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基于PI3K/Akt信号通路的汉黄芩素抗骨肉瘤作用机制研究
目的 本实验旨在探讨汉黄芩素对人骨肉瘤MG-63细胞株增殖、凋亡及PI3K/Akt信号通路的影响.方法人骨肉瘤MG-63细胞株培养成功后,取单细胞悬液,用不同浓度(0、50、100及200 μmol/L)汉黄芩素分组,进行干预后, MTT法检测24 h、48 h及72 h时各组人骨肉瘤MG-63细胞的增殖活性;流式细胞术检测各组人骨肉瘤MG-63细胞的凋亡率;细胞划痕实验检测细胞迁移能力变化;透射电镜检测MG-63细胞超微结构改变;Western blot法检测COX-2、Caspase-3和p-Akt蛋白表达变化.结果 汉黄芩素对MG-63细胞的增殖能力具有抑制作用,且该作用与药物浓度及作用时间呈正相关,差异有统计学意义(P<0. 05);MG-63细胞凋亡率与汉黄芩素浓度呈正相关,差异有统计学意义(P<0. 05);划痕实验显示汉黄芩素可明显抑制MG-63细胞的迁移能力,呈剂量依赖性;透射电镜观察细胞超微结构,可见汉黄芩素对MG-63超微结构有明显的促凋亡作用;Western blot结果显示,与对照组相比,实验组COX-2和p-Akt蛋白的表达水平显著降低,而实验组Caspase-3表达水平显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0. 05).结论 汉黄芩素可抑制MG-63细胞增殖,促进细胞凋亡,其机制可能与下调PI3K/Akt信号通路有关.
关键词： 汉黄芩素 骨肉瘤 增殖 凋亡 PI3K/Akt信号通路 -
六味地黄汤及其水提醇溶部位对2型糖尿病模型大鼠脂肪组织中PI3K/Akt信号通路的影响
目的 观察六味地黄汤及其水提醇溶部位对2型糖尿病(T2DM)模型大鼠脂肪组织中PI3K/Akt信号通路的影响.方法 采用高糖、高脂饲料喂养4周后,再行腹腔注射小剂量链脲佐菌素(STZ)且空腹血糖(FBG)≥16.7mmol/L的大鼠建立2型糖尿病动物模型,将其随机分为空白组、模型组、罗格列酮组、六味地黄汤组和六味地黄汤水提醇溶部位组,模型组和空白组给予等量蒸馏水,给药30 d后,测各组大鼠空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS),采用实时荧光定量PCR (RT-PCR)法测定各组大鼠脂肪组织胰岛素受体底物(Irs2)、磷脂酰肌醇3磷酸激酶(Pi3k)、蛋白激酶B(Akt)mRNA的表达情况.结果 六味地黄汤及其水提醇溶部位均能降低2型糖尿病大鼠FBG值及FINS水平,增强了T2DM大鼠脂肪组织Irs2、Pi3k、Akt mRNA的表达(P＜0.05).结论 六味地黄汤可能通过调节T2DM大鼠脂肪组织PI3 K/Akt信号通路来干预2型糖尿病胰岛素抵抗,其水提醇溶部位为该方调节PI3 K/Akt信号通路的药效物质之一.
关键词： 六味地黄汤 水提醇溶部位 2型糖尿病 PI3K/Akt信号通路 -
基于PI3K/Akt信号通路的中药治疗2型糖尿病胰岛素抵抗研究进展
随着生活方式的改变与饮食结构的变化,糖尿病,尤其是2型糖尿病的发病率呈逐年上升趋势,发病人群也逐渐趋向年轻化,引起了国内外医学界的高度关切.胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)是2型糖尿病发病的主要病理机制之一,改善IR是治疗2型糖尿病及其并发症的关键策略之一.研究发现,中药以其多途径、多靶点、多环节的网络整体调节特点在改善IR方面疗效显著.本文拟从PI3 K/Akt(磷脂酰肌醇-3-羟激酶/蛋白激酶B)通路对中药治疗2型糖尿病IR的作用机制研究新进展进行综述,以期为2型糖尿病的防治提供新的思路.
关键词： 中药 2型糖尿病 胰岛素抵抗 PI3K/Akt信号通路 研究进展 -
CD40、PI3K、p-Akt、VEGF在人胃腺癌中的表达和意义
背景:CD40属于肿瘤坏死因子受体超家族成员,多种恶性肿瘤中存在CD40表达,其高表达与肿瘤侵袭、转移和预后不良相关.PI3K/Akt信号通路在肿瘤发生过程中起关键作用.血管内皮生长因子(VEGF)与肿瘤血管生成关系密切.目的:探讨CD40、PI3K、p-Akt、VEGF在人胃腺癌中的表达及其生物学意义.方法:以免疫组化方法检测128例胃腺癌及其相应癌旁组织中的CD40、PI3K、p-Akt、VEGF蛋白表达,分析四种蛋白表达与胃腺癌临床病理特征之间的关系以及四者间的相关性.结果:胃腺癌组织中CD40、PI3K、p-Akt、VEGF蛋白阳性表达率分别为64.8％、84.4％、88.3％和73.4％,而相应癌旁组织中阳性表达率分别为7.0％、30.5％、28.1％和41.4％,两组间四种蛋白表达强度差异均有统计学意义(P＜0.001).CD40表达与胃腺癌远处转移和TNM分期相关,PI3K、p-Akt表达仅与TNM分期相关,VEGF表达与肿瘤分化程度相关.胃腺癌组织中四种蛋白表达两两之间均呈正相关.结论:CD40、PI3K、p-Akt、VEGF在胃腺癌中均呈高表达.CD40可能通过激活PI3K/Akt信号通路上调VEGF表达,从而促进肿瘤血管生成,参与胃腺癌的进展和转移.
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PI3K/AKT信号通路与结肠直肠癌关系的研究进展
丝/苏氨酸激酶(serine/threonine kinase,AKT)是多个信号转导通路中的关键中枢效应蛋白,在维持细胞正常生理功能方面发挥重要作用,通过对其磷酸化修饰产生快速的细胞内变化来应对环境的改变,而磷酸化修饰作用的失调导致癌蛋白异常活化是细胞恶性转化及肿瘤发生的重要原因[1].磷脂酰肌醇-3-羟基激酶( phophatidylinsotitol-3 -kinase,PI3K)/AKT信号通路是细胞内信号转导的重要环节,参与细胞代谢、生存/凋亡、分化和增殖等过程.PI3K/AKT信号通路被认为参与了多种肿瘤的发生、发展及转移.近年来,PI3K/AKT信号通路正逐渐成为肿瘤发生机制和治疗研究的热点,本文就PI3K/AKT信号通路与结肠直肠癌关系的研究进展作一综述.
关键词： 结肠直肠癌 PI3K/Akt信号通路 PTEN -
木香烃内酯对人胆管癌RBE细胞生物学行为的影响及其作用机制
目的:探讨木香烃内酯(costunolide,Cos)对人肝内胆管癌RBE细胞生物学行为的影响及其作用机制.方法:以不同质量浓度(0、2、4、6、8、12、16、20 μg/ml)Cos作用RBE细胞,通过CCK-8法、流式细胞术分别检测Cos对细胞增殖能力和周期分布的影响,Annexin V-FITC/PI双染法、Transwell小室实验分别检测Cos对细胞凋亡和迁移侵袭的影响,qRT-PCR检测与侵袭相关因子MMP2、MMP9 mRNA的表达,Western blotting检测PI3K/AKT信号通路相关蛋白的表达.结果:Cos能够显著抑制RBE细胞的增殖活性(P＜0.05或P＜0.01),阻滞细胞周期于S、G2/M期,同时诱导RBE细胞的凋亡(P＜0.01)、且呈质量浓度依赖性,Tran-swell及qRT-PCR结果显示Cos能够显著抑制RBE细胞的侵袭能力、降低侵袭相关转录因子MMP2和MMP9 mRNA的表达,Western blotting结果显示Cos明显抑制p-AKT、Bcl-2、MMP2及MMP9的表达,但促进Bax的表达.结论:Cos通过抑制PI3K/AKT信号通路降低胆管癌RBE细胞的增殖、迁移及侵袭能力.
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miR-429通过下调PTEN并激活PI3K/AKT信号通路促进胰腺癌PANC-1细胞对卡培他滨耐药
目的:探讨miR-429靶向PTEN并通过PI3K/AKT信号通路调控胰腺癌PANC-1细胞对卡培他滨的耐药性及其作用机制.方法:建立胰腺癌卡培他滨耐药细胞株PANC-1/CAP后,采用qRT-PCR和Western blotting实验检测miR-429和PTEN在胰腺癌细胞中的表达情况,平板克隆形成实验、CCK-8法和Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测敲降miR-429对胰腺癌卡培他滨耐药细胞株PANC-1/CAP细胞增殖、凋亡和卡培他滨耐药性的影响,双荧光素酶报告基因验证miR-429与PTEN的靶向关系,Western blotting实验进一步检测miR-429对PTEN-PI3K/AKT信号通路的调控作用.结果:miR-429在胰腺癌PANC-1细胞和PANC-1/CAP细胞中的表达水平高于人胰腺导管上皮细胞(HPDE6-C7) (P＜0.05或P＜0.01),敲降miR-429可显著抑制PANC-1/CAP细胞增殖活力、促进细胞凋亡及下调细胞卡培他滨耐药性,且双荧光素酶报告基因证实miR-429靶向作用PTEN并下调其表达水平(P＜0.05或P＜0.01);敲降miR-429可通过靶向上调PTN并阻断PI3K/AKT信号通路进而显著抑制PANC-1/CAP细胞增殖活力,从而下调PANC-1/CAP细胞对卡培他滨的耐药性(P＜0.05或P＜0.01).结论:miR-429/PTEN-PI3K、AKT信号通路与胰腺癌卡培他滨耐药性存在调控关系,且敲降miR-429可逆转PANC-1/CAP对卡培他滨的耐药性.
关键词： 胰腺癌 Panc-1细胞 卡培他滨 miR-429 PI3K/Akt信号通路 -
过表达miR-125b对子宫内膜癌HEC-1B细胞周期、增殖和凋亡的影响及其可能的机制
目的:探讨miR-125b过表达对子宫内膜癌(endometrial carcinoma,EC)HEC-1B细胞增殖及凋亡的影响及其可能的机制.方法:收集2012年11月至2013年11月间四川省妇幼保健医院收治的30例子宫内膜样腺癌患者肿瘤及其癌旁组织标本,Real-time PCR检测肿瘤组织及培养细胞中miR-125b的表达水平.脂质体转染法分别将miR-125b模拟片段(mimic)与无关序列(scramble mimic)转染入HEC-1B细胞作为miR-125b组和对照组,以野生型HEC-1B细胞为未处理组.流式细胞术和CCK-8法分别检测过表达miR-125b对HEC-1B细胞周期、凋亡和增殖的影响,Western blotting检测过表达miR-125b对HEC-1B细胞中PIK3CD、p-AKT以及总AKT表达的影响.结果:人EC组织中miR-125b表达量较癌旁组织显著下调(P＜0.05).HEC-1B细胞转染mimic片段后,其miR-125b的表达上调820倍以上.转染48 h后,miR-125b组细胞的增殖能力显著低于对照组和未处理组(0.53 ±0.06 vs 0.82 ±0.07、0.89 ±0.08,P＜0.01)、细胞凋亡率显著升高[(21.5±3.2)％ vs(14.2±2.3)％、(13.5±2.1)％,均P＜0.01],并且miR-125b组细胞周期阻滞于G1期;miR-125b组HEC-1B细胞中PIK3CD及其下游p-AKT蛋白表达较对照组和未处理组显著降低(均P＜0.01),而总AKT表达无明显变化(均P＞0.05).结论:miR-125b在EC组织中普遍低表达,其在HEC-1B细胞中过表达能够明显抑制细胞增殖和周期进程,促进细胞早期凋亡,这可能与miR-125过表达抑制细胞内PI3K/AKT信号通路有关.
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乳腺癌组织和细胞中低表达的LZTS2通过PI3K/AKT信号通路抑制癌细胞增殖、迁移和EMT
目的:探讨亮氨酸拉链肿瘤抑制因子2 (leucine zipper tumor suppressor2,LZTS2)基因在人乳腺癌组织和细胞系中的表达及其对乳腺癌细胞增殖、迁移和EMT的影响及其作用机制.方法:收集2016年1月至2016年12月开封中心医院乳腺外科收治的50例女性乳腺癌患者的癌及癌旁组织标本和乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-468以及正常人乳腺上皮细胞株HBL-100,用qPCR和Western blotting检测乳腺癌组织和细胞中LZTS2 mRNA和蛋白表达水平.构建pcDNA-LZTS2真核表达载体并采用脂质体转染MCF-7细胞,同时转染pcDNA3.1作为阴性对照.用Western blotting检测转染48～72 h后MCF-7细胞中LZTS2蛋白表达水平;用MTT法、Transwell小室法检测LZTS2过表达对细胞增殖、迁移和侵袭的影响,同时用Western blotting检测细胞中EMT相关蛋白Cyclin D1、波形蛋白、神经钙黏蛋白、上皮钙黏蛋白以及PI3K/AKT信号通路中相关蛋白的表达.结果:人乳腺癌组织中LZTS2 mRNA和蛋白表达水平均明显低于癌旁组织(P＜0.05或P＜0.01);乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231和MDA-MB-468细胞中LZTS2 mRNA和蛋白表达水平显著低于乳腺上皮细胞HBL-100(P＜0.05或P＜0.01).与空白对照组和pcDNA3.1组相比,pcDNA-LZTS2组MCF-7细胞中LZTS2蛋白表达水平明显上调(P＜0.01),细胞增殖、迁移和侵袭能力显著受到抑制(P＜0.05或P＜0.01),同时过表达LZTS2细胞中Cyclin D1、波形蛋白和神经钙黏蛋白表达水平均明显降低(P＜0.05或P＜0.01)、上皮钙黏蛋白表达水平明显升高(均P＜0.01),显示LZTS2过表达通过降低p-PI3K和p-AKT表达而抑制PI3K/AKT信号通路.结论:LZTS2在乳腺癌中低表达,过表达LZTS2能够抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,可能与抑制细胞EMT过程的PI3K/AKT信号通路有关.
关键词： 亮氨酸拉链肿瘤抑制因子2 乳腺癌 上皮间质转化 PI3K/Akt信号通路 增殖 迁移 侵袭 -
微环境中S100A6直接和间接促进结直肠癌LoVo细胞迁移
目的:深入探讨微环境中S100A6对结直肠癌LoVo细胞迁移的作用及其可能的分子机制.方法:制备并鉴定重组蛋白谷胱甘肽S-转移酶(glutathione S-transferase,GST)和融合蛋白GST-人S100A6 (GST-human S100A6,GST-hS100A6).用GST-hS100A6(终质量浓度为30 μg/mL)处理LoVo细胞后,采用划痕愈合实验检测细胞的迁移能力变化,采用蛋白质印迹法检测LoVo细胞中总蛋白激酶B(protein kinase B,PKB,又称Akt)和磷酸化Akt(phosphorylated Akt,p-Akt)的表达变化.分别用磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/Akt信号通路抑制剂LY294002和GST-hS100A6单独或联合处理LoVo细胞后,采用划痕愈合实验检测细胞迁移情况.用GST-hS100A6刺激LoVo细胞后的条件培养液(CM-A6-LoVo)处理巨噬细胞,然后采用实时荧光定量PCR法检测该巨噬细胞中M2型标志物CD206和M1型标志物诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)的表达水平;进一步将该巨噬细胞与LoVo细胞共培养后,采用划痕愈合实验检测LoVo细胞的迁移能力.结果:成功获得GST-hS100A6和GST蛋白(作为对照).与GST组相比,GST-hS100A6处理后的LoVo细胞划痕愈合率明显升高(P＜0.05),而且LoVo细胞中p-Akt蛋白表达明显上调(P＜0.05).与单独GST-hS100A6处理组相比,LY294002联合GST-hS100A6处理后LoVo细胞的划痕愈合率明显降低(P＜0.05).与GST-hS100A6组相比,CM-A6-LoVo条件培养液处理后的巨噬细胞中CD206表达水平升高(P＜0.05),而iNOS表达无明显变化(P＞0.05);并且该巨噬细胞与LoVo细胞共培养可明显提高LoVo细胞的划痕愈合率(P＜0.05).结论:微环境中S100A6可直接和间接地促进结直肠癌LoVo细胞迁移,该作用机制可能与调控PI3K/Akt信号通路以及诱导巨噬细胞向M2型分化有关.
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抑制或沉默Akt基因表达可逆转人结肠癌耐药SW1116/HCPT细胞的耐药性
目的:研究阻断磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/丝氨酸-苏氨酸激酶(seride-threonine protein kinase,又称Akt)信号通路对逆转耐羟基喜树碱(hydroxycamptothecin,HCPT)人结肠癌SW1116/HCPT细胞多药耐药性的影响.方法:采用蛋白质印迹法检测亲本SW1116细胞和耐HCPT细胞株SW1116/HCPT中Akt及磷酸化Akt (phospho-Akt,p-Akt)蛋白的表达水平.应用针对PI3K/Akt信号通路的小分子抑制剂LY294002或siRNA干扰的方法分别抑制或沉默Akt蛋白的表达;MTT法检测抑制或沉默Akt蛋白表达后,HCPT对SW1116/HCPT细胞生存率的影响;实时荧光定量PCR及蛋白质印迹法检测对耐药转运体三磷酸腺苷结合盒转运体G2 (ATP-binding cassette transporter G2,ABCG2) mRNA及蛋白表达的影响;罗丹明123 (rhodamine 123,Rh123)法检测对SW1116/HCPT细胞药物外排功能的影响.结果:蛋白质印迹法检测结果发现,耐药SW1116/HCPT细胞中p-Akt的表达水平明显高于亲本SW1116细胞(P＜0.01).小分子抑制剂LY294002及靶向Akt基因的Akt-siRNA均能明显降低p-Akt的表达水平,增加细胞对HCPT的药物敏感性(P值均＜0.01),有明显的多药耐药逆转作用.LY294002作用48 h可使耐药转运体ABCG2 mRNA的表达水平下调(74.82±4.71)％,蛋白表达水平下调(58.24±4.78)％(P值均＜0.01),并且耐药蛋白体的转运功能也明显受到抑制,细胞内Rh123的浓度增加了(1.45±0.12)倍(P＜0.01).沉默Akt基因后ABCG2 mRNA的表达水平下降了(59.63±5.14)％,蛋白表达水平下降了(44.41±2.56)％(P值均＜0.01),细胞内Rh123的浓度增加了(1.22±0.10)倍(P＜0.01).结论:PI3K/Akt信号通路可正向调节耐药基因ABCG2的表达,在调节HCPT诱导的多药耐药过程中发挥重要作用.
关键词： 结肠肿瘤 多药耐药相关蛋白质类 PI3K/Akt信号通路 RNA 小分子干扰 细胞增殖 -
HBXIP对腺样囊性癌细胞株ACC-M生物学功能及PI3K/Akt信号通路的影响
目的:研究乙肝病毒X蛋白结合蛋白(hepatitis B X-interacting protein,HBXIP)对唾液腺腺样囊性癌肺高转移细胞株(ACC-M)增殖、迁移和侵袭的影响,及其对PI3K/Akt信号通路的影响.方法:将HBXIP质粒转染到ACC-M中,将细胞分为实验组(转染pEGFP-N1-HBXIP质粒)、对照组1(未转染组)和对照组2(vector组,pEGFP-N1).采用RT-PCR检测HBXIP在ACC-M中的表达;采用MTT实验、Transwell小室实验和划痕实验检测HBXIP过表达对ACC-M的增殖、迁移和侵袭的影响;Western印迹法检测HBXIP过表达对Akt、p-Akt、PI3K、p-PI3K及S100A4蛋白表达量的影响.采用SPSS18.0软件包对数据进行统计学分析.结果:MTT实验结果显示,实验组中存活的细胞数显著高于对照组(P＜0.05);划痕实验结果显示,实验组细胞迁移率显著高于对照组(P＜0.01);Transwell小室实验结果显示,实验组细胞侵袭个数显著高于对照组(P＜0.01);Western印迹法结果显示,相对于对照组,实验组随着HBXIP过表达,p-Akt、p-PI3K及S100A4表达量相对增高.结论:HBXIP基因过表达ACC-M增殖、迁移和侵袭具有影响,可能通过促进Akt、PI3K磷酸化及S100A4蛋白表达量增加,促进ACC-M的增殖、迁移和侵袭.
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热疗联合Id-1基因沉默对舌鳞癌CAL-27细胞增殖及侵袭的影响
目的:探讨热疗联合Id-1基因沉默对舌鳞癌细胞增殖及侵袭的影响及其机制.方法:将培养的舌鳞癌细胞株CAL-27分为4组.①沉默Id-1组(Id-1-siRNA)—用siRNA基因转染法沉默舌鳞癌CAL-27细胞中Id-1的表达,RT-PCR法检测其Id-1的mRNA表达变化;②热疗组(HT)—细胞置于42.5℃恒温培养箱内40min;③联合组(HT+Id-1-siRNA)—siRNA基因转染法沉默细胞内Id-1的表达后进行42.5℃、40 min的热疗处理;④空白对照组—常规培养细胞.通过CCK8和Transwell侵袭实验,分别检测CAL-27细胞的增殖能力和侵袭能力变化;Western免疫印迹法检测CAL-27细胞中PI3K、磷酸化Akt(p-Akt)蛋白表达变化.采用SPSS19.0软件包对数据进行统计学分析.结果:siRNA能成功沉默CAL-27细胞内Id-1的表达,沉默Id-1组与空白对照组相比,Id-1的mRNA表达水平下降81.6％.沉默Id-1和热疗均可抑制CAL-27细胞的增殖和侵袭能力,下调PI3K、p-Akt蛋白表达(P＜0.05),热疗联合沉默Id-1作用于CAL-27细胞后的结果更为显著(P＜0.01).结论:热疗协同沉默Id-1可显著抑制人舌鳞癌细胞的增殖及侵袭能力,其作用是通过PI3K/Akt信号通路来实现.
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脂肪酸酰胺水解酶抑制剂URB597诱导人肝癌细胞MHCC97H凋亡的作用及其机制研究
目的:观察脂肪酸酰胺水解酶(fatty acid amide hydrolase,FAAH)抑制剂URB597诱导人肝癌高转移细胞MHCC97H凋亡的作用,并探讨其机制.方法:给予不同浓度(1、5、10μmol/L) URB597与MHCC97H孵育,应用流式细胞仪检测细胞凋亡率.采用蛋白质印迹技术检测凋亡诱导因子(apoptosis inducing factor,AIF)在细胞核中的水平,及凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达水平.采用caspase 3试剂盒检测caspase 3的活性变化.结果:(1)不同浓度(1、5、10 μmol/L)URB597作用细胞1、4、7d后,凋亡细胞数目明显增加,呈时间-剂量依赖性;(2)不同浓度URB597作用96 h后细胞内caspase3活性明显升高,且细胞核中AIF水平显著增加;(3)10 μmol/L URB597作用细胞96 h后,与对照组相比,Bcl-2水平明显下调,Bax水平明显上调,Bcl-2/Bax比值显著下降.PI3K抑制剂LY294002亦可显著降低Bcl-2/Bax比值,但与10 μmol/LURB597作用相比,对Bcl-2/Bax比值的影响程度较低.结论:URB597可通过促进入肝癌细胞凋亡抑制其增殖,该作用与其下调Bcl-2/Bax比值,影响线粒体通透性,诱导caspase依赖和非caspase依赖的细胞凋亡有关,且部分依赖于PI3K/Akt通路.
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脂肪酸酰胺水解酶抑制剂URB597对人肝癌细胞MHCC97H生长和侵袭的抑制作用及机制研究
目的:观察脂肪酸酰胺水解酶抑制剂URB597对人肝癌高转移细胞MHCC97H细胞生长和侵袭性的抑制作用.方法:不同浓度URB597(1、5、10 μmol/L)作用于MHCC97H细胞后不同时间,应用MTT法及流式细胞仪检测该种细胞生长活力及凋亡细胞数目的改变;应用Transwell实验检测该种细胞的运动能力及侵袭能力;应用蛋白质印迹法检测该种细胞内磷酸化Akt(p-Akt)和Akt表达量的变化.结果:上述3种浓度的URB597作用于该种细胞3～7d后,细胞活力明显降低,呈时间及剂量依赖性;10 μmol/L URB597作用3～7 d可显著增加凋亡细胞数目.URB597作用于细胞48 h后,与对照组比较,5、10 μmol/L URB597可显著抑制MHCC97H细胞侵袭能力(P＜0.01,P＜0.001).3种浓度URB597作用于细胞24 h后,5、10 μmol/L URB597可显著下调细胞内p-Akt水平(P＜0.05,P＜0.01).结论:URB597对体外生长的人肝癌细胞MHCC97H的生长和侵袭有明显抑制作用,该作用可能与其抑制磷酯酰肌醇3激酶(PI3K)/Akt信号通路有关.
关键词： 脂肪酸酰胺水解酶抑制剂 URB597 肝肿瘤 PI3K/Akt信号通路 -
骨桥蛋白通过PI3K/Akt信号通路激活胰腺星形细胞
目的 探讨骨桥蛋白(OPN)对胰腺星形细胞(PSC)的影响及其机制.方法 构建OPN慢病毒过表达载体(OPN-O/E)并转染PSC,设置空载体转染细胞作为对照组.分别采用CCK-8实验和Transwell小室检测OPN-O/E转染及OPN-O/E转染联合Akt抑制剂LY294002(10μmol/L、50μmol/L)处理后PSC增殖活性和趋化活性,采用蛋白质印迹法检测-平滑肌肌动蛋白(-SMA)及PI3K/Akt信号通路相关蛋白的表达.结果 OPN-O/E转染上调OPN表达后,PSC增殖活性增高、趋化活性增高,细胞中磷酸化PI3K(p-PI3K)、磷酸化Akt(p-Akt)和-SMA表达水平均增高,与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);细胞中PI3K和Akt表达水平与对照组相比差异均无统计学意义(P均>0.05).使用10μmol/L或50μmol/L Akt抑制剂LY294002干预后,细胞中-SMA及p-Akt的表达被抑制,与OPN-O/E组相比差异均有统计学意义(P均<0.01),Akt的表达无明显变化.结论 OPN通过PI3K/Akt信号通路介导PSC活化,活化后PSC的增殖及趋化活性也增强.
关键词： 骨桥蛋白 胰腺星形细胞 PI3K/Akt信号通路 -平滑肌肌动蛋白 -
消痰解郁方对乳腺癌前病变MCF-10AT细胞PI3K/Akt通路的影响及机制
目的 探讨消痰解郁方对乳腺癌前病变MCF-10AT细胞PI3K/Akt信号通路的影响及机制.方法 将MCF-10AT细胞分为消痰解郁方组、PI3K激酶选择性抑制剂LY294002组(抑制剂组)、消痰解郁方+抑制剂组和对照组.给予相应药物干预24、48 h后,采用CCK-8法观察各组细胞增殖及生长情况;药物干预48 h后,采用流式细胞仪检测各组细胞周期变化,用蛋白质印迹法检测各组细胞PTEN、PI3K、Akt蛋白表达变化.结果 药物干预24和48 h后,消痰解郁方组、抑制剂组和消痰解郁方+抑制剂组MCF-10AT细胞增殖受到抑制,且消痰解郁方+抑制剂组抑制率高于消痰解郁方组和抑制剂组,差异有统计学意义(P＜0.05);药物干预48 h后.消痰解郁方组、抑制剂组和消痰解郁方+抑制剂组MCF-10AT细胞G0/G1期细胞比例增高,S期及G2/M期细胞比例下降,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05),其中消痰解郁方+抑制剂组与其他各组相比差异有统计学意义(P＜0.05);药物干预48 h后,消痰解郁方组、抑制剂组、消痰解郁方+抑制剂组PI3K、p Akt蛋白表达较对照组减弱,PTEN蛋白表达较对照组增强,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 肖痰解郁方可能通过抑制PI3K/AKT信号通路发挥其对MCF10AT细胞的抑制及促凋亡作用.
关键词： 乳腺肿瘤 MCF-10AT细胞 PI3K/Akt信号通路 细胞凋亡 -
TRIM59对神经胶质瘤形成的促进作用
目的·揭示TRIM59在神经胶质瘤发生中的作用及分子机制.方法·通过免疫组织化学法分析TRIM59蛋白在临床胶质瘤手术切除样本中的表达;利用Western blotting和定量PCR法分析TRIM59在多个胶质瘤细胞系中的表达;利用shRNA敲低胶质瘤细胞系中TRIM59基因,分析其对胶质瘤细胞增殖、迁移、琼脂糖克隆形成及颅内原位肿瘤形成的影响;通过转录组测序及KEGGPATHWAY软件分析TRIM59调节的信号通路.结果·TRIM59在神经胶质瘤组织中表达水平与肿瘤的临床分级呈正相关.相对于正常星形胶质细胞,胶质瘤细胞系LN229和U87细胞中TRIM59表达较高.用慢病毒介导的shRNA抑制U87和LN229细胞中TRIM59的表达,能显著降低体外细胞增殖、迁移及克隆形成能力.用敲低TRIM59基因的U87细胞注射入裸鼠的右脑室,相较于对照细胞,胶质瘤细胞体积明显缩小.转录组测序及KEGG PATHWAY分析表明,敲低LN229细胞TRIM59基因后共有306个基因下调,其中与PI3K/AKT信号通路相关的基因多.Western blotting分析发现,LN229和U87细胞敲低TRIM59后,AKT磷酸化水平显著降低,而过表达组成型活化的Myr-AKT可逆转TRIM59敲低对细胞增殖的抑制作用.结论·TRIM59是新发现的胶质瘤促癌基因,其可能通过PI3K/AKT信号通路发挥作用.
关键词： TRIM59 胶质瘤 PI3K/Akt信号通路 促癌基因 -
Pi3k/Akt信号通路与非典型抗精神病药物作用机制的研究进展
Pi3k/Akt信号通路在精神分裂症的发病机制中发挥着重要作用,而非典型抗精神病药物对Pi3k/Akt信号通路具有一定的修饰作用,且该作用已受到研究人员的广泛关注.该文从代谢综合征、免疫功能变化、认知损害、神经保护作用4个方面,将Pi3k/Akt信号通路与非典型抗精神病药物作用机制之间关系的研究进展进行综述.
关键词： 非典型抗精神病药物 PI3K/Akt信号通路 精神分裂症 不良反应 -
紫草素诱导肺腺癌A549细胞凋亡及其机制的研究
目的 研究紫草素(shikonin,SK)诱导肺腺癌A549细胞凋亡及其作用机制.方法 不同浓度紫草素作用于肺腺癌A549细胞后,CCK-8法检测细胞的增殖情况;DAPI荧光染色法和FCM检测细胞凋亡;Western blotting检测紫草素处理48 h后Bax、Bcl-2、p-Akt、p-ERK1/2的蛋白水平.结果 紫草素显著抑制肺腺癌A549细胞的增殖活性(P＜0.05),诱导细胞凋亡,与空白对照组比较,紫草素处理组Bax表达上调(P＜0.05),Bcl-2、p-Akt、P-ERK1/2表达下调(P＜0.05).结论 紫草素可以显著抑制肺腺癌A549细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与线粒体凋亡途径,PI3K/Akt信号通路和ERK 1/2信号通路有关.
