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人天然Fab段噬菌体抗体库的构建及初步鉴定
目的构建人天然Fab段噬菌体抗体库,建立人源抗体制备技术平台,为恶性肿瘤的免疫治疗提供新方法.方法从一个健康献血员取200ml新鲜血液,分离淋巴细胞,提取总RNA,逆转录合成cDNA,PCR扩增抗体轻链和重链Fd段cDNA,依次将PCR产物插入载体pComb3相应位点,电穿孔转化感受态大肠杆菌XL1-Blue,加入辅助噬菌体VCSM13产生噬菌体抗体库,酶切和PCR鉴定有无插入片段,用白蛋白和IL2作为抗原进行筛选富集.结果部分重链Fd片段、部分κ轻链和λ轻链cDNA得到扩增.Fab表达库容达约1.2×106,酶切和PCR显示有插入片段.用不同蛋白进行几轮筛选,抗体库得到了不同程度的富集.结论本研究构建的人天然Fab段噬菌体抗体库可为进一步筛选特异性抗体,用于免疫治疗打下基础.
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单克隆抗体在病毒感染防治中的应用研究新进展
抗体疗法在抗病毒感染中发挥重要作用,有助于预防和缓解病毒疾病.传统的多抗制剂逐步被高效的单抗取代.新兴的鸡尾酒单抗和双特异性单抗针对多个病毒靶点,克服了病毒逃逸问题.抗体工程的进步促成了大量新型单抗的产生,伴随着病毒生物学特性及中和表位的深入了解,单抗的潜在靶点进一步扩展.此外,低成本生产平台的进步,将使得抗病毒单抗更加廉价从而得到广泛应用.
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2013中国（山东）国际生物医药产业博览会将于11月举办
协会主办的2013中国（山东）国际生物医药产业博览会将于今年11月27-29日在山东济南国际会展中心举行。本次活动将聚焦于基因工程、抗体工程及细胞工程等生物医药产品、技术的展示，为生物制药公司、生物技术公司、新药研发企业及政府部门、研究机构和国内外同行搭建交流与合作平台。
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全球生物制药产业概况
以基因工程、抗体工程或细胞工程技术生产的,源自生物体内的,用于体内诊断、治疗或预防的生物技术药物[1-2],已经成为利用现代生物技术生产的重要的产品,并成为衡量一个国家现代生物技术发展水平的一个重要的标志,生物制药已成为制药业中发展快、活力强和技术含量高的领域.
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重视抗体工程
目前,病理学工作者都能深切体会到抗体与病理学工作关系密切,因为,抗体已经走进了几乎所有的病理科,它在病理学研究,特别在日常活检诊断中的普遍应用,使之成为病理工作中不可或缺的工具之一.抗体工程就是抗体的人工改造.它与病理学有何关系,倒是大家不大清楚的问题,好象抗体工程是病理学家身外的事.实际上,抗体工程要求全面的病理学的支持.抗体工程参与并推动着病理学技术的重大改革.病理学家是抗体基因工程发展的重要力量.
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体外抗体亲和力成熟的几种策略
抗体在疾病诊断、治疗和预防方面发挥着举足轻重的作用.随着抗体工程技术的不断发展,抗体已经成为生物制药领域中的热点.而抗体工程发展所面临的两大难点问题之一就是如何提高基因工程抗体的亲和力.本文综述了有关基因工程抗体体外抗体亲和力成熟方面的新进展.
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关于创新型抗体药物药学评价的思考
近年来,随着我国生物制药自主创新能力的提高,越来越多的创新型抗体药物申请注册临床试验.按照其技术特点,可分为全新序列抗体(改良型抗体或新靶点抗体)、双特异性抗体(或复方抗体)、抗体偶联物等三类.与生物类似药不同,创新型抗体的开发具有“创试性”、“阶段性”和“渐进性”等显著特点.与之相适应,其药学评价内容与技术要求也区别于生物类似药.本文总结了近年来国内外创新型抗体的发展趋势与申报现状,对代表品种的技术特点进行分析.并结合新药审评实践,着重就创新型抗体药学评价的关注点、一般考虑与评价要点展开探讨,以期促进此类药物由研发顺利转入早期临床试验阶段.
关键词： 创新型抗体 抗体工程 抗体药物偶联物 双特异性抗体 程序化细胞死亡受体1 -
医学生物技术专业抗体工程综合性实验教学探索
抗体工程是我校生物技术专业本科生的核心课程,抗体工程实验课是其重要组成部分.针对抗体工程技术发展的特点,我们探索了以贯穿单克隆抗体制备的全过程为核心的综合性实验课程系统,通过实验内容、教学方式、考核评价体系等方面的改革,在保证掌握基础技能实验的基础上,着重培养学生综合分析、解决问题及创造性思维的能力.
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问题导学法在抗体工程教学中的应用
为评价PBL教学法在抗体工程课程教学应用的效果,在抗体工程教学中开展教学改革,对照组采用传统教学方法,实验组采用问题导学法.教学结束后,通过问卷调查和考核成绩评价教学效果.结果显示,学生对问题导学法教学的教学效果、能力培养、学习内容掌握和实施过程持肯定态度,问题导学法能够激发学生学习兴趣,有助于培养学生的自学能力、分析和综合能力.
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抗体工程制药实验教学探索
生物技术制药是一门综合性很强的学科,这是由现代生物技术的特点决定的.该学科的迅速发展充分体现了现代生物技术在制药领域的潜在应用前景[1].生物医药已成为全球发展快的产业之一.为适应培养制药产业复合型研发人才的需求,我们参照国内其他院校的生物技术制药实验课程设置及经验[2-5],在为药学专业本科生开设理论课的同时进行了一定学时的实验教学,包括动物细胞工程制药、基因工程制药、抗体工程制药涉及的基本实验技术.在教学过程中我们不断总结经验,提高教学效果.本文重点阐述了我们在抗体工程制药实验教学中在培养学生基本实验技能与动手能力、结合多媒体教学等方面的体会,为进一步完善生物技术制药实验教学体系奠定基础.
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体外展示技术及其在抗体工程中的应用
体外展示技术包括核糖体展示技术、mRNA展示技术、DNA展示技术,是在无细胞蛋白质表达体系内将基因型和表型通过一定的方法连接在一起,体外高通量的筛选多肽和蛋白质的技术.抗体的产生是一个不断选择的过程,利用体外展示技术在体外选择针对某一抗原的抗体分子,并结合基因工程技术对抗体进行改造,以产生高亲和力、高特异性的抗体.体外展示技术的研究和应用已越来越广泛,有望成为下一代的抗体制备技术.
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抗体工程和治疗:抗体协会2015年会
第26届抗体工程和治疗会议,暨抗体协会年会,于2015年12月6-10日在美国圣地亚哥举行.会议讨论了抗体创新研究和抗体研发进展,涉及多个抗体相关主题.
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全人源单克隆抗体现状及发展趋势(续)
4 技术平台全人源单抗是抗体工程技术发展的重要趋势.目前全人源单抗的研发技术主要有:B细胞永生化技术、噬菌体抗体库技术、转基因小鼠技术以及人源杂交瘤技术等.其中以噬菌体展示技术和转基因小鼠技术实际应用广泛、成功.
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噬菌体抗体库筛选方法的研究进展
建立高效的筛选方法是噬菌体抗体库技术实际应用的主要瓶颈.人们对传统抗体库筛选方法(固相和液相淘筛法)所涉及的抗原表位构象及筛选通量问题做了相应改进,并针对一些天然抗原难以体外制备、或为降低筛选的非特异性、或为达到规模化筛选目的而发展了一些新型的筛选方法(细胞淘筛法、组织或体内淘筛法、选择感染法和自动化淘筛法),同时对影响筛选效率的主要条件参数(封闭与洗脱条件,筛选轮数与严紧度)进行了优化研究.这些研究必将加速抗体库技术快速规模化制备抗体的普及实现.
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抗体噬菌体展示技术研究进展
抗体工程技术随着现代生物技术的发展而不断完善,并且是生物技术产业化的主力军,尤其在生物技术制药领域占有重要地位.
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噬菌体抗体库技术及其研究进展
抗体工程经历过多克隆血清,单克隆抗体阶段,现发展到了基因工程抗体时代.目前,抗体工程领域突出的进展就是噬菌体抗体库技术的建立.
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人天然Fab段噬菌体抗体库的构建
目的通过构建人天然Fab段噬菌体抗体库为恶性肿瘤的免疫治疗提供新方法.方法取4个健康献血员新鲜血液各200ml,分离淋巴细胞,提取总RNA,经逆转录合成cDNA,设计多对引物,以PCR扩增抗体轻链和重链Fd段cDNA.轻链PCR产物和质粒载体pComb3经SacⅠ和XbaⅠ酶切,由T4 DNA连接酶连接,电穿孔转化感受态大肠杆菌XL1-Blue,扩增后提取质粒,构建轻链库.轻链库和重链Fd段PCR产物经XhoⅠ和SpeⅠ酶切,同样方法连接转化XL1-Blue,加入辅助噬菌体VCSM13产生噬菌体抗体全库.酶切鉴定轻链库和全库有无插入片段.结果提取的淋巴细胞总RNA质量好,部分重链Fd片段、部分κ轻链和λ轻链cDNA得到扩增.Fab全库库容达5.4×106,酶切证实有插入片段.结论本研究构建的人天然Fab段噬菌体抗体库可为进一步筛选特异性抗体及从肿瘤组织中提取肿瘤抗原用于免疫治疗奠定基础.
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噬菌体抗体库展示技术及其研究进展
1 噬菌体展示技术的基本原理噬菌体展示技术(phage display technology)是一项通过基因重组的方法,将目的蛋白或部分片段基因以融合的方式重组到噬菌体的外壳蛋白的基因上,通过噬菌体的包装将目的蛋白展示在噬菌体的表面.这项技术在蛋白质组学、医药工程、临床等方面具有重要的应用价值.该技术是以改造的噬菌体为载体,把候选基因或部分片段定向插入噬菌体外壳蛋白质基因区,使外源多肽或蛋白质表达并展示于噬菌体表面,进而通过亲和富集法筛选到表达有特异肽或蛋白质的噬菌体.
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“抗体工程基础与应用”选修课的教学探索
在学制变革背景下，医学检验教育应转变人才培养理念，加强教育与社会需求的联系，注重创新能力和创新精神的培养。选修课作为学科教学体系的重要组成部分，在大学生教育中起着重要作用。该教研室在3、4年级医学检验专业学生中以专业选修课的形式开设了“抗体工程基础与应用”课程。该门课程在增强学生对抗体工程和体外诊断技术（IVD ）行业的认识，培养学生检验技术研发能力和创新能力，完善教学体系和加强学科建设等方面均取得了积极有益的效果。
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生物技术制药实验教学模式的探索
生物技术制药是一门实践性和综合性很强的学科,是当前研究热、发展迅速的学科之一.随着科学技术的迅猛发展,生物制药巳成为活跃、发展快的产业之一,制药业对生物技术制药人才的需求也日益增加,针对这些情况,如何增强生物技术制药实验课的教学效果,培养高素质的具有创新精神和实践能力的生物技术制药人才,是当前培养生物技术专业人才所需要重点关注的问题之一.生物技术制药课程着重讨论应用基因工程、发酵工程、酶工程、细胞工程、抗体工程、蛋白质工程等现代生物技术的原理和方法研制生物制品,是"现代生物技术"与"制药"的有机结合.
