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环磷酰胺处理致小鼠睾丸支持细胞去分化抑制精子发生
目的 研究环磷酰胺对小鼠支持细胞的影响.方法 睾丸组织切片的苏木素-伊红(HE)染色观察环磷酰胺对睾丸支持细胞的影响,通过免疫组织化学和细胞化学分析检测支持细胞中CK-18等的表达,通过Western-blot法检测ERK1/2的表达.结果 环磷酰胺处理导致小鼠支持细胞凋亡和数量减少,残存的支持细胞去分化,去分化的支持细胞中的ERK1/2-MAPK信号通路被激活.结论 环磷酰胺处理活化了ERK1/2-MAPK信号通路并诱导支持细胞去分化.
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131I SPECT/CT显像结果、血浆Tg与甲状腺癌去分化的相关性研究
目的:SPECT/CT可同时进行CT和SPECT检查,实现了解剖学图像和功能图像的同机融合,本研究回顾性分析197例次在本院核医学科接受131I治疗的分化型甲状腺癌(DTC)患者的影像学资料(131I SPECT/CT、131I全身显像、和FDG SPECT/CT显像)及血浆Tg、TSH测定结果,探讨131I SPECT/CT融合图像对分化型甲状腺癌疾病疾病进程和去分化的判断价值,以期指导临床施治.材料与方法:(1)对象:98位2001年3月至2007年12月期间在我院核医学科接受131I治疗的分化型甲状腺癌(DTC)患者的197例次影像学资料,乳头状癌77例,滤泡癌15例,滤泡乳头混合性癌6例.197例次131I显像结果和断层SPECT显像结果,13例次同期FDG显像结果,大部分患者具有同期血浆Tg和TSH测定结果.(2)方法:分化型甲状腺癌患者停服T4四周,治疗前测定血浆TSH和Tg水平.患者口服131I后5～7天做全身平面显像(131I全身显像)和局部131I SPECT/CT断层显像.结合患者的临床表现,综合分析患者同期的各项影像学检查结果(131I SPECT/CT断层显像、18F-FDG显像、CT、B超、MRI等)及血浆甲状腺球蛋白测定值,对患者是否发生分化型甲状腺癌术后转移复发进行判断,并以此做诊断结果.血浆Tg水平诊断肿瘤复发转移的判断阈值为>10 ng/ml.(3)131I影像学分期标准:不同于DTC的临床分期,根据图像显示的病灶摄取量、位置、数量及波及范围将病人分为4个期别:Ⅰ-摄取范围局限于甲状腺床;Ⅱ-甲状腺床+颈部淋巴结摄取或甲状腺床+纵隔淋巴结摄取;Ⅲ-颈部淋巴结或纵隔淋巴结摄取+肺摄取;Ⅳ-颈部淋巴结和纵隔淋巴结+肺部弥漫性摄取,或,颈部淋巴结和纵隔淋巴结+骨等其它脏器摄取.(4)统计学分析方法:SPSS软件包和EXCEL统计表,非参数秩合检验和相关性分析.结果:以Tg血浆水平>10 ng/ml做为肿瘤复发转移判断界值的灵敏度为85.6%,特异性为66%,准确度为66%.阳性预测值为77%.阴性预测值为50%;131I WBS显像诊断的灵敏度为83%,特异性为84%,准确度为83%.阳性预测值为93%.阴性预测值为67%;131I SPECT/CT显像诊断的灵敏度为95%,特异性为84%,准确度为92%.阳性预测值为94%.阴性预测值为87%;ROC曲线分析131I SPECT/CT显像的诊断效能较高;血浆甲状腺球蛋白水平与131I SPECT/CT断层显像的影像学分期呈正相关关系.结论:131I SPECT/CT融合图像结果,改善了病灶的定位,使对肿瘤分期和预后评价更趋准确,为临床正确施治提供了有力帮助.
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去分化用于细胞治疗的前景与展望
去分化是一种重要的细胞生物学现象,在体和离体环境下均可发生.去分化后得到的细胞具有未分化细胞的特征.去分化的过程较为复杂,涉及细胞自噬、细胞结构再循环等一系列生物学行为.越来越多的研究证实细胞去分化与细胞更新、组织再生和肿瘤发生等有着密切联系.
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毛囊神经干细胞促进受损大鼠视神经大胶质细胞去分化
目的 培养毛囊神经干细胞,研究其对受损视神经大胶质细胞去分化的影响. 方法 取约90g雄性SD大鼠触须垫毛囊隆突区贴块,无血清培养或经15%胎牛血清诱导培养毛囊隆突区细胞,用免疫荧光细胞化学和PCR鉴定;以含增强型绿色荧光蛋白的腺相关病毒(rAAV2-EGFP)稳定转染该细胞.成年雄性SD大鼠54只,分为正常对照组、损伤组、移植组,移植组为视神经损伤后移植上述毛囊神经干细胞.转染细胞移植组术后7d、14d、30d,取视神经荧光显微镜下观察;损伤组和未转染细胞移植组术后7d取术侧视神经行Affymetrix基因芯片及实时荧光定量PCR检测,术后7d、14d取术侧视神经行HE、免疫组织化学检测. 结果 成功培养出神经前体细胞标记分子阳性的毛囊神经干细胞,诱导后该细胞可表达成熟神经细胞标记分子.毛囊神经干细胞移植到受损视神经30 d后,仍能存活和迁移.与损伤组相比,移植组差异表达基因有240条,其中一些与去分化相关,如干细胞、凋亡、增殖、信号转导、转录、分化发育、细胞黏附等相关基因,实时荧光定量PCR与基因芯片结果基本相符.移植组视神经远侧段细胞数较损伤组明显增多,巢蛋白、髓鞘碱性蛋白(MBP)、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)表达增加,胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达减少,且视神经近侧段神经丝(NF)表达增加. 结论 毛囊神经干细胞通过调节受损视神经中的一些基因表达,促进了其大胶质细胞去分化并向有利于神经再生方向变化.
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大鼠视神经损伤后大胶质细胞去分化及预变性腓总神经的诱导
目的 研究视神经损伤后神经胶质细胞的去分化及其诱导.方法 成年雄性SD大鼠,分为正常对照组、损伤组、移植组和压榨移植组,在视神经伤后3d、7d、14d和28d 4个不同时相点取视神经,用HE方法计数细胞数量,用免疫组织化学、免疫印迹、原位杂交组织化学结合计算机图像分析检测巢蛋白(Nestin)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、髓鞘碱性蛋白(MBP)、神经丝(NF)、脑源性神经营养因子(BDNF)、Nogo-A及Nogo-A mRNA的表达,用免疫荧光双标组织化学法检测Nestin-GFAp和Nestin-MBP的共表达.结果 损伤组细胞数量仅在伤后7d明显增多,Nestin、MBP、Nogo-A及其mRNA表达上调,GFAP、NF、BDNF下调,出现一些Nestin.GFAP双标细胞和少量Nestin-MBP双标细胞;与损伤组相比,移植组和压榨移植组一些时相点的细胞数量不同程度地增多,Nestin、GFAP、BDNF和NF表达上调,MBP、Nogo-A及其mRNA表达下调,Nestin-GFAP双标细胞有所增加,且28d组高于14d组.结论 视神经损伤后,主要是星形胶质细胞发生去分化,大胶质细胞呈现一些不利于神经再生的基因表达变化;移植预变性周围神经能进一步诱导星形胶质细胞去分化,大胶质细胞的一些基因表达变化有利于神经再生.
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睫状神经营养因子调节受损视神经胶质细胞去分化相关基因的表达
目的 探讨睫状神经营养因子(CNTF)对受损视神经胶质细胞去分化的作用及机制.方法 将65只SD大鼠随机分为对照组、损伤组和CNTF组,制备视神经损伤及损伤后添加CNTF的动物模型.术后7、14 d取术侧视神经损伤远侧段,分别用基因芯片检测其基因表达谱,实时荧光定量PCR、免疫组织化学、HE染色等方法检测相关基因、蛋白表达和细胞数量的变化.结果 术后7 d,与损伤组相比,CNTF组筛选出608条表达上调和417条表达下调的差异基因,包括染色质构型、转录调节、神经干细胞、神经分化和发育、增殖凋亡、离子通道、受体、信号转导等相关基因.实时荧光定量PCR结果验证了基因芯片结果的可靠性.CNTF组视神经损伤远侧段细胞数量增多,远侧段Nestin、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、髓鞘碱性蛋白(MBP)、细胞外信号调节激酶1/2(Erk1/2)和近侧段神经丝(NF)阳性物质增多.结论外源性CNTF通过调节受损视神经大胶质细胞的去分化相关基因及蛋白的表达,促进了胶质细胞的去分化和轴突再生.
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碱性成纤维细胞生长因子诱导大鼠受损视神经胶质细胞去分化
目的 研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)促进大鼠受损视神经修复及诱导胶质细胞去分化的机制.方法 成年SD大鼠55只随机分为正常对照组、损伤组、bFGF组.术后7d取眶内段视神经行Agilent基因芯片、实时荧光定量PCR检测;术后7d、14d取眶内段视神经行HE、免疫组织化学等检测.结果 术后7d,bFGF组与损伤组相比有645条基因上调,458条下调,其中包括与神经干细胞或前体细胞及神经发育、增殖凋亡、染色质构型、转录调节、信号转导、神经生长相关基因等.与损伤组相比,bFGF组受损视神经远侧段细胞核增大,细胞数量增加, 巢蛋白、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、髓鞘碱性蛋白(MBP)阳性物质增加,近侧段神经丝(NF)阳性物质增加.结论 外加bFGF能促进受损视神经细胞增殖,增强神经胶质细胞去分化变化,同时改善神经再生的抑制性微环境,促进视神经再生.
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斑马鱼视网膜再生研究进展
哺乳动物视网膜损伤后仅有非常有限的自我修复能力.与哺乳动物不同,硬骨鱼类如斑马鱼的视网膜则具有旺盛的再生能力.斑马鱼视网膜损伤后,能够再生其丢失的所有类型的神经元和胶质细胞,并恢复大部分视力.研究表明,斑马鱼视网膜再生的细胞来源是Müller细胞.近年来,关于斑马鱼视网膜Müller细胞去分化及其增殖的分子机制和信号通路的研究取得了许多新的进展.我们就斑马鱼视网膜再生的研究历史、损伤模型和再生细胞来源以及调控的分子机制等做一综述.
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调控肝再生的基因和生长因子的研究进展
肝脏是哺乳动物具有很强再生能力的器官.随着分子生物学理论和实验技术的不断发展,尤其是1931年Higgins和Anderson建立了大鼠2/3肝切除模型后,人们可以在实验肝脏学基础上研究肝再生的分子机理,极大地促进了有关研究的发展[1].现在知道,肝再生涉及到细胞的激活、去分化、增殖、再分化、组织结构和功能重建等不同阶段,且每个阶段的进程都受到严格调控.与之有关的基因、生长因子和蛋白质等也在不断地被发现和鉴定,我们在本文中就与肝再生有关的基因和生长因子作一简要介绍.
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哺乳动物神经细胞的去分化及诱导
去分化是近年来细胞生物学,特别是新兴的干细胞生物学领域一个倍受关注的课题.大量实验证明,哺乳动物神经系统中各类神经细胞(如神经元、Schwann细胞、星形胶质细胞、少突胶质细胞等)在适当条件下均可发生不同程度的以细胞幼稚化、重新进入细胞周期和获得多向分化的潜能为主要特征的去分化表现.本文就哺乳动物各类神经细胞的去分化及其诱导条件、对神经再生修复等的作用作一综述.
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去分化软骨肉瘤12例临床特征分析
目的 探讨去分化软骨肉瘤的临床表现、影像学、病理学特点.方法 选取2002-2014年间确诊去分化软骨肉瘤12例,对其临床表现、放射学改变、病理形态学资料进行回顾性分析.结果 男性8例,女性4例,年龄21 ～63岁,平均48岁,发病部位为股骨4例、胫骨3例、肱骨2例、骨盆1例、肩胛骨1例、掌骨1例;主要临床症状为疼痛、肿胀,局部可触及肿块,1例患者因病理性骨折就诊.去分化软骨肉瘤表现为双重形态特征的恶性肿瘤,中央型多于周围型,组织学由分界清楚的高分化软骨性肿瘤和高级别间变性肉瘤构成.结论 去分化软骨肉瘤较少见,结合影像及组织病理形态特征对去分化软骨肉瘤的诊断及治疗有重要意义.
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甲状腺去分化型乳头状癌1例
患者男性,57岁.颈部肿物缓慢增大15年,近来生长较快.B超示甲状腺右叶增大,轮廓失常,内可见2.7 cm×1.7 cm×l.4cm大小团块,呈低、强回声及少量无回声,边界较清,内未见血流信号,强回声后方伴声影;右叶近峡部可见0.5 cm ×0.3 cm大小低回声,边界清,内未见血流信号,左叶可见0.5 cm ×0.3 cm大小无回声,边界清,内未见血流信号,峡部厚0.5 cm;两侧颈部未见肿大淋巴结影像.血清总T3略高,其余各项均正常.临床诊断:结节性甲状腺肿.术中发现右叶一3 cm×1.5 cm大小肿物,质硬,无包膜,与周围组织略有粘连;左叶一0.5 cm ×0.3 cm大小结节.
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肿瘤的去分化与转分化
近年对肿瘤的研究发现,肿瘤细胞具有去分化与转分化的能力,能复活胚胎发育基因和干细胞.肿瘤的去分化和转分化与肿瘤的发生、发展及浸润和转移密切相关.肿瘤的分化障碍不只是指肿瘤细胞分化程度降低,还应该包括肿瘤的去分化和转分化.
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去分化软骨肉瘤12例的临床表现、影像学及病理学分析
目的 探讨去分化软骨肉瘤的临床表现、影像学、病理学特点及分析.方法 选取2002～2014年间确诊去分化软骨肉瘤12例,对其临床表现、放射学改变、病理形态学资料进行回顾性分析.结果 男8例,女4例,年龄范围在21～63岁,平均年龄48岁,发病部位为股骨4例、胫骨3例、肱骨2例、骨盆1例、肩胛骨1例、掌骨1例;主要临床症状为疼痛、肿胀,局部可触及的肿块,1例患者因病理性骨折就诊.去分化软骨肉瘤表现为双重形态特征的恶性肿瘤,大体中央型多于周围型,组织学由分界清楚的高分化软骨性肿瘤和高级别间变性肉瘤构成.结论 去分化软骨肉瘤较少见,临床结合影像及组织病理形态特征对去分化软骨肉瘤的诊断及治疗有重要意义.
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反义IGF-Ⅰ寡核苷酸转染对人肝癌细胞生长的抑制作用
目的:利用反义核酸技术,研究体外胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)反义寡核苷酸转染对肝癌细胞增生、分化及凋亡的影响,探讨寡核苷酸转染治疗肝癌的可行性.方法:合成针对IGF-Ⅰ的寡核苷酸片段,利用脂质体包裹反义IGF-Ⅰ寡核苷酸片段瞬时转染人肝癌细胞系BEL-7402细胞,MTT法检测细胞增生;放免法检测培养细胞上清中AFP,CEA的分泌量;免疫组化法检测转染细胞AFP,PCNA表达的变化;采用末端标记(Tunel)法检测细胞凋亡的变化.结果:MTF法检测转染反义IGF-Ⅰ寡核苷酸的人肝癌细胞系BEL-7402A值由0.44±0.09下降为0.30±0.07(P＜0.01),上清液AFP和CEA水平分别由12.5±2.2 μg/L和6.8±2.3μg/L下降为2.5±0.3μg/L和2.2±1.5μg/L(P＜0.01,P＜0.05),凋亡阳性细胞数由16.4±2.3%增加至23.1±3.7%(P＜0.05).结论:反义IGF-Ⅰ寡核苷酸转染人肝癌细胞系BEL-7402细胞可以降低细胞增生,减少细胞去分化并诱导肝癌细胞凋亡.
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2型糖尿病的胰岛β细胞衰竭新机制--胰岛β细胞去分化
T2DM是以IR和胰岛β细胞功能衰竭为主要病理生理基础的慢性代谢性疾病。胰岛β细胞凋亡增加和去分化均是导致胰岛β细胞功能衰竭的机制。但近年来研究显示，胰岛β细胞去分化可能较细胞凋亡在T2DM中更为重要。叉头框转录因子O 亚族1（FoxO1）缺乏是导致胰岛β细胞去分化主要原因。而进一步研究发现，胰岛β细胞去分化的过程是可逆的，这为预防和治疗T2DM提供更多的思路和可能。
关键词： 糖尿病 2型 胰岛β细胞衰竭 叉头框转录因子O亚族1 去分化 -
抑瘤素M在心肌再生中的功能机理
目前心血管疾病已然成为中国居民死亡的重要因素.由于人的心肌受损后不能再生,因而对于罹患心梗、心衰等疾病的患者来说,诱导受损心肌再生是一种潜在的治疗方案.若能使受损心肌再生从而大限度地恢复心脏结构和生理上的完整性,必会为广大患者带来福音.有研究报道抑瘤素M能够促进心肌细胞分泌促使巨噬细胞向心肌受损位置迁移的胰岛再生源蛋白3β并可以介导心肌的去分化.这就需要我们深入研究OSM的作用机理,了解OSM是通过怎样的方式使心肌再生的.
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上皮细胞分化紊乱导致创伤性假性上皮瘤样增生病变形成
目的:创伤早期处理不当可继发罕见的假性上皮瘤样增生(PEH).本研究探讨创伤愈合过程中上皮细胞异常分化与PEH发生之间的关系.方法:将来自临床11例因创(烧)伤继发PEH病变(n=11)及其边缘正常皮肤(PEH-N,n=6)标本,采用组织病理学和电子显微镜技术观察PEH上皮组织形态改变,并结合免疫组化技术,观察人广谱角蛋白(p-CK)、Ⅳ型胶原、层粘连蛋白(LN)及其受体(LN-R)、β1-整合素、上皮性钙粘蛋白(E-Cad)、β-连环蛋白(β-Cat)、粘着斑激酶(FAK)、细胞间粘附分子-1(ICAM-1)和增殖细胞核抗原(PCNA)在PEH组织中定位和分布特征.结果:与PEH-N组相比,PEH呈现鳞状上皮不典型增生,可见上皮基底细胞脱落;超微结构显示上皮细胞变形,核浆比增加,细胞间连接松解,新形成的肿瘤样细胞从上皮细胞原位"脱壳"样迁移;相同部位免疫组化显示基底细胞p-CK、Ⅳ型胶原、LN和LN-R、E-Cad和ICAM-1表达能力丧失或显著减弱,但β-Cat、FAK、β1-整合素和PCNA的免疫反应性增强,深层间质内肿瘤样细胞恢复p-CK、CK19、E-Cad和ICAM-1的免疫活性,成堆聚集或增殖后形成实变的上皮岛.结论:本研究首次揭示创伤性PEH上皮细胞存在去分化后再分化现象,是上皮反应性增生及其良性病变的重要特征.局部炎症感染因素的刺激,导致上皮细胞缺失ICAM-1和E-Cad以及对FAK和β-Cat的过度反应,特别是基底细胞上β-Cat/E-Cad高信号落差,可能是上皮细胞丧失分化和结构形成能力、完成细胞迁移的重要机制.
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DNA损伤在去分化源性表皮干细胞安全性评价中的作用及相关机制的研究
目的：：从分子、细胞及在体水平评估DNA损伤和非 DNA 损伤因素诱导所得去分化源性表皮干细胞的安全性,探讨DNA损伤及其应答分子对其安全性评估的意义与机制。方法：分别采用紫外线(UV)照射和bFGF处理诱导方案诱导表皮细胞去分化。采用 MTT法比较正常培养和血清培养条件下的两组去分化源性表皮干细胞的增殖能力；流式细胞术检测凋亡情况；Western blotting检测各组去分化过程中DNA损伤应答分子γ-H2AX、激活型 caspase、p53、p21表达的变化；在雌性BALB/c裸小鼠右侧腋窝皮下注射人黑色素瘤细胞及两种去分化源性表皮干细胞,同时设生理盐水注射对照,30 d 后取瘤块称重,评估两种去分化源性干细胞的成瘤性。结果：①两种去分化源性表皮干细胞均表现出较强的增殖能力,UV 照射所得干细胞具有较强的血清耐受性；②UV照射可导致表皮细胞DNA损伤和细胞凋亡,影响表皮细胞中 p53和 p21水平,而 bFGF处理组无此作用；③两种去分化源性表皮干细胞均无体内成瘤性。结论：去分化过程中细胞 DNA 损伤与否是评价去分化源性干细胞安全性的较敏感的关键指标,因此 bFGF处理诱导与 UV照射所得的表皮干细胞相比更为安全可靠。
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热损伤与碱性成纤维细胞生长因子联合处理诱导表皮细胞去分化的实验研究
目的:体外建立表皮细胞去分化模型,为深入阐明表皮细胞去分化过程奠定基础.方法:离体条件下选择热损伤与碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)作为联合诱导因素处理成熟表皮细胞.通过Giemsa染色和电镜观察细胞形态的改变;通过细胞培养和滋养层培养体系观察细胞的增殖能力,包括克隆形成和复层生长情况;采用器官培养体系体外构建三维皮肤,观察细胞再分化形成表皮情况;应用基因芯片技术观察细胞基因表达的改变.结果:经联合诱导后,细胞形态发生改变,表现为体积减小,细胞器数目减少,核浆比增大.增殖和再分化能力的改变体现在诱导后的表皮细胞能形成克隆,在滋养层培养条件下可以形成复层生长,并能够在体外构建出包括基底层和基底上层在内的表皮结构.基因水平的改变表现为与角质化相关基因下调和与有丝分裂相关基因上调.结论:在热损伤与bFGF联合诱导下,已分化的表皮细胞会发生形态、功能和基因表达的改变,表现为干细胞的特性.
