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PTEN对PDGF诱导肝星状细胞活化影响机制探讨
目的 肝星状细胞的活化是肝纤维化过程中的重要事件,其活化受多种细胞因子及细胞内信号转导系统的调节.本研究通过上调PTEN表达观察其对血小板衍生长因子(platelet derived growth factor,PDGF)诱导肝星状细胞活化的抑制作用及其信号转导机制.方法 将实验分为对照组、PDGF组(正常细胞给予PDGF刺激)、PTEN+PDGF组(PDGF作用于成功转染PTEN质粒的细胞)、空载体+PDGF组(PDGF作用于成功转染空载体质粒的细胞)、PTEN质粒转染组和空载体质粒转染组,采用蛋白质印迹法对各组细胞α-SMA、Ⅰ型胶原、PI3K、Akt和p-Akt表达水平进行检测.采用倒置荧光显微镜对肝星状细胞PTEN质粒转染组及空载体质粒转染组绿色荧光蛋白表达进行检测;用蛋白质印迹法检测肝星状细胞对照组、PTEN质粒转染组和空载体质粒转染组中PTEN蛋白表达;用RT-PCR方法检测PTENmRNA表达.结果 含PTEN基因的质粒及空载体质粒转染LX2细胞48 h后可见明显绿色荧光蛋白表达,两组表达GFP的细胞占总细胞比例均＞80％.PTEN转染组PTEN蛋白(P=0.001)和mRNA(P=0.018)表达较对照组及空载体转染组均显著上升;空载体转染组与对照组PTEN mRNA表达差异无统计学意义,P=0.114;PDGF刺激组PTENmRNA较对照组有显著下降(P=0.023),且PDGF刺激与PTEN转染对PTEN mRNA表达的影响有交互作用,P=0.033.PDGF组较对照组PI3K、p-Akt、α-SMA、Ⅰ型胶原表达明显上调,P＜0.001;PTEN+PDGF组较空载体+PDGF组PI3K、p-Akt和Ⅰ型胶原蛋白表达明显下降,P＜0.001;空载体+PDGF组较PDGF组α-SMA、Ⅰ型胶原蛋白、p Akt和PI3K表达差异均无有统计学意义,P＞0.05;各组Akt表达差异无统计学意义,P＞0.05.结论 PTEN通过阻止PI3K/Akt信号通路活化而抑制PDGF诱导的人肝星状细胞活化.
关键词： PTEN 肝星状细胞 肝纤维化 PI3K/Akt信号通路 -
TGF-β1在乳腺癌EMT中作用机制探讨
目的 乳腺癌的发病率不断上升,上皮-间质转化(epithelial to mesenchymal transition,EMT)在乳腺癌病变中广泛存在.本研究探讨TGF-β1在乳腺癌EMT中的作用及PTPN12在此过程中的作用和相关机制.方法 蛋白质印迹法检测TGF-β1处理乳腺癌细胞后EMT相关基因以及PI3K、p-AKT和mTOR的表达;免疫组织化学检测乳腺癌组织和癌旁组织中PTPN 12表达;免疫共沉淀检测PTPN12和p-AKT是否有直接相互作用;蛋白质印迹法检测转染LV5-PTPN12后,E-Cadherin、Vimentin、Fibronectin、PI3K、p-AKT和mTOR蛋白的表达情况;裸鼠皮下成瘤检测PT-PN12对乳腺癌成瘤大小以及体积的影响.结果 NC组和TGF-β1组Vimentin蛋白表达量分别为(17.2±2.3)％和(79.7±8.3)％,t=12.5,P=0.008;Fibronectin蛋白表达量分别(17.4±2.3)％和(77.4±7.5)％,t=12.1,P=0.016.PTPN12在乳腺癌组织中表达明显降低,PTPN12与乳腺癌病理分期分级以及腋窝淋巴结受累数目有关,NC组和TGF-β1组PI3K蛋白表达量分别为(18.6±1.9)％和(76.3±5.9)％,t=12.1,P=0.029;p-AKT蛋白表达量分别为(27.6±3.2)％和(54.1±6.2)％,t=11.7,P=0.013;mTOR蛋白表达量分别为(35.2±3.2)％和(72.2±5.3)％,t=18.3,P=0.031;PTPN12和p-AKT有直接相互作用;PTPN12可以抑制TGF-β1诱导的EMT,LV5-PTPN12组和LV5-NC组Vimentin蛋白表达量分别为(17.2±2.3)％和(79.7±8.3)％,t=11.9,P＜0.018;Fibronectin蛋白表达量分别为(17.4±2.3)％和(77.4±7.5)％,t=10.2,P=0.019;E-Cadherin蛋白表达量分别为(82.1±8.4)％和(0.22±0.02)％,t=13.7,P＜0.001.PTPN12可以通过PI3K/AKT信号通路起作用,LV5-PTPN12组和LV5-NC组PI3K蛋白表达量分别为(13.2±1.2)％和(56.2±5.1)％,t=7.1,P=0.021;p-AKT蛋白表达量分别为(23.5±2.5)％和(77.1±6.3)％,t=9.2,P=0.008;mTOR蛋白表达量分别为(28.2±3.1)％和(71.7±6.1)％,t=12.8,P=0.032.体内实验表明,与对照组相比,LV5-PTPN12组荷瘤小鼠肿瘤体积和体质量都明显变小,LV5-PTPN12组和LV5-NC组肿瘤体积分别为(2.8±0.2)和(0.4±0.02) cm3,t'=13.8,P＜0.001;体质量分别为(3.1±0.3)和(0.4±0.02)g,t'=18.6,P＜0.001.结论 PTPN12在TGF-β1作用下通过PI3K/AKT信号通路诱导乳腺癌的EMT中起抑制作用.
关键词： 乳腺癌 PTPN12 PI3K/Akt信号通路 TGF-β1 -
亚砷酸联合LY294002对人鼻咽癌CNE细胞的抑制作用
目的 探讨亚砷酸(As2O3)联合PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002对人鼻咽癌细胞株CNE(简称CNE细胞)的抑制作用.方法 应用MTT法检测CNE细胞对As2O3和LY294002的敏感性,Western blot方法检测p-PTEN、p-AktsSer473、p-AktThr308、p-PDK1等信号分子的表达水平.结果 As2O3与LY294002均可显著抑制CNE细胞的生长,而且该作用呈现明显的剂量依赖性和时间依赖性.As2O3与LY294002的联合应用对CNE细胞生长的抑制作用具有协同效应.LY294002 (10 μmol/L)处理4h即可使CNE细胞内p-AktsSer473、p-AktThr308、p-PDK1蛋白表达下调,p-PTEN蛋白表达上调.As2O3(4μmol/L)单独作用12h后,CNE细胞内蛋白p-Aktser473表达下调,p-AktThr308、p-PDK1、p-PTEN蛋白变化不明显.LY294002(10 μmol/L)与As2O3(4μmol/L)联合处理12h,CNE细胞内p-AktsSer473、p-AktThr308、p-PDK1等信号分子的下调水平与p-PTEN蛋白的上调强度显著强于LY294002或As2O3的单独作用.结论 AS2O3联合LY294002对CNE细胞具有协同杀伤作用.
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PI3K/AKT信号通路对体外人牙髓细胞增殖和成牙本质向分化能力的影响
目的 研究PI3K/AKT信号通路对人牙髓细胞(hDPC)体外增殖作用和成牙本质向分化能力的影响.方法 体外培养hDPC,采用PI3K通路抑制剂LY294002(LY)处理hDPC,CCK8法检测细胞增殖情况,Western blot蛋白印记检测PI3K/AKT通路下游蛋白AKT、磷酸化AKT(p-AKT)水平在6、12、24、48、72 h的改变,检测成牙本质向分化指标DSPP的蛋白水平变化;设立空白对照组、矿化诱导组、LY组、矿化诱导+LY组共4组,成牙本质向矿化诱导14 d,茜素红染色检测矿化结节形成情况.结果 CCK8结果显示,LY294002在24、48和72 h可抑制hDPC的增殖(24 h:Z=-0.358,P＜ 0.05;48 h:t=11.674,P＜ 0.05;72 h:t=10.832,P＜ 0.05);Western blot显示,LY294002抑制PI3K/AKT通路下游蛋白p-AKT活性,在24 h时作用明显,成牙本质向分化指标DSPP蛋白水平降低;茜素红染色结果显示,矿化结节的数量B组多、C组少.结论 PI3K/AKT信号通路可促进hDPC的增殖和成牙本质向分化能力.
关键词： PI3K/Akt信号通路 人牙髓细胞 增殖 成牙本质向分化 -
PI3K/AKT信号通路与HER2阳性乳腺癌患者总生存时间的相关性及验证分析
目的 分析并验证与HER2阳性乳腺癌患者总生存时间相关的关键分子靶点.方法 首先,从TCGA数据库中分别下载Ⅰ/Ⅱ期和Ⅲ/Ⅳ期HER2阳性乳腺癌患者生存时间及转录组数据,将Ⅰ/Ⅱ期患者根据总生存时间分为2年和8.5年两组,先利用edgeR软件包分析两组乳腺癌患者的差异基因,随后对差异基因进行KEGG通路富集;将Ⅲ/Ⅳ期患者根据总生存时间分为2年和7年两组,利用edgeR软件包分析差异基因并对其进行KEGG通路富集;后分析与Ⅰ/Ⅱ期和Ⅲ/Ⅳ期HER2阳性乳腺癌患者总生存时间均相关的共同调控通路.其次,利用KMplot (Kaplan-Meier plotter)数据库验证KEGG富集通路关键节点基因及其他基因与HER2阳性乳腺癌患者总生存时间之间的相关性.后,利用HER2阳性乳腺癌细胞系BT474验证KEGG富集通路与抗HER2治疗耐药之间的相关性.结果 在Ⅰ/Ⅱ期HER2阳性乳腺癌患者中,总生存时间2年者PI3K/AKT信号通路处于上调差异基因富集信号通路的第9位,而在Ⅲ/Ⅳ期总生存时间2年者中,PI3K/AKT信号通路位于上调差异基因富集信号通路的第2位.在Ⅰ/Ⅱ期与Ⅲ/Ⅳ期总生存时间均2年的患者共同上调的差异基因中,PI3K/AKT信号通路被富集于第1位.在PI3K/AKT通路中,PI3K和AKT(关键节点基因)、CFAP221和COL4A6(通路其他基因)高表达的患者总生存时间短于低表达患者.细胞验证实验显示,PI3K抑制剂能够增强HER2小分子抑制剂对HER2阳性乳腺癌细胞系BT474的生长抑制作用.结论 PI3K/AKT通路过度激活与HER2阳性乳腺癌患者总生存时间短相关,并与HER2阳性乳腺癌细胞抗HER2治疗耐药相关.
关键词： TCGA数据库 PI3K/Akt信号通路 HER2阳性乳腺癌 -
双乌宣痹颗粒对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞凋亡及PI3K/Akt信号通路的影响
目的 观察双乌宣痹颗粒对类风湿关节炎(RA)滑膜成纤维细胞(FLS)凋亡及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路的影响,探讨其作用机制.方法 胶原酶消化法分离RA患者膝关节FLS,传代培养并鉴定后,取4～7代细胞用于实验.RA-FLS分别用高[17.28g/(kg.d)]、中[8.64g/(kg.d)]、低[4.32g/(kg.d)]剂量双乌宣痹颗粒含药血清培养24h,即高、中、低剂量双乌宣痹组;另设阳性药物对照[来氟米特,1.04mg/(kg.d)]组和阴性对照(生理盐水)组.采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Western blotting检测PI3K、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达水平.结果 高、中、低剂量双乌宣痹含药血清及来氟米特含药血清均能明显促进FLS的凋亡,下调PI3K、p-Akt、Bcl-2蛋白的表达,上调Bax蛋白表达,与阴性对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);与来氟米特组比较,高、中双乌宣痹组PI3K、p-Akt、Bcl-2蛋白的表达明显下调,Bax蛋白表达明显上调,差异有统计学意义(P<0.05).结论 双乌宣痹含药血清能促进RA-FLS凋亡,下调Bcl-2、PI3K、p-Akt蛋白的表达,这可能是其治疗RA的机制之一.
关键词： 类风湿关节炎 滑膜成纤维细胞 双乌宣痹颗粒 细胞凋亡 PI3K/Akt信号通路 -
PI3K/Akt信号通路在磷酸三钙磨损颗粒诱导小鼠颅骨溶解中的作用
目的:研究PI3K/Akt信号通路在磷酸三钙(tricalcium phosphate,TCP)磨损颗粒诱导小鼠颅骨溶解中的作用.方法:36只雄性ICR小鼠随机分为假手术组(Sham)、模型组(TCP)和LY294002处理组,每组12只.取TCP磨损颗粒30 mg置于颅顶后缝合皮肤构建小鼠颅骨溶解模型.LY294002处理组小鼠于术后第2天颅顶局部注射PI3K抑制剂LY294002(5 mg·kg-1),每周3次;假手术组小鼠颅骨顶仅注射生理盐水,注射时间与LY294002一致.2周后处死动物取骨膜和颅骨.通过Micro-CT分析小鼠颅骨溶解情况、骨密度(bone mineral density,BMD)和骨矿含量(bone mineral content,BMC);HE染色观察颅骨表面炎症反应及破骨细胞(osteoclasts)形成;Real-time PCR检测骨组织中破骨细胞生成标志物抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)、组织蛋白酶K(cathepsin K,CstK)、核因子KB受体活化因子配体(receptor activator for nuclear factor-KB kigand,RANKL)和c-Fos的mRNA水平;ELISA检测骨膜中炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6等水平;Western Blotting检测颅骨组织Akt、p-AktSer473和p-AktThr308等蛋白表达变化.结果:Micro-CT和组织形态学分析结果显示,PI3K抑制剂LY294002能明显抑制TCP磨损颗粒诱导小鼠颅骨溶解和破骨细胞形成(P＜0.05),增加BMD和BMC含量(P＜0.05);下调破骨细胞生成标志物TRAP、CstK、RANKL和c-Fos等mRNA水平(P＜0.05),并抑制炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6的释放(P＜0.05);而且LY294002显著减弱TCP磨损颗粒诱导的Akt信号蛋白活化,导致p-AktS-er473和p-AktThr308等蛋白表达明显下调(P＜0.05).结论:PI3K/Akt信号通路参与调控TCP磨损颗粒诱导的假体周围骨溶解,可作为假体周围骨溶解和关节松动的治疗靶标.
关键词： 磷酸三钙(TCP)磨损颗粒 骨溶解 破骨细胞 PI3K/Akt信号通路 -
PI3K/Akt信号通路与肝星状细胞活化的关系及其在放射性肝纤维化中的作用
目的 探讨磷脂酰肌醇3激酶-蛋白激酶B(PI3 K/Akt)信号通路与肝星状细胞(HSC)活化的关系及其在放射性肝纤维化中的作用.方法 6MVX射线照射,联合PI3K/Akt信号通路特异性抑制剂处理HSC,分为空白对照组、抑制剂组、10 Gy照射组、10 Gy+抑制剂组、20 Gy照射组和20 Gy+抑制剂组.检测各组的细胞凋亡率、细胞上清液转化生长因子β1(TGF-β1)浓度、平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的mRNA表达量和磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)的表达量.结果 与空白对照组相比,10和20 Gy照射组细胞的凋亡率随照射剂量的增加而增加(=8.43、11.63,P＜0.05);与10和20 Gy照射组比较,分别加抑制剂后细胞的凋亡率降低(t=8.09、4.88,P＜0.05).与10 Gy照射组比较,20 Gy照射组TGF-β1、α-SMA、p-Akt的量增加(t=6.91、7.80、9.28,P＜0.05),10 Gy+抑制剂组TGF-β1、α-SMA、p-Akt的量降低(t=6.17、15.11、10.34,P＜0.05).与20 Gy照射组比较,20 Gy+抑制剂组TGF-β1、α-SMA、p-Akt的量同样降低(t=10.04、6.85、23.84,P＜0.05).结论 X射线通过激活PI3K/Akt信号通路使HSC活化,导致放射性肝纤维化的发生.
关键词： X射线 肝星状细胞 放射性肝纤维化 PI3K/Akt信号通路 -
牛舌草总黄酮抗大鼠心肌缺血再灌注损伤的作用及机制
牛舌草是维吾尔医长期实践中治疗心脑血管疾病的常用药材之一.本研究采用大鼠冠状动脉左前降支结扎30 min,复灌4h模拟临床心肌缺血再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)损伤,于再灌注后腹腔注射给予10、30和50 mg·kg-1牛舌草总黄酮(bugloss total flavonoids,BTF),根据心电图、心功能、心肌梗死指数和血清心肌酶谱结果评价牛舌草总黄酮的心肌保护作用,并从炎症、细胞凋亡以及PI3K/Akt信号通路等探讨其作用机制.实验结果显示,牛舌草总黄酮能够剂量依赖性地降低心肌梗死指数,改善缺血再灌注大鼠的心脏功能,减少心肌酶的漏出,具有明显的心肌保护作用.ELISA结果表明,牛舌草总黄酮能降低心肌炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α的水平,增加Bcl-2,降低Bax,并上调PI3K和Akt的磷酸化水平.牛舌草总黄酮具有明显的抗心肌缺血再灌注损伤作用,其机制可能与上调PI3K/AKT信号通路而抑制细胞凋亡与炎症有关.
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叶酸受体在食管癌细胞中的表达及其与食管癌生物学行为的关系
目的 研究PI3K/AKT信号通路靶向抑制剂LY294002对食管癌细胞EC109中FR的表达的影响,从而了解食管癌生物学行为与叶酸受体的关系.方法 将LY294002作用于食管癌细胞株EC109,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞增殖抑制率,流式细胞术检测食管癌细胞FR的表达.结果 随LY294002浓度的增加及作用时间(12h、24h)的延长,实验组EC109细胞的增殖抑制率逐渐增大,LY294002抑制作用与浓度及作用时间呈正相关.LY294002干预食管癌细胞24小时后,实验组叶酸受体表达的表达较对照组明显降低.结论 阻断PI3K/AKT信号通路可以改变食管癌细胞株EC109中FR的表达,并能明显抑制细胞增殖,其机制可能与其抑制AKT磷酸化,从而改变食管癌细胞的生物学行为有关.
关键词： PI3K/Akt信号通路 LY294002 EC109细胞 FR -
银杏内酯B后处理改善缺血/再灌注损伤的老年大鼠心功能
目的:探讨银杏内酯B(ginkgolide B,GB)后处理对缺血/再灌注(isehemia/reperfusion,I/R)损伤的老年大鼠心功能的影响.方法:将老年SD大鼠随机分为正常对照组、单纯缺血/再灌注组和GB后处理组.制备离体心脏I/R损伤模型,记录心脏血流动力学各指标,测定心肌梗死面积、冠脉流出液乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)含量.分离心脏得单个心肌细胞,行细胞I/R损伤模型,分别用不同浓度GB在再灌注时进行后处理,并检测单个心肌细胞的收缩幅度,收集细胞,检查其Bcl-2和Bax蛋白表达.在GB佳浓度组中分别加和不加PI3 K/Akt信号通路抑制剂LY294002,检测细胞的收缩幅度和p-Akt蛋白表达含量.结果:GB后处理能明显降低左心室舒张末压(LVEDP),增强+dp/dtmax,并抑制-dp/dtmax的抬升,降低LDH含量.GB 1μmol·L-能明显增强心肌细胞的收缩幅度(P＜0.01),并能降低Bax与Bcl-2的比值,降低凋亡.而GB增强细胞收缩幅度的作用能够被LY294002抑制,并且GB能增加p-Akt蛋白的表达.结论:GB后处理可通过PI3K/Akt信号通路改善缺血/再灌注损伤的老年大鼠的心功能.
关键词： 银杏内酯B 缺血/再灌注 老年大鼠 心肌细胞 PI3K/Akt信号通路 -
雷公藤甲素对TM4细胞氧化应激及PI3K/AKT通路的影响
目的:探讨雷公藤甲素(triptolide,TP)对TM4小鼠睾丸支持细胞氧化应激、凋亡的影响及相关分子信号调控机制.方法:不同浓度雷公藤甲素对TM4细胞染毒24 h;细胞增殖实验检测雷公藤甲素对TM4细胞增殖的抑制作用;通过2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐(6-carboxy-2',7'-dichlorofluorescein diacetate,DCFH-DA)探针检测TM4细胞内活性氧水平的变化;Annexin V/PI双染检测雷公藤甲素诱导TM4细胞凋亡变化;Western blot免疫印迹法分别检测凋亡标志蛋白cleaved-PARP和PI3 K/Akt通路相关蛋白表达情况.结果:细胞增殖实验提示雷公藤甲素对TM4细胞有显著抑制作用,呈浓度梯度上升[10 nmol/L:(73.77±20.95)％,100 nmol/L:(51.60±10.43)％,500nmol/L:(44.34±5.78)％];雷公藤甲素处理使细胞内活性氧水平上调(P＜0.01),呈浓度依赖性;给药组TM4细胞早期凋亡和晚期凋亡比例均上调[对照组:(3.84±1.50)％,100 nmol/L:(13.04±2.03)％,200 nmol/L:(16.24±1.34)％,400 nmol/L:(18.76±3.45)％],各给药组cleaved-PARP表达上调(P＜0.01);给药组TM4细胞中Akt、p70S6K磷酸化水平上调(P＜0.01),mTOR磷酸化水平未见显著变化(P＞0.05).结论:在体外培养条件下,雷公藤甲素可抑制TM4睾丸支持细胞增殖,并诱导TM4细胞凋亡增加,呈浓度依赖性;雷公藤甲素同时可引起TM4细胞中氧化应激水平上调,这可能是其细胞毒性机制之一;雷公藤甲素可导致Akt和p70S6K的激活,磷酸化水平升高,提示PI3K/Akt信号通路可能参与雷公藤甲素诱导的TM4细胞氧化应激反应,激活PI3K/Akt信号通路可能是其分子调控机制之一.
关键词： 雷公藤甲素 睾丸支持细胞 氧化应激 细胞凋亡 PI3K/Akt信号通路 -
芪杉方联合顺铂对肺癌A549细胞PI3K/AKt信号通路的影响
目的 观察芪杉方联合顺铂对肺癌A549细胞PI3K/AKt信号通路的影响.方法 Wisatr雄性大鼠随机分成芪杉方含药血清组、顺铂组、芪杉方含药血清联合顺铂组和空白对照组,每组10只,各组连续灌胃3 d后取血.分别运用MTT法、Annexin V-PE/7-AAD双染法、蛋白质印迹(West-ern blot)法、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测芪杉方含药血清联合顺铂对A549细胞增殖、细胞凋亡及其相关蛋白和基因表达的影响.结果 芪杉方含药血清组、顺铂组、芪杉方含药血清联合顺铂组分别作用于A549细胞时,均表现为抑制细胞增殖作用,其抑制率分别为27.20％(P<0.01),28.52％(P<0.01)和51.25％(P<0.01).芪杉方含药血清组、顺铂组、芪杉方含药血清联合顺铂组Caspase-3、Caspase-9、mTOR及PI3 K蛋白和基因表达量与空白对照组相比,表达量降低(P<0.01),且芪杉方含药血清联合顺铂组对A549细胞凋亡相关蛋白表达的影响显著(P<0.01).结论 芪杉方含药血清组、顺铂组、芪杉方含药血清联合顺铂组均能够抑制A549细胞增殖,激活Caspase-3、Caspase-9、AKT、mTOR相关凋亡途径,从而诱导A549细胞凋亡.
关键词： 芪杉方 肺癌 顺铂 PI3K/Akt信号通路 -
三阴型化疗耐药乳腺癌中PI3K/Akt信号通路生物学功能的研究
目的 探讨三阴型化疗耐药乳腺癌中磷脂酰肌醇-3-激酶/丝苏氨酸蛋白激酶(PI3K/Akt)信号通路生物学功能.方法 选取2009年1月-2011年12月该院收治的49例三阴型化疗耐药性乳腺癌患者作为观察对象.患者采用PI3K/Akt抑制剂雷帕霉素口服液治疗,检测用药期间血药浓度.探讨治疗后患者发生肿瘤转移及疗效.结果 治疗后,总有效率为79.59％,较治疗前疗效,差异有统计学意义(P＜0.05);治疗期间常见不良反应主要为血小板减少、高血脂、皮肤毒性、转氨酶增高;乳腺癌组织及转移灶癌组织PI3K/Akt表达率治疗前后均差异有统计学意义(P＜0.05).结论 PI3K/Akt信号通路抑制剂能够有效阻断该信号通路在乳腺癌增殖、转移、耐药作用.
关键词： 乳腺癌 三阴型 耐药性 PI3K/Akt信号通路 -
类泛素蛋白FAT10在肝癌中的表达及生物学作用
目的 探讨类泛素蛋白FAT10在肝癌细胞中的异常表达和功能活化及其分子机制.方法 将38例肝癌大鼠随机分为空白组、pcDNA3.1-FAT10组、FAT10 siRNA组.采用RT-PCR法检测肝癌及癌旁组织中FAT10 mRNA的表达水平,电穿孔法分别将FAT10 siRNA和重组表达载体pcDNA3.1-FAT10转染人肝癌SMMC-7721后,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡的变化,RT-PCR检测PI3K/Akt通路的变化.结果 FAT10 mRNA在大鼠肝癌组织中的相对表达水平明显高于癌旁组织(P＜0.05),沉默FAT10后,对细胞周期无明显影响,细胞凋亡率上升,PI3K/Akt信号通路表达下调;促进FAT10表达后,对细胞周期无明显影响,细胞凋亡率显著下降,PI3K/Akt通路表达上调.结论 FAT10可通过上调PI3K/Akt通路表达,减少细胞凋亡,增强肝癌细胞的侵袭能力,FAT10可能成为预防和治疗肝癌的靶点.
关键词： 肝癌 FAT10 电转法 PI3K/Akt信号通路 凋亡 -
PI3K/AKT信号通路与寻常型银屑病表皮增殖失调的相关性研究
寻常型银屑病(psoriasis vulgaris)是一种具有顽固性、易复发特点的以红斑、鳞屑为主要表现的慢性炎性皮肤病.目前其发病机制尚未完全阐明,普遍认为多与免疫、感染、代谢障碍、遗传及精神因素等有关,近年主要研究其在免疫方面的发病机制,多认为是通过免疫介导的共同信号通路引起角质形成细胞增殖过度,但目前角质细胞过度增殖机制尚未清楚,本文主要从PI3K/AKT信号通路与银屑病表皮增殖的关系方面做一综述.
关键词： 寻常型银屑病 PI3K/Akt信号通路 FoxO转录因子 PTEN -
Akt抑制剂MK-2206对肝癌细胞huh7生物学行为的影响及机制
目的 探讨MK-2206作用于肝癌细胞huh7后对其生物学行为的影响及作用机制.方法 体外培养人肝癌细胞系huh7,采用不同浓度(0、2.5、5、10、20、40μmol/L) MK-2206干预huh7细胞.采用CCK-8检测细胞增殖变化;流式细胞术检测细胞凋亡的变化;蛋白免疫印迹法检测相关蛋白的表达.结果 与对照组(0 μmol/L)比较,MK-2206对肝癌细胞huh7的增殖活性有明显抑制作用,且呈剂量依赖性和时间依赖性(P＜0.05);MK-2206诱导huh7细胞凋亡(P＜0.05),显著抑制Akt的蛋白表达(P＜0.05).结论 Akt抑制剂MK-2206可通过调控PI3K/Akt信号通路来调控肝癌细胞huh7的生物学行为.
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Tizanidine对胶质瘤细胞U251增殖、迁移及凋亡的影响
目的 探究Tizanidine对胶质瘤细胞U251的增殖、迁移及凋亡的影响,并尝试探讨其作用机制.方法 将U251细胞分为两组,一组用Tizanidine(20 μmol/L)处理24h;另一组用DMSO处理为对照组.采用CCK8实验检测细胞增殖情况;采用Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭情况;采用细胞流式检测细胞凋亡情况,采用Western blot检测PI3K-AKT信号通路相关蛋白及凋亡相关蛋白的表达量的变化.结果 CCK8增殖实验表明Tizanidine可以抑制脑胶质瘤细胞U251的增殖(P＜0.05);Transwell结果说明Tizanidine可以抑制脑胶质瘤细胞U251的迁移和侵袭(P＜0.05);流式凋亡结果分析显示经无血清凋亡诱导后,经Tizanidine处理的细胞凋亡明显增多(P＜0.05),Western blot结果显示经过Tizanidine处理的U251细胞,细胞的抗凋亡蛋白B淋巴细胞瘤-2(BCL-2)的表达量显著下调(P＜0.05),促凋亡蛋白Bcl-2相关X蛋白(BAX)和Active Caspase3表达量则显著上调(P＜0.05),AKT和mTOR的磷酸化水平均受到了显著抑制(P＜0.05),PI3K/AKT信号通路的下游蛋白P70、CyclinD1的表达也相应下调(P＜0.05).结论 Tizanidine抑制胶质瘤细胞U251的增殖、迁移和侵袭,诱导其凋亡,这有可能是通过抑制PI3K/AKT信号通路的激活实现的.
关键词： Tizanidine U251 PI3K/Akt信号通路 -
角蛋白17在寻常性银屑病T淋巴细胞介导免疫机制中的作用研究
目的 探讨角蛋白17 (keratin17,K17)在寻常性银屑病T淋巴细胞介导免疫机制中的作用.方法 随机选取2014年6月至2015年4月本院收治的寻常性银屑病患者50例纳入寻常性银屑病组,将同期健康体检者50例纳入对照组,比较两组研究对象的蛋白激酶B (protein kinase B,Akt)、K17、血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达水平,并比较寻常性银屑病组进行期与稳定期患者的Akt、K17、VEGF表达水平,研究K17表达水平对T淋巴细胞免疫反应和磷脂酰肌醇-3-羟基激酶/丝/苏氨酸激酶(phophatidylinsotitol-3-kinase/serine/threonine kinase,PI3K/Akt)信号通路的影响,阐明K17通过PI3K/Akt信号通路促进寻常性银屑病发生的具体机制.结果 寻常性银屑病组患者Akt、K17、VEGF表达水平均显著高于对照组(P＜0.05);寻常性银屑病进行期患者的Akt、K17、VEGF表达水平均显著高于稳定期患者(P＜0.05).结论 K17在T淋巴细胞免疫调节下,通过PI3K/Akt信号转导通路调节细胞增殖及细胞周期,活化相关生长因子及趋化因子,在促进寻常性银屑病发生中具有重要作用,并提出K17→T细胞→细胞因子→PI3K/Akt信号通路→寻常性银屑病皮损这一具体信号机制.
关键词： 寻常性银屑病 T淋巴细胞 PI3K/Akt信号通路 角蛋白17 -
顺铂腹腔灌注对卵巢癌的疗效评价及对PI3K/Akt信号通路的影响
目的 探讨顺铂腹腔灌注对卵巢癌的疗效评价及对PI3K/Akt信号通路的影响.方法 收集2014年3月～2016年9月间本院收治的晚期卵巢癌患者78例,经随机数字表法分为对照组及观察组,各39例.对照组患者接受常规静脉化疗,观察组患者接受顺铂腹腔灌注联合静脉化疗.对比两组患者近期疗效、血清卵巢癌肿瘤标志物含量、癌性腹水中PI3K/Akt信号通路相关分子表达量的差异.结果 治疗3个疗程后,观察组患者的总有效率高于对照组(P<0.05);观察组患者血清中卵巢癌相关肿瘤标志物人附睾蛋白4(HE4)、细胞角蛋白19片段(CYDRA21-1)、组织特异性抗原(TPS)的含量低于对照组患者(P<0.05);观察组患者癌性腹水中PI3K/Akt信号通路相关分子PI3K、Akt蛋白的表达量低于对照组患者(P<0.05).结论 晚期卵巢癌患者接受顺铂腹腔灌注联合常规化疗,可更为有效的提升治疗效果,具体机制与其抑制PI3K/Akt信号通路功能直接相关.
关键词： 卵巢癌 顺铂腹腔灌注 肿瘤标志物 PI3K/Akt信号通路
