首页 > 文献资料
-
ELISA双抗原夹心法检测艾滋病病毒抗体实验条件的优化
[目的]通过对酶联免疫吸附试验(ELISA)双抗原夹心法艾滋病病毒抗体检测中实验条件的改进,在确保检测结果的前提下,探索出操作性更强的实验方法.[方法]以国际公认的实验条件设立对照组,设立不同实验条件的实验组,找出和标准对照组没有统计学差异的实验组.[结果]温度均为37℃,结合时间为50min,显色时间为20min的实验组和标准对照组总体均数无统计学差异,且消耗的总时间短.[结论]温度均为37℃,结合时间为50血n,显色时间为20min的实验组可以作为传统方法的替代方法加以推广.
-
ELISA双抗原夹心法检测抗-HIV室内质控探讨
ELISA双抗原夹心法检测抗-HIV是一种敏感性高、特异性强的试剂,易于在基层开展,因此常常作为艾滋病初筛的首选方法.近年来,艾滋病(AIDS)疫情迅速上升,流行速度明显加快,AIDS的预防、检测与控制显得日益重要.
-
HIV初筛实验室ELISA试验的注意事项
目前实验室作为HIV初筛检测主要是HIV病毒抗体检测.由于它的灵敏度和特异性高,而且方法相对简单、成熟,更重要的是HIV抗体在病毒感染后,除早期短暂的窗口期外的整个生命期间长期稳定地存在并可被检测到.在HIV初筛实验室,ELISA是常用的抗体筛查方法.ELISA是一种免疫测定,通常采用双抗原夹心法.其原理为预包被高纯度重组HIV(1+2型)抗原,可与样品中抗HIV抗体反应,同时加入HRP标记HIV(1+2型)抗原,然后用TMB底物作用显色.通过酶标仪检测吸光度(OD值)从而判定样品中HIV抗体的存在与否.
-
临床应用重组SARS病毒双抗原夹心诊断试剂盒的检测效果评价
严重急性呼吸综合征(severe acute respiralory syndrome,SARS)的临床表现为非典型性肺炎.继加拿大首次完成SARS病毒株Tor2的全基因组测序后[1],世界卫生组织(WTO)宣布一种新型的冠状病毒(coronavirus)是引发SARS的病原体[2,3].由于SARS具有极强的传染性和较高的病死率(5%～15%),且早期疾病体征较难与某些非SARS病毒引起的非典型肺炎相区分[4],由此导致大量疑似病例无法确诊,以及因误诊引起的交叉感染给人们造成巨大的心理压力和社会恐慌.所以,建立快速、准确的早期诊断方法显得尤为重要.目前的实验室诊断方法中,主要有基于病毒抗体检测的免疫荧光法和酶联免疫吸附试验(ELISA),以及基于基因检测的多聚酶链式反应(PCR)和基因芯片法.其中ELISA主要是使用病毒裂解抗原,检测病毒IgG及IgM抗体的间接ELISA.由于病毒裂解抗原的复杂性,以及间接ELISA中二抗带来的假阳性结果,间接ELISA试剂在正常人群中有1.5%～2%的阳性结果.
-
重组人类T淋巴细胞白血病病毒抗原及双抗原夹心法ELISA抗体诊断试剂盒的研制
为研制灵敏、特异的抗人类T淋巴细胞白血病病毒(HTLV)抗体诊断试剂,将一段HTLV-Ⅰ和HTLV-Ⅱenv区嵌合基因在大肠杆菌中表达,获得的重组抗原具有良好活性.将该抗原作为酶标记抗原建立双抗原夹心法ELISA(dsELISA),对31份HTLV-Ⅰ型血清和19份HTLV-Ⅱ型血清均能100%检出,而在5 065份各种阴性血清中特异度为99.94%.用dsELISA试剂与进口间接法试剂(GeneLabs试剂)平行检测18份HTLV-Ⅰ参比血清、17份HTLV-Ⅱ参比血清和1 024份献血员血清,结果dsELISA试剂正确率为100%,对HTLV-Ⅰ型血清和HTLV-Ⅱ型血清的反应性基本相同,平均s/co值显著高于GeneLabs试剂.而GeneLabs试剂对HTLV-Ⅱ型血清的反应性显著弱于Ⅰ型,并有2份BBI参比血清中的Ⅱ型血清漏检.另外,GeneLabs试剂在献血员血清中出现9例假阳性,特异性显著低于dsELISA试剂.这些结果表明:所研制的dsELISA试剂可用于HTLV-Ⅰ型和Ⅱ型血清的检测,其灵敏度和特异度均优于进口间接法诊断试剂.
关键词： 人类T淋巴细胞白血病病毒 诊断试剂 双抗原夹心法 -
丙型肝炎病毒抗体双抗原夹心法化学发光检测的应用
目的 探讨丙型肝炎病毒抗体双抗原夹心法化学发光检测的应用.方法 利用重组融合HCV抗原分别标记生物素及吖啶酯,建立起双抗原夹心法化学发光检测试剂盒,与间接法同时检测了866例阴性标本,440例阳性标本,3套BBI阳转血清盘.结果 双抗原夹心法与间接法灵敏度分别为100％、100％,特异性分别为99.9％、98.7％,特异性差别1.2％(95％可信区间:0.5％～2.1％),BBI阳转血清相对敏感性系数为-1.33.结论 双抗原夹心法特异性及早期感染检测能力优于间接法,将会成为丙型肝炎病毒抗体检测的主要方法.
-
丙型肝炎病毒抗体胶体金免疫层析法的建立
目的 建立一种快速定性检测人血清丙型肝炎病毒(HCV)抗体的方法.方法 根据双抗原夹心法的实验原理,建立胶体金免疫层析法检测人血清中丙型肝炎病毒抗体.结果 检测中国食品药品检定研究院快速法丙型肝炎病毒抗体国家参考品,20份阴性参考品、20份阳性参考品符合率均为100％;低检出限参考品L1(1∶8,1∶16)和L2(1∶64,1∶128)均能检出阳性;平行测定10条重复性参考品,全部阳性且显色强度一致.检测1050份血清,与酶联免疫法的符合率达到96.9％.经RIBA复核确认,本方法灵敏度为97.9％,特异性为99.0％.结论 本分析方法提供了一种更方便、快速的检测人血清中的HCV抗体的方法,具有很大的临床价值.
-
检测抗HIV-1/2型抗体的双抗原夹心方法的建立及其试剂盒的研制
目的建立更敏感的检测人免疫缺陷病毒(HIV)抗体的方法，并研制检测试剂盒。方法根据HIV-1/2型的基因序列及其所编码氨基酸结构，采用固相法合成了HIV-1型的gp41.1、gp41.2、gp120、p24和HIV-2型的gp36五条多肽，混合包被酶标板作为固相抗原。用辣根过氧化物酶标记以上多肽抗原作为标记物，建立检测血清中抗HIV-1/2抗体的双抗原夹心ELISA法。同时，应用该方法制备检测HIV抗体的试剂盒，并检测三批中国卫生部药品和生物制品检定所HIV诊断试剂国家参比品。结果建立了检测HIV-1/2抗体的双抗原夹心法。用检定所参比品检测，该方法特异性、灵敏度均为100％，变异系数小于10％。与间接法相比较其灵敏度、特异性均高于间接法(P<0.05)。检测210份其他病种患者血清均为阴性。与GBI公司的HIV抗体诊断试剂比较，检测40份卫生部药品和生物制品检定所提供的质控参比品(阳性20份，阴性20份)，GBI试剂阴、阳性符合率及总符合率分别为100％(20/20)、85％(17/20)及92.5％(37/40)，而应用该方法所研制的诊断试剂盒阴、阳性符合率及总符合率为100％。该试剂已通过国家卫生部质检。与雅培公司HIV诊断试剂比较检测90份献血员血清和88份HIV-1/2型感染者血清，符合率为100％。试剂盒于37℃放置4d后检测结果的阴、阳性判定不受影响。结论本法特异性强、灵敏度高、稳定性好，适用于献血员的筛选和临床HIV感染的检测。
-
3种不同免疫检验方法检测抗HIV结果可靠性比较观察
目的 对比分析采用金免疫层析试验、双抗原夹心ELISA法及间接酶联免疫吸附试验检测HIV抗体结果的可靠性.方法 抽取2013年卫生部全国血站系统免疫检验提供的室间质量评价血清以及卫生部临床检验中心定值质控血清2 NCU/mL和4 NCU/mL、无偿献血人员血清样本,分别采用3种检验手段进行诊断,对比分析HIV测抗结果.结果 利用双抗原夹心ELISA法检验定值质控血清2 NCU/mL和4 NCU/mL、室间质量评价血清、无偿献血人员的血清阳性率依次为100.0％、100.0％、100.0％、0.0％;金免疫层析试验测抗结果分别为100.0％、88.9％、96.2％、0.7％,而间接酶联免疫吸附试验测抗结果分别为77.8％、100.0％、84.6％、1.5％.故利用双抗原夹心ELISA法进行测抗,结果可靠性更高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 利用3种免疫手段进行HIV测抗过程中,双抗原夹心ELISA法的测抗结果可靠性较其他两种检测方法更高,值得在临床诊断HIV病毒测抗结果活动中大力推广应用.
-
丙型肝炎病毒抗体桥式双抗原夹心时间分辨荧光免疫分析法的建立
目的建立丙型肝炎病毒抗体桥式双抗原夹心时间分辨荧光免疫分析法。方法采用丙型肝炎病毒基因重组多表位嵌合蛋白作为包被抗原，生物素标记抗原作为桥接抗原，链霉亲和素标记铕作为示踪物，配制以β-萘甲酰三氟丙酮为主要成分的增强液，自建方法的校准品以国家标准血清物质GBW （ E ）090047为溯源，应用桥式双抗原夹心法建立丙型肝炎病毒抗体时间分辨荧光免疫分析法。结果自建方法在0.031～4.00 NCU/ml内，相关系数可达0.99；分析内和分析间变异系数均小于10％；灵敏度可达0.016 NCU/ml；校准品的效价比在0.90～1.10，平均回收率为101.47％；与相关疾病的抗原或抗体无明显交叉反应，其表观浓度值均小于0.03 NCU/ml；参考值为0.05 NCU/ml；符合国家检定标准的要求；37℃恒温箱烘烤7d后检测性能无明显改变；与同类方法学比对符合性好。结论自建方法精密度好，灵敏度高，特异性强，准确性好，线性范围宽，符合率高，能满足临床检测需要。
-
血液感染性疾病标志物筛检中应重视的若干问题
血液筛查质量的高低,直接关系到受血者的安全.目前,国内采供血机构针对感染性疾病病原体筛检的标志物共有4种,即乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、丙型肝炎病毒抗体(抗HCV)、人免疫缺陷病毒抗体(抗HIV)和梅毒抗体.主要采用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测,方法模式有一步双抗体夹心法、间接法和一步或两步双抗原夹心法等.所使用的仪器设备主要有酶标仪、洗板机、全自动酶免疫分析系统和全自动加样系统等.尽管国内采供血机构的血液筛查检测质量在不断提高,但在不同层次的采供血机构,仍不同程度的存在一些时常困扰基层实验室工作人员的问题.
-
梅毒螺旋体优势表位抗原嵌合表达构建双抗原夹心法的研究
目的用基因工程方法表达嵌合的梅毒螺旋体优势表位抗原,建立检测血清梅毒抗体的双抗原夹心酶联免疫方法(double antigen sandwich enzyme-linked immunosorbent assay,DAS-EIA).方法通过计算机软件分析选择梅毒螺旋体优势抗原表位,用聚合酶链式反应(PCR)扩增优势表位基因,构建了梅毒螺旋体多优势表位嵌合抗原(rTpN15-TpN17-TpN47)表达载体,转化宿主菌BL21(DE3)进行表达,亲和层析柱法纯化获得高纯度融合抗原,并用其建立检测梅毒抗体的DAS-EIA.结果表达的优势表位嵌合抗原具有很好的抗原性.用其建立的嵌合抗原DAS-EIA检测确诊的50份阳性和30份阴性血,阳性检出率和阴性检出率都是100%.结论嵌合抗原DAS-EIA法具有比间接EIA和重组单抗原DAS-EIA更高的灵敏度和检出正确率,其检测水平已经达到国外TPHA的水平.该方法的建立为临床检测梅毒开辟了新的方法.
-
因钩状效应导致HIV抗体检测假阴性1例
钩状效应是酶联免疫吸附试验(ELISA)一步夹心法中因被检样品中抗原或抗体浓度过高,而不形成夹心复合物,从而导致测定结果低于实际含量或假阴性的情况.现将用一步双抗原夹心法检测HIV抗体出现钩状效应导致假阴性的情况报告如下.
-
1例孕产妇HIV抗体假阳性结果分析
某产妇,25岁,孕36+6周,孕1产1,因阴道流液半小时于2006年5月30日13:13:00入住我院妇产科,早产一活女婴.次日采用中山生物试剂公司的HIV抗体1+2双抗原夹心法(批号:2006019,有效期:2007-1-18)进行测定,测定结果弱阳性.随即采用北京蓝十字生物公司的胶体金法(批号:20060102,有效期:2007-7-17)进行快速检测,结果为阴性.6月1日重新复查,结果虽为阴性,但属于灰带.故电话通知妇产科要求重新采血.6月2日把两次的标本重新测定,两次标本均无溶血及黄疸.根据检测结果后确诊为HIV抗体阴性.测定结果如下表.
-
1例HIV抗体假阳性结果分析
某男,30岁,2002年10月入住重庆市南岸区戒毒所接受治疗,自述在某地查到HIV抗体阳性.于2002年11月1日到现场采血,当日进行HIV抗体2+1双抗原夹心法测定.由于是有目的检测,第1次实验时就采用了北京金豪和厦门新创两种试剂测定,结果见表1.
-
双抗原夹心ELISA法检测HCV抗体在无偿献血中的应用探讨
目的 探讨双抗原夹心ELISA法(简称夹心法)检测丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)在无偿献血中的应用.方法 对42份以往一种或两种间接法抗-HCV反应性的献血者标本及2 831份无偿献血者标本同时采用一种夹心法和两种间接法试剂进行抗-HCV检测,对任一试剂检测为反应性的标本通过重组免疫印迹法(RIBA)作进一步确证.3种试剂检测均为阴性或RIBA结果为阴性判为真阴性,计算并对比各方法的特异性.结果 3种试剂检测均为阴性的标本2816份,均为反应性的标本32份,双试剂反应性标本7份,单试剂反应性标本18份.采用RIBA试剂对57份反应性标本进行检测,确认结果阳性26份、不确定12份、阴性19份.19份RIBA确认阴性的标本中,双抗原夹心法、某国产间接法、某进口间接法分别有1例、8例、15例假阳性结果,特异性分别为99.96％(2 834/2 835)、99.72％(2827/2835)和99.47％(2820/2835).结论 夹心法诊断试剂的特异性高于间接法诊断试剂,为降低生物学假阳性,建议采用夹心法试剂检测抗-HCV.
-
艾滋病毒重组抗原及第三代艾滋病毒抗体EIA诊断试剂盒的研制
近年来中国的艾滋病毒(HIV)感染人数以每年30%的速度增长,HIV感染者总数已超过60万人,感染者已从吸毒人员、献血员等高危人群扩展到社会各个阶层,我国已处于艾滋病泛滥前的关键时期.HIV诊断试剂盒是HIV防制工作中重要的技术工具.用于人群筛检的HIV诊断试剂盒已历经三代,第一代试剂盒主要使用来自细胞培养的HIV病毒的裂解产物作为抗原;第二代产品使用基因工程重组抗原和/或人工合成肽作为抗原,使包被抗原中免疫优势区的比例明显增强,从而提高了试剂的灵敏度,而且标准化生产的相对更纯的抗原的使用使试剂的特异性和重复性均大为提高.前两代试剂均采用间接法原理,即先以抗原包被聚丙乙烯板,再加入待检血清,后加入酶标记的抗人IgG抗体,因此均只能检测IgG抗体.1992年问世于美国的第三代试剂则采用双抗原夹心法,即先以抗原包被,再加入待检血清、酶标记的抗原,从而可同时检测所有类型的抗体,明显提高了试剂的灵敏度,同时由于采取了双抗原识别机制,特异性也得到了明显提高,因此在国外已取代间接法而成为主流试剂.
-
丙型肝炎病毒抗体双抗原夹心法的临床研究
目的 探讨丙型肝炎病毒抗体双抗原夹心法的临床研究.方法 血液筛查阴性标本450份.质控标本459份,采用双抗原夹心法检测,了解双抗原夹心法敏感性.结果 对269份HCV抗体阳性标本进行检测,双抗原夹心法检测有3份标本未检出.敏感性较高98.84%.结论 双抗原夹心法不需要稀释血清产品,不受类风湿因子等的干扰,具有较高的特异性;可以同时检出血清中各类抗体,特别是IgM类抗体,因此可以缩短从病毒感染到用ELISA法检出抗体之间的"窗口期",缩短检测时间,均有重要意义.
-
不同方法检测健康人群肾综合征出血热隐性感染率的分析
肾综合征出血热(HFRS)是我国广泛流行的一种人畜共患急性病毒性传染病.目前该病在我国的发病率占全球总数的 90%,病死率为 3%～10%,是除病毒性肝炎外危害大的一类病毒性疾病.为了更好地控制肾综合征出血热,每年都对 HFRS 感染率进行监测.由于 HFRS 临床表现复杂多样,病情变化迅速,给临床诊断带来困难.目前血清学检测方法仍然是 HFRS 辅助诊断的有效手段.以往采用间接免疫荧光方法(IFAT)对健康人群进行 HFRS-IgG 检测,感染率很低,是否反映 HFRS 流行的真实情况.鉴于有文献报道对IFAT 评价说法不一,我们收集了 100 份健康人血,用间接免疫荧光法 IFAT 及 ELISA 双抗原夹心法同时检测 HFRS IgG 抗体及总抗体.比较两者检测结果,为今后监测方法提供依据.
-
运用免疫胶体金技术快速检测丙型肝炎病毒抗体
目的 采用免疫胶体金层析技术,研制一种对丙型肝炎病毒(HCV)抗体快速检测的试剂.方法 采用双抗原夹心法,对HCV的Core和NS3抗原进行标记和包被,制备检测试剂,并进行性能分析和临床试验.结果 制备出1种快速检测试剂,以国家参考品作为样品进行测试,检测结果 和规定标准完全一致,预期稳定性为18个月以上.经对581例献血员和丙型肝炎病人样本进行检测,相对于ELJSA试剂,该试剂的灵敏度为96.5%,特异性为97.4%.结论 运用免疫胶体金技术制备了高质量的HCV抗体快速检测试剂,可运用于现场紧急情况或临床对丙型肝炎的辅助诊断.
