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血管紧张素Ⅱ对高糖状态下脂多糖诱导的人肺微血管内皮细胞通透性和细胞骨架蛋白的影响
目的:探讨血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)对高糖状态下脂多糖(LPS)诱导的人肺微血管内皮细胞(HPMVEC)通透性和其骨架蛋白纤维型肌动蛋白(F-actin)的影响.方法:将正常培养的HPMVEC分为空白对照组、高糖组、高糖加LPS组、Ang Ⅱ组、Ang Ⅱ受体拮抗剂组5组.建立单层细胞培养模型,流式细胞仪检测F-actin含量.激光共聚焦显微镜下观察HPMVEC骨架.ELISA测定培养液上清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)浓度.结果:(1)细胞通透性高糖加LPS组较空白对照组、高糖组显著增加(P<0.01),Ang Ⅱ组较高糖加LPS组显著增高(P<0.05),Ang Ⅱ受体拮抗剂组较Ang Ⅱ组显著降低(P<0.05).(2)F-actin含量高糖加LPS组较空白对照组、高糖组明显减少,Ang Ⅱ组较高糖加LPS组明显减少(P<0.01),Ang Ⅱ受体拮抗剂组较Ang Ⅱ组显著增加(P<0.05).(3)镜下高糖加LPS组整个细胞墙面细胞骨架排列紊乱无序,F-actin可见断裂,较空白对照组的排列有序、分布均匀有明显的改变;Ang Ⅱ组细胞完全破坏,细胞骨架不可见,细胞分界不清;AngⅡ受体拮抗剂组细胞骨架尚清晰.(4) TNF-α浓度高糖加LPS组较空白对照组、高糖组显著增加(P<0.01),Ang Ⅱ组较高糖加LPS组显著增加,Ang Ⅱ受体拮抗剂组较Ang Ⅱ组显著降低(P<0.01).结论:Ang Ⅱ引起高糖状态下LPS诱导的HPMVEC通透性增加,促进细胞骨架蛋白F-actin解聚,加快细胞骨架损坏,Ang Ⅱ受体拮抗剂可拮抗HPMVEC通透性的改变.
关键词: 高糖状态 人肺微血管内皮细胞 血管紧张素Ⅱ 脂多糖 血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂 -
交泰丸组方对牛视网膜微血管内皮细胞凋亡因子表达的影响
目的:通过检测交豢丸组方糖目宁对高糖诱导的牛视网膜微血管内皮细胞相关基因表达的影响,探讨其抑制血管内皮细胞凋亡的分子机制.方法:实验组用糖目宁血清培养血管内皮细胞,对照组用正常血清和血清培养基培养,检测其对血管内皮细胞基因表达的影响.结果:糖目宁血清可以显著提高Bcl-2基因的表达,降低Bax、Caspase-3、Caspase-9、Cyto-clarome C等基因的表达,与其他组相比存在显著性差异.结论:糖目宁可能通过调节凋亡因子的表达,影响Cytochrome C凋亡信号传导系统,抑制血管内皮细胞的凋亡,达到治疗的作用,这可能是其抑制血管内皮细胞凋亡的分子机制之一.
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高糖对小鼠足细胞表型转化的诱导作用及机制探讨
目的 观察高糖对小鼠足细胞表型转化的诱导作用,并探讨其机制.方法 将传代培养后的小鼠足细胞随机分为A、B、C三组,A组常规培养,B组加入终浓度为30 mmol/L的葡萄糖、C组加入终浓度为30 mmol/L的葡萄糖及10 μmol/L的蛋白质酪氨酸激酶(JAK2)特异性阻断剂α-氰-(3,4-二羟基)-N-苄基肉桂酰胺(AG490)进行培养,48 h后收集细胞,采用Western blot法检测足细胞中自身标志物人肾病蛋白(Nephrin)、间充质细胞标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及磷酸化蛋白质酪氨酸激酶(p-JAK2)蛋白,采用RT-PCR检测足细胞中的Nephrin、α-SMA mRNA.结果 A组足细胞中Nephrin、α-SMA、p-JAK2蛋白积分光密度值分别为0.96 ±0.01、0.21 ±0.02、0.39±0.01,B组分别为0.58 ±0.01、0.66 ±0.07、0.71 ±0.02,C组分别为0.87±0.04、0.35 ±0.02、0.41±0.04;A组足细胞中Nephrin、α-SMA mRNA的相对表达量为1.53 ±0.04、0.57 ±0.01,B组分别为0.82 ±0.09、0.89±0.03,C组分别为1.30 ±0.04、0.78 ±0.03.B组与A组比较,P均<0.05;C组与B组比较,P均<0.05.结论 高糖可通过激活JAK/STAT信号途径诱导足细胞发生表型转化.
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高糖培养人肾小球系膜细胞对TGF-β1、FN、Smad7表达的影响
糖尿病肾病(Diabetic Nephropathy, DN)是糖尿病常见的微血管并发症,是导致终末期肾病和糖尿病患者死亡的主要原因[1],虽然糖尿病患者的高血糖、高血脂、高血压有很多好的治疗控制方法,但DN的发病率仍然居高不下.因此,研究DN的发生机制和治疗方案是临床亟待解决的问题.Smad蛋白是目前唯一所知的转化生长因子-β1(TGF-β1)的胞内信号转导因子[2],Smad7是TGF-β1/Smad信号转导途径的负反馈调节因子,在DN的发病过程中,Smad7的表达失衡可能是致病环节之一.本文通过体外实验,观察高糖状态下TGF-β1、纤维连接蛋白(FN)增多的同时,Smad7表达的变化,探讨Smad7在细胞外基质(Extracellular Matrix,ECM)沉积中的作用.
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Cajal间质细胞介导的糖尿病大鼠胃离体平滑肌条收缩功能的研究
目的 通过观察Cajal间质细胞介导的糖尿病大鼠和普通大鼠胃离体平滑肌条的收缩功能,体外高糖状态对大鼠胃离体平滑肌条收缩功能的影响,以及糖尿病大鼠胃壁Cajal间质细胞含量及形态学的改变,探讨Cajal间质细胞在糖尿病胃轻瘫发病机制中的作用.方法 (1)动物分组处理:将20只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、1型糖尿病组.后组以腹腔注射STZ建立1型糖尿病动物模型.(2)胃离体平滑肌条收缩功能的测定:用瞿颂义方法,取胃体上1/3和胃窦环行肌肌条,与张力换能器相连,并输入生理记录仪,记录糖尿病组和对照组胃肌条的机械收缩运动.(3)给予体外不同浓度高糖,观察胃离体平滑肌条收缩状态的变化.(4)用免疫组化的方法,比较糖尿病组和对照组胃壁Cajal间质细胞含量及形态学的改变.结果 与正常组比较,糖尿病组液体胃排空率较正常对照组显著延迟(正常组74.38±3.62%,糖尿病组52.00±5.40%)(P<0.01);糖尿病大鼠胃平滑肌条体外收缩振幅和频率较正常对照组减少(P<0.05) ;体外高血糖状态并没有直接影响到胃平滑肌条的收缩;免疫组化结果显示糖尿病组Cajal间质细胞在胃体及胃窦的分布稀疏,数量减少,胃体与胃窦的减少比较没有明显差异.结论 本研究结果显示,Cajal间质细胞的病变可能是糖尿病胃轻瘫的重要发病机制,而体外高糖状态不作为直接导致为平滑肌收缩功能异常的独立危险因素.
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增强AhR表达对高糖状态牙龈卟啉单胞菌脂多糖导致的巨噬细胞炎症反应的影响
目的:探讨增强芳香烃受体(AhR)对高糖状态牙龈卟啉单胞菌(Pg)脂多糖(LPS)导致的巨噬细胞炎症反应的影响.方法:将小鼠巨噬细胞RAW264.7接种在高糖培养基中,并转染特异性增强AhR表达的重组质粒,稳定转染后将细胞在高糖状态加入Pg LPS刺激.用免疫印迹实验检测细胞的AhR及炎症反应相关蛋白Notch1、Jagged1、iNOS的表达,并用ELISA检测细胞培养上清液中的促炎因子TNFα、IL1β浓度.结果:在受高糖加Pg LPS刺激后,与未增强AhR表达的对照组细胞相比,增强AhR表达的细胞Notch1、Jagged1、iNOS、TNFα、IL1β蛋白表达量减少(P<0.05).结论:增强AhR表达,可抑制高糖状态Pg LPS导致的巨噬细胞炎症反应,该抑制作用可能与AhR调节Notch通路有关.
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普罗布考对结缔组织生长因子在系膜细胞中表达的调节
结缔组织生长因子(CTGF)是一种相对分子质量为36 000~38 000的分泌多肽,在包括肾脏在内的多种不同器官中可致纤维化病变[1].CTGF可诱导人肾小球系膜细胞产生与糖尿病.肾病相关的病理变化,如增加细胞外基质积聚及诱导细胞周期停滞在G1晚期[1].CTGF在糖尿病肾病中的作用及如何调控CTGF表达为当前研究热点.普罗布考是一种降脂药物,并具有抗增殖活性,已初步应用于糖尿病的治疗[2].本研究旨在明确CTGF在高糖状态下系膜细胞中的表达变化以及普罗布考对CTGF表达的调控,并进一步探讨其分子机制.
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醛固酮对高糖状态下肾小球系膜细胞血管紧张素Ⅱ受体基因表达的影响
血管紧张素Ⅱ能通过其1型受体(AT1R)和2型受体(AT2R)途径活化NF-κB[1].诱导单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)表达[2],导致炎性反应.而醛固酮(ALD)是否也有类似的作用,尚未阐明.由于ALD能通过作用于肾脏固有细胞参与肾脏的损伤.因此,本实验通过研究ALD对高糖状态下大鼠肾小球系膜细胞(RMC)上AT1aR和AT2R基因表达的影响,探讨ALD在糖尿病肾病(DN)中的作用机制.
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超声对2型糖尿病患者颈动脉粥样硬化的检测分析
随着社会压力和膳食结构的改变,因代谢障碍而发生的2型糖尿病患者逐渐增多,外周动脉血管的粥样硬化是糖尿病的常见并发症,而颈动脉是全身动脉血管的窗口,在一定程度上可直接反映2型糖尿病患者在高糖状态下蛋白质糖化终末产物形成的过程及其对血管内膜的影响.