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灵芝孢子油对免疫低下小鼠免疫调节机制的初步研究
目的 采用免疫功能低下小鼠模型探讨灵芝孢子油免疫调节作用机制.方法 将昆明小鼠随机分成模型对照组、灵芝孢子油组、正常对照组,每组10只；模型对照组、灵芝孢子油组分别腹腔注射40mg·kg-1·-1)环磷酰胺建立免疫功能低下小鼠模型,正常对照组腹腔注射生理盐水(0.9％)0.1ml/10g BW;同时灵芝孢子油组150mg/kg,正常和模型对照组灌胃玉米油0.1ml/10g BW,灌胃1次/A,连续30d;用ELISA试剂盒检测小鼠血清TNF-α、IFN-γ水平,半定量PCR检测小鼠脾脏、胸腺IL-2、IL-10、IL-12、IL-4、IFN-γ、TNF-α基因表达量,初步探讨灵芝孢子油的免疫调节机制.结果 灵芝孢子油明显提高环磷酰胺免疫低下模型小鼠血清中TNF-α、IFN-γ的含量,脾脏和胸腺中IL-2、IL-10、IL-12、IL-4、TNF-α和IFN-γmRNA的表达量,与模型对照组间差异显著(P≤0.05).结论 灵芝孢子油通过增强细胞因子的分泌、表达进行免疫调节.
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口服灵芝孢子油对小鼠免疫功能的影响
灵芝是担子菌纲多孔菌科(polyproraceae)灵芝属(ganoderma)真菌赤芝G.Lucidum Karst.和紫芝G.Japonicum Lloyd的总称,是祖国中医药宝库中的珍品,素有"仙草"之誉.基于灵芝的确切临床治疗作用,近年来对其化学成分及作用机理进行了大量的研究,对灵芝的生殖细胞--孢子药用价值的研究也日趋深入.以往的研究表明,灵芝孢子具有显著的防癌、抗肿瘤作用,其功效是灵芝子实体的60～70倍.
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灵芝孢子油通过下调miR-21促进人肺腺癌SPC-Al细胞凋亡
目的:通过检测灵芝孢子油对人肺腺癌细胞SPC-Al增殖、凋亡与miR-21及其靶基因表达的影响,探讨灵芝孢子油的抗肿瘤机制.方法:灵芝孢子油处理人肺腺癌细胞SPC-Al 24 h以及48 h后,采用CCK-8法检测其对细胞增殖的影响,倒置相差显微镜观察细胞形态学变化,流式细胞术检测细胞凋亡,Real-time PCR检测miR-21及其靶基因PTEN和PDCD4的表达.结果:灵芝孢子油剂量、时间依耐性地抑制人肺腺癌SPC-Al细胞的增殖;当灵芝孢子油体积分数达到0.2%时,细胞形态发生明显变化;Annexin-V/PI双染检测提示,灵芝孢子油在低浓度下就可促进细胞凋亡;灵芝孢子油显著下调SPC-Al细胞中miR-21的表达并相应上调PTEN以及PDCD4基因的表达.结论:灵芝孢子油能显著抑制人肺腺癌细胞SPC-Al细胞增殖,引起细胞形态学改变.通过下调miR-21的表达,上调抑癌基因FFEN以及PDCD4的表达,从而促进肺癌细胞凋亡,达到抗肿瘤的作用.
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灵芝孢子油及灵芝提取物孢子油对乳腺癌血管生成调节因子的作用
目的：探讨灵芝孢子油及灵芝提取物孢子油对人源高恶性乳腺癌血管生成调节因子的作用。方法不同剂量的灵芝孢子油、灵芝提取物孢子油分别刺激体外培养的人源高恶性乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞及MDA-MB-231细胞制作的荷廇小鼠， Western blotting 检测表皮生长因子受体（ EGFR ）的蛋白表达变化， Real-time PCR检测肿瘤血管生成相关因子EGFR、血管内皮生长因子（ VEGF）、基质金属蛋白酶（ MMPs）、血小板反应素-1（TSP-1）、血小板衍生因子（PDGF）、成纤维细胞生长因子（FGF）转录水平的基因表达变化。结果灵芝孢子油、灵芝提取物孢子油均可在体内和体外抑制人源高恶性乳腺癌细胞MDA-MB-231的EGFR蛋白表达，且有剂量依赖性；均可在体内和体外抑制VEGF RNA表达，增强血管生成抑制因子TSP-1 RNA表达；灵芝提取物孢子油比灵芝孢子油的作用更为显著。结论灵芝孢子油、灵芝提取物孢子油均有抑制肿瘤血管生成因子表达和促进血管生成抑制因子表达的作用，其中灵芝提取物孢子油比灵芝孢子油的作用更为显著。
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灵芝孢子油对抑郁小鼠行为学的影响及其神经生理机制
目的 考察灵芝孢子油对慢性轻度不可预见刺激模型小鼠行为学影响及可能的神经生理机制.方法 采用13种不同慢性轻度不可预见刺激对雄性BALB/C小鼠连续刺激建立小鼠抑郁模型.从第3周开始连续灌胃给予3个剂量的灵芝孢子油(850、283、141.5 mg·kg-1),盐酸氟西汀(10mg·kg-1)或空白溶媒(植物油)2周后,测定各组小鼠行为学变化,同时采用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定海马谷氨酸(GLU)和γ-氨基丁酸(GABA),酶联免疫法测定脑源性神经营养因子(BD-NF)的含量.结果 与模型组比较,灵芝孢子油能增加抑郁小鼠的体重、糖水偏好率和旷场实验得分(P＜0.01),缩短悬尾实验和强迫游泳实验的不动时间(P＜0.05,P＜0.01),明显降低海马GLU的含量(P＜0.01),增加BDNF含量(P＜0.01),但对GABA含量无影响(P＞0.05).结论 灵芝孢子油对抑郁模型小鼠表现出明显的抗抑郁作用,其抗抑郁作用可能与其降低GLU和增加BDNF相关.
关键词： 灵芝孢子油 慢性轻度不可预见刺激 谷氨酸 γ-氨基丁酸 脑源性神经营养因子 -
HPLC法测定灵芝孢子油中甘油三油酸酯含量
目的:建立高效液相色谱法( HPLC)测定灵芝孢子油中甘油三油酸酯含量的方法.方法:色谱柱为Kromasil 100-5C18,流动相为乙腈-异丙醇(53:47),流速为1.0 mL/min,蒸发光散射检测器检测.结果:甘油三油酸酯在2.290 ～ 13.740 μg范围内线性关系良好,r=0.999 6,平均回收率为99.10％,RSD为1.65％.结论:该方法准确可行、重复性好,可作为灵芝孢子油及其制剂质量评价的方法之一.
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紫外分光光度法测定灵芝孢子油中总三萜含量
目的:建立紫外分光光度法测定灵芝孢子油中总三萜含量.方法:以齐墩果酸为对照品,与5％香草醛-冰乙酸反应,在高氯酸环境下显色,在545 nm处测定样品吸光度.结果:齐墩果酸在0.02 ～0.12 mg范围内线性关系良好,y=11.033X-0.0441,r=0.9998.重复性实验,RSD为2.84％(n=6).平均回收率78.43％,RSD为3.5％(n=6).结论:经过线性、重复性、精密度、回收率实验,确认本方法适用于灵芝孢子油总三萜的含量测定.
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灵芝孢子油对老龄小鼠免疫保护作用
目的 探讨灵芝孢子油对老龄小鼠的免疫保护作用.方法 将192只健康老龄(12月龄)SPF级昆明雄性小鼠随机分为A、B、C、D 4组,各组均随机分为4个小组,即对照组、低、中、高剂量组,每组12只.低、中、高剂量组小鼠经口灌胃分别为0.25、0.50、1.50mg/(kg·bw)的灵芝孢子油,对照组给予同体积的玉米油.灌胃容量0.02 ml/g,1/d.连续灌胃30d后,分别进行迟发型变态反应(DTH)实验、血清溶血素的测定、抗体生成细胞数的测定、碳廓清实验、腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验、淋巴细胞转化实验和NK细胞活性测定.结果 灵芝孢子油暴露后,与对照组相比,中、高剂量组小鼠足跖肿胀度、淋巴细胞增殖能力、抗体生成细胞数、抗体积数、单核-巨噬细胞碳廓清能力、腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬率、腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬指数均具有统计学意义(P<0.05或P<0.01),而NK细胞活性无统计学意义(P>0.05).随着灵芝孢子油灌胃剂量的升高,上述指标均呈上升趋势.结论 灵芝孢子油可以增强老龄小鼠的免疫保护作用.
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灵芝孢子油对N-甲基-N-亚硝脲诱导大鼠视网膜光感受器细胞损伤的影响
目的 探讨灵芝孢子油对N-甲基N-亚硝脲(MNU)诱导的大鼠视网膜光感受器细胞变性动物模型的治疗作用,为防治视网膜变性提供一种有价值的现代化中药.方法 大鼠随机分为5组,对照组、灵芝孢子油治疗组、二十二碳六烯酸(DHA)治疗组、灵芝孢子油+DHA治疗组和模型组,在造模前2 d用不同的药物ig给药,第3天采用40 mg/kg MNU单次剂量ip造模,造模后继续ig给药至第10天,造模后1、3、5、7、10 d进行视网膜电图(ERG)检查,并取眼球进行眼病理检查.结果 不同用药组各时间点的b波振幅明显高于模型组(P＜0.05、0.01);灵芝孢子油组的a波振幅明显高于模型组(P＜0.05),但与DHA组和灵芝孢子油+DHA组相比较,无明显差异(P＞0.05).眼病理结果,不同用药组在各个时间点与相应的模型组比较,MNU诱导的大鼠视网膜光感受器损伤均明显减轻(P＜0.05).结论 灵芝孢子油和DHA可减轻MNU对大鼠视网膜光感受器细胞的损伤程度,促进MNU诱导的大鼠视网膜光感受器细胞损伤的功能恢复.
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灵芝孢子油体内抗Friend鼠白血病病毒的实验研究
目的 探讨灵芝孢子油体内抗Friend鼠白血病病毒(Friend murine leukemia virus,Fr.MuLV)感染的疗效和作用机制.方法 用Fr.MuLV感染BALB/C雌性小鼠,造模小鼠ig给药21 d,比较各组动物的体质量、脾指数、胸腺指数,CD_4~+、CD_8~+、CD_4~+/CD_8~+等指标变化情况.结果 小鼠感染Fr.MuLV后体质量严重减轻,脾明显肿大,胸腺萎缩,CD_4~+、CD_8~+、CD_4~+/CD_8~+值均显著降低.灵芝孢子油50、100、200 mg/kg剂量均可显著改善体质量增长抑制、脾肿大及胸腺萎缩(P<0.01),100、200 mg/kg剂量组CD_4~+、CD_8~+、CD_4~+/CD_8~+值均有明显升高(P<0.01、0.05).结论 灵芝孢子油对Fr.MuLV感染小鼠有保护作用.能够改善体质量增长抑制,抑制脾肿大及胸腺萎缩,升高感染小鼠的T淋巴细胞.
关键词： Friend鼠白血病病毒 灵芝孢子油 淋巴细胞 -
灵芝孢子油对小鼠T淋巴细胞功能影响浅释
[目的]观察灵芝孢子油对小鼠T淋巴细胞功能的影响.[方法]测定灵芝孢子油对小鼠T淋巴细胞亚群的含量变化、IL-2的活性和ConA诱导的脾淋巴细胞的增殖反应.[结果]灵芝孢子油可显著升高正常小鼠外周血CD4+T细胞比例,降低CD8+T细胞比例,升高CD4+/CD8+比值.可以促进正常小鼠诱生IL-2.促进ConA诱导的脾T淋巴细胞增殖反应.[结论]灵芝孢子油能促进小鼠T淋巴细胞的免疫功能.
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灵芝孢子油对辐射损伤老龄小鼠的保护作用
目的：探讨灵芝孢子油对辐射损伤老龄小鼠的保护作用。方法将144只健康老龄（12月龄） SPF级昆明雄性小鼠随机分为 A、B、 C三组，各组随机分为辐射模型组、低、中、高剂量灵芝孢子油组，每组12只。低、中、高剂量灵芝孢子油组小鼠经口灌胃浓度分别为12.5、25.0和75.0 g/L的灵芝孢子油，辐射模型组灌胃等体积的玉米油，灌胃容量为0.02 ml/g，1次/d。灌胃第30天， A组小鼠检测外周血白细胞计数后，各组小鼠给予60 Coγ射线全身一次性照射，照射后继续给予受试物。 A组小鼠分别在照射后第3、14天检测外周血白细胞计数； B组照射后第4天检测股骨及胸骨骨髓细胞DNA含量及骨髓细胞微核率； C组小鼠照射后第7天测定红细胞及肝脏超氧化物歧化酶（ SOD）活力。结果灵芝孢子油暴露后，与辐射模型组相比，中、高剂量灵芝孢子油组小鼠外周血白细胞计数、红细胞及肝脏 SOD活力显著升高（ P＜0.01），高剂量组骨髓细胞微核率显著降低（P＜0.05）；低、中、高剂量组小鼠骨髓细胞DNA含量均明显增多（P＜0.05）。随着灵芝孢子油灌胃剂量的升高，小鼠骨髓细胞微核率呈下降趋势，而外周血白细胞计数、骨髓细胞DNA含量、红细胞及肝脏 SOD活力呈上升趋势。结论灵芝孢子油对辐射引起的老龄小鼠损伤具有拮抗作用。
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灵芝孢子油对MCF-7细胞凋亡及迁移的影响
目的:观察灵芝孢子油对人乳腺癌MCF-7细胞增殖、迁移及凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制.方法:CCK-8法检测灵芝孢子油对MCF-7增殖的影响;伤口愈合实验观察灵芝孢子油对MCF-7细胞迁移的作用;流式细胞术检测细胞凋亡率;RT-PCR法检测抗凋亡基因Bcl-2、促凋亡基因Bax及血管内皮生长因子(VEGF)mRNA表达水平.结果:不同浓度的灵芝孢子油对MCF-7的增殖和迁移均有一定程度的抑制作用,且呈时间、剂量依赖性;灵芝孢子油能显著诱导MCF-7细胞凋亡;RT-PCR结果显示,灵芝孢子油能上调Bax同时下调Bcl-2和VEGF的mRNA表达水平.结论:灵芝孢子油能抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖和迁移,并促进细胞凋亡,其作用机制可能与下调VEGF和Bcl-2/Bax的比值有关.
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超临界CO2萃取灵芝孢子油的工艺条件研究
灵芝孢子是灵芝在发育后期产生释放出的种子,是灵芝的精华,而灵芝孢子油中包含了灵芝孢予中的三萜类、多糖类及核苷类等全部有效成分,是灵芝孢子有效成分的集合体,具有多种生理活性,尤其是对肿瘤的抑制作用已经由药理实验[1]得到公认.
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灵芝孢子油中三萜类成分的定量研究
灵芝孢子油对肿瘤的抑制作用已经由药理实验得到公认.中国科学院中科灵芝项目组对其抗癌作用的研究表明,灵芝孢子油是灵芝孢子抗癌作用的"主力",其抑瘤率平均可达91.16%.文献报道,灵芝孢子油中包含了灵芝孢子中的三萜类、多糖类及核苷类等全部有效成分,是灵芝孢子有效成分的集合体.
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灵芝孢子油对人肺癌细胞的生长抑制作用及超微结构的影响
目的:探讨灵芝孢子油对人肺癌细胞(A549)超微结构的影响以及对其生长的抑制作用.方法:利用CCK-8法检测灵芝孢子油对A549细胞的生长抑制作用;利用透射电镜研究灵芝孢子油对A549细胞超微结构的影响;利用乳酸脱氢酶(LDH)检测法研究灵芝孢子油对细胞膜通透性的影响;上述方法研究灵芝孢子油对体外培养的肺癌细胞A549的抑制作用.结果:CCK-8检测结果表明25 μg/ml浓度的灵芝孢子油可导致A549细胞的存活率明显下降;透射电镜结果显示,随着灵芝孢子油浓度的增加,可以观察到细胞超微结构的明显改变;LDH检测显示灵芝孢子油可使细胞的LDH释放量明显增加,且呈剂量依赖性.结论:灵芝孢子油对人肺癌细胞具有明显抑制作用.
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灵芝孢子油免疫调节作用的研究
目的:研究灵芝孢子油对小鼠免疫功能的调节作用.方法:分别以183、367、1100 mg/kg b.wt,剂量的灵芝孢子油对小鼠连续灌胃30d后,测定各项免疫指标.结果:灵芝孢子油能促进小鼠的脾淋巴细胞增殖转化作用及小鼠的迟发性变态反应,提高小鼠的抗体生成细胞和血清溶血素水平,增强小鼠巨噬细胞吞噬能力.结论:灵芝孢子油具有增强小鼠免疫功能的作用.
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HPLC法测定灵芝孢子油中麦角甾醇的含量
目的:建立灵芝孢子油中麦角甾醇含量的测定方法.方法:采用高效液相色谱方法.选用汉邦Kromasil C18色谱柱(200mm×4.6mm,5μm),流动相为100%纯甲醇,流速1.0mL/min,检测波长为282nm,柱温30℃.结果:麦角甾醇进样量在0.0500～1.60μg之间与峰面积呈良好的线性关系,r=0.9997;平均回收率为98.67%,RSD为2.53%(n=9).结论:该方法简单准确,为灵芝孢子油质量评价提供了可靠依据.
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GC-MS法测定灵芝孢子油中5种有机酸的含量
目的 建立灵芝孢子油中5种有机酸的含量测定方法 .方法 采用气相色谱-质谱联用方法 ,选用色谱柱为HP-5MS(5%苯基甲基聚硅氧烷弹性石英毛细管柱,150 m×0.25 mm×0.25 μm);色谱柱程序升温条件:初始温度为165℃,保持40 win,以30℃/min的速率升至280℃,保持2 min.结果 十四酸、十五酸、十六酸、亚油酸和油酸分别在0.0126～0.0630mg、0.03680～0.1840mg、0.80230～4.0116mg、1.8528～9.2640mg、7.6225～38.113mg范围内线性关系良好;方法 的平均回收率为96.98%～98.32%,RSD为2.28%～2.52%.结论 该法简便、快速、准确、重现性好,可用于控制灵芝孢子油质量.
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灵芝孢子油体外抗肿瘤活性比较研究
探讨灵芝孢子油对于不同肿瘤细胞的抗肿瘤活性差异,选取人肝癌细胞(HepG2)、人非小细胞肺癌细胞(A549)、人结肠癌细胞(HCT116)为待检测肿瘤细胞株,采用MTT法进行细胞活力检测,Western blot法检测NF-κB信号通路激活程度,Caspase-3活性检测法检测Caspase-3酶活性来对灵芝孢子油的抗肿瘤活性机制进行初步探讨,并对3种肿瘤细胞的抗肿瘤活性进行比较.经MTT细胞活力实验验证,发现灵芝孢子油对3种肿瘤细胞的生长均具有一定抑制作用,其抑制强度依次为A549细胞、HepG2细胞、HCT116细胞;Western blot检测结果显示,灵芝孢子油能促进NF-κB通路的激活,3种肿瘤细胞比较下,A549细胞NF-κB信号通路激活程度强,其次为HepG2细胞,对HCT116细胞作用弱;Caspase-3活性检测结果显示,灵芝孢子油能激活Caspase-3依赖的凋亡相关途径,其中对A549细胞Caspase-3酶激活程度强,对HepG2细胞作用较强,对HCT116细胞作用弱.因此,本研究发现,灵芝孢子油对3种肿瘤细胞的生长均具有一定抑制作用,其抗肿瘤活性呈时间剂量依赖性,其机制可能与激活NF-κB通路与Caspase-3凋亡途径加速肿瘤细胞凋亡坏死相关.3种肿瘤细胞生长抑制实验结果显示,灵芝孢子油对A549细胞的抗肿瘤活性明显,其次为HepG2细胞,对HCT116细胞的抗肿瘤活性弱.
