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梅毒螺旋体Tp0453和TpN47抗原的制备及应用
目的 表达纯化梅毒螺旋体Tp0453和TpN47蛋白,评价2种蛋白的检测效果,并建立一种新的梅毒抗体检测方法.方法 以梅毒螺旋体Nichols菌株基因组DNA为模板,通过PCR扩增Tp0453和TpN47蛋白基因,构建原核表达载体;转化表达菌株后经IPTG诱导表达,并优化表达条件,大规模培养后采用N2+亲和柱纯化目的 蛋白;纯化蛋白用过碘酸钠法进行HRP标记,采用双抗原夹心ELISA法分别评价两种蛋白的检测效果,在此基础上,按比例混合两种抗原,并建立双抗原夹心ELISA检测法.结果 构建了Tp0453和TpN47蛋白的原核表达载体,在低温(27℃)和低剂量IPTG(0.1 mmol/L)诱导条件下,有效的实现了Tp0453和TpN47蛋白的可溶性表达.采用Ni2+亲和纯化方法成功纯化出了高纯度的Tp0453和TpN47融合蛋白,ELISA检测结果显示Tp0453比TpN47具有更强的反应性,两种蛋白混合,建立的双抗原夹心ELISA检测法通过血清学试验表明具有很好的敏感度和特异性.结论 实现了梅毒螺旋体Tp0453和TpN47蛋白快速高效的表达,并结合2种抗原优势,建立了一种高效的梅毒双抗原夹心ELISA检测方法.
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第三、第四代抗-HCV检测试剂对122份可疑标本检测结果分析
目的:探讨第三代、第四代抗-HCV检测试剂对无偿献血者筛检的应用价值.方法:用国产第三代、第四代抗-HCV检测试剂对2011-2013年无偿献血者筛检的抗-HCV初检、复检不合格的122份标本在同等条件下进行检测.结果:第三代与第四代试剂检测可疑结果差异有统计学意义(P<0.05).结论:第三代与第四代抗-HCV检测试剂间的灵敏度、特异性存在一定的差异.
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SARS病毒核衣壳蛋白抗体消长规律
研究SARS病毒抗体的消长规律对于评价患者的愈后及SARS疫苗的使用效果具有重要意义.本项目选用了军事医学科学院生物工程研究所研制的双抗原夹心SARS N蛋白抗体ELISA诊断试剂.对279例临床确诊的、发病不同时间SARS患者的血清进行检测,并同时跟踪检测了41例SARS患者在不同发病时间(发病3 d至160 d)的血清标本,对抗体产生的时间规律进行了研究.
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抗-HCV双抗原夹心酶联免疫法检测试剂的应用评价
丙型肝炎是由丙型肝炎病毒(HCV)感染引起的世界性传染病,主要通过输血和使用血液制品等途径传播.为控制HCV经血传播,要求对献血员进行抗-HCV检测.目前使用的抗-HCV检测试剂,采用的是间接酶联免疫法第三代诊断试剂,包被用抗原一般包括Core、NS3、NS4、NS5抗原,检测结果存在一定的假阳性,而且检测抗-HCV的窗口期较长.
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国产梅毒ELISA试剂(双抗原夹心)在血液筛查中的初步应用
为探讨ELISA在血液中筛查梅毒的可行性,我们以OlympusPK7200全自动分析仪微量血凝集试验Serodia-TPPA作为参考方法,选用2种国产ELISA试剂(双抗原夹心)在献血者中筛查梅毒特异性抗体,以了解其灵敏度和特异性,现将结果报告如下.
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抗HCV抗体双抗原夹心ELISA法试剂的应用
目前常用的第三代抗HCV抗体试剂为间接ELISA试剂,存在一定的假阳性,且检测抗HCV抗体的"窗口期"较长[1].抗HCV抗体双抗原夹心法ELISA试剂是检测抗HCV总抗体,缩短了"窗口期".因对抗体进行两次特异性反应,可降低间接EUSA法引起的假阳性[2].
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HIV-Ⅰ/Ⅱ型抗体双抗原夹心乳胶免疫层析测定方法的建立及应用
艾滋病(AIDS)是由人免疫缺陷病毒(HIV)引起的一种后天性免疫缺陷性疾病,发现于1981年.为有效控制HIV传播,必然要求HIV检测试剂具有较高的灵敏度、特异性和稳定性.本文研究并成功建立了检测HIV-Ⅰ/Ⅱ抗体的双抗原夹心乳胶免疫层析法,这是一种简便、快速、可靠、经济的HIV抗体检测方法,现报告如下.
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血吸虫病快速免疫诊断--胶体染料免疫渗滤法的初步研究
目前,血吸虫病的免疫诊断是以抗体检测为主,常用的方法有酶联免疫吸附试验(ELISA)、环卵沉淀试验(COPT)和间接血凝试验(IHA).这些方法,操作较烦琐,对大规模的现场查病来说仍不十分理想.本研究根据双抗原夹心ELISA、斑点渗滤法和胶体染料标记抗原、抗体技术开发研制出一种快速、敏感、适于血吸虫病现场筛查的新方法-胶体染料免疫渗滤法(Colloidal Dye Immunofiltration Assay,以下简称CDIFA),检测患者血清中特异性抗体,用于血吸虫病现场快速筛检.
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ELISA一步法检测梅毒抗体钩状效应三例
笔者在用EUSA双抗原夹心一步法试剂检测梅毒抗体(TP-Ab)工作中遇到高滴度标本检测结果假阴性1例、弱阳性2例,经进一步实验判定此结果为钩状效应(Hook effect)引起,现报告如下.
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双抗原夹心ELISA一步法检测梅毒螺旋体抗体前带现象的初步分析
梅毒的实验室诊断主要有RPR法、TRUST法、TPPA法、TPHA法和ELISA法等.
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抗-HCV ELISA间接法与双抗原夹心法试剂的应用对比评价
目的:对比研究国产抗-HCV ELISA间接法和双抗原夹心法试剂的检测效能,探讨血站抗-HCV检测模式.方法:选择1种双抗原夹心法酶联免疫试剂、2种间接法酶联免疫试剂分别检测34 593名无偿献血者血样,采用重组免疫印迹试验(RIBA)对其中有反应性的44份标本进行确认,并用BBI血清盘对这2种检测试剂进行考核评价.结果:科华、新创和万泰3个厂家的抗-HCV有反应性及灰区标本经RIBA实验确证后,假阳性率分别为31％、63％、13％.万泰双抗原夹心法与间接法相比,增加了反应强度、降低了假阳性率且缩短了窗口期.结论:为确保血液质量,血筛实验室应选择灵敏度和特异性双优的试剂,采用间接和双抗原夹心2种不同的ELISA试剂检测HCV抗体优于2种间接ELISA试剂,不仅提高抗-HCV有反应性标本的检出率,而且减少血液因假阳性造成的浪费.
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31 573名无偿献血者梅毒感染情况调查
为了解本地区无偿献血者的梅毒感染情况,我们于2007～2009年对31 573名无偿献血者进行了梅毒检测,现报告如下.1 材料与方法1.1 样本来源 2007～2009年本站采集的无偿献血者血样标本共31573份,年龄18～55周岁.1.2 试剂与方法 初复检分别采用梅毒双抗原夹心ELISA诊断试剂盒(北京万泰生物技术有限公司,北京金豪制药股份有限公司),试剂均经检测合格,并按说明书操作,在有效期内使用.
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HIV-1/2/O 抗体联合诊断试剂盒的制备及其检测效果的研究
目的 制备HIV-1/2/O抗体检测试剂盒并评估其检测效果.方法 采用RT-PCR分别获取HIV-1型M、O组的gp41以及HIV-2 gp36的优势表位基因,并通过柔性链将各表位基因嵌合,重组表达,亲和纯化、辣根过氧化酶标记,与包被抗原配对筛选,获取检测HIV 抗体的双抗原试剂.结果 成功嵌合各表位基因并获得表达,纯化后的抗原具有很高的抗原活性,检测灵敏度与国外试剂相当.结论 采用柔性链技术嵌合表达制备的HIV-1/2/O 抗体联合诊断试剂盒对HIV O组病毒株的检测具有较高灵敏度.
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抗-HIV(1/2)ELISA一步法检测时应注意钩状效应
目的认识抗-HIV(1/2)双抗原夹心ELISA一步法试剂盒在检测某些高滴度HIV抗体强阳性标本时可能存在的钩状效应.方法用5种不同厂家的抗-HIV(1/2)双抗原夹心ELISA试剂盒(包括一步法和二步法)检测43256份血标本,将检测出来4份高滴度HIV抗体强阳性标本用蛋白印迹法确认结果,同时将4份强阳性标本稀释100倍后用5种不同厂家的抗-HIV(1/2)双抗原夹心ELISA试剂盒重复检测.结果某些厂家抗-HIV(1/2)双抗原夹心ELISA一步法试剂盒在测定原倍和稀释后高滴度HIV抗体强阳性标本时其结果OD值存在着显著性差异.结论在使用抗-HIV(1/2)双抗原夹心ELISA一步法试剂盒进行检测时应注意因严重钩状效应而影响结果正确的可能性.提示应选择高灵敏和高特异性试剂,确保血液质量安全.
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抗-HIV(1/2)ELISA一步法与二步法检测的比较分析
目的对抗-HIV(1/2)双抗原夹心法ELISA一步法与二步法试剂盒的检测情况进行比较分析,了解二种方法各自的优缺点,利于更合理的选择试剂.方法对2组无偿献血者标本共32340份分别用2种不同厂家的抗HIV-(1/2)双抗原夹心法ELISA试剂盒进行检测,将检测可疑的标本120份统一用进口试剂进行检测,同时上送市疾控中心用蛋白印迹法进行确认;对确认阳性的2份强阳性及1份弱阳性标本进行倍比稀释后用5种试剂盒重复检测.结果5种厂家试剂中2种国产的一步法试剂盒特异性低于另2种国产的二步法试剂盒;2种国产一步法试剂盒在检测强阳性标本的原倍标本与稀释后标本时其OD值差异有显著性;2种国产的二步法试剂盒在检测弱阳性标本的原倍标本时其OD值明显低于一步法试剂盒,而且其检测结果OD值仅在临界值附近,在检测弱阳性标本的稀释后标本时其检出滴度明显低于一步法试剂盒.结论国产一步法与二步法试剂盒在灵敏度和特异性上各有优势,进口试剂盒综合质量较好,血站在选择抗-HIV(1/2)试剂盒时应综合考虑以上因素,更好地保证血液质量.
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双抗原夹心酶联免疫技术检测丙型肝炎病毒抗体
1993年3月,国家卫生部下发文件要求对献血员进行抗HCV抗体的检测,随后有10几家检测HCV抗体的ELISA试剂上市,并进行批批检定,但全是间接ELISA法.由于间接法技术自身的缺陷及各生产厂家的产品存在一定的质量问题,导致了一些误诊和漏检.为此,应从根本上解决试剂本身的质量问题,建立双抗原夹心ELISA技术检测抗HCV抗体可大大提高检测试剂的特异性和敏感性.目前双抗原夹心法大多用于检测抗HIV和Tp抗体.此类试剂的敏感性和特异性均优于标记抗人免疫球蛋白的间接法[1].而丙型肝炎病毒抗体的检测仍采用间接ELISA技术, 目前已有快速金标试剂采用双抗原夹心法原理,通过免疫层析检测抗HCV抗体.但灵敏度较低,不能用于献血员的筛选[2].我们通过对基因工程抗原进行改造,以适应标记辣根过氧化物酶,建立双抗原夹心ELISA法检测抗HCV抗体.
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梅毒螺旋体多表位抗原的改构及在双抗原夹心检测梅毒抗体中的应用
[目的]研制用于包被和标记重组梅毒螺旋体表位抗原,建立双抗原夹心酶联免疫检测梅毒抗体[方法]利用计算机Godlkey软件分析梅毒螺旋体基因,确立优势抗原表位(rTpN17-TpN15-TpN42-TpN47),并分别克隆表达四个抗原,然后将四个抗原串联成一个嵌合表达蛋白用于包被,在此抗原的末端连接4个赖氨酸,作为辣根过氧化物酶标记用梅毒抗原,建立双抗原夹心检测梅毒抗体.[结果]在一端连接4个赖氨酸梅毒抗原活性高于未加赖氨酸的抗原,梅毒抗原标记辣根过氧化物酶的ELISA双抗原夹心法与TPHA法阳性符合率为97.5%,特异性明显好于TRUST、间接ELISA法.[结论]改进的梅毒抗原标记辣根过氧化物酶用于双抗原夹心检测梅毒抗体获得了满意的结果.
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双抗原夹心与间接ELISA法检测抗HCV对比研究
[目的]用研制的双抗原夹心ELISA法试剂与间接ELISA法试剂对比检测抗HCV.[方法]利用基因重组技术表达的HCV多表位抗原分别包被和标记,收集献血员样本,二种国产(试剂A,B)及雅培间接抗HCV试剂同时检测,对一种试剂单独阳性和3种试剂检测均为阳性的样本,再用研制的双抗原夹心法进行检测.[结果]试剂A检测单独阳性的样本12份,试剂B单独检测阳性20份样本中,双抗原夹心检测为阴性;而三家试剂检测均为阳性9份样本,双抗原夹心检测均为阳性.[结论]双抗原夹心检测抗HCV特异性较间接法好,灵敏度二者相当.
