首页 > 文献资料
-
高效液相色谱法测定吴茱萸提取物中吴茱萸碱、吴茱萸次碱及吴茱萸内酯的含量
目的:建立以高效液相色谱法测定吴茱萸提取物中吴茱萸内酯、吴茱萸碱及吴茱萸次碱含量的方法.方法:十八烷基键合硅胶柱,流动相乙腈-水-四氢呋喃-乙酸(51:48:1:0.1).检测波长210nm.结果:3种成分能很好的分离.吴茱萸内酯、吴茱萸碱和吴茱萸次碱的线性范围分别为:0.866～2.599μg·ml-1(r=0.9999)、0.419～1.258μg·ml-1(r=0.9999)、0.407～1.707μg·ml-1(r=0.9995).平均回收率吴茱萸内酯(%)为97.01(n=5),RSD(%)为1.68;吴茱萸碱(%)为99.74,RSD(%)为0.17;吴茱萸次碱(%)为99.01(n=5),RSD(%)为0.24.结论:方法简便快速,重现性好.
-
反相高效液相色谱法同时测定复方木香小檗碱片中吴茱萸碱和吴茱萸次碱的含量
目的 建立复方木香小檗碱片中吴茱萸碱与吴茱萸次碱含量测定的方法 .方法 采用RP-HPLC法,ODS2柱 (250 mm×4.6 mm,5 μm),以乙腈-水(39:61)为流动相;流速为1.0 mL·min-1;检测波长为225 nm;柱温为35 ℃;进样量为20 μL.结果 吴茱萸碱在2.096～10.480 μg·mL-1与峰面积有良好的线性关系,其平均回收率为98.76%,方法 精密度(RSD)为1.68%(n=6);吴茱萸次碱在2.816～14.080 μg·mL-1与峰面积有良好的线性关系,其平均回收率为99.54%,方法 精密度(RSD)为1.93%(n=6).结论 所建立的方法 简便易行、准确可靠,可用于复方木香小檗碱片中吴茱萸碱与吴茱萸次碱的含量测定.
-
吴茱萸汤复方颗粒定性定量方法研究
目的 建立吴茱萸汤复方颗粒的定性定量方法.方法 采用薄层色谱法(TLC)对方中吴莱萸、生姜、人参3味药材饮片进行定性鉴别;采用高效液相色谱法(HPLC)对吴莱萸碱和吴茱萸次碱进行定量测定,色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18(4.6 mm×150 mm,5 μm),以乙腈(A)-水(B)(51∶49)为流动相,流速0.8mL·min-1,检测波长256 nm,柱温25℃;采用HPLC法对人参皂苷Re和人参皂苷Rb1进行定量测定,色谱柱为Agilent Zorbax TC-C18(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈(A)-水(B)为流动相进行洗脱(0～35 min,19％A;35～55 min,19％～29％A;55～70 min,29％A;70～100 min,29％～40％A),流速1 mL·min-1,检测波长203 nm,柱温25℃.结果 TLC斑点清晰,分离度良好,阴性无干扰;吴莱萸碱在0.041～1.02 μg与峰面积线性关系良好,r=1.000;吴茱萸次碱在0.041～1.03μg与峰面积线性关系良好,r=0.9999;人参皂苷Re在0.298～7.438 μg与峰面积线性关系良好,r=1.000;人参皂苷Rb1在0.300～7.509 μg与峰面积线性关系良好,r=1.000;平均回收率分别为99.3％、96.3％、100.5％、100.6％,RSD分别为1.3％、0.51％、1.2％、2.1％(n=6).结论 建立的方法简便、专属性强、结果准确,可作为吴茱萸汤复方颗粒的质量控制标准.
-
不同采收期对吴茱萸品质的影响
目的 考察吴茱萸不同采收期的主要成分的差异,为吴茱萸药材合理利用提供参考.方法 应用HPLC方法测定吴茱萸果实中吴茱萸内酯、吴茱萸碱和吴茱萸次碱的含量,以此为指标考察不同采收期药材主要成分的变化规律.结果 吴茱萸品种随成熟期不同,生物碱含量呈先升高、再保持稳定、后随药材的老熟而呈降低的趋势.结论 湖南浏阳地区吴茱萸的佳采收期是8月底,湖南浏阳地区石虎的佳采收期是9月初,广西柳城地区疏毛吴茱萸的佳采收期是8月中下旬,广西桂林地区疏毛吴茱萸的佳采收期是8月中旬.
-
肠康片定性定量方法的研究
目的 研究肠康片的定性定量方法.方法 采用薄层色谱法对肠康片中木香进行定性鉴别,采用高效液相色谱法对肠康片中吴茱萸进行定性鉴别,并采用高效液相色谱法对盐酸小檗碱进行含量测定.结果 薄层色谱分离清晰,阴性样品无干扰.运用高效液相色谱法能检出吴茱萸中所含的吴茱萸碱和吴茱萸次碱,阴性样品无干扰.盐酸小檗碱在0.038 76～0.969 2μg线性良好,r=0.999 8,平均回收率为101.9％,RSD=1.6％(n=6).结论 本方法专属性强,灵敏度高,重现性好,能更好地对肠康片进行质量控制.
-
吴茱萸化学成分研究
目的研究吴茱萸的活性成分.方法用硅胶色谱技术和重结晶等方法分离化学成分,用IR、NMR和 MS等波谱方法确定其结构.结果获得4个化合物,分别鉴定为吴茱萸碱(Ⅰ)、吴茱萸次碱( Ⅱ)、吴茱萸内酯(Ⅲ)和羟基吴茱萸碱(Ⅳ).结论首次系统归属吴茱萸碱和吴茱萸次碱的波谱数据
-
吴茱萸碱和吴茱萸次碱体外微透析回收率的测定
目的:研究吴茱萸碱和吴茱萸次碱微透析探针体外回收率及传递率与流速、药物浓度之间的关系.方法:浓差法(正、反向透析法)考察流速及药物浓度对微透析探针的体外回收率和传递率的影响,以HPLC法测定微透析样品中EVO、RUT浓度.结果:探针体外回收率与传递率基本一致,均与灌流速度成反比,药物浓度对其影响不大.结论:在吴茱萸碱和吴茱萸次碱的药动学研究中,可采用反透析法作为探针回收率的测定方法.
-
离子对色谱法同时测定吴茱萸中的辛弗林、吴茱萸碱和吴茱萸次碱的含量
目的 建立一种能同时测定吴茱萸中辛弗林、吴茱萸碱和吴茱萸次碱含量的离子对色谱方法.方法 采用甲醇超声提取方法制备样品.以乙腈-含0.03%十二烷基磺酸钠(SDS)的2%醋酸为流动相,检测波长为260 nm.结果 辛弗林、吴茱萸碱和吴茱萸次碱都获得了良好的分离效果,其平均回收率分别为101.4%、97.6%和98.5%.RSD分别为3.1%、1.6%和1.3%(n=6).结论 本法适用于吴茱萸药材中辛弗林、吴茱萸碱和吴茱萸次碱的同时分析,为吴茱萸药材的质量评价提供了更好的技术手段.
-
不同来源吴茱萸药材质量的比较
目的 以吴茱萸碱、吴茱萸次碱、柠檬苦素、水分、灰分、浸出物为考察指标,评价28批湖南省道地药材吴茱萸的质量.方法 参照2010版《中国药典》吴茱萸项下的要求,对吴茱萸药材的水分、总灰分、酸不溶灰分、醇溶性浸出物、吴茱萸碱和次碱、柠檬苦素等方面进行测定.结果 测得28批吴茱萸药材的水分为3.65％～9.11％,总灰分为4.85％～8.80％,乙醇浸出物为31.66％～55.09％,吴茱萸碱和吴茱萸次碱的总碱含量为0.025％～1.249％,柠檬苦素含量为0.607％～4.763％.结论 产地和品种对吴茱萸药材质量有一定的影响.
-
吴茱萸碱抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖及对细胞外信号调节激酶-1表达的影响
目的 明确吴茱萸碱对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的抑制作用及对细胞外信号调节激酶-1(ERK-1)和丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1(MKP-1)表达的影响.方法 贴壁法培养大鼠胸主动脉VSMC,MTT比色法测定吴茱萸碱对AngⅡ诱导大鼠VSMC增殖的抑制作用,Real-time PCR检测VSMC中增殖细胞核抗原(PCNA)、ERK-1和原癌基因c-myc mRNA的表达,Western blot检测VSMC中MKP-1蛋白的表达.结果 吴茱萸碱0.1μmol/L和1.0μmol/L明显抑制AngⅡ(1.0μmol/L)诱导VSMC光密度值的增加(P ＜0.05,P＜0.01),抑制AngⅡ上调ERK-1 (P ＜0.01)、PCNA(P ＜0.05)和c-myc mRNA(P＜0.05)的表达,上调MKP-1蛋白的表达(P＜0.05,P＜0.01).结论 吴茱萸碱明显抑制AngⅡ诱导的VSMC增殖,其机制与下调ERK mRNA、上调MKP-1蛋白的表达有关.
-
吴茱萸次碱的母核构像与辣椒素受体有关的药理作用的选择性关系初步研究
目的 吴茱萸碱和吴茱萸次碱是中药吴茱萸中的主要生物碱成分,二者可以通过激活辣椒素受体(TRPV1)释放CGRP达到舒张血管降低血压的作用.本课题研究了吴茱萸次碱的母核构像与辣椒素受体有关的药理作用的选择性关系.方法 本研究设计、合成了两个5-脱氧吴茱萸次碱的类似物,并分别测试它们对动脉环和气管环的影响.结果 这两个化合物均能产生弱于吴茱萸次碱的舒张血管作用,且它们与吴茱萸次碱一样不能产生任何支气管收缩作用.结论 计算机模拟显示这两个化合物有着与吴茱萸次碱类似的近平面结构,而这种近平面的结构可能是它们不能产生支气管收缩作用的原因.实验结果为研究TRPV1亚型,开发新一代以TRPV1为靶点的低副作用的抗高血压药物指出了新的方向.
-
吴茱萸碱对小鼠免疫功能的调节作用
目的:研究吴茱萸碱对小鼠胸腺、脾淋巴细胞增殖、凋亡及生物功能的影响.方法:处死8周龄雄性c57BI/6小鼠,取胸腺、脾组织研磨过滤为单细胞悬液,MTT法测定ConA诱导的脾和胸腺淋巴细胞增殖活性,ELISA法测定培养早清液IL-2、IL-12活性,RT-PCR法检测0.75 μmol/L吴茱萸碱处理细胞的Bcl-2和CDK2基因mRNA水平,流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡率、死亡率和细胞内ROS水平,荧光显微镜检测Bcl-2、CDK2、Bax蛋白表达率.结果:MTT显示当浓度≥0.5 μmol/L时,吴茱萸碱在24、48和72 h均明显抑制小鼠ConA诱导的胸腺、脾淋巴细胞增殖(P<0.05);ELISA结果显示吴茱萸碱处理的小鼠脾和胸腺细胞释放IL-2、IL-12的功能较对照组明显减低(P<0.05);RT-PER显示0.75 μmo/L的吴茱萸碱处理后细胞Bcl-2和CDK2的mRNA水平较对照组明显升高.与对照组相比,0.75 μmol/L吴茱萸碱在6、12、24 h均可诱导小鼠胸腺细胞、脾细胞明显凋亡(P<0.05).12 h双氢二绿荧光黄(DCF)阳性的细胞百分比明显高于对照组,但24和48 h药物组罗丹明阳性的细胞百分比与对照组无明显差异,但药物处理组细胞出现大小不一的两群细胞,直方图呈双峰,其中一群细胞DCF呈阴性.结论:吴茱萸碱可通过Bcl-2、CDK2上调,抑制小鼠体外培养的脾和胸腺淋巴细胞增殖诱导其凋亡,同时细胞分泌IL-2和IL-12的生物活性亦明显下降,细胞内ROS水平增高,但随着药物处理时间的延长,细胞死亡率升高,死亡细胞内ROS水平明显降低.
-
吴茱萸中吲哚喹唑啉类生物碱和吴茱萸内酯的质谱裂解分析
目的:应用ESI-MS-MS技术分析吴茱萸中吲哚喹唑啉类生物碱和吴茱萸内酯的质谱断裂.方法:在正离子模式下,以电喷雾离子源分析吴茱萸中生物碱的一级和二级质谱图.结果:解析了吲哚喹唑啉类生物碱和吴茱萸内酯的二级质谱碎片.结论:获得了吴茱萸中主要活性成分生物碱的质谱断裂特点,为吴茱萸质量标准及其生物碱类化学成分研究提供依据.
-
吴茱萸药材中吴茱萸碱及吴茱萸次碱的超声提取中试研究
目的:探索吴茱萸药材中吴茱萸碱及吴茱萸次碱的超声提取中试工艺研究.方法:以吴茱萸碱及吴茱萸次碱为指标,运用中试型超声提取设备提取吴茱萸碱及吴茱萸次碱,研究提取时间、提取温度、乙醇浓度对提取率的影响,并与常规回流提取比较.结果:中试型超声提取吴茱萸碱及吴茱萸次碱佳的工艺条件为提取温度60℃,超声时间80 min,提取溶剂70%乙醇,液固比15∶1(ml/g).结论:中试型超声提取吴茱萸碱及吴茱萸次碱具有提取温度低、提取时间短、节省能耗、降低生产成本等方面的优点.
-
基于物质基础研究甘草用量对吴茱萸和制吴茱萸煎出率的影响
目的: 考察吴茱萸用甘草炮制前后,其有效成分含量以及水煎出率的差异,探索甘草与吴茱萸配伍比例与煎出率的关系.方法: 以吴茱萸有效成分吴茱萸内酯、吴茱萸碱和吴茱萸次碱为研究对象,采用HPLC-DAD 检测吴茱萸用甘草炮制前后有其效成分含量变化,以及不同比例甘草与吴茱萸同煎有效成分煎出率,并绘制有效成分煎出量与甘草比例的关系曲线.结果: 甘草制吴茱萸后,有效成分吴茱萸内酯、吴茱萸碱含量均有下降,但煎出率显著升高; 吴茱萸和制吴茱萸水煎液中吴茱萸内酯煎出率分别为5. 317 和6. 451％,吴茱萸碱煎出率分别为0. 166％和0. 437％,吴茱萸次碱煎出率均为0; 甘草与吴茱萸同煎组,甘草比例小于1∶3 时,吴茱萸内酯煎出率较不加甘草组高,比例在小于1∶2 时,吴茱萸碱煎出率较不加甘草组高; 而制吴茱萸各组,加入甘草组吴茱萸内酯和吴茱萸碱煎出率均小于不加甘草组.结论: 甘草炮制吴茱萸有利于有效成分吴茱萸内酯、吴茱萸碱的煎出; 吴茱萸次碱水煎不能煎出,可能为"外用吴茱萸有降压作用,而水煎内服无此作用"的科学解释; 制吴茱萸与甘草配伍会降低吴茱萸有效成分的煎出,建议临床配伍慎用.
-
HPLC同时测定吴茱萸配方颗粒中4种成分的含量
目的:建立HPLC法同时测定吴茱萸配方颗粒中绿原酸、柠檬苦素、吴茱萸碱和吴茱萸次碱4种成分的含量.方法:Wondasil C1s色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:甲醇-乙腈-0.1％磷酸溶液,梯度洗脱;流速:1.0 mL/min;柱温:30 ℃;检测波长:绿原酸为327 nm,柠檬苦素、吴茱萸碱、吴茱萸次碱为225 nm.结果:绿原酸、柠檬苦素、吴茱萸碱和吴茱萸次碱的进样量分别在0.1070～1.2840 μg(r1=0.9999)、0.0889 ～ 1.0668 μg(r2=0.9999)、0.0126 ～0.1512 μg(r3 =0.9999)、0.0128 ～0.1536 μg(r4=1.0000)范围内与峰面积呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为101.50％、97.16％、96.71％、97.35％.结论:该实验所建立的吴茱萸配方颗粒含量测定方法稳定性、重复性良好,可为其质量控制和评价提供参考.
-
吴茱萸碱抑制Huh7细胞生长并增强细胞对TRAIL的敏感性
目的:探讨吴茱萸碱对人肝癌Huh7细胞生长和凋亡的影响,阐明吴茱萸碱促进肿瘤坏死因子凋亡诱导配体(TRAIL)抗肿瘤活性的分子机制.方法:MTT 法检测吴茱萸碱对Huh7细胞活力的影响;流式细胞术观察吴茱萸碱对细胞周期的阻滞;TUNEL染色法检测细胞凋亡的变化;Western blot实验测定细胞内细胞周期和凋亡相关蛋白的表达水平.结果:Huh7细胞经吴茱萸碱处理后,细胞活力明显下降(P<0.05);同时,细胞发生G2/M期阻滞,p27、cyclin B1、细胞分裂周期蛋白2(Cdc2)和p-Cdc2的蛋白水平上调(P<0.05);吴茱萸碱能够诱导Huh7细胞发生凋亡,促进多聚ADP核糖聚合酶(PARP)和caspase-3的切割.当吴茱萸与TRAIL联用后,Huh7细胞活力明显下降,PARP和caspase-3的切割增加;另外,吴茱萸上调Huh7细胞中死亡受体5(DR5)的蛋白水平.结论:吴茱萸碱通过抑制细胞活力和阻滞细胞周期于G2/M期而抑制细胞生长,并诱导Huh7细胞发生凋亡;上调DR5的表达水平可能与吴茱萸碱增强Huh7细胞对TRAIL的敏感性相关.
关键词： 吴茱萸碱 细胞周期 细胞凋亡 肿瘤坏死因子凋亡诱导配体 死亡受体5 -
微透析联用高效液相色谱法研究吴茱萸碱和吴茱萸次碱经皮吸收方法的建立
目的 建立吴茱萸碱(EVO)和吴茱萸次碱(RUT)的大鼠在体皮肤微透析方法.方法 采用高效液相色谱法建立大鼠微透析样品中EVO和RUT的分析方法,考察药物浓度及微透析灌流液的温度、流速对体外回收率和体内回收率的影响.结果 EVO、RUT在检测要求范围内线性关系良好,色谱的专属性、回收率、精密度等测定结果均符合生物样品测定要求.EVO、RUT的体外回收率与体外传递率无显著性差异,均与灌流温度成正比,灌流速度成反比,与药物浓度无关;佳的在体皮肤微透析实验条件为灌流温度32℃,流速0.5μL/min.EVO、RUT经皮吸收药物浓度可采用体内回收率RL进行校正,EVO的体内回收率RL值分别为44.0％,RUT的体内回收率RL为30.50％.结论 本方法能够在体、实时监测大鼠皮下EVO和RUT的动态浓度,为局部药动学研究提供新的方法学参考.
-
HPLC法测定吴茱萸中吴茱萸碱和吴茱萸次碱的含量
目的 对HPLC法测定吴茱萸中吴茱萸碱与吴茱萸次碱含量的可行性进行验证.方法 采用HPLC法,色谱柱为EclipseXDB-C18(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-水(51:49),流速为1.0 mL/min,柱温为30℃,检测波长为290 nm,进行吴茱萸中吴茱萸碱与吴茱萸次碱含量检测.结果 吴茱萸碱与吴茱萸次碱在浓度为5.38～53.80μg/mL、5.02～50.20μg/mL范围内与其峰面积积分分值之间呈良好线性关系,并且其平均加样回收率达到99.82％和98.49％.结论 HPLC法检测吴茱萸中吴茱萸碱与吴茱萸次碱含量不仅操作简便,并且具有可重复性,能够用于吴茱萸质量检测与控制.
-
吴茱萸碱和盐酸小檗碱对HT29细胞生长抑制及凋亡的影响
目的 探讨左金丸的主要成分吴茱萸碱和盐酸小檗碱对大肠癌HT29细胞的生长抑制及其诱导细胞凋亡的作用,为临床应用左金丸治疗大肠癌提供实验依据.方法 采用活细胞计数试剂盒(CCK-8),Annexin V-FITC/PI双染色流式细胞术,检测不同浓度的盐酸小檗碱和吴茱萸碱作用后HT29细胞增殖活性和细胞凋亡的变化.结果 吴茱萸碱和盐酸小檗碱作用HT29细胞后,增殖明显受到抑制,呈剂量和时间依赖性;流式细胞仪检测表明吴茱萸碱和盐酸小檗碱能够诱导细胞凋亡,呈剂量依赖性.倒置显微镜观察细胞呈现缩小、变圆、皱缩、脱壁等增殖变慢的形态学特征.结论 吴茱萸碱和盐酸小檗碱对大肠癌HT29细胞具有显著生长抑制作用,该抑制作用与诱导细胞凋亡相关.
