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磷酸化P120ctn在宫颈腺癌Hela、鳞癌Caski细胞系中的表达及意义
目的:探讨P120连环蛋白(P120ctn)及磷酸化P120ctn在宫颈腺癌(Hela)、鳞癌(Caski)细胞系及正常人脐静脉内皮细胞系(HECV)中的表达,分析P120etn表达量的改变是否涉及P120ctn磷酸化修饰.方法:应用蛋白质印迹实验(western-blotting)检测Hela、Caski细胞系及HECV中P120ctn与磷酸化P120etn的表达.结果:①HECV、He-la、Caski细胞系中都有P120etn与磷酸化P120ctn的表达,P120ctn与磷酸化P120ctn在三种细胞系之间有统计学差异(P<0.05);②P120ctn在HECV细胞中表达量高于Hela、Caski细胞(P<0.05),Hela与Caski细胞之间没有表达量差异(P>0.05);③磷酸化P120etn在Hela、Caski与HECV三种细胞之间有表达量差异(P<0.05),HECV细胞表达量低,Hela其次,Caski细胞高.结论:磷酸化P120ctn在宫颈肿瘤细胞系中的表达量高于正常细胞系,P120ctn的磷酸化修饰可能参与了宫颈肿瘤细胞的生物学行为.
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丹参转录因子SmWRKY1蛋白的表达和纯化条件优化研究
WRKY转录因子是一类含有高度保守的WRKY结构域的锌指蛋白,是植物所特有的转录因子家族.该研究将已克隆的SmWRKY1 cDNA构建到原核表达载体pET28a上,转化大肠杆菌BL21 (DE3)进行诱导表达,SDS-PAGE结果显示该蛋白的大小约36 kDa,与预测的蛋白相对分子质量一样,说明该基因在大肠杆菌中成功表达.对影响蛋白表达的4个因素:诱导时间、诱导温度、IPTG浓度及诱导前菌液的浓度进行优化,结果表明在大肠杆菌BL21(DE3)中,当A600达到约1.0 ～1.5时,加入0.2 mol·L-1的IPTG,在20℃诱导培养12h后SmWRKY1蛋白的表达量较高.原核表达产物SmWRKY1蛋白以包涵体的形式存在,采用尿素提取包涵体蛋白,用Ni2+亲和色谱法纯化表达蛋白,纯化后蛋白的质量浓度为2.454 g·L-1.经蛋白质印迹检测,His-Tag单克隆抗体可以特异性的识别SmWRKY1蛋白,进一步证实丹参SmWRKY1蛋白在大肠杆菌中成功表达.本研究为进一步开展SmWRKYI基因的表达与丹参酮类等化合物的生物合成相关研究奠定了工作基础.
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人乳头瘤病毒16型E7蛋白的原核表达与鉴定
本研究在大肠杆菌BL21中融合表达人乳头瘤病毒16型E7蛋白,并初步评价其应用价值.采用PCR技术扩增出HPV16 E7基因,将其克隆进原核表达载体pGEX6p-1,转化至大肠杆菌BL21,利用IPTG进行诱导表达.以纯化的融合蛋白作为检测抗原建立间接ELISA方法,用于检测重组李斯特菌(Lm1-2-E7)免疫小鼠后的E7血清抗体水平.在25℃,0.5mM IPTG诱导下,HPV16 E7蛋白在大肠杆菌BL21中获得表达,融合蛋白以可溶性形式存在,Western blot结果显示其与HPV16 E7单克隆抗体发生特异性反应.二次免疫后小鼠血清经间接ELISA结果表明E7特异性抗体滴度为1:200.结果表明GST-E7融合蛋白具有较强的免疫活性.
关键词： 人乳头状瘤病毒16型 E7蛋白 原核表达 蛋白质印迹 ELISA -
不同＋Gz重复持续暴露对大鼠肝脏组织损伤及GRP78的表达影响
目的：探讨不同正加速度（＋Gz）暴露下大鼠肝脏损伤及葡萄糖调节蛋白78（GRP78／Bip）在肝脏组织内分布和表达的变化。方法将SD大鼠24只，随机分为对照、＋6Gz、＋9Gz和＋12Gz组，每组6只，峰值作用时间3 min，加速度增长率0.5 G／s，间隔30 min，重复间断连续5次。 HE染色观察肝组织，并测定血浆天冬氨酸转氨酶（ AST）和丙氨酸转氨酶（ALT），用免疫组化法和Western blot测定肝脏组织中GRP78的表达。结果与对照组相比，＋9Gz组、＋12Gz组转氨酶水平均显著升高；且在ALT水平上，＋12Gz组高于＋9Gz组（P＜0.05）；HE染色显示正加速度组肝细胞排列紊乱，形态不规则，细胞间隙不清晰，空泡样改变，且随G值增长而加重。与对照组相比，GRP78／Bip表达分布主要集中在细胞胞质内；各实验组的GRP78表达均显著升高（ P＜0.05）。且＋12 Gz组明显高于＋6 Gz组和对照组（P＜0.05），肝脏组织中GRP78／Bip蛋白表达水平随G值升高而升高；＋12Gz组和＋9Gz组都高于＋6Gz组和对照组（ P＜0.05）。结论 GRP78／Bip的表达可能在加速度引起的肝脏应激反应有着正相关的作用。
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心肌缺血对大鼠孤束核利钠肽受体表达的影响
目的 探讨心肌缺血后大鼠孤束核内利钠肽受体NPR-A和NPR-C表达的时程变化,并检测其与胆碱能和儿茶酚胺能神经元之间的关系.方法 雄性SD大鼠分为对照组、假手术组和模型组.复制心肌缺血模型,并于术后的3、7、14、18和28 d取材;用Western blot检测孤束核区域NPR-A和NPR-C的表达量;免疫荧光化学法观察NPR-A、NPR-C与ChAT、TH在孤束核内的共表达.结果 在缺血后14 d孤束核区NPR-A的表达显著低于对照组(P＜0.05),而后逐渐升高,至缺血后28 d显著高于对照组(P＜0.01);NPR-C的表达从缺血第3～18天均显著低于对照组(P＜0.01);孤束核内仅见少量的NPR-A/TH双标记神经元,而NPR-C/TH则较多;未见ChAT与NPR-A或NPR-C双标记神经元的分布.结论 心肌缺血后,在孤束核内利钠肽的调节作用增强,这种调节可能不是直接影响胆碱能和儿茶酚胺能神经元的活动来实现的.
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RPA1在肝癌组织中的表达及临床意义的研究
目的：观察复制蛋白A1（ RPA1）在肝细胞肝癌组织中的表达并探讨其临床意义。方法应用逆转录聚合酶链反应（ RT-PCR）和蛋白质印迹法（ Western blot）检测30例肝细胞肝癌组织及癌旁组织中RPA1 mRNA及蛋白的半定量表达水平，结合临床病理资料，统计分析肝细胞肝癌患者中RPA1表达的临床意义。结果 RPA1 mRNA在肝细胞肝癌组织的表达高于癌旁组织（0.635±0.228 vs.0.448±0.186，P <0.05）。RPA1蛋白在肝细胞肝癌组织的表达高于癌旁组织（0.876±0.205 vs 0.727±0.153，P <0.05）。在肝细胞肝癌组织中，RPA1 mRNA的表达在临床分期Ⅰ+Ⅱ组低于Ⅲ+Ⅳ组，组间差异有统计学意义（0.471±0.190 vs.0.744±0.184，P <0.05）。在肝细胞肝癌组织中，RPA1蛋白的表达在临床分期为Ⅰ+Ⅱ组低于Ⅲ+Ⅳ组，组间差异有统计学意义（0.742±0.155 vs.0.965±0.188，P <0.05）。在肝细胞肝癌组织中，RPA1 mRNA和蛋白的表达水平在患者不同年龄、性别、肝癌组织分级、是否有乙肝表面抗原、淋巴转移、门脉癌栓等临床病理特征中差异无统计学意义（ P >0.05）。结论 RPA1在肝细胞肝癌组织中表达上调，其表达上调可能促进肝癌的发生和发展。
关键词： 肝细胞肝癌 复制蛋白A 蛋白质印迹 逆转录-聚合酶链反应 -
2012-2016年郴州市无偿献血人群HIV抗体不确定结果的分析
目的 分析2012—2016年郴州市无偿献血人群血液标本HIV抗体筛查(包括初筛和复检)呈阳性并经蛋白质印迹实验确证后为不确定结果的血清学特点,为临床安全输血、用血提供依据.方法 对2012年1月1日—2016年12月31日郴州市中心血站筛查为HIV抗体阳性反应的233例血液标本进行蛋白质印迹确证实验,分析不确定标本的带型.结果 233例标本经过确证实验发现有43例(18.45%)为阳性,107例(45.92%)为阴性,83例(35.62%)为不确定.在不确定标本中,男54例(65.06%),女29例(34.94%);<20、20~39、40~59岁年龄组不确定标本结果分别为2、54和27例.不确定带型中出现单一和组合条带共9种,单一带型中以p24多,为53例(63.86%),组合条带中以p17和p24居多,为10例(12.05%).其中11例在4周之后完成了随访复检,结果有4例不确定样品转为阳性(其中2例的带型为p24,1例为p24和gp160,1例为p24和p66),其余7例条带无进展.结论 血站送检的标本经确证后阳性率较低;阴性和不确定标本,可进行核酸检测,或4周后随访加以确证.
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氯沙坦调节钾电流的分子基础
目的 探讨氯沙坦对自发性高血压大鼠(SHR)心室肌细胞编码瞬间外向钾电流(I_(to)、延迟整流性钾电流(I_(k)、内向整流钾电流(I_(kl)关键钾通道α和β亚基[I_(to)(Kv4.2、KChIP2)、I_(k)(ERG、KvLQTI)、I_(Kl)(Kir2.1)]mRNA和蛋白水平的变化,研究氯沙坦抗室性心律失常效应的分子基础.方法 SHR随机分成2组:对照组(n=12)和氯沙坦组[10 rag/(kg·d),n=12,灌胃].年龄、体质量匹配的WKY(n=12)作为对照.用药8周后采用膜片钳技术记录离体心脏、酶分解所得左室心肌细胞动作电位、I_(to)、I_(kl)、I_(k),并采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫印迹(Western blot)方法测定Kv4.2、KChIP2、ERG、KvLQT1、Kir2.1的 mRNA及蛋白水平.结果 氯沙坦组心肌动作电位50%及90%复极化时程[(16.8±3.8)、(68.5±13.2)ms]短于对照组[(24.6±4.6)、(73.3±15.5)ms,均P<0.01].氯沙坦组的I_(to)电流密度(从+40到+70 mV)高于对照组(P<0.01).氯沙坦组Kv4.2、Kir2.1 mRNA及蛋白水平高于对照组(均P<0.01).3组大鼠心肌细胞I_K电流密度和ERG、KChIP2 mRNA及蛋白水平均无差异(均P>0.05).结论 氯沙坦能够逆转SHR左室的电重构,缩短单个心肌细胞动作电位时程,这与I_(to)、I_(kl),电流密度增加和Kv4.2、Kir2.1 mRNA及蛋白水平增加密切相关.
关键词： 膜片钳 氯沙坦 钾电流 逆转录酶聚合酶链式反应 蛋白质印迹 -
骨形态发生蛋白2、6在肝癌中的表达及意义
目的:研究骨形态发生蛋白2、6(BMP-2、6)在肝癌组织中的表达,并探讨其与肝癌生物学行为的关系.方法:应用半定量逆转录聚合酶链反应(RTPCR)和Western blot检测30例正常肝脏组织和30例肝癌组织的BMP-2、6的表达水平.结果:正常肝脏组织BMP-2、6 mRNA相对表达量显著低于肝癌组织(0.3245±0.1127vs 0.8298±0.1187,0.2947±0.1853 vs 0.7145±0.1373,均P<0.05),Ⅲ、Ⅳ期肝癌组织BMP-2、6 mRNA相对表达量显著高于Ⅰ、Ⅱ期(0.92431±0.1234 vs 0.69355±0.1925,0.8354±0.1423 vs 0.6043±0.1234,均P<0.05).We s t e r n b l o t检测有远处转移的肝癌组织BMP-2、6表达高于无远处转移的肝癌组织(0.9854±0.2888 vs 0.6244±0.3087,0.9076±0.1276 vs 0.5678±0.2493,均P<0.01).结论:BMP-2、6在肝癌中表达上调,可能在肝癌的发生发展中起着重要的作用,其表达上调可能促进肝癌的浸润和转移.
关键词： 癌 肝细胞 骨形态发生蛋白 逆转录-聚合酶链反应 蛋白质印迹 -
Jagged2在结肠癌中的表达及临床意义
目的 探讨Jagged2在结肠癌中的表达及其临床意义.方法 应用免疫组化、实时定量PCR及蛋白质印迹等方法检测Jagged2在42例结肠癌及癌旁组织中的表达,并结合免疫组化结果及结肠癌患者的临床病理资料进行统计学分析.结果 结肠癌及癌旁组织中均检测到Jagged2mRNA和蛋白质的表达.Jagged2在结肠癌中的表达水平明显高于其对应的癌旁组织(P＜0.05);免疫组化染色结果显示,Jagged2在结肠癌组织中的阳性比例显著高于癌旁组织(85.7％ vs 33.3％,x2=23.92,P＜0.01),且Jagged2的表达与肿瘤分化程度、Dukes分期、淋巴结转移及浸润深度密切相关(P＜0.05).结论 Jagged2在结肠癌肿瘤组织中表达上调,可能与结肠癌的发生发展和浸润转移等恶性生物学行为相关.
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非小细胞肺癌组织MYLK和MYL9表达临床意义探讨
目的:探讨肌球蛋白轻链激酶(myosin light chain kinase,MYLK)和肌球蛋白轻链(myosin regulatory light chain 9,MYL9)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织的表达情况及临床意义.方法:采用qRT-PCR及蛋白质印迹法检测2012-08-20-2013-02-01广西医科大学第一附属医院胸外科30例NSCLC组织和对应的癌旁组织及30例正常肺组织中MYLK和MYL9 mRNA及蛋白的表达情况.进一步对影响MYLK和MYL9表达的临床特征进行Logistic回归分析.结果:NSCLC癌组织MYLK基因相对表达量为0.50±0.19,癌旁组织为0.97±0.22,正常组织为1,癌组织低于癌旁(P=0.001)及正常组织(P＜0.001);MYLK蛋白在肺癌组织、癌旁组织及正常组织中表达分别为0.54±0.18、0.72±0.21和0.84±0.23,癌组织低于癌旁(P=0.008)及正常组织(P=0.003);MYL9基因在肺癌组织、癌旁组织及正常组织相对表达量分别为0.37±0.12、0.95±0.19和1,癌组织低于癌旁(P＜0.001)及正常组织(P＜0.001);MYL9蛋白在肺癌组织、癌旁组织及正常组织中蛋白相对表达量分别为0.56±0.14、0.74±0.20和0.78±0.19,癌组织低于癌旁(P=0.001)及正常组织(P＜0.001).MYLK和MYL9的mRNA及蛋白相对表达量与病理类型、分化程度和临床分期无关.癌组织淋巴结转移组MYLK的mRNA(P=0.04)和蛋白(P=0.04)及MYL9的mRNA(P＜0.001)和蛋白(P=0.024)相对表达量明显高于无淋巴结转移组;吸烟组MYLK的mRNA(P＜0.001)和蛋白(P=0.038)及MYL9的mRNA(P=0.001)及蛋白(P=0.01)相对表达量低于无吸烟组;男性MYLK的mRNA(P＜0.001)和蛋白(P=0.03)及MYL9的mRNA(P=0.001)和蛋白(P＜0.001)相对表达量低于女性组.多因素分析显示,女性、无吸烟及淋巴结转移增加MYLK及MYL9的表达.结论:NSCLC中MYLK和MYL9 mRNA及蛋白表达均明显低于癌旁及正常组织,且在淋巴结转移的癌组织中表达均高于无淋巴结转移组.女性、无吸烟及淋巴结转移是MYLK及MYL9表达量增高的主要影响因素.
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人骨肉瘤组织钙网织蛋白表达及其意义探讨
目的:探讨钙网织蛋白(calreticulin,CRT)在骨肉瘤组织中的表达与骨肉瘤生长、转移的关系,以及化疗对其表达的影响.方法:取2005-10-01-2010-09-31在山东中医药大学附属医院(15例)、山东大学齐鲁医院(11例)及新汶矿务局集团中心医院(4例)骨科行骨肉瘤切除术、病历资料完整并排除合并其他运动系统肿瘤的骨肉瘤标本30例,其中转移20例,术前化疗者20例.每例标本同时取距离瘤组织＞ 30 mm的正常组织作对照.免疫组织化学染色法检测CRT在瘤体组织和正常组织中的表达;RT-PCR法检测CRT在mRNA水平的表达;蛋白质印迹法检测CRT蛋白的表达.结果:CRT主要存在于细胞质内,在所有标本中都有表达.其表达强度为瘤体组织(1.07±0.32)＜瘤体周围正常组织(2.68±0.09),P＜0.01;肿瘤转移组(0.93±0.21)＜未转移组(1.36±0.42),P=0.020;术前未化疗组(0.75±0.21)＜术前化疗组(1.24±0.30),P=0.001.CRT mRNA的表达强度为瘤体组织(0.58±0.30)＜瘤体周围正常组织(1.48±0.14),P＜0.01;肿瘤转移组(0.50±0.22)＜未转移组(0.73±0.23),P=0.033;术前未化疗组(0.27士0.13)＜术前化疗组(0.74±0.23),P＜0.01.CRT蛋白的表达水平为瘤体组织(369.35±14.27)＜瘤体周围正常组织(599.23±6.78),P＜0.01;肿瘤转移组(361.95±17.37)＜未转移组(394.15±17.97),P=0.031;术前未化疗组(288.96±12.86)＜术前化疗组(409.54±18.22),P＜0.01.结论:CRT的表达在人骨肉瘤组织中降低,其mRNA和蛋白质表达水平下降程度与瘤体是否转移有关,化疗可增加其表达水平.
关键词： 骨肉瘤 钙网织蛋白 免疫荧光组织化学染色 逆转录聚合酶链反应 蛋白质印迹 -
前列腺癌组织Livin表达与PTEN相关性研究
目的 凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis protein,IAP)家族新成员Livin与前列腺癌(prostate carcinoma,Pca)关系密切,本研究探讨Livin在前列腺癌组织中的表达及其与抑癌基因PTEN的相关性.方法 选取江苏大学附属医院2015-03-12—2016-10-15前列腺癌组织31例及前列腺增生(benign prostatic hyperplasia,BPH)组织18例,蛋白质印迹法和免疫组化SP法检测组织中Livin和PTEN的表达,分析前列腺癌组织中Livin和PTEN表达与临床病理参数之间的关系及Livin表达与PTEN表达的相关性.结果 蛋白质印迹结果显示,前列腺癌组织Livin蛋白表达量为2.16±0.83,高于前列腺增生组织1.43±0.74,t=3.085,P=0.003;前列腺癌组织PTEN蛋白表达量为1.33±0.88,低于前列腺增生组织2.13±1.51,t=-2.351,P=0.023;免疫组化SP法显示,前列腺癌组织中Livin阳性表达与临床分期和转移显著相关,均P<0.05;但Livin与年龄、前列腺体积、病理分级和前列腺特异抗原(prostate specific antigen,PSA)无明显相关,均P>0.05;前列腺癌组织中PTEN蛋白的阳性表达与临床分期和转移显著相关,均P<0.05;但PTEN蛋白阳性表达与年龄、前列腺体积、病理分级和PSA无明显相关,均P>0.05;在前列腺癌组织中PTEN低表达,Livin高表达,两者表达呈显著负关联,OR=0.0392,P=0.0003.结论 前列腺癌组织中Livin高表达,Livin表达与临床分期和转移显著相关;前列腺癌组织中PTEN低表达,PTEN表达与临床分期和转移显著相关;前列腺癌组织中Livin表达与PTEN表达呈显著负关联,Livin和PTEN与前列腺癌的发生、进展和转移密切相关.
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三叉神经痛合并根区蛛网膜粘连的病毒病因学研究
目的 探讨原发性三叉神经痛(TN)合并根区蛛网膜粘连与HSV -1感染的关系.方法 对TN患者于显微血管减压术中见其三叉神经根区合并蛛网膜粘连者59例,取其蛛网膜作为实验组；未合并根区明显蛛网膜粘连的TN患者24例,取其蛛网膜作为病例对照组；采用PCR和Western Blot方法分别检测其HSV -1特异性DNA片段、特异性抗原,并以20例外伤患者蛛网膜做正常对照.结果 三组资料中DNA片段阳性率分别为:69％、58％和25％；实验组和病例对照组的DNA片段阳性率均高于正常对照组,且差异有统计学意义(P＜0.05),但实验组和病例对照组相比差异无统计学意义(P＞0.05)；病毒特异性抗原阳性率分别为:51％、25％和15％,实验组病毒抗原阳性率高于病例对照组,也高于正常对照组,差异有统计学意义(P＜0.05),而病例对照组和正常对照组相比差异无统计学意义(P＞0.05).结论 HSV -1病毒增殖性感染可能促使TN患者三叉神经根区蛛网膜的粘连,蛛网膜组织可能是HSV -1潜伏感染的另一基地；HSV -1病毒感染可能是TN又一致病因素.
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丹参茉莉酸甲基转移酶蛋白表达和纯化的研究
茉莉酸甲基转移酶(jasmonic acid carboxyl methyltransferase,JMT)是茉莉酸生物合成途径中的关键酶,能够催化茉莉酸甲基化形成茉莉酸甲酯.本研究将丹参茉莉酸甲基转移酶基因(SmJMTl) cDNA构建到原核表达载体pGEX-4T-1上,转化大肠杆菌BL21 (DE3)并诱导表达.SDS-PAGE凝胶电泳结果表明该蛋白的大小约66 kDa,与预测的蛋白分子质量相同;同时对影响蛋白表达的4个因素:诱导时间、诱导温度、异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)浓度及诱导前菌液的浓度进行优化,结果表明当诱导前菌液的A600在0.8左右时,加入0.4 mmol·L-1IPTG,20℃诱导培养8h后SmJMTI蛋白的表达量较高.蛋白质印迹检测显示,anti-GST抗体可以特异性地识别SmJMT1蛋白,证实丹参SmJMT1蛋白在大肠杆菌中表达成功;Q-TOF检测数据检索分析表明,SmJMT1蛋白属于甲基转移酶亚家族.丹参中茉莉酸甲基转移酶SmJMT1的成功表达和纯化对研究茉莉酸生物合成途径及茉莉酸对药用植物次生代谢调控奠定了一定基础.
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环孢素A作用于人滋养层细胞差异表达的功能基因
目的探讨环孢素A(cyclosporin A,CsA)作用于人滋养层细胞差异表达的功能基因.方法应用抑制性消减杂交筛选1.0μmol·L-1CsA作用于JAR细胞系前后差异表达的功能基因,经RT-PCR及蛋白质印迹进一步验证CsA作用前后原代分离的人早孕期滋养层细胞及JAR细胞株titin表达的变化.结果CsA作用于人JAR细胞系前后出现6个具有差异表达的基因,其中1个为已知基因titin,2个为功能未知的mRNA,3个为位于16号染色体上的EST.RT-PCR显示,CsA作用于人滋养层细胞24h后出现titin mRNA的表达,72 h达高峰,并呈现明显的剂量依赖性,1.0μmol·L-1CsA作用明显.蛋白质印迹显示,CsA可诱导titin的表达.结论CsA可能通过诱导滋养层细胞titin的高表达,改变其生物学行为,从而有利于胚胎着床及早期发育.
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肾络通对5/6肾切除肾衰竭大鼠残余肾组织PAI-1蛋白表达的影响
目的观察肾络通对5/6肾切除肾衰竭大鼠残余肾组织纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)蛋白表达的影响.方法 5/6肾切除制备肾衰竭大鼠模型,随机分为假手术组、模型组、肾络通组和缬沙坦组,分别灌胃给药16周取材,应用蛋白质印迹法检测肾组织PAI-1蛋白的表达.结果模型组与假手术组相比,PAI-1蛋白的表达明显增高(P＜0.01);肾络通组PAI-1蛋白表达较模型组显著降低(P＜0.05),与缬沙坦组比较无明显差异.结论肾络通可下调慢性进展性纤维化肾组织PAI-1蛋白表达,改善纤溶系统的失衡,延缓5/6肾切除肾衰大鼠的病程进展.
关键词： 肾络通 肾衰竭 纤溶酶原激活物抑制物 蛋白质印迹 大鼠 -
卵巢癌中miR-144-3p和SGK3的表达水平及临床意义
目的 检测卵巢癌中microRNA-144-3p(miR-144-3p)与血清和糖皮质诱导蛋白激酶(SGK3)的表达水平,并探究其临床意义.方法 收集2010年3月～ 2012年7月于笔者医院经手术切除的64例上皮性卵巢癌组织、12例卵巢良性肿瘤组织和12例正常卵巢组织.实时定量PCR(qRT-PCR)技术检测卵巢癌组织miR-144-3p水平;蛋白质印迹(Western blot)法技术检测卵巢癌组织SGK3水平;分析卵巢癌组织miR-144-3p、SGK3表达与患者临床病理特征及预后的关系.结果 (1)卵巢癌组织miR-144-3p表达水平显著低于正常卵巢组织、卵巢良性组织(P＜0.05).(2)卵巢癌组织SGK3蛋白表达水平显著高于正常卵巢组织、卵巢良性组织(P＜0.05).(3)卵巢癌组织中miR-144-3p表达水平与SGK3蛋白表达水平显著呈负相关(P＜0.05).(4)卵巢癌组织miR-144-3 p、SGK3表达水平与患者的肿瘤直径、病理分期、淋巴结转移情况、分化程度有关(P＜0.05),与患者的年龄、有无腹腔积液、组织学类型无关(P＞0.05).(5)全部患者的中位生存期为40个月,术后1、3、5年的累积生存率分别为76.56％、53.13％、25.00％.miR-144-3p低表达患者术后1、3、5年的累积生存率分别为67.57％、37.84％、10.81％;miR-144-3p高表达患者术后1、3、5年的累积生存率分别为88.89％、74.07％、44.44％;两者生存率的差异有统计学意义(P=0.001).(6)SGK3高表达患者术后1、3、5年的累积生存率分别为68.29％、39.02％、9.76％;SGK3低表达患者术后1、3、5年的累积生存率分别为91.30％、78.26％、52.17％;两者生存率的差异有统计学意义(P=0.000).结论 miR-144-3p、SGK3表达异常与上皮性卵巢癌的发生、发展有关,可能成为上皮性卵巢癌临床治疗及预后的新靶点.
关键词： 上皮性卵巢癌 miR-144-3p SGK3 实时定量PCR 蛋白质印迹 -
妊娠期和哺乳期铅染毒对子代小鼠海马组织中肿瘤坏死因子-α表达的影响
目的 研究母鼠妊娠期和哺乳期铅暴露对仔鼠海马组织中肿瘤坏死因子--α(TNF-α)蛋白表达的影响.方法 将60只健康成年清洁级妊娠昆明小鼠随机分为4组,分别为对照(蒸馏水)组和低剂量(0.3 g/L)、中剂量(1.0g/L)、高剂量(3.0 g/L)乙酸铅染毒组,每组10只.分别于妊娠期和哺乳期(即妊娠第1天至仔鼠出生21 d)采用自由饮水方式对母鼠进行染毒.每组取10只仔鼠,每窝取1只进行实验.分别于出生后第7、14、21天检测血铅和海马组织中的铅含量;出生后第21天采用Western blot方法检测海马组织中TNF-α的表达水平.结果 不同剂量铅染毒仔鼠血铅和海马组织中铅含量均高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).与对照组比较,中、高剂量铅染毒组仔鼠海马组织中TNF-α蛋白的表达水平均较高,差异有统计学意义(P＜0.01).经Pearson相关分析,仔鼠海马组织中TNF-α蛋白的表达水平与血铅、海马组织中铅含量均呈正相关(血铅:r=0.782,P＜0.05;海马组织中铅含量:r=0.893,P＜0.05).结论 妊娠期和哺乳期铅暴露可使仔鼠海马组织中TNF-α蛋白表达增高.
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乳腺癌前哨淋巴结中细胞角蛋白19的表达及临床意义
目的 检测乳腺癌前哨淋巴结(SIN)组织中细胞角蛋白19(CK19)在mRNA和蛋白水平的表达情况,以探讨检测淋巴结CK19的表达对预测乳腺癌前哨淋巴结微转移的临床价值.方法 本组30例可手术的原发性乳腺癌患者,手术中均行肿块周围或乳晕周围注射亚甲蓝进行SLN定位成功,同时常规行腋窝淋巴结清扫,术后对SLN和非SLN均行常规病理学检测,对SLN同时采用RT-PCR和Western Blot方法检测CK19的表达.结果 30例SLN常规病理检测发现8例阳性SLN,阳性率为26.67%(8/30),1例假阴性.应用RT-PCR方法和Western Blot方法检测30例SLN中CK19的表达,结果HE染色阳性的8例SLN及1例假阴性SLN均呈阳性表达,共有12例SLN CK19mRNA表达阳性,阳性率为40.0%(12/30);Western Blot检测发现1I例SLN CK19呈阳性,阳性率为36.67%(11/30).RT-PCR、Western Blot检测结果分别与HE染色结果比较,差异均有统计学意义(P<0.05),假阴性率为0.结论 CK19mRNA可作为标志物来检测乳腺癌SLN中的微转移情况;RT-PCR方法可检测到SLN微转移灶,通过SLN定位后检测其中CK19mRNA的阳性表达,可明显提高乳腺癌SLN的阳性率,降低SLN单纯病理检测的假阴性率.
