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不同程度内质网应激对巨噬细胞自噬的影响
目的:采用ox-LDL诱导巨噬细胞泡沫化模型,通过不同剂量衣霉素诱导巨噬细胞不同程度内质网应激,观察对其自噬的影响.方法:不同剂量衣霉素作用于小鼠巨噬细胞系RAW264.7,通过TUNEL染色检测其凋亡率,Western blot检测内质网应激蛋白GRP78,以及自噬标志蛋白P62的表达水平.结果:与ox-LDL组和大剂量衣霉素组相比,小剂量衣霉素组可以显著减少巨噬细胞的凋亡(P＜0.01);与ox-LDL组相比,小剂量衣霉素组上调内质网应激蛋白GRP78表达的同时,自噬标志蛋白P62适度下降(P＜0.01);大剂量衣霉素组更为显著地上调了内质网应激蛋白GRP78表达,但同时自噬标志蛋白P62也显著增加(P＜0.01).结论:小剂量衣霉素引起一定程度的内质网应激,可以激活适度的自噬,从而减少巨噬细胞的凋亡,可能有助于降低动脉粥样硬化的程度.
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心肺复苏大鼠神经元凋亡和内质网应激相关因子GRP78及CHOP表达的变化
目的 研究心跳骤停复苏后大鼠脑内质网应激相关因子葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)表达的动态变化及其与神经元凋亡的关系,从而探讨内质网应激与脑缺血再灌注损伤的机制.方法 将48只SD大鼠随机分为对照组和复苏组,采用经食道起搏诱发室颤法制备大鼠心肺复苏模型;应用尼氏染色观察各组大鼠海马CA1区6 h、12 h、24 h、48 h存活神经元形态;应用TUNEL染色法,观察各组大鼠海马CA1区神经元凋亡情况,并进行凋亡阳性细胞计数;应用免疫组化法检测GRP78及CHOP抗原的表达、应用Western Blot法检测GRP78及CHOP蛋白的表达量.结果 与对照组比较,复苏组大鼠海马CA1区神经元细胞变性更严重,出现凋亡细胞,随着再灌注时间的延长,凋亡细胞明显增多.与对照组比较,复苏组GRP78阳性细胞于再灌注 6 h逐渐增多,于12 h明显增高,此后表达逐渐减少;复苏组CHOP于再灌注6 h开始阳性细胞即有表达,逐渐增多,于再灌注 24 h显著增加,直至48 h.结论 心跳骤停复苏后诱发内质网应激,早期通过上调促生存因子GRP78蛋白的表达达到自我保护作用,晚期通过上调凋亡因子CHOP诱导神经元凋亡.
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白藜芦醇通过内质网应激抑制心肌细胞肥大及凋亡
目的 探讨白藜芦醇(resveratrol,Res)通过内质网应激介导心肌细胞肥大的作用机制.方法 利用异丙肾上腺素(isoproterenol,ISO)建立心肌细胞肥大模型,Res干预后通过检测心肌细胞表面积和ANP基因表达评价心肌细胞肥大程度;检测各组心肌细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性和丙二醛(MDA)含量变化和心肌细胞凋亡率,Real time-PCR检测心肌细胞ERS相关基因GRP 78和CHOP表达.结果 与ISO组比较,Res显著抑制ISO诱导的心肌细胞肥大(P＜0.05),降低肥大心肌细胞LDH和MDA释放量(P＜0.05);下调GRP78和CHOP基因表达(P＜0.05),并抑制心肌细胞凋亡率(P＜0.05).结论 Res对ISO诱导的心肌细胞肥大和凋亡具有保护作用,其机制是通过抑制内质网应激和CHOP介导的凋亡通路实现的.
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GRP78、GRP94在乳腺癌中的表达及其意义
目的:在对乳腺癌的临床研究中,探讨GRP78和GRP94表达水平所提示的临床意义.方法:将符合临床研究标准的患者的病理样本统一采用免疫组化法检测其GRP78、GRP94的表达,将检测结果数值用SPASS统计软件中卡方、spearman法和方差分析进行统计分析.结果:①乳腺癌组织中GRP78阳性表达高于癌旁组织,具有统计学意义(P＜0.01);GRP94表达也具有统计学意义.②在乳腺癌癌组织中,肿瘤大小≤2cm组与＞2cm组GRP78表达无统计学意义(P＞0.05);GRP94同样.③在肿瘤的高、中、低分化组比较GRP78表达具有统计学意义(P＜0.05);GRP94同样.④在淋巴结转移的分析中,有淋巴结转移组较无淋巴结转移组GRP78的阳性表达明显增高,且具有统计学意义(P＜0.01); GRP94表达同样.⑤在临床分期的比较中,临床分期越靠后GRP78的含量越高,具有统计学差异性(P＜0.01);GRP94表达也同样⑥GRP78、GRP94在乳腺癌肿的表达存在正相关.结论:①GRP78、GRP94在乳腺癌组织中呈高表达.②.GRP78、GRP94可能与乳腺癌的发生、发展及预后有关.
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大鼠脑缺血再灌注损伤后莴苣苷B对皮质Grp78和Caspase-3 mRNA表达的影响
目的 探讨莴苣苷B对大鼠脑缺血再灌注损伤时大脑皮质葡萄糖调节蛋白78 (Grp78)和Caspase-3 mRNA表达水平的影响.方法 用线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤模型,腹腔注射不同剂量的莴苣苷B.采用RT-PCR技术检测大脑皮质中Grp78 mRNA和Caspase-3 mRNA的表达情况.结果 再灌注后24 h和72 h检测表明,莴苣苷B组的Grp78 mRNA的表达与模型组相比均增加(P＜0.05),总体上低、中剂量组作用明显,优于阳性对照药尼莫地平组(P＜0.05);莴苣苷B组的Caspase-3 mRNA的表达与模型组相比均降低(P＜0.05),总体上中、高剂量组作用明显,优于尼莫地平组(P＜0.05).结论 莴苣苷B的抗脑缺血再灌注损伤作用在一定时间范围内与其持续上调皮质的Grp78 mRNA和下调Caspase-3 mRNA表达水平有关.
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脑心通对大鼠脑缺血损伤的保护机制
目的:观察脑心通对大鼠缺血脑组织(纹状体)葡萄糖调控蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)、GRP94表达的影响,探讨其对大鼠局灶性脑缺血损伤可能的保护机制.方法:大鼠随机分为假手术组、缺血损伤组(线栓法制备大鼠局灶性脑缺血模型)以及脑心通治疗组(缺血损伤前予脑心通治疗,n=30).应用组织学观察、免疫组织化学及半定量RT-PCR检测缺血不同时段(6、12、24 h)各组大鼠纹状体GRP78、GRP94表达的变化.结果:成功建立大鼠局灶性脑缺血模型.组织学观察表明脑心通治疗组大鼠脑缺血损伤程度较缺血损伤组明显减轻.免疫组织化学检查和RT-PCR检测均发现各时间点假手术组大鼠纹状体GRP78、GRP94表达高于缺血损伤组(P<0.01);缺血后6、12、24 h缺血损伤组、脑心通治疗组GRP78、GRP94表达呈现先升高后降低趋势, 缺血后12 h的表达高;各时间点缺血损伤组GRP78、 GRP94表达低于脑心通治疗组(P<0.05或P<0.01).结论:大鼠纹状体缺血损伤后12 h内出现GRP78、 GRP94表达升高;脑心通能够提高脑缺血损伤组织GRP78、GRP94表达;脑心通可能是通过促进GRP78、GRP94表达来发挥保护内质网功能,减轻脑缺血损伤.
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未折叠蛋白反应参与小鼠急性肾缺血/再灌注损伤
目的 探讨未折叠蛋白反应(UPR)在小鼠急性肾缺血/再灌注损伤中的作用.方法 将C5786小鼠分为正常、假手术组和0、4、12、24 h手术组(分别于术后0、4、12和24 h处死小鼠),留取各组小鼠的左侧肾脏.苏木精一伊红(H-E)、过碘酸雪夫反应(PAS)和脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)染色观察各组肾脏组织学变化,Western印迹法和实时聚合酶链反应(PCR)检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和caspasel2在各组小鼠肾组织中的表达.结果 H-E、PAS染色可见24 h手术组的肾小管上皮细胞坏死明显,病变重的部位为外髓外带近端小管,肾小管坏死评分为(2.930 0±0.131 1)分,显著高于其他组(P值均<0.01).TUNEL染色可见24 h手术组的肾小管上皮细胞凋亡指数为(36.17±7.53)%,显著高于其他各组(P值均<0.01).Western印迹法.结果 显示,12 h手术组的GRP78和caspase12蛋白水平显著高于其他各组(P值均<0.01).实时PCR.结果 显示,4 h手术组的GRP78和caspasel2 mRNA水平显著高于其他各组(P值分别<0.01、0.05).结论 在夹闭左侧肾动脉致急性肾缺血/再灌注损伤模型中,小鼠左侧肾脏组织学损伤显示再灌注后24 h严重.GRP78和caspasel2在再灌注后其mRNA和蛋白表达水平明显升高或激活,其变化早于组织学改变.提示UPR可能在急性肾缺血/再灌注损伤中发挥重要作用.
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促红细胞生成素保护糖尿病大鼠心功能的机制研究
目的:探讨促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)保护糖尿病大鼠心功能的相关机制.方法:雄性SD大鼠40只,随机分为正常对照组、正常+EPO干预组、糖尿病组、糖尿病+EPO干预组,每组10只.采用链脲佐菌素腹腔注射建立糖尿病动物模型,建模成功后,给予正常+EPO干预组和糖尿病+EPO干预组大鼠皮下注射EPO 1 000 IU/Kg,正常对照组和糖尿病组皮下注射等量生理盐水,每周1次,共12周.建模前及末次给药后7d,尾静脉采血,检测血糖、血脂和血常规,超声心动图检测心功能,RT-PCR法分析内质网应激蛋白葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein78,GRP78)、肌浆网Ca2+-ATP酶(SERCA2a)和EPO受体(EPOR) mRNA表达水平,Western blot技术检测GRP78、SERCA2a和EPOR蛋白表达.结果:正常对照组和正常+EPO干预组之间,心功能、血糖、血脂、血常规、GRP78、SERCA2a和EPOR蛋白表达水平均无明显差别(P＞0.05).与正常对照组和正常+EPO干预组相比,糖尿病组大鼠射血分数及左心室短轴缩短率明显下降(P＜0.01),血糖和血脂明显升高(P＜0.01),左心室心肌组织GRP78 mRNA及蛋白表达明显增加(P＜0.01),SERCA2a和EPOR mRNA及蛋白表达明显减少(P＜0.01).与糖尿病组相比,糖尿病+EPO干预组大鼠射血分数及左心室短轴缩短率明显增加(P＜0.01),左心室舒张末期内径明显减小(P＜0.05),左心室收缩末期内径明显减小(P＜0.01),左心室组织GRP78mRNA及蛋白表达明显下降(P＜0.01),SERCA2a和EPOR mRNA及蛋白表达明显增加(P＜0.01).结论:EPO具有保护糖尿病大鼠心功能的作用,其机制可能是减轻心肌内质网应激,增加糖尿病大鼠心肌SERCA2a和EPOR蛋白表达.
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糖脂清对糖尿病大鼠海马内质网应激相关因子GRP78、CHOP、Caspase-12表达的影响
目的 通过观察糖脂清对糖尿病大鼠海马组织的内质网应激相关因子GPR78、CHOP、Caspase-12的影响,探讨其在改善糖尿病大鼠认知功能的作用机制.方法 采用高糖高脂饲料联合小剂量链脲佐菌素腹腔注射复制2型糖尿病大鼠模型,并给予糖脂清高、中、低剂量组干预8周后,采用ELISA法检测血清空腹葡萄糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS),计算稳态模型的胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、胰岛素敏感指数(ISI);qPCR和Western blot法检测海马组织内质网应激相关因子GPR78、CHOP、Caspase-12的mRNA及蛋白表达水平.结果 糖脂清各剂量组均能够显著降低FPG及HOMA-IR(P＜0.01),除低剂量组外,糖脂清均可显著提高ISI(P＜0.01),3组FINS水平无显著性差异(P＞0.05).与模型组比较,糖脂清低、中、高3个剂量组GRP78 mRNA和蛋白相对表达均显著增加,CHOP、Caspase-12 mRNA表达均减少(P＜0.01),中、高剂量组CHOP、Caspase-12蛋白表达显著减少(P＜0.01).结论 糖脂清能够控制血糖,改善胰岛素抵抗,增加胰岛素敏感性,同时能够调节海马内质网应激相关因子GRP78、CHOP、Caspase-12 mRNA和蛋白的表达.
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GRP78核酸疫苗在非小细胞肺癌模型中的抗肿瘤作用研究
目的:研究GRP78核酸疫苗对非小细胞肺癌的预防作用及生存期影响.方法:将携带GRP78基因的真核表达载体肌肉内注射免疫C57BL/6小鼠,完成3次免疫后,接种小鼠非小细胞肺癌细胞(Tc-1),以此来观察该疫苗对非小细胞肺癌的预防作用及生存期影响.结果:免疫后的治疗组肿瘤生长体积小于对照组,平均生存期比对照组延长了25天,免疫细胞分泌细胞因子肿瘤坏死因子(TNF-α)、γ干扰素(IFN-γ)的水平和对靶细胞的杀伤率明显高于对照组.结论:GRP78核酸疫苗能够提高机体免疫细胞对非小细胞肺癌的杀伤能力,延缓肿瘤生长,延长生存期.
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小檗碱调控内质网应激水平影响UC结肠炎症反应的实验研究
目的 从内质网应激(ERS)角度探讨小檗碱(BBR)缓解溃疡性结肠炎(UC)结肠炎症反应的作用机制.方法 60只BALB/c小鼠按随机数字表法分为空白对照组、模型对照组和BBR低、中、高剂量组,每组12只.制备右旋葡聚糖硫酸钠诱导的UC小鼠模型,BBR低、中、高剂量组造模同时给予BBR混悬液灌胃7d.观察5组小鼠一般情况并评估疾病活动指数(DAI);末次给药后取小鼠结肠病变部位标本,进行组织病理学评价;TUNEL法检测结肠组织肠上皮细胞(IECs)的凋亡情况;免疫组化法检测结肠组织中GRP78、Caspase-12和Caspase-3蛋白的表达水平;荧光定量PCR法检测结肠组织GRP78 mRNA的表达水平.结果 与模型对照组比较,BBR低、中、高剂量组小鼠结肠炎的临床症状和组织病理学损伤均有明显减轻.与空白对照组比较,模型对照组结肠组织IECs凋亡数明显增多,GRP78、Caspase-12和Caspase-3蛋白表达水平明显升高,GRP78 mRNA的表达亦上调.而与模型对照组比较,BBR低、中、高剂量组小鼠结肠组织IECs凋亡数明显下降,BBR高剂量组小鼠结肠组织GRP78、Caspase-12、Caspase-3蛋白表达水平与GRP78 mRNA的表达水平均下调.结论 BBR能有效减轻UC小鼠的结肠炎症,其机制可能与下调ERS水平,抑制ERS介导的Caspase-12/Caspase-3凋亡信号通路活化有关.
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子宫颈癌中MHC-Ⅰ类分子抗原呈递相关蛋白GRP78、CRT、ERP57表达及意义
目的 探讨子宫颈炎组织和子宫颈癌组织中GRP78、CRT、ERP57蛋白与HPV16型感染在维吾尔族和汉族妇女中的表达及相关关系.方法 采用免疫组化SP法和PCR技术检测子宫颈炎组织69例(汉族38例,维吾尔族31例)以及子宫颈癌组织124例(汉族36例,维吾尔族88例)中GRP78、CRT、ERP57蛋白的表达和HPV16的感染情况.结果 HPV16型感染在子宫颈癌中的阳性表达率(31.45%)高于宫颈炎组(11.59%),差异有统计学意义(P<0.05).GRP78、CRT、ERP57 3种蛋白在宫颈癌中的表达(95.16%、90.32%、90.32%)均高于与其各自在宫颈炎中的表达(89.96%、50.72%、49.28%),差异均有统计学意义(P<0.05).GRP78和CRT在汉族妇女宫颈癌中的表达(100.00%、97.22%)均高于各自在汉族妇女宫颈炎中的表达(81.58%、39.47%),并且差异均有统计学意义(P<0.05).CRT和ERP57在维吾尔族妇女宫颈癌中的表达(87.50%、94.32%)均高于各自在维吾尔族妇女宫颈炎中的表达(64.51%、35.48%),并且差异均有统计学意义(P<0.05).除此之外,仅ERP57在维吾尔族妇女宫颈癌中的表达(94.32%)高于其在汉族宫颈癌中的表达(80.56%),差异有统计学意义(P<0.05).而通过对GRP78、CRT、ERP57蛋白与HPV16的相关性分析发现:GRP78、CRT、ERP57蛋白在维吾尔族妇女宫颈癌中的阳性表达率与HPV16型感染均存在正相关关系(r=0.278,P<0.05;r=0.429,P<0.05;r=0.222,P<0.05).结论 通过对GRP78、CRT、ERP57 3种蛋白和HPV16联合检测,可能作为检查子宫颈癌的标记物,提高宫颈癌的检出率;ERP57蛋白在宫颈癌中的表达存在民族间差异.
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GRP78的表达对急性肺损伤上皮细胞凋亡和NF-κB信号通路的影响
目的 探究免疫球蛋白重链结合蛋白(GRP78)的表达量降低对急性肺损伤(ALI)上皮细胞凋亡、增殖以及核因子-κB(NF-κB)信号通路的影响.方法 采用脂质体Lipofectamine 2000将siRNA-GRP78转入肺上皮MLE-12细胞中,使用10μg/mL脂多糖(LPS)作用于生长状态良好的细胞24 h,建立急性肺损伤模型.实验分为4组:对照组为未经处理的细胞,模型组为LPS干预的细胞,空载体组为先把siRNA-NC转入细胞中然后经LPS干预,低表达组为先把siRNA-GRP78转入细胞中后经LPS干预.CCK-8检测细胞的增殖情况,流式细胞术检测细胞的凋亡率,蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞中GRP78、P65、核因子κB抑制蛋白(IκB)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)的表达量.结果 与对照组相比,模型组、空载体组、低表达组细胞中GRP78蛋白的表达量显著升高(P<0.05);与模型组相比,低表达组显著降低(P<0.05).与对照组相比,模型组、空载体组、低表达组细胞的存活率显著下降(P<0.05),凋亡率显著升高(P<0.05);与模型组相比,低表达组细胞的存活率显著升高(P<0.05),凋亡率显著降低(P<0.05).与对照组相比,模型组和空载体组细胞中P65(P<0.05)、IκB(P<0.05)、CyclinD1(P<0.05)蛋白的表达量显著降低;与模型组相比,低表达组细胞中P65、IκB、CyclinD1蛋白的表达量显著升高(P<0.05).结论 下调GRP78表达抑制急性肺损伤上皮细胞凋亡,促进其增殖,其作用机制可能是通过抑制NF-κB信号通路介导的下游靶基因的表达来发挥作用.
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GRP78的表达非小细胞性肺癌细胞A549对顺铂的敏感性
目的 探讨下调GRP78的表达后是否增强非小细胞性肺癌细胞对顺铂的敏感性.方法 通过蛋白印记的方法 检测内质网应激后GRP78的表达变化;用流式细胞仪检测用siRNAGRP 78抑制GRP 78的表达上调后凋亡细胞的数目;用A549肿瘤细胞对裸鼠进行了皮下荷瘤,在体内检验GRP78的表达水平对顺铂耐药的影响;运用免疫组织化学的方法 检测肺癌患者的肿瘤组织中GRP78的表达水平.结果 内质网应激能上调GRP78的表达;抑制内质网应激诱导的GRP78的表达上调后,细胞对顺铂的敏感性增加;将GRP78基因表达干扰后,荷瘤组织的生长明显受到顺铂的抑制;20例肺癌患者的肿瘤组织与癌旁组织相比,存在GRP78的高表达.结论 GRP78的表达水平上调降低非小细胞性肺癌细胞对顺铂的敏感性,具体的参与调控的信号通路需要进一步的机制研究.
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匹诺塞林对脑缺血再灌注内质网应激凋亡相关基因mRNA表达的影响
目的:观察匹诺塞林对大鼠脑缺血再灌注急性期损伤内质网应激凋亡途径相关基因的调控作用.方法:雄性SD大鼠50只,阻塞大脑中动脉建立脑缺血再灌注模型,随机分为假手术组、模型组、匹诺塞林1 mg/kg组、3 mg/kg组和10 mg/kg组,其中模型组及匹诺塞林各给药组,分别于大脑中动脉阻塞2h后再灌注同时给药,6h后取血并断头取脑,取缺血半暗带组织,实时荧光定量PCR(RT-PCR)法测定GRP78、CHOP、ATF4、XBP-1的mRNA变化.结果:匹诺塞林能增加急性局灶性脑缺血再灌注GRP78 mRNA水平,其中匹诺塞林3 mg/kg、10 mg/组与模型组比较,差异有统计学意义(P ＜0.05或P＜0.01);匹诺塞林能降低内质网应激凋亡相关蛋白CHOP、ATF4,XBP-1mRNA水平,与模型组相比,差异有统计学意义(P ＜0.05或P＜0.01).结论:匹诺塞林能抗脑缺血再灌注损伤,其机制可能与保护内质网功能,减少GRP78、CHOP、ATF4及XBP-1相关基因表达有关.
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内质网应激介导的白藜芦醇对MPTP诱导的小鼠帕金森病模型的神经保护作用
目的:探讨白藜芦醇对1-甲基4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱导的小鼠帕金森病模型的神经保护作用及与内质网应激的关系.方法:将30只C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组和治疗组,模型组和治疗组小鼠腹腔注射MPTP(30 mg/kg)诱导帕金森病模型,每3.5天1次,连续5周,共注射10次.治疗组在造模第一天开始予以白藜芦醇(20 mg/kg)灌胃治疗,每天1次,连续5周.5周后用旷场实验、游泳实验和转棒实验观察小鼠的行为学能力,免疫组化法观察小鼠黑质酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)、GRP78和CHOP的阳性细胞的变化.结果:与对照组相比,模型组小鼠出现明显的行为学障碍,黑质多巴胺能神经元明显减少(P＜0.01),说明造模成功;与模型组相比,白藜芦醇治疗组能显著改善小鼠的行为学障碍,抑制黑质多巴胺能神经元的凋亡,同时下调黑质GRP78和CHOP的表达(P＜0.01).结论:白藜芦醇对MPTP诱导的小鼠帕金森病模型有神经保护作用,其作用机制可能与抑制内质网应激相关因子GRP78和CHOP的表达有关.
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银杏叶提取物对肝纤维化大鼠肝组织GRP78及CHOP表达的影响
目的:观察银杏叶提取物(GbE)对肝纤维大鼠内质网应激通路相关分子GRP78、CHOP表达的影响,探讨GbE抗肝纤维的作用机制.方法:采用 40％ 的 CCl4 皮下注射(3mL·kg-1·d-1,2次/周,首剂加倍)6周诱导大鼠肝纤维化模型,同时分别以200、100、50 mg· kg-1·d-1的GbE灌胃干预6周,空腹取肝组织,Real-time PCR及免疫组化法分别检测肝组织GRP78及CHOP基因的mRNA及蛋白表达.结果:肝组织GRP78和CHOP的mRNA及蛋白的表达较正常组明显增加(P＜0.05,P＜0.01);应用高、中、低剂量GbE干预后,大鼠肝组织GRP78和CHOP基因的mRNA及蛋白表达显著下降(P＜0.05,P＜0.01).结论:肝纤维化大鼠肝脏发生了内质网应激反应,GbE下调肝纤维化大鼠肝组织内质网应激通路相关分子GRP78和CHOP的mRNA及蛋白的表达可能是其抗肝纤维化作用的机制之一.
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二氟甲基鸟氨酸对2型糖尿病大鼠心肌肥厚 及内质网应激的影响
目的 研究二氟甲基鸟氨酸(difluoromethylornithine,DFMO)对2型糖尿病(T2DM)大鼠心肌肥厚的作用,以及对内质网应激蛋白GRP78和CHOP的影响.方法 采用高糖高脂膳食负荷链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)单次腹腔注射,建立T2DM大鼠模型.实验大鼠分为正常对照组、T2DM模型组和DFMO治疗组,上述条件继续饲养12周.检测各组大鼠空腹血糖、心脏参数、心肌纤维化程度;测定MDA含量、SOD和T-AOC活性;检测GRP78和CHOP蛋白表达.结果 DFMO治疗后,降低T2DM大鼠空腹血糖和心脏参数(P<0.05),心肌间质纤维化程度下降(P<0.05),MDA含量降低,SOD和T-AOC活性增加.同时,DFMO治疗可以下调GRP78和CHOP蛋白表达水平(P<0.05).结论 DF-MO抑制T2DM大鼠心肌肥厚,机制与下调GRP78和CHOP蛋白表达,抑制内质网应激有关.
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淫羊藿次苷Ⅱ通过改善内质网应激和caspase-12 信号改善SHR大鼠左心室功能
目的 基于内质网应激与caspase-12信号,探索淫羊藿次苷Ⅱ(icarisideⅡ,ICSⅡ)改善自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats,SHRs)左心室功能的机制.方法 30只14周龄♂SHRs分为模型组、ICSⅡ低、中、高剂量(4、8、16 mg·kg-1)组及阳性药氯沙坦(20 mg·kg-1)组(n=6);同时,WKY作为空白对照组(n=6).在第26周给药结束后,麻醉大鼠,用小动物超声检测大鼠左心室功能;RT-PCR检测左心室GRP78 mRNA水平;Western blot检测左心室GRP78、cleaved-caspase-12/9/3蛋白水平.结果 与WKY组相比,SHR组大鼠左心室舒张末期的内径和后壁厚度增加,射血分数和短轴缩短率降低;GRP78 mRNA和蛋白水平上调,cleaved-caspase-12/9/3蛋白水平增加(P<0.05).与SHR组相比,ICSⅡ中、高剂量组及阳性药组左心室舒张末期的内径和后壁厚度降低(P<0.05),射血分数和短轴缩短率增加(P<0.05);GRP78 mRNA和蛋白水平下调,cleaved-caspase-12/9/3蛋白水平降低(P<0.05).结论ICSⅡ可改善SHRs左心室功能,其作用机制可能与改善内质网应激、下调升高的caspase-12信号有关.
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抑制MEK对内质网应激诱导乳腺癌细胞凋亡的增敏作用
目的 探讨抑制MEK/ERK信号通路对人乳腺癌细胞内质网(endoplasmic reticulum, ER)应激途径细胞凋亡的影响,以期为乳腺癌化疗提供新的靶点.方法 不同浓度(0、1.5、3、6、9、12 μmol*L-1)衣霉素(tunicamycin, TM)处理乳腺癌细胞SK-BR-3,48 h后溴化丙啶(propidium iodide,PI)染色检测细胞凋亡率;TM(3 μmol*L-1)处理SK-BR-3细胞不同时间(0、6、12、24、36 h),Western blot检测葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78, GRP78)、ERK1/2、pERK1/2的表达;MEK抑制剂U0126(20 μmol*L-1)预处理1 h后再给予TM(3 μmol*L-1)同上处理,检测上述指标,比较U0126作用前后上述指标的变化.结果 SK-BR-3细胞对TM诱导的细胞凋亡率<20%,且TM上调GRP78的表达;TM没有诱导ERK1/2的进一步激活;U0126明显增加TM诱导的细胞凋亡率(78%),同时下调GRP78的表达和阻断TM对GRP78的上调作用.结论 MEK/ERK信号通路的抑制增强人乳腺癌细胞SK-BR-3对ER应激途径细胞凋亡的敏感性,抑制非折叠蛋白反应(unfolded protein response, UPR)的诱导.
