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菌核净内分泌干扰作用研究
目的 研究菌核净内分泌干扰作用(雌激素和抗雄激素活性作用).方法 通过不同实验终点探讨茵核净雌激素样作用:(1)每隔5天腹腔注射给予鲫鱼不同浓度茼核净(0、50、100和200mg/kg)诱导卵黄蛋白原(VTG)的产生,2周后收集雄性鲫鱼血浆和肝脏进行VTG检测;(2)人乳腺癌细胞(MCF-7细胞)中加入不同浓度的茵核净(10-10～10'-4mol/L),作用3天后观察茵核净诱导细胞增殖情况;(3)雌性小鼠去势后给予不同浓度茵核净(0、125、250和500mg/kg),计算子宫脏器系数.Hershberger试验研究茵核净抗雄激素样作用:雄性大鼠去势后给予不同剂量的茵核净(0、30、60和120mg/kg),同时皮下注射雄性激素丙酮酸睾酮(TP),计算雄激素依赖组织的脏器系数.结果 100mg/kg和200mg/kg茵核净能诱导雄性鲫鱼血VTG产生,200mg/kg茵核净能刺激雄性鲫鱼肝脏产生VTG,与阴性对照组相比,VTG含量差异均具有显著性(P<0.05);各剂量组茵核净对雄性鲫鱼血钙离子、血和肝总蛋白含量均无影响,但阳性对照E2能增高血钙离子水平;10-8、10-7和10-6mol/L茵核净能诱导MCF-7细胞增殖,与对照组相比,差异具有显著性(P<0.05);茵核净3个剂量组均能增加去势小鼠子宫脏器系数,其中250mg/kg组与阴性对照组比较差异具有显著性(P<0.05);60ms/kg和120mg/ks茵核净均能降低前列腺加精囊腺、肛提肌、球海绵体肌的脏器系数,与模型对照组比较,差异具有显著性(P<0.05).结论 茵核净具有雌激素和抗雄激素双重内分泌干扰作用.
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应用卵黄蛋白原检测内分泌干扰物质的研究进展
由于内分泌干扰物对人类健康及生物种群的严重影响,已经成为当前公共卫生和环境保护研究工作的一个热点.该文介绍了卵黄蛋白原作为内分泌干扰物筛选生物标志物的科学依据和优势,并在此基础上综述了卵黄蛋白原及其编码基因表达的检测方法及原理、应用和优缺点.
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壬基酚对河川沙塘鳢幼鱼卵黄蛋白原诱导的影响
目的 卵黄蛋白原(vitellogenin,VTG)可以作为检测环境雌激素生物标志物,用于评价化学物质雌激素能力或动物在存在有雌激素污染物水体中的暴露状况.该文主要研究壬基酚(nonylphenol,NP)对河川沙塘鳢幼鱼VTG的诱导的情况.方法 把孵化出的河川沙塘鳢仔鱼暴露于壬基酚中,设立3个浓度(100、300和500ug/L),同时设空白对照和溶剂对照,暴露时间为150 d,然后取样进行检测.结果 与对照相比,VTG蛋白的含量以及基因的表达随着NP浓度的增加而递增,具有明显的浓度效应,并且在NP 500ug/L时,差异具有统计学意义(P<0.01).结论 可以用VTG的含量及基因表达水平作为监测环境雌激素类化学物暴露有效的终点指标.
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阿特拉津对斑马鱼影响的研究
目的 研究农药阿特拉津是否具有雌激素效应.方法 选择斑马鱼为受试动物,随机分为对照组和阿特拉津暴露组.观察不同浓度的阿特拉津(0.1、0.5、1.0,5.0、10.0 mg/L)对斑马鱼的生长、体内卵黄蛋白原(Vtg)含量及肝脏7-乙氧基-3-异吩噁唑酮-脱乙基酶(EROD)酶活力的影响.结果 经14d暴露后,阿特拉津浓度低于1.0 ms/kg时雄性斑马鱼体重增长分别为对照组的1.57、1.81和2.07倍;当阿特拉津浓度高于1.0 mg/kg时,实验组斑马鱼体重出现负增长现象.当阿特拉津浓度为1.0、5.0和10.0 mg/kg时,实验组雌性斑马鱼体重分别为对照组的-0.42、-2.18和-1.32倍.阿特拉津可诱导雄性斑马鱼体内Vtg表达,具有雌激素效应并抑制肝脏中EROD酶活力,与对照组相比,差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 阿特拉津对水生动物有明确的生长和生殖毒性.
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环境内分泌干扰物研究方法进展
环境内分泌干扰物(Environmental endocrine disruptors, EEDs)对人和野生生物的有害影响是近些年来国际上研究热点.美国、欧共体和日本等都已拨出巨款对此进行研究.2000年国家自然科学基金对EEDs研究给予有力的支持.联合国已于2001年以来在全世界范围内禁用或严格限用一些EEDs,以减少其对人类健康的危害,建立一套高效快速的EEDs筛检方法显得尤为重要.目前,EEDs的研究方法主要有:整体动物试验、酵母双杂交法[1,2]、受体结合实验、重组受体/报告基因表达培养细胞、卵黄蛋白原法、细胞增殖法以及流行病学调查研究.本文从环境毒理学及流行病学角度就其研究方法进展作一综述.
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电子垃圾拆解地野生雄性鲫鱼多氯联苯、卵黄蛋白原及EROD水平
[目的]研究电子垃圾拆解地多氯联苯(PCBs)污染对雄性野生鲫鱼血清卵黄蛋白原(VTG)水平和肝脏乙氧基异吩恶唑酮脱乙基酶(EROD)活性的影响. [方法]分别选择东南沿海有大量电子变压器和电容器拆解业历史及以电子产品生产为主要产业的两地区作为重度、轻度污染区,以无电子拆解业的某地区作为对照区.各地区分别采集5尾野生雄性鲫鱼,并测定鱼肌肉组织中.PCBs、肝脏组织中EROD、血清中VTG水平. [结果]所有雄性野生鲫鱼体内均检测出18种PCBs单体.重度污染区总PCBs质量分数(中位数)为214138pg/g,明显高于轻度污染区(8088pg/g),二者均高于对照区(2968 pg/g)(均P＜0.05).重度污染区野生鲫鱼肝脏EROD活性明显高于对照区和轻度污染区(均P＜0.05);血清VTG水平与对照区差异无统计学意义(P＞0.05).轻度污染区野生鲫鱼血清VTG水平明显高于对照区(P＜0.05);但肝脏EROD活性与对照区差异无统计学意义(P＞0.05). [结论]电子垃圾拆解地野生雄性鲫鱼肌肉PCBs水平较高,肝脏EROD活性明显升高,血清VTG水平升高不明显.
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Aroclor1254对斑马鱼胚胎发育、肝脏组织结构及其卵黄蛋白原基因的影响
[目的]使用脊椎动物模型斑马鱼评价Aroclor1254对斑马鱼胚胎发育、肝脏组织结构以及卵黄蛋白原(vtg)基因表达的影响,为Aroclor1254的毒性效应研究提供基础数据,以期选择Aroclor1254污染的敏感指标,进行早期污染监测和预警.[方法]将斑马鱼及其胚胎暴露在不同浓度的Aroclor1254溶液中,运用斑马鱼胚胎发育技术和组织病理观察法以及实时定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Aroclor1254对斑马鱼胚胎发育的影响、形态学的改变和卵黄蛋白原(vtg)基因的表达.[结果]斑马鱼胚胎试验显示,3.3、6.5、10.0mg/L Aroclor1254等均可诱导肝变性、肝脏发育不全,其中3.3 mg/L Aroclor1254诱导斑马鱼卵黄部分变性,6.5、10.0mg/L Aroclor1254诱导斑马鱼卵黄大部分或者全部变性.肝脏组织病理观察发现,2.0、10.0、50.0 μg/L Aroclor1254肝细胞肿大,胞质疏松,空泡明显增加,细胞质中可见脂沉积.vtg mRNA的表达在Aroclor1254暴露的斑马鱼个体中产生了显著的改变,雌鱼中表达普遍呈抑制趋势,其中以2.0μg/L抑制现象明显,而在雄鱼中该剂量组vtg表达量被显著诱导.[结论]研究表明Aroclor1254对斑马鱼及其胚胎具有毒性效应,肝脏是产生毒性效应的重要靶器官.
关键词： Aroclor1254 斑马鱼 肝脏 卵黄蛋白原 -
荧光转基因斑马鱼Tg(ere-vtg:egfp)质粒的构建及验证
[目的]本研究旨在构建一种对17α-炔雌醇(17a-ethynylestradiol,EE2)敏感的荧光转基因斑马鱼模型,提供一种可直观地监测水中环境雌激素(environmental estrogens,EEs)污染程度的生物检测方法.[方法]构建Tg(ere-vtg:egfp)质粒,显微注射到1～2个细胞期的斑马鱼胚胎中,经10 ng/L EE2暴露发出绿色荧光,建立能稳定遗传的Tg(ere-vtg:egfp)转基因斑马鱼系.将转基因斑马鱼纯合子幼鱼和胚胎暴露于不同浓度的EE2进行敏感性鉴定,并将转基因斑马鱼纯合子幼鱼暴露于多种EEs、雌激素结构类似物中进行特异性鉴定.[结果]经显微注射Tg(ere-vtg:egfp)质粒并进行基因筛选,成功构建Tg(ere-vtg:egfp)转基因斑马鱼.EE2诱导Tg(ere-v喀egfp)转基因斑马鱼表达绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)与浓度、时间有关.当EE2质量浓度大于0.1 ng/L(131 hpf)时,可见转基因斑马鱼胚胎表达明显的GFP.当暴露于不同结构的雌激素类化合物时,Tg(ere-vtg:egfp)转基因斑马鱼幼鱼呈现GFP表达,而对于非雌激素类化合物在各浓度下均没有GFP表达.[结论]采用Tg(ere-vegp)转基因斑马鱼可直观地动态监测环境中EEs污染情况.
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菌核净对鲫鱼的雌激素效应研究
目的 研究菌核净对鲫鱼的雌激素效应.方法 每隔5d腹腔注射给予鲫鱼不同剂量菌核净(50mg/kg、100 mg/kg和200 mg/kg)诱导卵黄蛋白原(vitellogenin,VTG)的产生,同时设置阳性对照组17β-雌二醇(E2)和花生油对照组,2W后收集雄性鲫鱼血浆和肝脏进行VTG检测(ELISA法),并测定血钙离子和血、肝总蛋白含量.结果 100mg/kg和200 mg/kg菌核净能诱导雄性鲫鱼血VTG产生,200mg/kg菌核净能刺激雄性鲫鱼肝脏产生WIG,与阴性对照组相比,VTG含量均具有显著性差异;各剂量组菌核净对雄性鲫鱼血钙离子、血和肝总蛋白含量均无影响;但阳性对照E2能增高血钙离子水平,差异具有显著性.结论 菌核净具有雌激素样作用.
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大劣按蚊卵黄蛋白原cDNA的克隆及转录水平研究
目的 克隆大劣按蚊卵黄蛋白原cDNA,进行序列分析,并研究该基因在不同蚊期的转录水平变化.方法 首先提取大劣按蚊总RNA,反转录成cDNA;然后设计昆虫卵黄蛋白原简并引物,以该cDNA为模板进行PCR扩增和测序,对所获取的序列进行生物信息学分析;后利用实时荧光定量PCR方法检测卵黄蛋白原基因在蚊卵、幼虫、蛹和成蚊各时期的转录水平变化.结果 PCR成功扩增出了清晰的单一目的条带,经测序为一段1071 bp的序列,BLAST比对分析显示该序列与浅色按蚊、库态按蚊和斯氏按蚊的卵黄蛋白基因同源性高达90％,与冈比亚按蚊、微小按蚊和美彩按蚊的同源性达89％.对大劣按蚊各时期卵黄蛋白原转录水平的研究结果显示,4d龄按蚊卵黄蛋白原mRNA水平是3d龄按蚊的15.2倍,而吸血后卵黄蛋白原mRNA水平高效上调,是未吸血组的955.7倍(P＜0.01);吸血组6d龄按蚊卵黄蛋白原mRNA表达较吸血组4d龄按蚊骤降(下降近1 870倍),而与未吸血组6d龄按蚊相比,差异无统计学意义.结论 本研究成功地克隆了大劣按蚊卵黄蛋白原基因的cDNA;大劣按蚊血餐后24 h卵黄蛋白原基因高效表达,提示卵黄蛋白原基因可能参与了大劣按蚊蚊卵的发育.
