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吴茱萸碱通过增强细胞缝隙连接通讯改善前列腺癌PC-3细胞对顺铂耐药的研究
目的 观察吴茱萸碱联合顺铂对前列腺癌PC-3细胞增殖和细胞间缝隙连接通讯(GJIC)的影响.方法 体外培养PC-3细胞,分为顺铂组(5、10、15、20 μmol/L)和顺铂(5、10、15、20 μmol/L)+吴茱萸碱组(0.4μmol/L)作用PC-3细胞.细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖率变化;流式细胞术检测细胞凋亡变化;Western blot分别检测间隙连接蛋白43(Cx43)蛋白表达;荧光光漂白恢复技术检测细胞缝隙连接(GJ)功能改变.结果 顺铂组荧光恢复率分别为(41.93±1.30)％、(36.32±2.33)％、(30.81±1.43)％、(22.54±1.70)％,顺铂+吴茱萸碱组分别为(69.86±2.16)％、(50.03±5.00)％、(45.38 ±2.59)％、(34.01±4.01)％.与顺铂组比较,顺铂联合吴茱萸碱组荧光恢复率、细胞凋亡水平、Cx43蛋白表达水平均明显升高(P＜0.05).结论 吴茱萸碱可改善前列腺癌PC-3细胞株对顺铂耐药性,增强顺铂对前列腺癌PC-3细胞杀伤作用.
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吴茱萸不同炮制品中吴茱萸碱、吴茱萸次碱、柠檬苦素含量测定
目的:考察不同炮制方法及炮制前后吴茱萸中吴茱萸碱、吴茱萸次碱和柠檬苦素的含量变化情况.方法:采用高效液相色谱法,Hypersil ODS C18(250 mm×4.6mm,5μm)；流动相:乙腈-水-四氢呋喃-乙酸(41:59∶1∶0.2)；流速:1.0ml·min -1；检测波长:225 nm；柱温:25℃.结果:吴茱萸碱、吴茱萸次碱、柠檬苦素进样量分别在0.156 ～3.120μg(r =0.999 6,n=6)、0.116 ～2.320 μg(r=1.000 0,n=6)、0.620～12.400 μg(r =0.999 1,n=6)范围内与峰面积呈良好线性关系,平均回收率分别为97.2％(RSD=1.33％)、97.1％(RSD=1.56％)、97.3％(RSD=1.52％).结论:不同炮制方法吴茱萸碱、吴茱萸次碱、柠檬苦素含量不同,砂烫法优于其他炮制方法.
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吴茱萸碱对心肌细胞缺血损伤的研究
目的:探讨吴茱萸碱对心肌细胞缺血损伤的保护作用.方法:培养H9c2心肌细胞,缺氧24 h造成心肌细胞损伤模型,给予不同浓度(0.1,1,5,10 μmol·L-1)吴茱萸预处理细胞12 h,CCK-8检测心肌细胞的活性,RT-PCR检测心肌细胞炎症因子的转录,Tunel染色检测心肌细胞凋亡,免疫印迹检测信号通路的改变.结果:4种浓度的吴茱萸碱在基础状态下并未影响心肌细胞活性(P>0.05);缺氧24 h后,心肌细胞活性显著降低,给予1,5,10 μmol·L-1的吴茱萸与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05),且其效果呈现剂量依耐性;细胞促炎症因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-1(IL-1)和白细胞介素-6 (IL-6)的转录明显增加,心肌细胞凋亡增多,吴茱萸碱可以增加缺氧损伤的细胞活性,减少细胞炎症因子的转录,减少细胞凋亡数量,给予1 μmol·L-1和10 μmol·L-1的吴茱萸与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05).免疫印迹结果显示,吴茱萸碱通过增加蛋白激酶B(AKT)和AMP依赖蛋白激酶α(AMPKα)的活性,抑制核因子-κB(NF-κB)的活性发挥其心肌保护作用,给予1 μmol·L-1和10 μmol·L-1的吴茱萸与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05).结论:吴茱萸碱能保护心肌细胞缺血损伤,可能成为新的抗心肌缺血药物.
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吴茱萸碱对大鼠离体子宫平滑肌的舒张作用及机制研究
目的:探讨吴茱萸碱对大鼠离体子宫平滑肌的舒张作用及其可能机制.方法:以前列腺素F2α(PGF2α)诱导大鼠离体子宫平滑肌收缩,生物机能实验系统观察吴茱萸碱舒张离体子宫平滑肌的作用以及辣椒素受体阻断药capsazepine、磷脂酶Cβ阻断药U73122和钙调蛋白阻断药W-7对吴茱萸碱作用的影响,Prism-5.01非线型可变斜率回归计算半效浓度(EC50).结果:吴茱萸碱对PGF2α(EC50=9.60×10-11 mol·L-1)收缩离体子宫平滑肌舒张作用的EC50为9.56×10-9mol·L-1.半抑制浓度(IC50)的capsazepine(6.30×10-11 mol·L-1),U73122(2.57×10-11 mol·L-1)和W-7(5.65×10-13 mol·L-1)预舒张离体子宫平滑肌后,吴茱萸碱的EC50降低,量效曲线左移.EC50的大小顺序依次为:U73122-吴茱萸碱(1.95×10-12 mol·L-1)>capsazepine-吴茱萸碱(7.35×10-13 mol·L-1)>W-7-吴茱萸碱(8.88×10-15 mol·L-1).结论:吴茱萸碱对PGF2α收缩的离体子宫平滑肌有舒张作用,其作用机制可能与辣椒素受体1、磷脂酶Cβ和钙调蛋白有关.
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星点设计-效应面法优化吴茱萸碱脂质体的处方
目的：：优化吴茱萸碱脂质体的处方。方法：采用薄膜分散法制备脂质体,并采用星点设计-效应面法以包封率为考察指标,对大豆卵磷脂与药物质量比、大豆卵磷脂与胆固醇质量比、大豆卵磷脂浓度进行二项式拟合,通过三维效应面图和等高线选择佳处方,对预测结果进行验证,并观察其外观、粒径及pH。结果：佳处方为大豆卵磷脂与药物质量比30.58∶1,大豆卵磷脂与胆固醇的质量比15.22∶1,大豆卵磷脂浓度为42.26 mg·ml-1,制得吴茱萸碱脂质体的平均包封率为92.89%。吴茱萸碱脂质体外观为乳白色半透明,呈圆球形或椭圆形的球粒,粒径为126 nm,pH为6.94±0.17。结论：采用该处方工艺制备吴茱萸碱脂质体稳定、可行。
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微透析-高效液相色谱法联用研究吴茱萸提取物的经皮吸收药动学特性
目的:利用在体皮肤微透析技术研究吴茱萸提取物经皮吸收的特性.方法:以裸鼠为研究对象,建立在体经皮微透析采样技术,以吴茱萸碱和吴茱萸次碱为指标成分,采用高效液相色谱测定吴茱萸提取物经皮给药后透析液中的药物浓度,通过相对损失率的校正,计算皮肤药物浓度,并利用Kinetica 5.0软件对皮肤药物浓度和时间进行非房室模型拟合,计算相关统计参数.结果:吴茱萸提取物中吴茱萸碱的达峰时间为(150±15.3)min,半衰期(f12)(263.7±41.6)min;吴茱萸次碱的达峰时间为(90±2.1)min,半衰期(t1 2)(194±17.3)min;二者均能较快地达到峰值,并在较长的时间内保持稳定释放,使皮下组织中的药物浓度保持在一个相对恒定的水平.结论:本研究中所建立的微透析方法可用于吴茱萸提取物的皮肤药动学研究,吴茱萸碱和吴茱萸次碱可透过皮肤吸收而发挥临床药效.
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高效液相色谱法测定复方吴茱萸碱纳米乳的含量
目的:建立高效液相色谱法测定复方吴茱萸碱纳米乳制剂中吴茱萸碱的含量.方法:通过有机溶剂法破乳,采用高效液相色谱法在225 nm波长处测定峰面积,测定复方吴茱萸碱纳米乳中吴茱萸碱的含量.结果:吴茱萸碱在1.25～10μg·mL-1范围内与峰面积呈良好的线性关系；回归方程为A=122 583C-33 922 (r=0.999 7)；平均回收率为99.96％,RSD为0.31％(n=9)；日内及日间精密度的RSD均小于1％(n=5).结论:建立的高效液相色谱法准确度高、专属性好,可用于吴茱萸碱复方纳米乳中吴茱萸碱的含量测定.
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吴茱萸碱超分子复合物的制备及体外溶出
目的:制备吴茱萸碱超分子复合物(EVO-PLC),并考察其体外溶出.方法:以吴茱萸碱(EVO)和磷脂的复合率为评价指标,通过单因素试验优化磷脂复合物的制备工艺.采用薄层色谱法,紫外光谱法验证磷脂复合物的形成,并测定其粒径和Zeta电位.用Weibull模型拟合法和相似因子(f2)法考察磷脂复合物的体外溶出动力学.结果:超分子磷脂复合物的佳制备工艺为:以四氢呋喃为反应溶剂,磷脂与吴茱萸碱的物质的量的比为2∶1,吴茱萸碱的反应浓度为1.5 mg·mL-1,反应温度为60℃,反应时间为3h；优工艺的复合率为(92.01±0.11)％,粒径为(248.03±9.15) nm,Zeta电位为(- 24.68±3.97)mV;薄层色谱法提示吴茱萸碱与磷脂复合过程中没有生成新物质；紫外光谱法提示吴茱萸碱与磷脂之间存在相互作用,而非简单的物理混合,溶出动力学结果表明吴茱萸碱磷脂复合物的溶出符合Weibull模型,相似因子(f2)法结果表明EVO通过与磷脂复合促进了EVO的体外溶出.结论:本文制备得到了工艺简单、复合率较高的吴茱萸碱超分子磷脂复合物,通过制备磷脂复合物大大增加了吴茱萸碱的体外溶出.
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用多指标试验全概率评分法研究儿泻贴提取工艺
目的:优选儿泻贴的提取工艺.方法:用挥发油收得率、丁香酚含量、浸膏得率3指标试验全概率公式评分法考察挥发油提取部分加水量、浸泡时间、提取时间的优条件;用吴茱萸碱含量、浸膏得率2指标考察醇提部分乙醇浓度、乙醇用量、提取时间、提取次数的优条件.结果:挥发油提取部分为丁香、肉桂加5倍量水浸泡0.5h后,水蒸汽蒸馏提取6 h;醇提部分为吴茱萸、五倍子加8倍量60%乙醇回流提取3次,每次1.5h.结论:该工艺合理,稳定可行.
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超临界流体萃取吴茱萸中吴茱萸碱和吴茱萸次碱
目的:研究超临界流体萃取(SFE)吴茱萸中吴茱萸碱和吴茱萸次碱的提取工艺,并用高效液相色谱法(HPLC)测定吴茱萸碱和吴茱萸次碱的含量.方法:采用95%乙醇作夹带剂,运用超临界流体的萃取工艺,含量测定时,在Water-C18柱上,以乙腈-水(43∶57)为流动相,流速:1.0 mL*min-1,检测波长:290 nm,柱温:40℃.结果:吴茱萸碱和吴茱萸次碱的标准曲线在0.024～0.120 μg(r=0.9994)和0.026～0.130 μg(r=0.9995)之间有较好的线性关系;加样平均回收率分别为:102.7%(RSD=1.58)和101.7%(RSD=1.79%). 结论:采用SFE萃取吴茱萸中吴茱萸碱和吴茱萸次碱的提取工艺速度快,HPLC法测定吴茱萸碱和吴茱萸次碱的含量精确,重现性好.
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吴茱萸碱对大鼠结肠运动的影响
目的:初步探讨吴茱萸碱对大鼠结肠运动的影响及其可能机制.方法:SD大鼠随机分为对照组和给药组,给药组给予腹腔注射吴茱萸碱2 mg/kg,对照组腹腔注射等体积溶剂.采用蛋白印迹法和免疫组织化学方法分别对胆囊收缩素1受体(CCK1R)在结肠的表达进行定量和定位分析,使用生物机能实验系统记录两组肌条自发性收缩活性.结果:给药组大鼠8,12,24 h排便量、结肠肌条收缩幅度均低于对照组(P＜0.001),而4h排便量两组间的差异无统计学意义(P＞0.05);免疫组织化学结果显示,CCK1R在结肠全层皆有弥散表达,但肌层表达多,且给药组表达较对照组明显;蛋白印迹实验结果表明,与对照组相比,给药组大鼠结肠CCK1R表达上调(P＜0.05).结论:吴茱萸碱可抑制结肠运动,并可诱导结肠CCK1R的表达,为进一步开展治疗肠道动力紊乱的相关药物研究提供-定的理论基础.
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吴茱萸药材石虎变种不同产地含量分析及适宜产区规划
目的:研究石虎不同产地、不同采收期的品质差异,构建石虎的适宜产区规划图.方法:应用HPLC方法测定吴茱萸药材石虎品种果实有效成分的含量,考察不同产地、不同采收期对药材品质的影响,并应用中药材适宜性分析系统(TCMGIS)对石虎的适宜生长区进行规划.结果:石虎药材以贵州、湖南等道地产区有效成分含量高,吴茱萸药材随成熟期不同,生物碱含量呈升高趋势.区划系统能很好地区分适宜栽种区域,其中以贵州、重庆、湖南的适宜种植区较大.结论:阐明了石虎药材的生长特性,建立了较完善的石虎适宜产区图,对石虎药材生长有较好的指导意义.
关键词： 吴茱萸 中药材产地适宜性分析平台TCMGIS 石虎 吴茱萸碱 -
HPLC测定吴茱萸中吴茱萸碱含量及其不确定度分析
目的:建立HPLC法测定吴茱萸中吴茱萸碱的不确定度评定方法.方法:用HPLC法测定吴莱萸中吴茱萸碱的含量,通过建立数学模型对测定过程中引入的不确定度进行分析与评估,终得出测量结果的扩展不确定度和置信水平.结果:该实验的吴茱萸中吴茱萸碱的扩展不确定度为0.015％.结论:建立的吴茱萸碱含量测定方法合理、可靠,适用于HPLC法的不确定度分析.
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醋调吴茱萸贴剂制备及其体外透皮情况研究
目的:制备吴茱萸贴剂,并采用HPLC法研究加酸对吴茱萸碱体外透皮率的影响.方法:以PVP为主要基质制备吴茱萸贴剂,以SD大鼠离体腹部皮肤为透皮屏障,利用TK-20B型透皮扩散试验仪,采用HPLC方法进行含量测定,对加酸和不加酸吴茱萸两种贴剂的吴莱萸碱透皮率进行比较.结果:制得吴茱萸贴剂,且加酸贴吴茱萸碱的累计透过率明显高于不加酸贴.结论:采用浸膏方法制备吴茱萸成贴剂是可行的,且其中加酸贴吴菜萸碱具有良好的体外透皮释放性能.
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小檗碱吴茱萸碱配伍的降脂作用与上调LXRα和PPARγ蛋白表达的研究
目的:探讨小檗碱吴茱萸碱配伍对高脂血症大鼠肝脏LXRα和脂肪PPARγ蛋白表达的影响.方法:将60只大鼠随机分为空白组6只与模型组54只.建立高脂饮食诱导高脂血症大鼠模型,选取造模成功的48只大鼠随机分为8组(每组6只)后药物干预8周,检测各组大鼠的血清三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平以评价药物作用效果;以Western blot方法检测肝脏LXRα和脂肪PPARγ蛋白的表达.结果:与模型组相比,小檗碱吴茱萸碱配伍能够明显降低高脂血症模型大鼠血清TC、LDL-C水平(P＜0.01),且降脂效果优于小檗碱或吴茱萸碱单用,能够升高血清HDL-C水平(P＜0.05),但其作用弱于吴茱萸碱单用;小檗碱吴茱萸碱配伍能够明显上调模型大鼠肝脏LXRα和脂肪PPARγ的表达,且其作用强于小檗碱或吴茱萸碱单用(P＜0.05).结论:小檗碱吴茱萸碱配伍能够降低高脂饮食诱导的高脂血症大鼠血脂水平,其作用机制与其上调LXRα和PPARγ蛋白的表达有关.
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吴茱萸超微前后吴茱萸碱和吴茱萸次碱的比较研究
吴茱萸为芸香科植物吴茱萸Evodia rutaecparpa ( Juss ).Benth.、石虎Evodia rutaecarpa (Juss.) Benth.var.officinalis(Dode) Huang或疏毛吴茱萸Evodia rutaecarpa ( Juss ).Benth.var.bodinieri (Dode) Huang的干燥近成熟果实[1].
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吴茱萸及其炮制品中吴茱萸碱、吴茱萸次碱和柠檬苦素成分含量对比分析
目的:通过建立的高效液相色谱法对吴茱萸及其炮制品中吴茱萸碱、吴茱萸次碱和柠檬苦素3个指标性成分含量进行测定,并进行对比分析.方法:采用高效液相色谱法,色谱柱AgiLentC18(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相:乙腈-水(55:45);流速:1 mL·min-1;检测波长:225 nm;柱温:25℃.结果:吴茱萸炮制品与生品相比较,3个指标性成分含量均下降,其中柠檬苦素含量下降较多.结论:吴茱萸炮制后对吴茱萸碱、吴茱萸次碱含量影响不大,对柠檬苦素含量影响较大.
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吴茱萸碱和吴茱萸次碱含药血清抑菌活性研究
目的:研究吴茱萸生物碱含药血清的抗菌活性.方法:以DimonsilC18(2)色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm)为固定相,水-甲醇-乙腈(42∶20∶38)为流动相,流速为1mL/min,在波长为240 nm时,用HPLC法对血清中吴茱萸碱和吴茱萸次碱进行定量;并用比浊法测定吴茱萸生物碱含药血清对8种临床常见病原菌的抑菌作用.结果:吴茱萸生物碱含药血清对伤寒杆菌(MICEV为0.4329 μg/mL,MICRU为0.3784 μg/mL)、甲型副甲伤寒杆菌(MICEV为1.0824 μg/mL,MICRU为0.9465 μg/mL)、痢疾志贺菌(MICEV为2.1645 μg/mL,MICRU为1.8921 μg/mL)和福氏痢疾杆菌有抑菌(MICEV为1.0824 μg/mL,MICRU为0.9465 μg/mL)作用.结论:吴茱萸生物碱含药血清对伤寒杆菌、甲型副伤寒杆菌和福氏痢疾杆菌具有较好的抑菌作用.
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疏毛吴茱萸药材中吴茱萸碱、吴茱萸次碱、柠檬苦素含量的动态变化及采收期确定
目的:建立同时测定疏毛吴莱萸中吴茱萸碱、吴茱萸次碱和柠檬苦素的含量的方法以及分析含量动态变化,为合理采收提供科学依据方法:采用HPLC法,色谱柱:AgiLent C18(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相:乙腈-水(55∶45);流速:1 mL·min-1;检测波长:225 nm;柱温:25℃结果:疏毛吴莱萸中吴菜萸碱和吴莱萸次碱的含量在7月底即果实呈黄绿色未开裂前高,柠檬苦素含量从6月初开始逐渐递减结论:疏毛吴莱萸的佳采收期为果实呈黄绿色未开裂前.
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高效液相色谱法测定萸黄连中吴茱萸碱的含量
目的:采用高效液相色谱法测定黄连的炮制品萸黄连中吴茱萸碱的含量,以探索萸黄连的质量控制.方法:采用KromasilC18,以乙腈-水(44:56)为流动相,检测波长为290nm,流速为1.0mL·min-1.结果:吴茱萸碱进样量线性范围为40～400ng,r=0.9999;平均加样回收率为100.5%,RSD=1.48%(n=5).结论:本方法简便、可靠、准确,可用于萸黄连的质量控制.
