粘膜鳞癌p53、p21蛋白表达阳性率分别为43.5%(10/23)和60.9%(14/23).癌前病变有1例存在p53基因第8外显子和ras基因突变(6.7%);p53、p21蛋白表达阳性率分别为13.3%(2/15)和20%(3/15).两组间差异显著(P<0.05).结论 p53、ras基因突变和p53、p21蛋白过量表达与口腔粘膜鳞癌的发生过程密切相关,可作为癌前病变发展为癌危险性的生物指标.
