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吴茱萸碱诱导前列腺癌PC-3细胞凋亡机制的实验研究
目的 探讨吴茱萸碱诱导人前列腺癌PC-3细胞凋亡的不同机制.方法 应用MTT法检测吴茱萸碱对PC-3细胞生长的抑制作用,Western blot法检测吴茱萸碱诱导PC-3细胞凋亡的信号通路.结果 吴茱萸碱(≥1 μmol/L)明显抑制PC-3细胞生长,吴茱萸碱作用24 h后,caspase蛋白酶凋亡通路被激活,caspase-3和caspase-9的表达增加,同时bcl-2蛋白表达减少而bax蛋白表达增加.结论 吴茱萸碱对前列腺癌PC-3细胞主要是通过激活caspase通路及下调bcl-2表达和增加bax表达等信号通路诱导细胞凋亡.
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吴茱萸碱对S180荷瘤小鼠抑瘤作用及血常规的影响
目的 研究吴茱萸碱对小鼠肉瘤S180细胞肿瘤模型生长的抑制作用及对外周血常规的影响.方法 小鼠左后肢皮下接种S180.接种后将小鼠按体重随机分为3组:模型组(0.5％羧甲基纤维素钠,剂量10 ml/kg)、阳性对照组(给予环磷酰胺,剂量50 mg/kg)、吴茱萸碱组(给予吴茱萸碱,剂量50 mg/kg).每组小鼠10只.给药结束后,观察抑瘤率,检测血常规.结果 吴茱萸碱对荷瘤小鼠的肿瘤生长具有较明显的抑制作用,50 mg/kg吴茱萸碱可使抑瘤率达到43.6％左右.吴茱萸碱(剂量50 mg/kg)能升高S180荷瘤小鼠外周血的白细胞(P＜0 05),红细胞和血小板的影响不大.结论 吴茱萸碱对小鼠在体肿瘤S180具有一定的抑制作用,吴茱萸碱作为抗肿瘤药有较大的开发潜力;吴茱萸碱能升高S180荷瘤小鼠外周血的白细胞数量,可能是其抗肿瘤的作用机制之一.
关键词： 吴茱萸碱 小鼠肉瘤S180细胞 抗肿瘤 血常规 -
吴茱萸碱对人胃低分化黏液腺癌MGC-803细胞作用的研究
目的 研究吴茱萸碱(Evodiamine,Evo)对人胃低分化黏液腺癌(MGC-803)细胞的作用,并初步探讨其作用机制.方法 MTT测定Evodiamine的抗肿瘤活性;电镜观察Evo对细胞形态学的影响;琼脂糖凝胶电泳检测Evo对细胞DNA电泳行为的影响.结果 一定浓度范围内Evodiamine对MGC-803细胞的增殖有剂量、时间依赖性抑制作用;透射电镜下可见细胞核染色质边集、核碎裂及凋亡小体;一定浓度的Evo可使细胞基因组DNA电泳出现阶梯状条带"ladder".结论 Evodiamine对MGC-803细胞的抑制作用与诱导其凋亡密切相关.
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大孔吸附树脂纯化左金丸总生物碱工艺研究
目的:筛选分离纯化左金丸总生物碱的树脂,并确定其佳工艺条件.方法:以盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、盐酸药根碱、吴茱萸碱、吴茱萸次碱的吸附率及解吸率为考察指标,采用静态及动态吸附考察确定适合的大孔吸附树脂;采用单因素实验和正交试验确定佳工艺参数.结果:AB-8树脂对左金丸总生物碱有良好的吸附分离性能.其佳工艺条件为:径高比1:10,上样药液浓度0.14 g/mL,上样量为2.4 BV,上样流速9 BV/h,70％乙醇7BV洗脱.结论:左金丸中5种主要生物碱成分纯化后转移率均在75％以上,其中3种成分转移率85％以上,用大孔吸附树脂对左金丸提取液进行精制效果好.
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吴茱萸碱的药理学研究进展
吴茱萸碱是芸香科植物吴茱萸、石虎和疏毛吴茱萸的干燥近成熟果实中的主要生物碱成分,具有多种药理作用.吴茱萸碱能抑制多种肿瘤细胞增殖,通过caspase或其他调控因素诱导肿瘤细胞凋亡坏死;抑制肿瘤细胞血管生成,阻止肿瘤细胞迁移和侵袭.通过CGRP的释放产生正性肌力、防止心脏过敏性反应的作用;降低醛固酮的分泌影响血压;部分内皮依赖性舒张血管.改善阿尔茨海默症学习记忆能力,影响内分泌系统多种激素的释放分泌,并且具有减肥、降血糖、抗炎、镇痛、免疫调节等作用.吴茱萸碱对多方面都有显著药理作用,具有很强的药用价值,深入探讨其结构与活性的关系,并以此对其进行结构改造,提高其作用的选择性,降低副作用,有利于更好的开发利用这一资源.本文对近年来吴茱萸碱的药理学研究进展作一综述.
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液质联用法测定华佗再造丸中阿魏酸和吴茱萸碱
目的 建立同时测定华佗再造丸中阿魏酸和吴茱萸碱的方法.方法 采用超高效液相串联质谱(UPLC-MS/MS)法,BEH C18色谱柱(2.1 mm×150mm,1.7 μm),以乙腈-5 mmol/L甲酸铵溶液为流动相进行梯度洗脱,体积流量为0.4 mL/min,进样量2μL,柱温45℃,质谱条件:电喷雾离子源(ESI),检测方式为多离子反应监测(M RM),正负离子模式同步检测.结果 阿魏酸和吴茱萸碱的线性范围分别为0.64 ～10.20 μg/mL(r=0.999 9)和0.79 ～ 25.00 μg/mL(r=0.999 6),其回收率分别为98.1％(RSD为2.4％)和97.2％(RSD为1.7％).结论 该方法简便,快速,准确,重复性好,专属性高,可用于华佗再造丸的质量控制.
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HPLC同时测定雪胆胃肠丸中吴茱萸碱和吴茱萸次碱
雪胆胃肠丸是从苗族民间传统秘方中开发出来的中药复方,含有雪胆、吴茱萸、木香、白及、黄芪等十多味中药材.经临床研究表明,雪胆胃肠丸对胃炎、萎缩性胃炎、十二指肠溃疡等疾病有独特的疗效.
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均匀设计优选吴茱萸提取工艺的研究
吴茱萸为常用温中散寒类中药,含吴茱萸碱、吴茱萸次碱等生物碱类成分,具有镇痛、抗炎、升高体温、降压等作用[1,2].提取生物碱类成分常用乙醇提取[3].本文采用均匀设计法,考察提取时间、提取次数、乙醇用量、乙醇浓度对提取效果的影响;以吴茱萸总生物碱相对提取得率及浸膏得率作为指标,确定吴茱萸佳提取工艺.
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反相HPLC法同时测定复方黄连素片中的8种成分
目的 建立反相HPLC法同时测定复方黄连素片(盐酸小檗碱、木香、吴茱萸、白芍)中芍药内酯苷、芍药苷、盐酸小檗碱、吴茱萸内酯、吴茱萸碱、吴茱萸次碱、木香烃内酯和去氢木香内酯的方法.方法 复方黄连素片提取物的定量分析采用月旭XB-C18色谱柱(250mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈(A)-0.03 mol/L磷酸二氢钾水溶液(B),梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;柱温25℃;检测波长220 nm.结果 芍药内酯苷、芍药苷、盐酸小檗碱、吴茱萸内酯、吴茱萸碱、吴茱萸次碱、木香烃内酯和去氢木香内酯分别在0.054～0.804 μg、0.080 ～1.21μg、0.132 ～1.99 μg、0.034 ～0.504μg、0.035 ～0.519 μg、0.031 ～0.468 μg、0.048 ～0.714 μg、0.053 ～0.792 μg范围内与色谱峰面积呈良好的线性关系,加样回收率(n=6)分别为100.2％、99.2％、99.5％、99.2％、98.8％、100.5％、98.6％、99.0％,RSD分别为1.7％、1.5％、1.2％、1.9％、2.0％、1.9％、1.8％、1.0％.结论 在80％甲醇溶液和超声30 min的提取条件下,该方法适用于复方黄连素片中这8个成分的测定.
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二阶导数光谱法测定复方吴茱萸碱纳米乳中吴茱萸碱
目的 建立二阶导数光谱法测定复方吴茱萸碱纳米乳中吴茱萸碱.方法 通过有机溶剂法破乳,采用二阶导数光谱法,于288 nm和291 nm波长处测定峰谷差值(P288-V291),测定复方吴茱萸碱纳米乳中吴茱萸碱.结果 吴茱萸碱在5.2～ 20.8 μg/mL质量浓度范围内与二阶导数峰谷差值呈良好的线性关系;回归方程为:Y=0.0812X+0.0035 (r=0.9997);平均回收率为99.60％、RSD为1.04％ (n=9);日内及日间精密度的RSD均小于1％(n=5).结论 本方法准确性高、精密度好、操作简单,可用于吴茱萸碱复方纳米乳中吴茱萸碱的测定.
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复方灵通胶囊稳定性试验中吴茱萸碱和吴茱萸次碱的含量变化
目的 考察复方灵通胶囊稳定性试验中吴茱萸碱和吴茱萸次碱的含量变化.方法 建立复方灵通胶囊中吴茱萸碱和吴茱萸次碱的HPLC测定方法；分别采用加速稳定性试验和长期稳定性试验,测定加速试验条件下0、1、2、3、6个月及长期稳定性条件下0、3、6、9、12个月取样点时样品中吴茱萸碱和吴茱萸次碱的量；比较长期稳定性条件下12个月样品与0个月样品的液相色谱图中吴茱萸碱和吴茱萸次碱的峰面积的比例.结果 加速稳定性试验与长期稳定性试验中吴茱萸碱下降幅度较大,而吴茱萸次碱较为稳定.12个月样品的吴茱萸碱与吴茱萸次碱的峰面积比值与0个月样品相比,明显下降.结论 对含有吴茱萸药材的制剂,特别是质量标准中有吴茱萸生物碱含量或指纹图谱项目的,需要注意相关测定中吴茱萸碱的含量下降而造成的对含量限度或指纹图谱相似度的影响,应关注中药稳定性与药效相关性的评价问题.
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LC-MS/MS同时测定左金丸和香连丸中6种生物碱的含量
目的:建立左金丸(黄连、吴茱萸)和香连丸(黄连(吴茱萸制)、木香)中6种生物碱含量的LC-MS/MS测定方法.方法:色谱条件:Phenomenex Lunac_(18)柱(5μm,250mm×4.60mm);乙腈-水(4mmol/L乙酸铵和0.08%甲酸)为流动相,梯度洗脱;质谱条件:采用电喷雾离子源(ESI),正离子检测,MRM模式.结果:左金丸中药根碱、黄连碱、巴马汀、小檗碱、吴茱萸碱和吴茱萸次碱的平均回收率分别为101.0%,101.3%、101.2%、100.2%、99.6%、99.7%,RSD分别为1.1%、1.8%、0.98%、1.0%、1.3%、1.3%,香连丸中药根碱、黄连碱、巴马汀、小檗碱和吴茱萸碱的平均回收率分别为101.6%、99.8%、101.9%、101.0%、101.3%,RSD分别为1.0%、1.9%、0.75%、1.1%、1.9%.结论:本方法可同时测定左金丸和香连丸中药根碱、黄连碱、巴马汀、小檗碱、吴茱萸碱和吴茱萸次碱的含量,具有快速、简便等特点.
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RP-HPLC同时测定左金丸中多指标成分含量
目的:建立同时测定左金丸中盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、盐酸药根碱、吴茱萸碱和吴茱萸次碱含量的液相色谱法.方法:采用Agilent C18(200 mm ×4.6 mm,5μm)柱,以乙腈-0.3%磷酸三乙胺为流动相进行梯度洗脱,检测波长:225nm.结果:盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、盐酸药根碱、吴茱萸碱和吴茱萸次碱的线性范围分别为0.063 36～0.316 8、0.012 76～0.102 08、0.012 93～0.064 60、0.012 76～0.102 08和0.001 988～0.009 94μm,平均回收率分别为103.1%、99.8%、99.8%、100.5%、98.9%,RSD分别为1.1%、1.9%、1.4%、1.5%、1.9%.结论:本方法可同时测定左金丸中盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、盐酸药根碱、吴茱萸碱和吴茱萸次碱的含量,具有快速、简便等特点.
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四神丸质量标准研究
目的:建立四神丸(吴茱萸,肉豆蔻,补骨脂等)的指纹图谱及其主要有效成分的定量分析方法.方法:甲醇提取,HPLC分析,紫外检测器检测.色谱柱:YWG-C18(10μm,250mm×4.6mm).流动相:水-甲醇-乙腈梯度洗脱.流速:1.0mL·min-1.柱温:30℃.检测波长:225nm.结果:四神丸共有21个较强峰,12个特征峰,为本文的8批样品所共有.其主要有效成分吴茱萸碱的回归方程为Y=147.37X+1186.32,r=0.9999,线性范围为5～1000μg·mL-1,回收率为99.83%.吴茱萸次碱的回归方程为Y=101.19X+279.81,r=0.9999,线性范围为4.5～900μg·mL-1,回收率为98.72%.结论:本文首次建立了中成药四神丸的质量标准,方法的稳定性高,重现性好,是生产四神丸质量监控较理想的方法.
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小檗碱与吴茱萸碱配伍对高胆固醇血症大鼠小肠ACAT2、ApoB48和NPC1L1表达的影响
目的 研究小檗碱与吴茱萸碱配伍对高胆固醇血症大鼠小肠酰基辅酶A-胆固醇酰基转移酶2 (ACAT2)、载脂蛋白B48 (ApoB48)和尼曼-匹克C1型类似蛋白1(NPC1L1)表达的影响.方法 50只SD大鼠分成空白对照组和4个造模组,造模组40只大鼠给予高脂、高胆固醇饲料喂养建立高胆固醇血症大鼠模型,将造模成功的大鼠随机均分为模型对照组、阿托伐他汀组、小檗碱-吴茱萸碱配伍组(89.2、178.4mg/kg),给予相应药物干预4周,检测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平,气相色谱法测定各组动物血清中总胆固醇、β-谷固醇水平,免疫组化法测定各组大鼠小肠组织ACAT2、ApoB48和NPC1 L1蛋白表达.结果 89.2、178.4 mg/kg配伍组能显著降低高胆同醇血症大鼠血清TC、TG和肝脏TC水平(P＜0.01),89.2 mg/kg配伍组还能显著降低高胆固醇血症大鼠血清LDL-C和肝脏TG水平(P＜0.05);气相色谱结果表明,178.4 mg/kg配伍组大鼠血清总胆固醇、β-谷固醇水平较模型对照组显著降低(P＜0.05),89.2 mg/kg配伍组极显著降低(P＜0.01);免疫组化结果显示,小檗碱与吴茱萸碱配伍2个剂量组ACAT2、ApoB48和NPC1 L1平均光密度值较模型对照组均显著降低(P＜0.05或P＜0.01).结论 小檗碱与吴茱萸碱配伍可通过下调高胆固醇血症大鼠小肠ACAT2、ApoB48和NPC1 L1的表达调节机体胆固醇代谢.
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吴茱萸碱固体脂质纳米粒的制备和抗肿瘤活性
目的 制备吴茱萸碱固体脂质纳米粒,并评价其抗肿瘤活性.方法 吴茱萸碱溶于混合溶剂(丙酮-无水乙醇)中,加入Precirol ATO 5并水浴加热,作为有机相,将其缓慢倒入泊洛沙姆188溶液(水相)中,冷冻干燥后制得纳米粒.分子模拟考察其处方组成.以Precirol ATO 5用量、药脂比、泊洛沙姆188用量为影响因素,在单因素试验基础上通过Box-Behnken设计优化制备工艺,再进行表征与体外抗肿瘤(人宫颈癌HeLa细胞)活性实验.结果 佳条件为30 mg Precirol ATO 5,药脂比1∶3,93 mg泊洛沙姆188,所得纳米粒圆整,分布均匀,平均粒径268.9 nm,平均载药量1.65％,对HeLa细胞有较好的抑制作用,并呈剂量依赖关系.结论 固体脂质纳米粒可有效改善吴茱萸碱的分散性与透膜吸收.
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吴茱萸提取物的透皮吸收促进剂的筛选
目的 筛选吴茱萸提取物中吴茱萸碱、吴茱萸次碱的佳透皮促渗剂及浓度.方法 以裸鼠腹部皮肤为实验屏障,用改良Franz扩散池法建立离体经皮吸收试验方法,收集吴茱萸提取物的透皮接受液,用高效液相色谱法测定其吴茱萸碱、吴茱萸次碱的透皮速率.结果 3种促渗剂质量分数3％时对吴茱萸碱与吴茱萸次碱的促渗效果依次为油酸＞氮酮＞1,2-丙二醇,油酸不同用量下促渗效果依次为7％油酸＞5％油酸＞3％油酸.结论 以7％的油酸作为促渗剂时可以较好的促进吴茱萸碱和吴茱萸次碱的经皮吸收.
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戊己胃漂浮缓释片多组分体外释放行为研究
目的 考察戊己胃漂浮缓释片中多成分体外释放行为及机制.方法 采用浆法以人工胃液为介质,运用HPLC法测定戊己胃漂浮缓释片中芍药苷、盐酸小檗碱、吴茱萸碱和吴茱萸次碱在12 h内的体外累积释放率,通过相似因子法结合拟合释放模型研究戊己胃漂浮缓释片体外释放行为.结果 盐酸小檗碱、吴茱萸碱和吴茱萸次碱相似因子大于50,芍药苷和生物碱成分相似因子小于50,4种成分体外释放均符合Higuchi模型.结论 戊己胃漂浮缓释片中生物碱成分体外释放具有同步性,可达到缓释长效效果.
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液液萃取高效液相色谱法测定纳米乳中吴茱萸碱的血浆浓度
目的 建立高效液相色谱测定吴茱萸碱纳米乳中吴茱萸碱血浆浓度的方法.方法 采用液液萃取法处理血浆样品,用LichrospherC18高效液相色谱柱分离,流动相为甲醇-水70∶30(V/V),以和厚朴酚为内标物质用紫外检测器在225nm波长处检测.结果 实验结果显示吴茱萸碱和内标物质的保留时间分别为6.0 min和8.2 min,血浆内源性杂质不存在干扰；吴茱萸碱在0.017 86 ～2.856 8 μg/mL质量浓度范围内与吴茱萸碱和内标物质色谱峰面积比值呈良好的线性关系(r=0.999 3),吴茱萸碱的低定量限为10 ng/mL;样品日内和日间精密度的RSD均小于7.60％,样品的平均提取回收率为105.13％,平均方法回收率为100.13％.结论 本方法准确、灵敏,可用于生物样品中吴茱萸碱的测定.
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基于大鼠体内吸收分布的吴茱萸指标成分选择及测定
目的 基于大鼠体内吸收分布情况选择吴茱萸(石虎Euodia rutaecarpa[Juss.]Benth.var.officinalis[Dode] Huang)指标成分,并测定其含有量.方法 建立该药材TLC及HPLC色谱图,分析其在大鼠体内吸收分布情况,能被吸收入血的成分确定为指标成分,HPLC-UV法测定其含有量.结果 柠檬苦素、吴茱萸碱和吴茱萸次碱为指标成分,主要分布于肺组织中,其次在肝、脑、脂肪,而尿中较少.TLC与HPLC相比,有着直观、高通量的特点.柠檬苦素在5.5--545.0 μg/mL(r＞0.999 9)、吴茱萸碱在0.6 ～79.8 μg/mL(r＞0.999 9)、吴茱萸次碱在0.4～46.4 μg/mL(r=0.999 9)范围内线性关系良好,平均加样回收率分别为101.6％ (RSD=1.05％)、98.1％ (RSD=0.99％)和100.5％ (RSD=0.72％).结论 该方法具有可行性,能对该药材质量进行评价与控制.
