首页 > 文献资料
-
大鼠脑缺血预处理后GRP78表达的变化及清热化瘀方的干预研究
目的:观察缺血预处理对大鼠脑缺血再灌注后GRP78mRNA及其蛋白表达和神经元凋亡的影响及清热化瘀方的干预作用.方法:SD大鼠160只,随机分为假手术组(SO)、脑缺血再灌注组(MCAO)、脑缺血预处理组(BIP)、清热化瘀方干预组(QRHY)4组,每组按照再缺血后12h、1天、2天、3天四个时间点分为4个亚组.采用二次线栓法制备大鼠局灶性脑缺血预处理模型,用原位杂交法和Western blot法观察再缺血后各个时间点GRP78mRNA及其蛋白的表达变化,用流式细胞术检测神经细胞凋亡率.结果:①MCAO组12h GRP78mRNA及其蛋白表达均达高峰,随再灌注时间延长其表达逐渐下降(P ＜0.05,P＜0.01)；BIP组较MCAO组GRP78mRNA及其蛋白表达均明显升高(P ＜0.05,P＜0.01)；QRHY组较BIP组进一步升高其表达(P＜0.05).②MCAO组12h细胞凋亡发生率显著增加,1天时达到高峰(P＜0.01),以后时间点逐渐下降(P＜0.01)；BIP组各个时间点神经元凋亡发生率较MCAO组显著降低(P＜0.05,P＜0.01)；QRHY组较BIP组神经细胞凋亡率进一步降低(P＜0.05,P＜0.01).结论:脑缺血预处理可能通过诱导GRP78表达发挥其神经保护作用,清热化瘀方可促进其作用.
-
番茄红素对PS1/APP小鼠前额叶GRP78、Notch1表达及学习记忆的影响
目的 探讨番茄红素对PS1/APP小鼠前额叶皮质区Notch1、GRP78表达及学习记忆功能的影响.方法 将18只6月龄的PS1/APP小鼠随机平分为3组,分别为正常对照组、模型组、模型组+番茄红素组;利用Morris水迷宫测试小鼠学习记忆功能,免疫组化、Western blot检测Notch1和GRP78在小鼠前额叶皮质区的表达情况.结果 番茄红素明显改善PS1/APP小鼠的空间学习记忆功能,下调前额叶皮质区Notch1和GRP78的表达水平.结论 番茄红素改善PS1/APP小鼠学习记忆功能可能与下调前额叶皮质区Notch1和GRP78蛋白的表达水平相关.
-
葡萄糖调节蛋白78和内质网调节蛋白57在PTSD大鼠前额皮质的表达
目的 观察创伤后应激障碍(PTSD)大鼠前额皮质(mPFC)神经元未折叠蛋白反应(unfolded protein response,UPR)标志物葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和内质网调节蛋白57(ERP57)的表达变化,探讨内质网分子伴侣在PTSD发病机制中的作用.方法 采用国际认定的PTSD动物模型-SPS大鼠模型,取80只成年雄性健康Wistar大鼠,随机分为正常组和SPS模型组(SPS1d,SPS4d,SPS7d),采用逆转录-聚合酶链式反应、免疫组织化学法和免疫印记检测PTSD-SPS大鼠mPFC神经元中GRP78和ERP57的表达变化.结果 SPS刺激后大鼠mPFC神经元细胞内GRP78和ERP57蛋白表达于1d开始逐渐升高,7d时表达多;GRP78和ERP57的mRNA水平的变化与其蛋白表达变化相一致.结论 GRP78和ERP57在PTSD大鼠mPFC过表达可能参与SPS刺激诱导的UPR反应.
-
基于内质网应激研究蛇床子素对成骨细胞增殖与分化的影响
背景:研究表明,蛇床子素可以通过促进成骨细胞分化而促进骨形成,但是蛇床子素抗骨质疏松效应的机制尚不明确.目的:观察蛇床子素对体外培养大鼠成骨细胞增殖与分化的影响,探究其抗骨质疏松效应的机制.方法:采用二次酶消化法分离大鼠成骨细胞,并使用碱性磷酸酶染色以及矿化结节染色进行鉴定.实验分5组,分别为溶剂对照组、β-雌二醇组以及蛇床子素低、中、高剂量组(1×10-6,1×10-5,1×10-4mol/L).用CCK-8法检测各组细胞增殖情况,通过检测各组细胞内碱性磷酸酶活力以及矿化结节染色评价细胞分化情况,蛋白免疫印迹法检测GRP78、PDI、CHOP蛋白表达.结果与结论:①1×10-4,1×10-5mol/L蛇床子素可抑制成骨细胞增殖;②10-4mol/L蛇床子素可增加成骨细胞碱性磷酸酶活力、增强成骨细胞矿化能力;③10-4mol/L蛇床子素可降低GRP78蛋白水平,增加PDI及CHOP蛋白表达;④结果表明,蛇床子素可促进成骨细胞分化,可能通过内质网应激抑制成骨细胞增殖.
-
内质网凋亡途径参与了高糖诱导髓核细胞凋亡的过程
背景:椎间盘退变是下腰痛的主要诱因,髓核细胞的凋亡是椎间盘退变的重要危险因素.然而,椎间盘退变引起下腰痛的具体分子机制目前尚不明确.目的:探讨内质网应激是否参与高糖诱导兔髓核细胞凋亡的过程.方法:将第3代兔髓核细胞随机分为空白对照组(正常培养液);高糖组(培养基中葡萄糖浓度为100 mmol/L);抑制剂组(培养基中含有Caspase-12抑制剂Z-ATAD-FMK);抑制剂+高糖组(培养基中含有Z-ATAD-FMK及100 mmol/L的葡萄糖).分别处理6 h后,检测各组细胞的增殖活性、凋亡率、活性氧自由基、Caspase-12和葡萄糖调节蛋白78的变化情况.结果与结论:①高糖组细胞增殖明显抑制,活性氧自由基、凋亡率、Caspase-12和葡萄糖调节蛋白78表达量较对照组明显增加;②Z-ATAD-FMK可以降低高糖诱导的细胞凋亡率以及Caspase-12和葡萄糖调节蛋白78表达的增加;③结果表明,内质网凋亡通路参与了高糖诱导兔髓核细胞的凋亡过程;高糖诱导的活性氧自由基过量产生及积累是引起内质网应激的主要因素.
-
成肌细胞体外培养-力学刺激模型与周期性张应力的影响
背景：内质网应激参与多种疾病的发生发展过程，如动脉粥样硬化、糖尿病、阿尔茨海默病，GRP78是内质网应激的标志蛋白，GRP78的表达水平反映内质网应激的程度。
目的：研究周期性张应力对 L6大鼠成肌细胞 GRP78表达的影响，以明确周期性张应力与内质网应激的关系。
方法：在成功构建L6大鼠成肌细胞体外培养力学刺激模型的基础上，采用RT-PCR和Western blot法分析周期性张应力对GRP78 mRNA和蛋白表达的影响。加力组分别给予1，6，12，24 h的力学刺激，加载频率为10 cycles/min，拉伸变形幅度为15%。对照组与实验组在同时种板，不给予力刺激。
结果与结论：GRP78 mRNA随着加力时间的延长呈一致上升趋势，与对照组相比，差异均有显著性意义(P<0.05)；GRP78蛋白在加力1 h后，蛋白表达量开始升高，加力6 h后蛋白表达量显著升高，到24 h达到峰值，与对照组相比，差异均有显著性意义(P<0.05)。由以上结果得出，在一定时间范围内，周期性张应力可引起内质网应激，并且随着时间的延长逐渐增强；持续的应力刺激，可引起严重的内质网应激导致成肌细胞凋亡。 -
Grp78用于胸部良恶性肿瘤鉴别诊断的实验研究
目的 探讨分子伴侣Grp78用于胸部良恶性肿瘤鉴别诊断的可能性.方法 应用免疫印迹技术对36例疑似肺癌病人胸水脱落细胞中Grp78的表达水平进行检测,并将检测结果与胸水脱落细胞学检查结果和临床病理资料对照.结果 免疫印迹结果表明Grp78高表达的21例病人,经过临床观察和病理学检查,有19例被临床诊断为肺癌,Grp78表达水平较低15例病人中,没有病例被诊断为肺癌,灵敏度为90%,特异度为85.7%;而应用传统的检测方法对36例肺癌疑似病人胸水进行脱落细胞学检查,有12例病人怀疑为肺癌,经过临床及病理学检查有4例被排除,灵敏度为47%,特异度为85%.结论 检测肺癌疑似病人胸水脱落细胞中GW78的表达水平可以提高肺癌鉴别诊断的灵敏度,有利于胸部恶性肿瘤的早期诊断及鉴别诊断.
-
Grp78基因转染肝细胞癌SMMC-7721克隆筛选及鉴定
目的 用Grp78基因转染人肝细胞癌SMMC-7721,筛选阳性克隆并鉴定.方法 利用真核表达载体pcDNA3.1+Grp78转染SMMC-7721,pcDNA3.1+Grp78与转染试剂的比例(μg/μL)分别为2:3、2:4、2:5、2:6、2:7、2:8、2:9,400 μg/mL G418筛选阳性克隆后,传代扩增,Western Blot鉴定克隆的Grp78表达情况.应用pcDNA3.1空载体作为阴性对照.结果 Western Blot显示,转染后的SMMC-7721经G418筛选,除一个克隆不高表达外,其余克隆均高表达Grp78.结论 Crp78转染SMMC-7721的佳转染效率是8:2(转染试剂/DNA),由于假阳性克隆的存在,筛选后的克隆需要鉴定.
-
当归补血汤对内质网应激特有Caspase-12凋亡途径影响
目的:研究当归补血汤对内质网应激特有的Caspase-12凋亡途径的影响,探讨当归补血汤对肾脏的保护机制.方法:60只SD大鼠腹腔内注射链脲佐菌素(STZ)结合高脂高糖饮食建立大鼠糖尿病肾病模型(DN),喂养8周后,观察大鼠的毛色、精神状态等一般状态;酶偶联比色法检测尿蛋白、BUN、尿肌酐等反应肾功能的相关指标;光镜观察其肾脏病理变化;RT-PCR、western Blot及免疫组化检测GRP78、Caspase-12的蛋白及mRNA表达水平;TUNEL检测肾组织细胞凋亡情况.结果:DN组大鼠空腹血糖、尿蛋白、BUN等明显升高,肾功能受损严重,肾脏组织GRP78、Caspase-12的蛋白及mRNA含量增加,光镜下肾脏结构病变明显,肾组织细胞凋亡率增高;当归补血汤治疗后肾功能损伤减轻,GRP78、Caspase-12的蛋白及mRNA含量降低,光镜下肾组织病变改善,大鼠肾组织凋亡率降低.结论:当归补血汤能抑制内质网应激特有Caspase-12凋亡途径,改善糖尿病肾病大鼠肾功能,减少肾组织过度凋亡.
关键词： 当归补血汤 内质网应激 糖尿病肾病 GRP78 Caspase-12凋亡途径 -
CCl4诱发galectin-3基因敲除鼠急性肝损伤中GRP78和BAD表达
目的 观察半乳糖凝集素-3(galectin-3)基因敲除鼠肝脏中GRP78和BAD表达,探讨急性肝损伤中gMectin-3抗凋亡作用.方法 制备GRP78和BAD DNA探针,分别利用Western和Northern杂交技术检测在CCl4损伤galectin-3基因敲除鼠肝组织中GRP78和BAD蛋白和mRNA表达.结果 成功构建PTS1-BAD和PTS1-GRP78扩增质粒.GRP78蛋白主要定位在微粒体中,galectin-3+/+小鼠经CCl4处理6-14 h后,肝脏GRP78表达上调至高峰,而后恢复正常;在galectin-3-/-小鼠中,CCl4处理后GRP78表达水平未见变化.正常或者cch处理的galectin.3+/+和-/一小鼠中GRP78 mRNA表达未见显著差别.galectin一3+/+鼠中主要定位在微粒体中在CCl4处理前后未见BAD蛋白在细胞浆和微粒体中表达.galectin-3-/-中BAD主要定位在肝细胞浆和微粒体,CCl4处理前后表达升高.BAD mRNA 1.6 kb片段在galectin-3+/+和-/-小鼠经CCl4处理前后均没有变化,但0.9 kb片段galectin-3+/+和-/-小鼠经CCl4处理后表达降低.结论 CCl4可诱导肝脏mRNA降解,该过程中参与细胞凋亡的蛋白质表达升高.galectin-3+/+小鼠CCl4处理后肝细胞凋亡以内质网应急途径为主,而galectin-3-/-则以线粒体为主.在肝细胞中galectin-3对线粒体凋亡和内质网应急途径均有抑制作用.
-
宫颈病变组织中葡萄糖调节蛋白78与衰老相关蛋白HP1-γ的表达研究
目的:探讨葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein,GRP78)与细胞衰老在宫颈癌发生、发展过程中的相关性.方法:免疫组化法检测宫颈癌组织芯片中衰老相关异染色质灶标志蛋白HP1-γ及GRP78蛋白表达情况.结果:正常宫颈组织中HP1-γ蛋白及GRP78蛋白均呈低表达,而在宫颈上皮内瘤变(cerv ical intraepithelial neoplasia,CIN)Ⅱ-Ⅲ组织中HP1-γ蛋白及GRP78蛋白表达均逐渐升高.随着宫颈癌恶性程度的升高,GRP78表达明显升高,呈强阳性表达,而HP1-γ蛋白表达逐渐降低至较低水平.结论:GRP78蛋白可能通过抑制细胞衰老从而导致宫颈细胞由正常向恶性转化.
-
GRP78在不同分化程度胃癌组织中的表达
目的:探讨不同分化程度胃癌组织中葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的表达差异.方法:分别用Western blot和免疫组化法检测GRP78在高、中、低三种分化程度胃癌组织中的表达水平.结果:Western blot和免疫组化结果均证实GRP78蛋白表达水平与胃癌细胞分化程度呈负相关.结论:GRP78蛋白表达水平在不同分化程度胃癌组织中存在差异,但作为胃癌细胞分化程度判定的参考指标缺乏可操作性.
关键词： 胃肿瘤 GRP78 Western blot 免疫组织化学 -
沉默GRP78／BIP表达对人膀胱癌T24细胞侵袭及迁移的影响及机制
目的：探讨体外沉默葡萄糖调节蛋白GRP78／BIP表达对膀胱癌T24细胞侵袭及迁移的影响及可能机制。方法：设计、合成靶向GRP78基因的小干扰RNA，利用脂质体Liopfecta mineRNAIMAX转染入膀胱癌T24细胞，分别采用Real-time PCR、Western blot在mRNA和蛋白水平检测细胞内GRP78、MMP2、MMP9、Timp-2表达，采用Transwell实验及细胞划痕实验检测沉默GRP78表达对膀胱癌T24细胞侵袭及迁移的影响。结果：实验（ siRNA-GRP78） T24细胞中GRP78表达显著降低，细胞侵袭迁移能力明显受到抑制，MMP2、MMP9表达降低，而Timp-2表达增高，差异均有统计学意义（ P＜0.05）。结论：沉默GRP78能明显抑制人膀胱癌细胞的侵袭、迁移能力，其机制可能与影响MMP2、MMP9、Timp-2表达相关。
-
老年非小细胞肺癌患者GRP94及GRP78蛋白表达及其临床意义
目的：研究非小细胞肺癌（ NSCLC）中细胞应激因子GRP94及GRP78蛋白表达及其与临床分期及生存期的关系。方法选取该院接受外科手术切除治疗的64例NSCLC患者，应用电话随访的方式了解患者的术后情况和生存期；使用免疫组化技术检测研究对象的病理切片标本中GRP78和GRP94的表达水平。结果 GRP94与GRP78蛋白在 NSCLC肿瘤细胞中明显高表达状态；GRP94、GRP78蛋白的表达与 NSCLC病理类型有关，与分化程度、肿瘤T分期、肿瘤N分期、WHO临床分期具有不同程度的联系，也与肿瘤的大小、浸润、转移有关；与性别和年龄无关。 GRP94及GRP78蛋白的高表达与NSCLC患者生存期及生存率呈明显负相关，其蛋白表达水平越高，患者的生存期越短，生存率越低。结论 GRP78和GRP94是NSCLC发生、发展中的重要因子，可作为肿瘤分期和预测预后的一项指标。
关键词： 非小细胞肺癌(NSCLC) GRP94 GRP78 生存期 -
缺血后处理对大鼠脑缺血/再灌注损伤内质网应激通路相关分子的影响
目的 探讨缺血后处理对大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤的保护作用及与内质网应激通路相关分子GRP78、caspase-12的关系.方法 成年雄性Wistar大鼠58只,随机分为假手术组(sham组)、缺血/再灌注组(I/R组)和缺血后处理组(IP组),采用线栓法阻断大脑中动脉制备大鼠局灶性脑缺血/再灌注(MCAO)模型.大鼠脑缺血/再灌注后24 h进行神经行为学评分和脑梗死体积测定;脑缺血/再灌注6h、12h、24 h后免疫组织化学方法检测脑缺血侧半暗带区GRP78、caspase-12蛋白的表达.结果 与缺血/再灌注组相比,后处理组再灌注24h神经行为学评分明显降低,脑梗死体积明显减少(P＜0.05);后处理组再灌注12h、24 h GRP78蛋白表达明显增加,再灌注24 h caspase-12蛋白表达明显减少.结论 脑缺血后处理可能通过减弱内质网应激过程从而对随后发生的再灌注损伤起到了神经保护作用.其机制可能是增加GRP78蛋白表达、减少caspase-12蛋白表达而减轻神经细胞的凋亡.
关键词： 脑缺血/再灌注损伤 缺血后处理 内质网应激 GRP78 Caspase-12 -
多巴胺诱导SH-SY5Y细胞帕金森病模型中GRP78的表达
目的:探讨神经毒素多巴胺(DA)诱导SH-SY5Y细胞帕金森病(PD)细胞模型中葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的表达.为深入研究PD的发病机制提供理论依据.方法:建立多巴胺诱导SH-SY5Y细胞帕金森病模型,实验组加入DA(溶解于0.2%维生素C,DA终浓度为200 μmol·L~(-1)),对照组加入等体积的0.2%维生素C,分别孵育24 h,台盼蓝染色检测细胞存活率,Hoechst33342染色检测细胞凋亡.分别提取实验组和对照组细胞总蛋白,应用荧光差异双向凝胶电泳(DIGE)技术获得蛋白点的差异表达,应用基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱仪(MALDI-TOF MS)鉴定差异蛋白质.结果:实验组细胞存活率为53.2%,与对照组细胞存活率(100%)比较显著下降(P<0.05).荧光染色,实验组可见细胞核呈同缩状或碎裂状,呈典型的凋亡形态学改变;对照组可见细胞胞核着均匀一致蓝色.DIGE分析,实验组表达增高的一个蛋白质点,经质谱分析鉴定确认为GRP78.结论:多巴胺能够诱导SH-SY5Y细胞凋亡,凋亡过程中GRP78表达增高,提示GRP78增高可能与PD的发病机制有关.
-
GRP78指标在诊治胃癌中的价值及相关研究
葡萄糖调节蛋白78在胃癌患者体内呈高表达，被证明与胃癌的发生、发展密切相关，可作为判断胃癌恶性程度的重要指标，亦可作为靶点应用于肿瘤的探测和治疗，可为胃癌的临床治疗提供新的思路。研究证实，钙离子螯合剂BAPTA-AM、钙离子载体A23187、维生素E琥珀酸酯、衣霉素及饥饿诱导均可引起GRP78表达水平的改变。
-
葡萄糖调节蛋白78在子痫前期中的表达及其意义
目的:探讨葡萄糖调节蛋白78 (GRP78)mRNA及蛋白在胎盘组织的表达水平及其与子痫前期的发病关系.方法:选择2010年1月-2010年12月在南京医科大学第一附属医院江苏省人民医院产科住院的予痫前期患者35例(子痫前期组),以同期正常孕妇35例为对照组.采用RT-PCR技术、蛋白印迹(westem-blot)法和免疫组化检测两组孕妇胎盘组织中GRP78的mRNA与蛋白表达水平差异.结果:子痫前期组患者胎盘组织中GRP78mRNA与蛋白表达水平均显著高于相应孕周正常妊娠组.结论:子痫前期能够诱导GRP78表达,CHOP/GADD 153表达的增高与子痫前期的发病有关.
-
GRP78的表达与非小细胞肺癌生物学特性及预后的关系
目的:探讨GRP78在非小细胞肺癌和癌旁组织中的表达情况,并研究其与生物学特征及临床预后的关系 方法:收集非小细胞肺癌术后切除标本88例,及其癌旁组织20例作为对照.采用免疫组织化学方法检测GRP78的表达.结果:GRP78在非小细胞肺癌组织和癌旁组织中的表达有统计学差异.GRP78的表达与非小细胞肺癌的临床分期、分化程度有关,而与患者性别、年龄和病理类型无关.非小细胞肺癌中GRP78高表达的患者生存时间短于GRP78低表达的患者.GRP78的表达情况是影响非小细胞肺癌患者手术预后的独立危险因素.结论:非小细胞肺癌患者的GRP78的表达可能与肿瘤细胞的发生及发展有关,GRP78可以作为一个预测非小细胞肺癌患者预后的分子标志物.
-
衣霉素诱导大鼠心肌细胞内质网应激凋亡模型的构建
目的:通过衣霉素诱导内质网应激建立新生大鼠心肌细胞凋亡模型.方法:不同浓度、不同时间的衣霉素作用于原代培养乳鼠心肌细胞,通过MTT实验和流式细胞术测定心肌细胞的存活率和凋亡率,Western blot检测内质网应激蛋白GRP78,CHOP表达水平.结果:①与阴性对照组相比,衣霉素具有损伤心肌细胞的作用,并呈现剂量与时间依赖关系(P<0.05,n=12).②通过流式细胞术判断心肌细胞死亡的性质,当衣霉素浓度为100ng/ml,作用72h时,心肌细胞存活率和凋亡率分别为57.4±3.2%(n=12),25.9±5.8%(n=3).提示衣霉素损伤细胞的形式主要为凋亡性死亡.③内质网应激蛋白GRP78和CHOP表达于6h开始增加,24h达到峰值,随后呈下降趋势.结论:应用衣霉素成功诱导SD乳鼠心肌细胞内质网应激凋亡模型,衣霉素的佳诱导浓度为100ng/ml,作用时间为72h.
