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秦皮乙素通过调控Smac、Survivin蛋白对SGC-7901细胞凋亡机制的研究
目的：研究秦皮乙素对活性氧、膜电位、Ca2+以及Smac、Survivin蛋白活性的影响，为进一步揭示其抗肿瘤作用机制提供帮助。方法：MTT法检测对肿瘤细胞生长的抑制作用；流式细胞仪检测细胞内活性氧、Ca2+以及膜电位变化情况；westenblot法测定对Surviving、Smac蛋白含量的影响。结果：秦皮乙素可显著提高SGC-7901细胞生长抑制率，升高活性氧和细胞内Ca2+浓度，降低线粒体膜电位，增加Smac蛋白含量，降低Surviving蛋白含量，与对照组比较具有统计学意义。结论：秦皮乙素可通过调控活性氧和细胞内Ca2+浓度，以及线粒体膜电位来启动线粒体凋亡通路，进而释放Smac蛋白，并与凋亡抑制蛋白Surviving蛋白结合，从而发挥其抗肿瘤作用。
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卵母细胞发育潜能与颗粒细胞凋亡关系的初步研究
目的探讨卵母细胞发育潜能与颗粒细胞凋亡之间的关系.方法将卵母细胞在体外培养28～30 h后,取其颗粒细胞,采用TUNEL法进行凋亡率的分析,并与卵子的成熟情况和卵子的评分及形成胚胎结果进行对照. 结果经培养后,随着卵母细胞成熟度的降低,凋亡率升高;而且随着卵母细胞评分和发育潜能的降低,颗粒细胞凋亡率逐渐升高.结论卵子发育潜能与颗粒细胞凋亡密切相关,通过测定颗粒细胞的凋亡率可预测未成熟卵母细胞的发育潜能.
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细胞凋亡与诱导型一氧化氮合酶在早期自然流产绒毛滋养细胞的表达
目的：为了探讨细胞凋亡与诱导型一氧化氮合酶(iNOS)对早期自然流产的影响。方法：应用末端缺口标记法(TUNEL)检测自然流产(流产组)绒毛组织中滋养细胞的凋亡，原位杂交及免疫组织化学(免疫组化)方法检测iNOS的表达，利用计算机CMIAS系统，滋养细胞凋亡及原位杂交阳性表达指标以光密度(D)及数密度(N/S)表示，免疫组化阳性表达指标以N/S及阳性单位(Pu)表示，检测结果与正常人工流产(对照组)比较。结果：滋养细胞凋亡阳性指标D、N/S流产组(分别为0.48±0.04及0.045±0.002)显著高于对照组(分别为0.35±0.06及0.031±0.003)，差异有显著性(均为P<0.01)；原位杂交及免疫组化同时显示阳性细胞表达指数流产组高于对照组，差异有显著性，凋亡与iNOS表达呈正相关。结论：滋养细胞凋亡和iNOS的表达在早期自然流产中具重要作用，细胞凋亡的发生和iNOS表达有关。
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缺氧对滋养层细胞功能的影响
在早孕期,由于胎盘绒毛发育不完善,胚胎与母体血液之间的物质交换尚未完全建立,胚胎发育及滋养层细胞侵入子宫基质的过程是在一个相对缺氧的环境下进行的.缺氧对这些过程产生着广泛的影响,而其对滋养层细胞增殖和功能的调节是这些影响的核心,并与一些妊娠疾病的病理机制有关.本文就近年来有关缺氧对滋养层细胞功能影响的研究进展进行综述.
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胚泡围着床期子宫内膜细胞的增殖、分化与凋亡
围着床期子宫内膜细胞的增殖、分化与凋亡以一种时空有序和细胞特异性的方式发生是胚泡着床成功的重要条件.子宫内膜细胞的增殖、分化与凋亡是受雌、孕激素宏观调控,并受局部粘附分子-细胞因子-生长因子以及胚泡严格调控.了解围着床期子宫内膜细胞的增殖、分化与凋亡以及相关调节因素,对于我们深入理解胚泡着床机制具有重要意义.
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低氧环境下子宫内膜基质细胞增殖及Prohibitin表达
目的 观察常氧和低氧环境下子宫内膜基质细胞(ESCs)的增殖,探讨抗增殖蛋白prohibitin(PHB)在子宫内膜异位症(EMs)病理机制中的作用. 方法 10例正常内膜组织(正常对照组)和10例EMs患者在位内膜组织(在位内膜组)各分为两份,分别置于常氧(21% O2)与低氧(1% O2)环境中培养.运用BrdU方法检测细胞增殖,并以光密度值(OD)代表细胞的增殖能力;通过流式细胞技术检测细胞凋亡;细胞免疫荧光技术和蛋白质印记法(Western blot)检测细胞中PHB表达. 结果 在常氧环境,在位内膜组的OD值略高于正常对照组但无统计学差异(P＞0.05);而在低氧环境,在位内膜组的OD值[(1.400±0.659)]显著高于正常对照组[(0.590±0.021)](P＜0.001),且显著高于常氧环境的在位内膜OD值[(1.156±0.044)](P＜0.05).无论是常氧还是低氧环境,在位内膜组的细胞凋亡率均显著低于对照组[分别为(4.117±0.450)% vs.(7.247±0.707)%及(4.983±0.393)% vs.(9.867±0.675)%],差异均有统计学意义(P＜0.05).在常氧环境,在位内膜组ESCs的PHB表达[(0.747±0.026)]显著高于正常对照组[(0.590±0.021)](P＜0.05);在低氧环境,正常对照组和在位内膜组ESCs的PHB表达水平均较常氧环境的PHB表达水平降低[分别为(0.358±0.071)vs.(0.590±0.021)和(0.458±0.054) vs.(0.747±0.026)],且差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 正常子宫内膜组织表达PHB,EMs患者的在位内膜组织PHB表达升高;低氧环境下ESCs的PHB表达水平显著降低,可能与促进ESCs增殖、抑制ESCs凋亡相关,因此PHB在EMs病理机制中起重要作用.
关键词： 子宫内膜异位症 低氧 Prohibitin 细胞增殖 细胞凋亡 -
SET蛋白对精原细胞株GC-1spg增殖和凋亡的影响
目的 探讨SET蛋白对精原细胞株GC-1 spg增殖和凋亡的影响.方法 使用含10％胎牛血清的DMEM高糖培养基在37℃、5％ CO2条件下培养GC-1 spg细胞,分对照组(转染无关序列腺病毒)和实验组[转染SET干涉腺病毒(AdH1-siRNA/SET)];GC-1 spg接种于96孔板或者6孔板,转染腺病毒48 h、72 h后收集细胞,免疫荧光和共聚焦激光扫描显微镜检测SET蛋白在GC-1 spg细胞中的表达与定位;提取细胞总蛋白,Western Blot检测转染前后SET蛋白的表达;细胞计数试剂盒-8 (CCK8)和5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记法检测细胞的数目和增殖情况;流式细胞仪检测细胞凋亡的变化.结果 SET蛋白表达于GC-1 spg细胞的胞核和胞浆中,且胞浆分布多于胞核;转染SET干涉腺病毒后,干涉组GC-1 spg细胞中的SET蛋白相对表达量为(0.217±0.044)显著低于对照组的(0.629±0.170) (P＜0.05),同时GC-1 spg细胞的数目减少,增殖减慢,且细胞凋亡率显著增加[干涉组(21.663±1.287)％,对照组(8.813±0.671)％](P均＜0.01).结论 SET蛋白在精原细胞GC-1 spg胞核和胞浆中均有表达,且胞浆分布多于胞核;GC-1 spg细胞中SET蛋白表达降低,能够抑制细胞增殖、促进细胞凋亡,提示SET蛋白可能参与调节精子发生的过程.
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米非司酮对早孕胎盘绒毛诱导型一氧化氮合酶和细胞凋亡的影响
目的 了解米非司酮对早孕绒毛诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及滋养层细胞凋亡的影响,进一步探讨米非司酮早孕药物流产机理.方法 选择40例早孕药物流产患者(实验组),采用原位杂交及免疫组化方法检测绒毛中iNOS的表达,细胞凋亡采用3′-OH末端缺口标记法(TUNEL)显示绒毛滋养细胞中原位凋亡细胞的表达.利用计算机图象分析系统(CMIAS),iNOS表达指标以数密度(N/S)及阳性单位(Pu)计算,细胞凋亡以每个统计场凋亡细胞个数(N)、凋亡细胞平均吸光度(OD)、凋亡细胞面密度(凋亡细胞面积/统计场面积,DS/TS)表示,并与40例正常人工流产的绒毛和蜕膜组织(对照组)比较.结果 实验组绒毛组织iNOS原位杂交结果显示N/S、Pu分别为0.12±0.010、15.3±2.6,对照组分别为0.02±0.003、3.1±0.5,两组有极显著性差异(P＜0.01);免疫组化结果显示实验组和对照组N/S、Pu分别为0.09±0.01、10.24±1.55及0.016±0.002、1.26±0.33,差异有显著性.实验组绒毛滋养细胞凋亡指数显著增高,各指标两组比较差异显著.结论 米非司酮早孕药物流产与绒毛组织iNOS活性及滋养细胞凋亡有关.
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环境雌激素对卵巢癌细胞PEO-4凋亡的影响
环境中天然存在的或污染的能够模拟或干扰人和动物的内分泌机能的各类化学物统称为环境内分泌干扰物,环境雌激素是其中的一大类.已有研究资料表明,环境雌激素进入人体后可通过多种途径影响机体内分泌系统的正常功能并导致人体生殖功能障碍、发育行为、生殖障碍及其他与雌激素调节失衡而引发的恶性肿瘤.
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全胚胎培养在环磷酰胺致畸与细胞凋亡研究中的应用
哺乳动物植入后全胚胎培养排除了母体等因素对胚胎发育的影响,并可人为控制实验条件,与组织、细胞培养及动物整体实验相比,具有许多明显的优点,可动态观察和研究药物致畸作用及机制.细胞凋亡是多细胞生物体内环境稳定和发育精确控制的基本条件,也是胚胎发生和发育过程中一定结构和功能器官形成的必要条件,过多的细胞凋亡或不适当的细胞凋亡终导致先天性畸形的发生[1].本研究利用小鼠全胚胎培养方法观察了抗肿瘤药物环磷酰胺致畸作用,在获得畸形胚胎的基础上,对环磷酰胺致畸作用与细胞凋亡的关系进行了探讨.
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多溴联苯醚-153对大鼠体内外神经细胞的毒性研究
目的 通过体内外实验,研究BDE-153对大鼠神经细胞的毒性损伤,为研究PBDE的神经毒性提供一定的科学依据.方法 (1)体内实验部分:将40只新生雄性清洁级SD大鼠按窝别和体重随机分为溶剂对照(橄榄油)组和低(1 mg/kg)、中(5 mg/kg)、高剂量(10 mg/kg) BDE-153染毒组,每组10只.在仔鼠出生第10天,采用一次性腹腔注射方式进行染毒,并且每周称重并记录大鼠的食欲、饮水量和体重增长状况,观察大鼠的神经行为变化.两个月后,在光镜和电镜下观察脑组织病理学形态和大鼠海马神经细胞超微结构以及TUNEL染色结果,采用比色法和流式细胞术分别检测LDH活力和细胞凋亡;(2)体外实验部分:体外培养大鼠原代神经元,分别用10、20和40 μmol/L BDE-153染毒48 h后(另设DMSO溶剂对照组和空白对照组),在倒置显微镜下观察神经细胞的形态学改变,采用Hoechst 33258和AO/EB染色法观察BDE-153染毒后神经细胞凋亡,采用比色法、CCK-8试剂盒和流式细胞术分别检测LDH活力、细胞活力和神经细胞凋亡率.结果 (1)染毒后大鼠一般状况以及行为无明显改变.体内神经细胞病理形态学和超微结构观察显不,BDE-153能引起大鼠神经细胞形态发生改变.与对照组相比,体内外各染毒组海马神经细胞凋亡率和LDH活力均呈剂量依赖性地增加,差异有统计学意义(P＜0.05);(2)与对照组比较,体外各染毒组神经细胞的细胞活力呈现剂量依赖性地降低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 BDE-153能引起体内外大鼠神经细胞的损伤,表现为细胞形态学和超微结构的改变,神经细胞活力降低,使细胞膜的通透性和细胞凋亡率增加.
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紫杉醇脂质体联合卡铂对宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响
目的 研究紫杉醇脂质体联合卡铂对宫颈癌Hela细胞凋亡的影响.方法 用设定浓度的紫杉醇(0.5和1 μmol/L)单独或联合(0.5和25 mg/L)卡铂分别处理Hela细胞24 h.用MTT比色法检测细胞活力,荧光探针检测细胞内活性氧,用流式细胞仪检测细胞凋亡,用Western blot检测凋亡蛋白p53、Bax和Bcl-2的表达量.结果 与空白对照组相比,紫杉醇、卡铂单独处理组可降低细胞活力,提高ROS含量,使p53和Bax蛋白表达升高,降低Bcl-2蛋白表达,使Hela细胞发生凋亡.且紫杉醇联合卡铂对Hela细胞的杀伤作用显著大于单独作用组.结论 本实验初步证明紫杉醇和卡铂均通过引起Hela细胞活性氧升高,诱导p53蛋白介导线粒体凋亡通路,导致Hela细胞凋亡的发生,还进一步证明紫杉醇联合卡铂对Hela细胞的杀伤作用显著大于二者单独作用.
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明日叶查尔酮对小鼠急性辐射损伤防护作用的研究
目的 研究明日叶查尔酮对小鼠急性辐射损伤的防护作用.方法 将50只昆明种小鼠随机分5组,每组10只.低、中和高剂量组每天灌胃给予明日叶查尔酮4、20和40 mg/kg,辐射损伤组与正常对照组给予生理盐水,连续5d,第6天给予一次性X射线全身照射4Gy,空白对照组不照射.照射后按前述方法继续灌胃5d处死动物,检测体重、骨髓嗜多染红细胞微核率,脾淋巴细胞增值活性与肝细胞凋亡等指标.结果 与正常对照组比较,辐射损伤组的体重、淋巴细胞增殖活性和Bcl-2/Bax值降低,而高剂量组则较辐射损伤组升高;辐射损伤组的微核率高于正常对照组和高剂量组.上述各组的差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 明日叶查尔酮对小鼠X射线所致辐射损伤有一定防护作用.
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硫酸镍诱导大鼠睾丸细胞凋亡的研究
镍(Ni)既是人体的必需微量元素,参与人体的许多正常代谢过程,又是常见的环境污染物之一.属于一种多器官、多系统毒物,并且对生殖系统具有一定的损伤,但其详细机制不清[1].本研究拟通过雄性动物整体染毒硫酸镍(NiSO4),探讨Ni对男性生殖系统睾丸的损伤及其机制,为Ni毒性的防治提供实验室理论依据.
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铝和苯并[a]芘联合染毒对神经细胞凋亡的影响
目的 通过研究铝和苯并[a]芘联合染毒对大鼠神经元细胞凋亡的影响,探索两种毒物共同作用下致神经细胞凋亡的联合类型.方法 采用新生的SD大鼠进行原代神经元细胞培养,培养5d后,选取生长良好的同批次细胞,分为对照组(DMSO+S9+maltol)、染苯并[a]芘组(10 μmol/L B[a]P)、染铝组(50 μmol/L Al(mal)3)和联合作用组(50μmol/L Al(mal)3+10μmol/L B[a]P)4组,继续培养72 h后电子显微镜观察不同实验组神经细胞凋亡形态学变化,AO-EB荧光染色法观察神经元细胞凋亡,流式细胞仪Annexin V-PI双染法定量检测神经元凋亡率的变化.结果 透射电子显微镜和荧光倒置显微镜下观察,可以看到染苯并[a]芘组、染铝组神经元细胞出现核膜皱缩,胞质致密,核染色质边集等细胞凋亡的经典形态学变化;联合作用组出现了细胞核裂解甚至凋亡小体.细胞凋亡率测定结果显示,与对照组相比,染苯并[a]芘组早期凋亡率、晚期凋亡率、总凋亡率差异均无统计学意义(P＞0.05);染铝组,早期凋亡率、晚期凋亡率差异无统计学意义(P＞0.05),总凋亡率差异有统计学意义(P＜0.05);联合作用组各指标差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 铝和苯并[a]芘联合染毒对神经细胞凋亡具有联合作用,作用类型为协同作用.
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氟对小鼠成釉细胞DNA损伤、细胞凋亡和增殖周期的影响
目的 探讨氟对小鼠成釉细胞DNA损伤、细胞凋亡和增殖周期的影响.方法 取小鼠成釉细胞,分为0.25、0.50、1.00、2.00和4.00 mmol/L剂量组,经氟化钠染毒24 h后,收集细胞,检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力、脂质过氧化物丙二醛(MDA)和8-OHdG含量、DNA单链断裂情况、细胞凋亡、细胞增殖周期以及细胞增殖活性.结果 小鼠成釉细胞在氟浓度为2.00和4.00 mmol/L下作用24 h后,细胞SOD、GSH-Px的活性降低(P＜0.05),MDA含量升高(P＜0.05).1.00和4.00 mmol/L剂量组的小鼠成釉细胞DNA尾长、Olive尾距、尾DNA％、尾/头长比均明显高于对照组(P＜0.05),且在此剂量条件下,小鼠成釉细胞8-OHdG的含量明显升高(P＜0.05),而在2.00 mmol/L剂量条件下,小鼠成釉细胞DNA损伤各指标的变化不明显.在2.00 mmol/L剂量条件下,G0/G1和G2/M期细胞均显著增多,S期细胞较对照组明显减少(P＜0.05).在4.00mmol/L浓度下,成釉细胞凋亡率明显升高,而细胞增殖活性则在0.25 mmol/L浓度就开始出现了明显的下降(P＜0.05).结论 在一定剂量条件下,氟可引起小鼠成釉细胞氧化应激,DNA损伤,细胞凋亡,细胞增殖周期改变和细胞增殖活性的降低.氟在2.00 mmol/L剂量条件下可诱导小鼠成釉细胞抗氧化应激反应,但相关机制需结合Nrf2信号通路深入研究.
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氯化镉对体外培养的人胎盘滋养细胞增殖与凋亡的影响
目的 探讨氯化镉对体外培养的人胎盘滋养细胞增殖和凋亡的影响.方法 人JEG-3细胞经稳定培养12 h,用不同浓度氯化镉(0、2.5、5、10、20和40 μmol/L)分别处理不同时间(0～24 h)后收集细胞,用MTT法检测细胞活力,TUNEL法检测细胞凋亡,免疫细胞化学技术检测人滋养细胞Ki-67表达与分布,用蛋白免疫印迹法检测细胞增殖相关蛋白(PCNA)和凋亡相关蛋白(裂解型Caspase-3)水平.结果 随着氯化镉浓度升高,贴壁细胞数逐渐减少,细胞变圆,甚至脱落.MTT检测结果显示,较低浓度氯化镉(2.5 ～ 10 μmol/L)处理组细胞活力在镉处理24 h才开始降低,而较高浓度氯化镉(20和40μmol/L)处理组细胞活力在镉处理6h开始下降,24 h降至低.细胞增殖指数结果表明,较高浓度镉(20和40 μmol/L)在6h开始抑制细胞增殖,24 h达低水平;氯化镉(20 μmol/L)处理12h后Ki67阳性细胞率明显减少,24 h后PCNA蛋白表达水平显著降低.凋亡检测结果显示,氯化镉(20 μmol/L)处理6h后,人胎盘滋养细胞TUNEL阳性细胞率明显升高,裂解型Caspase-3蛋白水平也显著升高.结论 氯化镉显著抑制人胎盘滋养细胞增殖和促进细胞凋亡.
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p53非依赖性细胞信号通路在依托泊苷诱导的细胞凋亡中的作用机制
目的 探讨p53非依赖性细胞信号通路在依托泊苷诱导的细胞凋亡中的相关作用机制.方法 常规培养HL-60细胞(p53基因缺失),采用0(溶剂对照组)、25、50、100和200 μmol/L的依托泊苷处理处于对数生长期的HL-60细胞.通过MTT比色法检测HL-60胞的增殖率变化,流式细胞术分析HL-60细胞凋亡率变化情况,Elisa方法检测Caspase 3和Caspase 9活力,胞浆Cytochrome c水平,western blotting方法检测HL-60细胞中TAp73、DNp73、p-JNK、p-P38、Bax和Bcl-2的蛋白水平变化.结果 在依托泊苷处理中,HL-60细胞增殖率显著下降(P＜0.05),细胞凋亡率明显升高(P＜0.01)；Caspase 3和Caspase 9活力明显增强,胞浆Cytochrome c水平显著升高(P＜0.01)；同时,尽管TAp73和DNp73无明显表达,但p-JNK、p-P38和Bax表达量则显著增多(P＜0.05),Bcl-2表达量则无变化.结论 JNK和P38通过p53非依赖性的细胞信号通路参与调控了依托泊苷诱导的线粒体依赖性的细胞凋亡过程.
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p,p’-DDE对原代培养的支持细胞周期的影响
目的探讨p,p’-DDE对离体培养的大鼠睾丸支持细胞(Sertoli cell)细胞周期及凋亡的影响.方法 实验采用了从大鼠睾丸组织中分离的支持细胞进行离体原代培养,染毒剂量分别为10、30和50 μmol/L,通过流式细胞仪测定细胞凋亡情况.结果 在凋亡百分比中高剂量组(50μmol/L)与溶剂对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05),30和50 μmol/L与溶剂对照组比较在G1、S、G2/M期都有显著的变化(P＜0.05).结论 浓度为50 μmol/L的p,p’-DDE对支持细胞周期有影响,可能引起细胞凋亡.p,p’-DDE可能诱导支持细胞凋亡,影响细胞周期,终可能影响生殖功能.
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硫代乙酰胺促进骨髓间充质干细胞凋亡的研究
目的 研究硫代乙酰胺(TAA)对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)的毒性作用.方法 体外分离大鼠骨髓间充质干细胞并培养;光学显微镜下观察原代细胞生长的过程;CCK-8检测TAA对BMSCs细胞的生长抑制作用;流工式细胞术法检测细胞凋亡率;免疫印迹法(Western blot)检测凋亡蛋白Bax,Bcl-2,Caspase-3的表达情况.结果 分离培养的BMSCs阳性表达CD90,CD29,阴性表达CD45,CD11 b/c;与对照组比较,TAA能显著的抑制BMSCs细胞增值,具有明显的时间和剂量依赖性;流式细胞术结果显示TAA能够诱导细胞凋亡;Western blot结果显示TAA能够上调Bax,Caspase-3的表达,Bcl-2的表达下降.结论 TAA对BMSCs具有促进其凋亡的作用.
