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定心方经PI3K/Akt通路抑制人脐静脉内皮细胞迁移的研究
目的:探讨定心方(DXR)对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)迁移的分子机制.方法:将HUVEC分为空白组、模型组、DXR低、中、高剂量组和LY294002阻制剂组.除正常对照组外,其他组采用ox-LDL(终浓度为100 mg/L)造成HUVEC损伤模型,用不同浓度定心方含药血清(终浓度为0％,5％,10％,20％)和PI3K特异性抑制剂LY294002(浓度为4μmol/L)干预培养24 h.采用MTT法检测细胞增殖;细胞划痕实验和迁移实验检测各组细胞迁移情况;Western blotting法检测各组细胞中MMP9、PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt蛋白表达情况.结果:与空白组比较,模型组可显著促进HUVEC增殖和细胞迁移,上调HUVEC内p-PI3K、p-Akt、MMP9蛋白的表达(P＜0.05);与模型组比较,DXR高、中剂量组和LY294002阻制剂组可显著抑制HUVEC增殖,降低细胞迁移数目,抑制HU-VEC内p-PI3K、p-Akt、MMP9蛋白的表达(P＜0.05).结论:体外实验表明,DXR可抑制ox-LDL诱导的HUVEC迁移,其机制可能与下调PI3 K/Akt通路抑制MMP9表达有关.
关键词： 定心方 PI3K/Akt信号通路 MMP9 细胞迁移 -
表皮生长因子影响大鼠骨髓间充质干细胞增殖和迁移的信号通路
背景:表皮生长因子作为一种辅助生长因子,但是对于骨髓间充质干细胞的生长是否必须尚无定论.目的:建立大鼠骨髓间充质干细胞分离提取以及鉴定的方法,同时探索表皮生长因子对其增殖能力以及迁移能力的影响,同时探索其潜在机制.方法:①采用全骨髓贴壁法,分离纯化大鼠骨髓间充质干细胞,培养至第3代,使用流式细胞仪检测细胞表面抗原CD29,CD45,CD90表达情况.通过成骨和成脂分化诱导,更进一步鉴定骨髓间充质干细胞;②同时通过CCK-8法和克隆形成实验测量表皮生长因子对骨髓间充质干细胞的第3代细胞的增殖能力的影响.同时通过Transwell小室验证表皮生长因子对骨髓间充质干细胞的第3代细胞迁移能力的影响.通过蛋白印迹实验检测PI3K/Akt和核因子KB信号通路相关蛋白表达水平,探索表皮生长因子的作用机制.结果与结论:①原代骨髓间充质干细胞呈多角形和梭形,随着培养时间增加,逐渐呈梭形为主.流式细胞术检测第3代细胞表面CD29,CD90表达呈阳性,CD45表达成阴性.并且对骨髓间充质干细胞的第3代细胞成功进行了成骨和成脂分化诱导;②表皮生长因子能够促进第3代细胞的增殖,且细胞中PI3K/Akt信号通路关键分子p-Akt表达水平的增加,同时其下游信号分子Bax表达水平降低而Bcl-2表达升高.表皮生长因子能够通过调节核因子κB信号通路分子p 65以及IκB的磷酸化水平,同时也增加了基质金属蛋白酶9的表达水平,从而促进大鼠骨髓间充质干细胞的迁移;③结果表明表皮生长因子促进骨髓间充质干细胞的增殖和迁移.
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唾液酸糖基转移酶ST8SIA4对NB4/ADR细胞耐药性的影响
目的 通过研究在人急性髓性白血病(AML)中NB4和耐药细胞株NB4/ADR的唾液酸糖基转移酶ST8SIA4的表达差异,探讨ST8SIA4基因的差异表达在AML细胞体内外药敏性的影响,为AML多药耐药的检测提供新的标志物,同时为逆转其耐药提供新策略和靶点.方法 采用Real-time PCR、Western blot技术检测人AML细胞株ST8SIA4的表达情况.通过对ST8SIA4特异性调控,检测NB4/ADR细胞在体内和体外干扰前后对化疗药物的敏感性变化、信号通路PI3K/Akt的激活情况和P-gp的表达情况.结果 在人AML和耐药细胞株中ST8SIA4的表达具有明显差异;特异性下调ST8SIA4在NB4/ADR细胞中的表达,药敏性在该细胞中增强;PI3K/Akt信号通路主要分子p110α、p-Akt308、p-Akt473在NB4/ADR-ST8SIA4shRNA细胞中表达较少,同时P-gp的表达量减少.结论 ST8SIA4在人AML和耐药细胞株中表达具有明显的差异,AML多药耐药与ST8SIA4的特征性改变具有相关性;AML的多药耐药性可能是通过介导ST8SIA4的信号通路PI3K/Akt来调控P-gp表达改变的.
关键词： ST8SIA4 白血病细胞株 多药耐药 PI3K/Akt信号通路 P-gp -
PAX9在食管鳞癌细胞中的表达
目的：研究配对盒基因9(paired box gene 9, PAX9)在食管鳞癌细胞中的表达及其对细胞生长和增殖的作用及其机制,为食管癌的治疗寻找新的靶点和治疗方法。方法培养4种食管鳞癌细胞,提取细胞总RNA及总蛋白,用RT-PCR和Western blot法检测食管鳞癌细胞中PAX9的mRNA和蛋白质的表达水平；合成并构建PAX9 shRNA载体,转染食管鳞癌细胞,通过Western blot法检测其对PAX9表达抑制情况和PI3K/AKT信号通路上的AKT活性(p-AKT)变化,用台盼蓝拒染法计算细胞存活率。结果在食管鳞癌细胞中, PAX9在mRNA和蛋白水平上均有表达；沉默PAX9基因能抑制食管鳞癌细胞增殖,且p-AKT表达也降低,说明PAX9是通过PI3K/AKT信号通路促进细胞增殖。结论 PAX9是食管鳞癌细胞增殖和生长所必需的转录因子,而且通过调控PI3K/AKT信号通路参与并促进细胞增殖,为食管癌分子靶向治疗提供了实验依据。
关键词： Pax9 食管鳞癌 细胞增殖 PI3K/Akt信号通路 -
化瘀祛痰方对高脂血症大鼠肝脏PI3K/Akt信号通路影响研究
目的:探讨化瘀祛痰方对高脂血症大鼠肝脏PI3K/Akt信号通路的影响.方法:将50只SD大鼠随机分为正常组、模型组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组,每组10只.采用高脂饲料喂养进行高脂血症模型复制后,中药低、中、高剂量组分别给予含有生药量为0.45、0.9、1.8 g/mL的化瘀祛痰方药煎剂进行治疗,正常组和模型组给予等量生理盐水灌胃.4周后HE染色观察各组大鼠肝脏形态变化;全自动生化分析仪检测各组大鼠血清TC、TG、LDL-C、HDL-C含量变化;WB法检测各组大鼠肝脏PI3K、Akt、p-Akt蛋白表达水平.结果:与正常组相比,模型组大鼠肝脏脂肪变性明显,TC、LDL-C水平显著升高(P＜0.05),HDL-C水平降低(P＜0.05),TG水平未发生显著改变(P＞0.05);PI3K、p-Akt蛋白表达水平上调(P＜0.05);与模型组相比,中药低、中、高剂量组大鼠肝脏脂肪变性呈不同程度减低,TC、LDL-C水平显著降低(P＜0.05),HDL-C水平升高(P＜0.05),TG水平未发生显著改变(P＞0.05);PI3K、p-Akt蛋白表达水平呈不同程度下调(P＜0.05).结论:化瘀祛痰方可以通过调节PI3K/Akt信号通路相关蛋白的表达,从而改善高脂血症大鼠肝脏脂质损伤.
关键词： 高脂血症 化瘀祛痰方 PI3K/Akt信号通路 -
PI3K/Akt/GSK-3β/β-catenin信号通路促进神经细胞再生修复的研究进展
PI3K/Akt信号通路和Wnt/β-catenin信号通路通过活化多种效应分子,抑制细胞凋亡,促进细胞分裂增殖,在细胞存活方面发挥着重要作用.实验研究表明这两种信号通路在神经细胞凋亡和再生方面也起到关键作用,为以两种信号通路关键分子为靶点的研究提供有力参考和保证,特别是在目前广泛研究的脑缺血损伤与修复方面.
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乙肝病毒X蛋白结合蛋白对腺样囊性癌细胞株ACC-2生物学行为的影响
目的 探讨乙肝病毒X蛋白结合蛋白(HBXIP)对腺样囊性癌细胞株ACC-2生物学行为的影响及其机制.方法 采用siRNA转染法抑制腺样囊性癌细胞株ACC-2中HBXIP的表达;实时PCR和Western blotting检测HBXIP基因及蛋白表达水平;MTT法检测HBXIP-siRNA对细胞增殖的影响;transwell法检测HBXIP-siRNA对细胞侵袭的影响;划痕实验检测HBXIP-siRNA对细胞迁移的影响;蛋白印迹方法检测HBXIP-siRNA对PI3K/Akt信号通路中Akt、p-Akt、PI3K、p-PI3K及对S100A4蛋白表达量的影响.结果 HBXIP在ACC-2中高表达,HBXIP-siRNA成功转染细胞株.MTF结果显示,48、72、96 h时实验组中存活的细胞数低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);划痕实验结果显示,实验组细胞迁移率明显低于对照组(P＜0.01);transwell小室实验结果显示,实验组中细胞侵袭个数明显低于对照组(P＜0.01);蛋白印迹结果显示,相对于对照组,实验组细胞中p-Akt、p-PI3K及S100A4的表达量随着HBXIP基因沉默而相对降低.结论 HBXIP可促进腺样囊性癌细胞株ACC-2增殖、迁移和侵袭,其机制可能与促进Akt、PI3K磷酸化及增加S100A4蛋白表达量有关.
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外源性硫化氢通过PI3K/Akt信号通路诱导人卵巢癌细胞凋亡
目的:探讨PI3K/Akt信号通路在外源性硫化氢诱导人卵巢癌细胞凋亡中的作用.方法:用硫化氢供体硫氢化钠(10-5、10-4和10-3mol/L)处理卵巢癌细胞株SKOV3细胞12h、24h和48 h后,采用MTT法测算细胞增殖抑制率、流式细胞术检测细胞凋亡,采用实时荧光定量PCR和Western blot分别检测p-Akt mRNA和蛋白的表达,观察PI3K/Akt信号通路激动剂胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对外源性硫化氢作用的影响.结果:10-4和10-3 mol/L的硫氢化钠处理24 h和48 h,以浓度和剂量依赖的方式增加了细胞增殖抑制率和细胞凋亡率,下调了p-Akt的表达(P＜0.05).IGF-1取消了硫氢化钠诱导的SKOV3细胞增殖抑制和凋亡增加(P＜0.05).结论:外源性硫化氢通过PI3K/Akt信号通路诱导人卵巢癌细胞凋亡,抑制增殖.
关键词： 硫化氢 细胞凋亡 细胞增殖 人卵巢癌细胞 PI3K/Akt信号通路 -
下调miR-21抑制PI3K/AKT信号通路对白血病细胞增殖凋亡的影响
目的:探讨 miR-21对白血病 K562细胞增殖凋亡的影响及对 PI3K/AKT信号通路的调控作用.方法:将K562细胞分为对照组、miR-21 NC组和miR-21干扰组,对照组不做处理,后两组采用阳离子脂质体LipofectamineTM2000转染miR-21 inhibitor和miR-21 negative control.转染48 h后,利用实时荧光定量(qRT-PCR)检测各组细胞中miR-21 mRNA的表达情况,采用MTT比色法检测miR-21对细胞增殖率的影响,流式细胞仪检测miR-21对细胞周期和凋亡率的影响,蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测miR-21对各组细胞中PI3K/AKT信号通路相关蛋白PI3K、AKT和p-AKT表达的影响.结果:miR-21干扰组中细胞的miR-21 mRNA表达水平和细胞的存活率较对照组和miR-21 NC组均明显降低;与对照组和miR-21 NC组比较,流式细胞仪检测miR-3干扰组中G0/G1期所占细胞比例明显升高,S期细胞所占比例明显下降,细胞的凋亡率明显升高.Western blot检测p-AKT的表达水平较对照组和miR-21 NC组明显下降,但PI3K和AKT蛋白的表达水平变化不大.结论:下调miR-21能够抑制白血病K562细胞的增殖,促进其凋亡,其作用机制可以与抑制PI3K/AKT信号通路有关.
关键词： miR-21 白血病 细胞增殖 细胞凋亡 PI3K/Akt信号通路 -
羟氯喹通过PI3K/Akt通路对系统性红斑狼疮外周血单个核细胞凋亡的作用研究
目的:探讨羟氯喹对SLE患者外周血单个核细胞的凋亡作用及其相关机制.方法:对30例活动期SLE患者及15例正常健康人抽血分离PBMCs细胞进行培养,分为正常对照组、SLE组、羟氯喹5 mg/L、羟氯喹25 mg/L组,MTT法检测细胞生长抑制,采用Annexin V/PI流式细胞仪细胞检测凋亡率,Western blot方法检测BAX、BCL-2、PI3K、pAKt及mTOR等相关蛋白的表达影响.同时加入羟氯喹HCQ 25 mg/L和PI3 K/AKT通路抑制剂LY294002 20 μmol/L,作用SLE患者的PBMCs细胞48 h,检测PBMCs细胞生长抑制和凋亡率.结果:SLE组比正常对照组PBMCs细胞生长抑制率和凋亡率显著升高(P＜0.05);与SLE组相比,羟氯喹5 mg/L和25 mg/L组细胞生长抑制率和凋亡率显著升高(P＜0.05).羟氯喹组与SLE组比较,PI3K、pAKt、mTOR、bcl-2的表达明显下降,差异有统计学意义(P＜0.05),bax和caspase-3的表达增加,差异有统计学意义(P＜0.05).PI3K/AKT抑制剂LY294002能够阻断羟氯喹导致的SLE患者PBMCs细胞凋亡.结论:羟氯喹能够通过PI3K/Akt信号通路促进SLE患者体外PBMCs的凋亡.
关键词： 羟氯喹 系统性红斑狼疮 外周血单个核细胞 凋亡 PI3K/Akt信号通路 -
上调GDF-15表达对H2O2诱导的H9C2心肌细胞生物学特性及PI3K/AKT信号通路的影响
目的:探讨上调生长分化因子-15(GDF-15)的表达对H2O2诱导的H9C2心肌细胞增殖、凋亡及PI3K/AKT信号通路的影响.方法:CCK8法检测不同浓度的H2O2处理H9C2心肌细胞后的细胞增殖情况;H9C2心肌细胞分为Control组、NC组、H2O2组、GDF-15+H2O2组,各组细胞处理24 h后收集细胞,RT-PCR及Western blot分别检测各组细胞中GDF-15的mRNA及蛋白表达;CCK8法及流式细胞术分别检测细胞的增殖和凋亡情况;2',7'-二氯二氢荧光素黄二乙酸酯(DCFH-DA)探针检测细胞活性氧簇(ROS)水平;Western blot检测Ki67、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、PI3K、p-AKT蛋白表达.10 μmol/L的PI3K/AKT信号通路抑制剂LY294002处理H9C2心肌细胞,通过CCK8法及流式细胞术分别检测GDF-15+H2O2组及PI3K/AKT信号通路抑制剂组细胞活力及凋亡率,Western blot检测Ki67、Bcl-2、Bax、PI3K、p-AKT蛋白表达.结果:不同浓度H2O2处理H9C2心肌细胞后,细胞活力均受到抑制,且有浓度依赖性(P<0.05),由于200 μmol/L的H2O2处理H9C2心肌细胞后可抑制将近一半的细胞增殖,选择200 μmol/L的H2O2作为研究对象;与Control组比较,H2O2组GDF-15的mRNA及蛋白表达均显著升高,细胞增殖显著降低,凋亡率增加,ROS水平升高,Ki67、Bcl-2、PI3K、p-AKT蛋白表达降低,Bax蛋白表达升高(P<0.05);与H2O2组比较,GDF-15+H2O2组细胞GDF-15的mRNA及蛋白表达均显著升高,细胞增殖显著增加,凋亡率降低,ROS水平降低,Ki67、Bcl-2、PI3K、p-AKT蛋白表达升高,Bax蛋白表达降低(P<0.05).PI3K/AKT信号抑制剂组细胞活力及Bcl-2、PI3K和p-AKT的蛋白表达均显著低于GDF-15+H2O2组,细胞凋亡率及Bax蛋白表达显著高于GDF-15+H2O2组(P<0.05).结论:上调GDF-15表达可促进H2O2诱导的H9C2心肌细胞增殖,降低细胞凋亡,其机制可能与调节细胞中ROS水平,Ki67、Bcl-2、Bax表达及PI3K/AKT信号通路有关.
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沙眼衣原体pORF5蛋白通过激活PI3K/Akt信号通路抑制细胞凋亡
目的:探讨沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)pORF5蛋白对细胞凋亡的影响,并进一步分析其分子机制,为阐明Ct致病机制提供实验依据.方法:pGEX-6p/pORF5重组质粒转化XL1-blue大肠杆菌,IPTG诱导表达GST-pORF5融合蛋白,融合蛋白经谷胱甘肽琼脂糖凝胶4B纯化及蛋白酶切除GST标签后得到pORF5蛋白.用不同浓度的pORF5蛋白刺激HeLa细胞,Western blot 检测不同时间Bax和Bcl-2的表达水平以及PI3K/Akt磷酸化水平,Hoechst 33342及流式细胞技术分析细胞凋亡情况;HeLa细胞经PI3K/Akt特异性抑制剂LY294002预处理1 h后,再用pORF5蛋白刺激24 h,测定细胞凋亡率,并进一步分析凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达水平及PI3K/Akt磷酸化水平.结果:凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达变化与pORF5蛋白浓度呈现一定的浓度和时间依赖性,当pORF5蛋白浓度达10 μg/ml时,Bax表达下调,Bcl-2的表达上调,当升高至15 μg/ml时,Bax和Bcl-2的表达量变化明显;15 μg/ml的pORF5蛋白刺激HeLa细胞24 h,Bax和Bcl-2表达变化明显;流式细胞检测结果显示:pORF5蛋白刺激组较TNF-α处理组和未处理组细胞凋亡率分别降低了27.3%(P<0.01)和8.4%(P<0.05);Akt在pORF5蛋白刺激15 min后发生磷酸化,30 min后磷酸化水平达到峰值,用PI3K抑制剂LY294002预处理Hela细胞后,发现Akt的磷酸化显著减少,Bax蛋白表达明显上调,Bcl-2表达明显下调;LY294002处理组细胞凋亡率相比于对照组增加了13.0% (P<0.01).结论:pORF5蛋白通过激活PI3K/Akt信号通路调节Bcl-2和Bax蛋白的表达抑制细胞凋亡.
关键词： 沙眼衣原体 pORF5蛋白 细胞凋亡 PI3K/Akt信号通路 -
白藜芦醇对糖尿病大鼠血管平滑肌细胞凋亡的影响及其机制研究
目的:探索白藜芦醇对糖尿病大鼠血管平滑肌细胞凋亡的影响及其调控机制.方法:实时定量PCR ( qRT-PCR)检测血清中单核细胞趋化蛋白-1 (MCP1)、巨噬细胞移动抑制因子(MIF)和白细胞介素18(IL-18)的mRNA水平;HE染色和Masson染色评价心肌纤维化水平;流式细胞术分析细胞凋亡;蛋白印迹检测Cleaved caspase-3、Cleaved caspase-9、B淋巴瘤2蛋白(Bcl-2)、Bcl-2相关蛋白X(Bax)、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达.结果:白藜芦醇可降低STZ诱导的糖尿病大鼠血清MCP-1、MIF和IL-18的mRNA水平并改善心肌纤维化加剧. STZ诱导糖尿病组血管平滑肌细胞凋亡率明显高于对照组(P＜0. 05).与STZ诱导糖尿病组相比,STZ+白藜芦醇组血管平滑肌细胞凋亡率明显降低 (P＜0. 05).而且,白藜芦醇可抑制STZ诱导的糖尿病大鼠血管平滑肌细胞Cleaved caspase-3、Cleaved caspase-9和Bax蛋白表达,提高Bcl-2表达(P＜0. 05).与对照组相比,STZ诱导糖尿病组血管平滑肌细胞中p-PI3K/PI3K和p-AKT/AKT比率明显降低(P＜0. 05). STZ+白藜芦醇组血管平滑肌细胞p-PI3K/PI3K和p-AKT/AKT比率明显高于STZ诱导糖尿病组(P＜0. 05).结论:白藜芦醇可通过激活PI3K/AKT信号通路抑制STZ诱导的糖尿病大鼠血管平滑肌细胞凋亡.
关键词： 白藜芦醇 糖尿病 凋亡 PI3K/Akt信号通路 -
雄激素受体基因对前列腺癌移植瘤生长及PI3K/AKT信号通路的影响
目的 探讨雄激素受体(AR)小片段发夹 RNA(shRNA)质粒对前列腺癌移植瘤的作用及其机制.方法 构建AR shRNA并制备重组质粒.使用BALB/C裸鼠构建前列腺癌细胞DU-145移植瘤模型并分为模型对照组、阳性对照组和实验组(n=10).阳性对照组、实验组和模型对照组裸鼠分别尾静脉注射氟尿嘧啶(20 mg/kg)、AR shRNA质粒(2 mg/kg)及等体积生理盐水共10 d,测定各组裸鼠的肿瘤体积生长情况,开始给药后第4周处死裸鼠剥离肿瘤,采用RT-PCT测定移植瘤中AR mRNA表达水平,采用Western印迹测定磷脂酰肌醇-3-羟激酶(PI3K)/丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(AKT)信号通路相关蛋白表达水平.结果 给药3d时实验组和模型对照组裸鼠肿瘤体积差异无统计学意义(P>0.05),实验组裸鼠在给药后1w、2w、3w和4w时肿瘤体积较模型对照组显著降低(P<0.05).实验组裸鼠移植瘤AR mRNA表达水平较模型对照组显著降低(P<0.05).p-AKT、p-GSK3β和p-雷帕霉素靶蛋白(mTOR)蛋白表达水平较模型对照组显著降低(P<0.05),AKT、GSK3β和mTOR蛋白表达较模型对照组显著升高(P<0.05).结论 AR shRNA可抑制前列腺癌组织AR表达及PI3K/AKT信号通路相关蛋白磷酸化而发挥对前列腺癌移植瘤生长的抑制作用.
关键词： 雄激素受体 前列腺癌 PI3K/Akt信号通路 -
川芎嗪抗β淀粉样蛋白25～35诱导的SH－SY5 Y细胞凋亡作用的机制
目的：探讨川芎嗪是否作用 PI3K／Akt通路抗β淀粉样蛋白（Aβ）25～35诱导的细胞凋亡。方法 Aβ25～35作用 SH－SY5Y 细胞建立AD细胞模型，MTT法检测细胞的生存率，流式细胞术检测细胞凋亡率；Western印迹检测p－Akt、Akt、Bax、Bcl－2、caspase－3蛋白表达。结果川芎嗪能够抑制Aβ25～35诱导的SH－SY5Y细胞凋亡和促进其存活；川芎嗪可抑制 Aβ25～35引起的 p－Akt／Akt、Bcl－2表达降低和 Bax、caspase－3的表达增加。PI3K／Akt通路抑制剂LY294002能够抑制川芎嗪对 Aβ25～35诱导的细胞凋亡的保护作用，抑制川芎嗪诱导的 p－Akt／Akt、Bcl－2表达上调及 Bax、caspase－3表达下调。结论川芎嗪拮抗Aβ25～35诱导的细胞凋亡与作用PI3K／Akt通路，调节Bcl－2、Bax、caspase－3的表达有关。
关键词： 川芎嗪 细胞凋亡 阿尔茨海默病 PI3K/Akt信号通路 -
姜黄素对脑缺血大鼠脑组织PI3K/AKT信号通路的影响
目的 探究姜黄素对脑缺血大鼠脑组织PI3K/Akt信号转导通路的影响及机制.方法 SD大鼠随机分为假手术组、模型组、低剂量姜黄素组、高剂量姜黄素组,每组大鼠18只.其中模型组、低、高剂量姜黄素慢性脑缺血大鼠模型的制备采用将大鼠两侧颈动脉结扎的方法进行,假手术组和模型组分别灌胃给予生理盐水.免疫组化法检测PI3K、AKT、Bcl-2、Bax蛋白的表达,干湿重法检测脑组织水含量,甲酰胺法检测血脑屏障通透性.结果 同模型组比较,姜黄素组PI3K、AKT、Bcl-2蛋白表达均明显增高(P＜0.05),脑组织含水量、Bax蛋白表达及伊文思蓝含量显著降低(P＜0.05),高剂量姜黄素组效果优于低剂量姜黄素组.结论 姜黄素对缺血性脑损伤的保护作用可能是其在降低血脑屏障通透性之后,激活了PI3 K/A KT信号转导通路,介导Bcl-2蛋白表达增加,Bax蛋白表达降低,通过调节二者比值实现,姜黄素的脑保护效果与剂量相关.
关键词： 姜黄素 PI3K/Akt信号通路 Bcl-2 Bax -
肝X受体激动剂T0901317对血糖波动下人脐静脉内皮细胞增殖能力的影响
目的 研究肝X受体(LXRs)激动剂T0901317对血糖波动条件下人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖能力的影响及其作用机制.方法 用不同浓度的葡萄糖和T0901317处理HUVEC,采用CCK8法检测HUVEC增殖情况;Western印迹法检测Akt蛋白、p-Akt(Ser473)蛋白表达.结果 血糖波动抑制HUVEC的增殖及p-Akt(Ser473)蛋白的表达(P<0.05).T0901317促进血糖波动损伤后HUVEC的增殖(P<0.05),上调p-Akt(Ser473)蛋白表达(P<0.05),且具有浓度依赖性(P<0.05).此外,PI3K/Akt抑制剂LY294002(10 μmol/L)可以阻断T0901317上调p-Akt(Ser473)蛋白表达的作用(P<0.05).结论 血糖波动通过抑制PI3K/Akt信号通路减弱HUVEC增殖能力,LXRs激动剂T0901317可通过激活PI3K/Akt信号通路增强血糖波动抑制下HUVEC的增殖能力.
关键词： 血糖波动 人脐静脉内皮细胞 PI3K/Akt信号通路 T0901317 -
针药结合对癫痫大鼠PI3K/AKT信号通路的影响
目的:探讨针灸结合中药对癫痫大鼠PI3K/AKT信号通路的影响.方法:将100只SD雄性大鼠随机分为空白组、模型组、针药组、中药组和西药组5组.空白组、模型组均采用灌服等体积生理盐水;西药组:丙戊酸钠连续灌胃治疗;中药组:祛痰活血方灌胃治疗;针药组:在中药组的基础上,选用百会、神门针刺治疗.结果:行为学结果:与模型组比较,西药组、针药组、中药组大鼠的逃避时间均缩短(P<0.05或0.01),跨越次数均增加(P<0.05或0.01);与西药组比较,针药组逃避时间、跨越次数均无差异,中药组逃避时间、跨越次数均有统计学意义(P<0.05).PI3K-P85蛋白表达结果:与模型组相比,中药组和针药组均具有统计学意义(P<0.05),西药组具有显著意义(P<0.01);与针药组相比,西药组具有统计学意义(P<0.05).AKT蛋白表达结果:与模型组相比,中药组和针药组均具有统计学意义(P<0.05),西药组具有显著意义(P<0.01);与针药组相比,西药组具有统计学意义(P<0.05).结论:针灸结合中药可激活PI3K/AKT信号通路,抑制海马神经细胞的凋亡.
关键词： 针刺 祛痰活血方 癫痫 PI3K/Akt信号通路 -
针药联合抑制缺血再灌注大鼠 PI3K/Akt信号通路的相关性研究
目的:通过检测缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡情况,以及磷酸化Akt(p-Akt)等指标,探讨中药预处理联合针刺后对缺血再灌注心肌细胞的大鼠模型影响及作用机制.方法:健康清洁级wistar大鼠24只,随机分为6组:缺血再灌注组、心脑通络液预处理组、针刺后处理组、心脑通络液预处理组+针刺后处理组.建立缺血再灌注损伤模型.免疫组化检测p-Akt、RT-PCR检测AktmRNA水平、Western blot检测Akt、p-Akt的变化.结果:应用PI3K/Akt信号通路阻断剂渥曼青霉素后,心脑通络液加针刺降低心肌细胞凋亡指数的作用被抑制,p-Akt、p-Akt/Akt表达减少(P＞0.01),而AktmRNA含量未见明显变化.结论:1)心脑通络液预处理联合针刺后处理没有改变缺血再灌注大鼠心肌中AktmRNA含量.2)心脑通络液预处理联合针刺后处理使大鼠心肌中p-Akt、p-Akt/Akt表达增多,应用PI3K/Akt信号通路阻断剂渥曼青霉素后,心脑通络液预处理联合针刺后处理降低心肌细胞凋亡的作用被抑制,p-Akt、p-Akt/Akt表达减少,说明心脑通络液预处理联合针刺后处理的心肌保护作用是通过PI3K/Akt通路介导实现的.
关键词： 心脑通络液预处理 针刺后处理 缺血再灌注 PI3K/Akt信号通路 凋亡指数 -
雌激素膜受体GPER1通过调节Nrf2减轻心肌氧化损伤
目的:观察雌激素膜受体GPER1对心肌细胞氧化损伤的保护作用,并探讨其通过PI3K/Akt信号通路上调Nrf2,减轻心肌氧化损伤的机制.方法:H2O2处理原代培养的新生大鼠心肌细胞建立氧化损伤模型,分为对照组、H2O2处理组,GPER1受体激动剂G1预处理+H2O2处理组和GPER1拮抗剂G15+G1预处理+H2O2处理组,MTT检测细胞活性,Hoechst33342染色和cleaved caspase-3免疫荧光染色观察细胞凋亡,并检测细胞内氧自由基,总抗氧化能力,超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的水平.Western blot测定细胞中p-Akt和细胞核内Nrf2的水平.结果:G1显著抑制H2O2导致细胞活性下降和细胞凋亡,并降低细胞内氧自由基水平,提高总抗氧化能力,增加SOD活性,减少MDA含量,但G15能拮抗G1的上述效应.同时G1能增加细胞内Akt磷酸化水平和细胞核内Nrf2的表达,这些效应可被G15和LY-294002阻断.结论:GPER1通过PI3K/Akt信号通路,调节Nrf2的表达,抑制氧化应激导致的心肌细胞损伤.GPER1可以作为开发心肌缺血损伤保护剂的一个潜在靶点.
关键词： GPER1 PI3K/Akt信号通路 Nrf2 抗氧化作用
