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环境表观基因组学相关技术
继人类基因组计划圆满完成之后,"人类基因组表遗传计划(Human Epigenome Project)"也于2003年10月7日正式启动.这是世界上首项针对控制人类基因"开"和"关"的主要成分进行的图谱绘制工作,它将帮助科学家建立人类遗传、疾病与环境之间的关键联系.
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内源性二氧化硫生物学特性及研究进展
传统认为二氧化硫(SO2)是一种有毒气体,对环境及动植物危害极大,但随着科学研究的进展,人们发现人体内含硫氨基酸代谢等生成的内源性二氧化硫(SO2)及其衍生物亚硫酸氢盐(HSO3-)与亚硫酸盐(SO32-)在人体生理及疾病中具有重要意义.SO2作为一种新型气体信号分子,同一氧化氮(NO)、一氧化碳(CO)及硫化氢(H2S)等一样,逐渐的引起人们重视[1].本研究针对内源性二氧化硫及其衍生物在人体生理及病理中的作用,对SO2的生物学特性及研究现状做一简要综述.
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对现行版《中国药典》中亚硫酸氢钠甲萘醌鉴别(2)的讨论
目的 为中国药典收载的亚硫酸氢钠甲萘醌鉴别(2)提出修改建议.方法 对亚硫酸氢钠甲萘醌鉴别(2)与药典附录一般鉴别试验中有关亚硫酸(氢)盐鉴别试验进行比较、分析.结果上述两种鉴别试验方法存在不一致之处.结论 应对亚硫酸氢钠甲萘醌鉴别(2)进行修订.
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二氧化硫吸入对大鼠血红细胞的氧化损伤作用
目的为了研究低浓度二氧化硫(SO2)毒理作用的机理.方法测定SO2(14 mg/m3)吸入对大鼠血红细胞抗氧化酶活性和脂质过氧化水平的影响.结果 SO2吸入可引起超氧化歧化酶(Cu、Zn-SOD)活性降低、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性升高、过氧化氢酶(CAT)活性无明显改变,以及红细胞脂质过氧化水平显著升高.结论 SO2通过产生活性氧自由基引起脂质及其它生物大分子的氧化损伤,可能是低浓度SO2毒理作用的主要机制.
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化妆品中亚硫酸盐及亚硫酸氢盐测定方法的探讨
亚硫酸盐及亚硫酸氢盐是化妆品的限用物质,含量(以SO2计)不得超过0.2%.目前尚没有国家标准检验方法.参考有关文献,对各类化妆品中的亚硫酸盐及亚硫酸氢盐的测定方法进行探讨,其精密度、准确度等结果均令人满意.
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Rotor-Gene链融解曲线法甲基化标记筛选技术的建立
目的:建立基于Rotor-Gene的链融解曲线法的甲基化标记筛选技术,分析各种影响因素,评估其实用性.方法:克隆Hela细胞雄激素受体基因外显子-1的Bisulfite-PCR产物,挑出经测序证实的可以代表不同甲基化程度的一组质粒,并以之为模板,在Rotor-Gene 3 000实时定量PCR仪进行扩增和链融解,分析融链温度、链融解曲线与甲基化程度、甲基化模式的相关性及各种影响因素.结果:基于Rotor-Gene 的链融解曲线法,不仅可以区分甲基化与非甲基化,而且能够鉴别片段内细微的甲基化差异;主要的影响因素有升温幅度、缓冲液离子强度、产物浓度等.结论:基于Rotor-Gene 的链融解曲线法,可以集扩增和链融解于一体,是一种经济简便的甲基化分析技术,可用于样品的甲基化筛选.
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CPEB1基因甲基化与胃癌的关系研究
目的:检测胃癌及癌旁组织的细胞质聚腺苷酸化元件结合蛋白1(CPEB1)mRNA表达情况,测序获得CPEB1基因启动子区甲基化情况,通过以上结果综合探讨CPEB1与胃癌组织发生及病理改变是否有关联。方法:取46例手术的胃癌组织及46例相应癌旁正常组织(距离癌组织10 cm以上),亚硫酸氢盐测序法(BSP)法检测其启动子区甲基化状况,通过实时荧光定量逆转录-多聚合酶链反应检测胃癌组织中mRNA的表达水平。结果:胃癌组织中的CPEB1甲基化率为78%(36/46),而癌旁组织中的CPEB1甲基化率为13%(6/46),差异有统计学意义(P<0.01)。胃癌组织中的CPEB1mRNA表达阳性率为39%(18/46),明显低于正常组织100%(46/46),差异有统计学意义(P<0.01)。CPEB1甲基化与性别、年龄、TNM分期及有无淋巴结转移无相关性(P<0.05)。结论:CPEB1基因甲基化可能是胃癌发生的重要的分子机制,与胃癌的发生、发展相关。
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表观遗传修饰参与细胞恶性转化过程中FHIT基因的表达调控
目的:研究亚硝胺类致癌物诱导细胞恶性转化过程中抑癌基因FHIT的表达变化,明确其遗传及表观遗传调控机制。方法:建立N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍( MNNG)和N-甲基-N-亚硝基脲( MNU)暴露后胃黏膜上皮细胞GES-1的恶性转化模型。动态分析FHIT表达、基因缺失、DNA甲基化和组蛋白修饰变化。结果:MNNG和MNU暴露早期FHIT即明显下调,且与暴露剂量呈负相关。 FHIT低表达恶性转化单克隆细胞株克隆形成能力明显增强。外显子特异性PCR显示基因无纯合性缺失。甲基化特异性PCR显示FHIT基因甲基化水平增高,亚硫酸氢盐基因组测序证实FHIT启动子区呈明显高甲基化。组蛋白修饰分析发现FHIT低表达细胞株组蛋白H4乙酰化水平降低,组蛋白去乙酰化酶HDACs家族成员参与调控。结论:亚硝胺类致癌物诱导细胞恶性转化过程中FHIT基因在恶性变早期即下调,DNA甲基化和组蛋白修饰参与其表达调控。
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DNA甲基化参与细胞恶性转化过程中MGMT基因的表达调控
目的:研究O6-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶( MGMT)在N-甲基亚硝基脲( MNU)诱导的人胃正常黏膜上皮细胞GES-1恶性转化中的表达变化,明确其转录激活的分子机制。方法:建立MNU诱导的GES-1细胞恶性转化模型,动态分析MGMT的表达、启动子转录激活、DNA甲基化、组蛋白修饰变化及其表达改变在GES-1细胞恶性转化中的作用。结果:MNU暴露持续激活MGMT的表达。 MGMT高表达细胞的增殖和克隆形成能力显著下降。甲基化特异性PCR显示MGMT基因甲基化水平下降,亚硫酸氢盐基因组测序证实其启动子区呈显著低甲基化。免疫共沉淀分析发现DNA甲基化转移酶( DNMT1)与MGMT基因的结合减少,组蛋白特异性修饰H3K9met3和H3K4met2均参与调控其表达。结论:MGMT的表达上调抑制化学致癌剂MNU诱导的细胞恶性转化,MGMT的持续激活依赖于其启动子区DNA的低甲基化。
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亚硫酸氢盐修饰方法在DNA甲基化检测中的研究进展
随着人类基因组测序工作的基本完成,基因表达的调控成为21世纪分子遗传学研究的热点领域。而作为基因表达调控的一个重要机制--表观遗传学改变的研究倍受广大研究者的关注。DNA甲基化在人类表观遗传、胚胎发育、基因印记、等位基因失活及肿瘤发生等有着非常重要的作用[1]。DNA甲基化的研究也成为目前研究的热点,然而制约其发展的仍然是技术与方法。目前检测DNA甲基化的方法很多[2]:(1)以亚硫酸氢盐修饰DNA 为基础,并在此基础上发展出来的各种CpG 岛甲基化检测方法,如BSP 测序、PCR (MSP、nMSP,Methelight 等)、芯片技术(microarray)。(2)以甲基化敏感的限制性内切酶消化为基础的研究方法。(3)其他的方法,如特异性识别甲基化修饰 DNA 的抗体或蛋白;质谱或色谱等精密检测手段。其中亚硫酸氢盐修饰 DNA 为基础的方法在研究DNA 甲基化中成为常用、应用广泛的方法。但很少有关这方面的文献综述就其详细的技术要点及原理进行分析。因此,本文主要收集有关亚硫酸氢盐修饰技术的文献,结合笔者经验,阐述其原理及技术要点。
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抗氧剂对氢醌乳膏抗氧作用考察
氢醌(1,4-对苯二酚)乳膏用于治疗黄褐斑、雀斑等。氢醌易氧化,往往在配制及贮存过程中被氧化,使乳膏颜色逐渐加深,影响制剂质量。在乳膏中添加一定抗氧剂,可延缓氢醌被氧化,提高制剂稳定性。为此,我们做了如下对比实验。1 处方组成及制备 各处方组成(除0.5%抗氧剂外)及制法均同《中国医院制剂规范》(西药制剂,第2版,卫生部药政局编,142页)氢醌乳膏项下。氢醌原料由湖南湘中地质实验研究所提供(980630)。2 稳定性试验 将各处方所配乳膏分装于10g试管(带塞)及20g塑料油膏盒中,分别进行恒温加热实验(40℃±1℃)、紫外线加速实验(20W,D=550mm)。用肉眼观察乳膏颜色开始变化的时间,结果见表1。表1 含不同抗氧剂的氢醌乳膏的pH及开始变色时间3 讨论 ①实验表明,在氢醌乳膏中无添加油溶性抗氧剂的必要。维生素E(VE),2,6-二叔丁基对甲酚抗氧作用较差,与空白对照组无差异。乳膏中维生素C(VC)抗紫外线的作用较好,但其耐热性能不及亚硫酸氢盐理想。3种亚硫酸盐中,亚硫酸钠对乳膏的稳定效果差,可能与偏碱性有关。 ②在一定温度下,氢醌的颜色变化随乳膏pH增大而加快。当pH<6时颜色变化较慢,提示在乳膏中可添加一定量的枸橼酸或乳酸调pH至5~5.5。 ③氢醌乳膏的抗氧剂以选用0.5%焦亚硫酸钠为宜。同时,为减少氢醌氧化,应在基质温度降至50℃时,再加入氢醌。