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调心方对Aβ和TNFα诱导的SK-N-SH细胞株毒性的保护作用
目的：观察调心方对由TNFα加Aβ(25～35)诱导的SK-N-SH(神经源性细胞株)细胞毒性的保护作用。方法：用TNFα 50ng/ml和Aβ(25～35)0.1μM处理SK-N-SH细胞造成细胞损伤模型。以MTT和DNA ladder为指标。结果：TNFα和Aβ(25～35)处理SK-N-SH细胞24小时细胞生存率减少约50%，而调心方含药血清能提高细胞模型的生存率，减少细胞DNA的降解。结论：一定剂量的TNFα加小剂量的Aβ(25～35)能造成接近体内病理生理机制的细胞损伤模型，调心方对TNFα加Aβ(25～35)造成的细胞毒性具有一定的保护作用。
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星形孢菌素诱导NG108-15细胞凋亡
目的:研究星形孢菌素是否能引起NG108-15细胞的凋亡及它对数种与凋亡相关基因蛋白表达水平的影响.方法:用相差显微镜、荧光显微镜和透射电镜观察形态学变化；琼脂糖凝胶电泳检测DNA梯带；免疫印迹法检测凋亡相关基因蛋白的表达水平.结果:经星形孢菌素0.1 μmol/L处理后NG108-15细胞呈典型的凋亡形态学变化.星形孢菌素处理后6 h即出现DNA凋亡梯带，可持续至24 h.Bax蛋白表达在星形孢菌素处理后6 h开始上升，12 h至高峰，24 h后下降.Bcl-2蛋白表达在星形孢菌素处理后3 h明显上升，随后逐渐下降.星形孢菌素处理后6 h可见caspase-3切割产物出现，但Cdk5蛋白的表达水平未见明显变化.p53蛋白表达在星形孢菌素处理12 h后下降.结论:星形孢菌素诱导了NG108-15细胞的凋亡，可能与Bax蛋白表达的增加及caspase-3切割有关，而与p53和Cdk5无明显相关性.
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D-半乳糖葡胺增敏小鼠对非致死剂量细菌脂多糖致死作用与肝脏DNA片段化的高度相关性
目的:本实验研究了以非致死剂量脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)攻击半乳糖葡胺(D-galactosamine,D-GalN)增敏小鼠的死亡是否伴有重要器官的凋亡特征.方法:实验组小鼠以LPS(0.05μg)与D-GalN(20 mg)直接攻击,而对照组小鼠仅仅以LPS或D-GalN,在规定实验时间经乙醚麻醉后,取出脑、肾、心、脾、肺、肝,并立即匀浆和抽提DNA,对所抽提的各器官的DNA以常规琼脂糖凝胶电泳分析是否存在DNA梯度现象;并测定血浆中乳酸脱氢酶和谷氨酸草酰乙酸转移酶,同时将DNA片段化现象与小鼠致死作用的关联性在实验组和对照组间做比较.结果:LPS攻击D-GalN增敏的小鼠4 h时,在所检测的器官中,仅仅肝脏可见到凋亡特征DNA片段化现象,至7 h时小鼠死亡.而仅用LPS或D-GalN攻击的对照组小鼠,不仅全部存活而且肝脏DNA分子完整.结论:LPS攻击D-GalN增敏的小鼠,肝脏是唯一出现DNA片段化的靶器官,由细菌LPS引发小鼠的死亡,肝脏的损伤可能是关键的原因.
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Caspases家族成员促进DADAG诱导的人白血病HL-60细胞凋亡
目的:研究caspases家族成员在二乙酰二脱水卫矛醇(DADAG)诱导人白血病HL-60细胞凋亡中的作用.方法:MTT法观察DADAG的体外抗增殖作用;透射电镜、DNA梯形条带和流式细胞仪检测HL-60细胞凋亡;caspase-3检测试剂盒和Western blot法分析caspases家族成员.结果:DADAG明显抑制HL-60细胞增殖和诱导细胞凋亡.DADAG处理HL-60细胞24 h后,caspase-3酶活性达峰值,同时聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)、lamin B和DFF45蛋白开始出现断裂片段.Caspase-3抑制剂z-DEVD@fmk可部分逆转DADAG诱导的HL-60细胞凋亡,而caspases广谱抑制剂z-VAD@fmk可完全逆转此作用.结论:Caspases在DADAG诱导HL-60细胞凋亡中起重要作用,它们通过酶解底物PARP、DFF45和lamin B促进细胞凋亡.
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黄樟素氧化物对去除成纤维细胞生长因子所诱导的血管内皮细胞凋亡及生长的影响
目的:研究黄樟素氧化物对去除成纤维细胞生长因子(FGF)诱导的血管内皮细胞凋亡及生长的影响.方法:光学显微镜观察细胞形态学变化;MTT法测定细胞生长;DNA电泳和荧光显微技术检测DNA断裂;流式细胞术测定细胞周期分布.结果:黄樟素氧化物5-25 mg/L处理去除FGF的血管内皮细胞24h,细胞铺展和生长被促进,细胞脱壁和DNA片段化被抑制,黄樟素氧化物10 mg/L对细胞周期分布无明显影响.黄樟素氧化物50-100 mg/L促进血管内皮细胞的脱壁和DNA片段化,黄樟素氧化物100 mg/L将细胞周期阻断于G2-M期.结论:黄樟素氧化物在10 mg/L时抑制血管内皮细胞凋亡,而在100 mg/L时促进其凋亡,该药物对血管内皮细胞生长和凋亡有重要影响.
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VFGF通过对p38和p42/p44 CCDPK信号的共调节作用抑制TNF-α和H2O2诱导的牛主动脉内皮细胞凋亡
目的:研究血管内皮细胞生长因子(VEGF)对肿瘤坏死因子(TNF-ot)和过氧化氢(H2O2)诱导牛主动脉内皮细胞(BAEC)凋亡的影响及信号机制.方法:BAEC培养并传代于DMEM.经TNF-a或H2O2处理24 h后,Hoechst 33258染色,荧光显微镜观察形态学变化及凋亡细胞计数.MTT法测定细胞活性,琼脂糖凝胶电泳分析DNA降解,Western blot法检测磷酸化p38和p42/p44 CCDPK表达.结果:TNF-α5000 kU/L和H2O2 300 tμmol/L均可诱导BAEC产生DNA断片.VEGF 100μg/L显著增强TNF-a和H2O2诱导的磷酸化p42/p44 CCDPK表达,而明显抑制磷酸化p38 CCDPK的活化.对二者所致BAEC凋亡起明显的抑制作用.P42/p44 CCDPK抑制剂U0126可取消VEGF引起的磷酸化p42/p44 CCDPK表达上调和其抗凋亡作用.结论:VEGF通过其共调节作用激活p42/p44 CCDPK,抑制p38 CCDPK信号途径而对TNF-α和H2O2所致凋亡产生的抑制效应,是内皮细胞存活的重要机制.
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分枝石蕊多糖诱导人白血病K562细胞凋亡
目的：研究分枝石蕊多糖(CFP-1)是否能诱导K562细胞凋亡.方法：抑制细胞增殖的测定采用MTT法；用荧光显微镜和透射电镜观察细胞的形态学变化；采用琼脂糖凝胶电泳法观测DNA碎片；用流式细胞仪检测凋亡细胞数.结果：CFP-1(50-800mg/L)明显抑制K562细胞增殖，并且呈浓度依赖性.K562细胞与CFP-1 300 mg/L共同培养5 d后，观察到典型的凋亡形态变化，电泳呈现梯形条带.结论：CFP-1诱导人白血病K562细胞凋亡.
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丹参酮ⅡA抑制去血清培养诱导的PC12细胞凋亡
目的：研究丹参酮ⅡA对无血清培养诱致PC12细胞凋亡的抑制作用.方法：以噻唑兰(MTT)法测定PC12细胞存活率；用流式细胞术检测DNA含量及凋亡细胞百分率；DNA琼脂糖电泳法观察DNA断裂.结果：去血清培养(12 h)可诱导PC12细胞凋亡(细胞凋亡率96.07％).丹参酮ⅡA(0.1，1μmol·L-1)显著降低凋亡细胞百分率(细胞凋亡率分别为25.71％和4.89％)，并减少DNA断裂.丹参酮ⅡA(O.01-10μmol·L-1)抑制氰化钠(20 mmol·L-1)、谷氨酸钠(0.5 mmol·L-1)和硝普钠(0.5 mmol·L-1)所致的细胞毒性.结论：丹参酮ⅡA可抑制去血清培养引起的PC12细胞凋亡.
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p38和p44/42 CCDPK信号在TNF-α诱导牛主动脉内皮细胞凋亡中的相反作用
目的：研究肿瘤坏死因子(TNF-α)诱导牛主动脉内皮细胞(BAEC)凋亡及其信号途径.方法：BAEC培养并传代于DMEM.经TNF-α处理24 h后，Hoechst33258染色，荧光显微镜观察形态学变化及凋亡细胞计数.MTF法测定细胞活性，琼脂糖凝胶电泳分析DNA降解，Western blot法检测磷酸化p38和p44/42CCDPK表达.结果：TNF-α诱导BAEC产生典型的凋亡细胞形态学变化(核浓染，核碎裂)和DNA断片.TNF-α(1000-5000 kU/L)浓度依赖性诱导BAFC凋亡，并同时刺激磷酸化p44/42和p38CCDPK的表达.p44/42 CCDPK抑制剂U0126可完全阻断TNF-α诱导的p44/42 CCDPK的活化，显著增强TNF-α致凋亡作用；而p38 CCDPK抑制剂SB203580可完全阻断TNF-o诱导的p38 CCDPK的活化，还可增强TNF-α诱导的磷酸化p44/42 CCDPK的表达，明显抑制TNF-α促凋亡作用.结论：TNF-α同时激活p38和p44/42 CCDPK，这两种CCDPK信号通路在TNF-α诱导BAEC凋亡中起相反作用.
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p38和p42/p44 Ca2+-钙调蛋白依赖性蛋白激酶信号在过氧化氢诱导牛主动脉内皮细胞凋亡中的作用
目的：研究p38和p42/p44 Ca2+-钙调蛋白依赖性蛋白激酶(CCDPK)信号通路对过氧化氢(H2O2)诱导牛主动脉内皮细胞(BAEC)凋亡的调节作用.方法：H2O2处理BAEC 24 h后，荧光显微镜下观察形态学变化及凋亡细胞计数.MTT法测定细胞活性，琼脂糖凝胶电泳分析DNA降解，蛋白质印迹法检测磷酸化p38和p42/p44 CCDPK表达.结果：H2O2诱导BAEC产生典型的凋亡细胞形态学变化(核浓染，核碎裂)和DNA断片.H2O2(100-500 μmol·L-1)浓度依赖性刺激磷酸化p42/p44和p38 CCDPK的表达.p42/p44 CCDPK抑制剂U0126显著增强H2O2致凋亡作用；然而p38CCDPK抑制剂SB203580可增强H2O2诱导的磷酸化p42/p44 CCDPK的表达，但不影响BAEC的存活.结论：p42/p44 CDPK对H2O2诱导的BAEC凋亡起保护作用，而p38 CCDPK不是介导H2O2所致细胞凋亡的主要信号通路.
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1-甲基-3-异丁基黄嘌呤延迟去除生长因子诱导的血管内皮细胞凋亡
目的：研究1-甲基-3-异丁基黄嘌呤(MIBX)对去除生长因子(aFGF和血清)诱导的血管内皮细胞凋亡的影响.方法：通过细胞存活率的分析，荧光显微技术和DNA凝胶电泳等方法，检测MIBX对细胞凋亡的影响.结果：用25-200 μmol/L的MIBX处理培养在无aFGF和血清的培养液中的血管内皮细胞，50-200 μmol/L的MIBX在处理6 h明显抑制了凋亡小体的形成和DNA的片断化.但是同样浓度的MIBX处理细胞12 h以后，处理组和对照组之间无明显差别.结论：MIBX延迟去除aFGF和血清诱导的血管内皮细胞凋亡.
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雌激素通过对p38和p44/42 CCDPK的相反作用阻止TNF-α诱导牛主动脉内皮细胞凋亡
目的:研究雌二醇(17β-estradiol,E2)对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导牛主动脉内皮细胞(BAEC)凋亡的影响及机制.方法:BAEC培养并传代于DMEM.BAEC经Hoechst 33258染色后用荧光显微镜观察形态学变化及计数凋亡细胞;用MTT法测定细胞活性;用琼脂糖凝胶电泳分析DNA降解;用Westernblot法检测磷酸化p38和p44/42 CCDPK表达.结果:TNF-α诱导BAEC产生典型的凋亡细胞形态学变化(核浓染,核碎裂)和DNA断片.E2(0.1 pmol/L-100 nmol/L)能增强TNF-α诱导的磷酸化p44/42表达,同时抑制p38 CCDPK的活化而浓度依赖性阻止TNF-o诱导的BAEC凋亡;E2 1 nmol/L明显减弱TNF-α所致DNA断裂;p44/42 CCDPK抑制剂U0126可拮抗E2的作用.结论:雌激素通过激活p44/42CCDPK,同时抑制p38 CCDPK而产生的抗凋亡效应,是其使内皮细胞存活的重要机制.
