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纳米银诱导长爪沙鼠肝细胞凋亡与血清生化指标的研究
目的 探索经口灌胃纳米银建立肝细胞凋亡动物模型,并初步阐明其发生机制.方法 选用2～3月龄长爪沙鼠,随机分成3个剂量试验组和1个生理盐水阴性对照组,每组均为14只,雌性各半,分笼饲养.3个剂量组分别每天按30、125和500 mg/kg体重给予各组小鼠各剂量受试物,对照组小鼠经口灌胃同批号生理盐水,剂量为25 mL/kg,连续28 d.注射结束后第3天,经小鼠眼眶采血,检测小鼠血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平,用TUNEL法、流式细胞技术检测肝细胞凋亡情况,并进行光子显微镜、电子显微镜观察,探索导致明显急性肝损伤的可能机制.结果 与对照组相比,剂量125和500 mg/kg的受试组血清中SOD活力和GSH-Px活力显著降低(P＜0.01),MDA含量显著提高(P＜0.01)；30mg/kg剂量受试组血清SOD和GSH-Px活力降低,MDA含量提高,但差异不显著(P＞0.05)；组织病理学检测可见典型的凋亡小体结构；流式细胞术、TUNEL法检测及电镜检测都见明显的凋亡小体.结论 注射125 mg/kg剂量以上纳米银的老鼠肝细胞出现了明显的凋亡.
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硝酸钇对小鼠胚胎干细胞神经发育的影响及机制研究
目的 研究硝酸钇对小鼠胚胎干细胞神经发育的影响及可能作用机制.方法 建立以胰岛素-转铁蛋白-硒-纤维连接蛋白(ITSFn)培养法为基础的胚胎干细胞神经发育毒性评价模型,通过MTT试验、彗星试验、流式细胞试验、RT-PCR和免疫印迹试验,检测不同浓度硝酸钇溶液对胚胎干细胞神经发育的影响.结果 彗星试验和流式细胞仪检测结果显示,低剂量硝酸钇降低了神经元细胞凋亡率,而高剂量组神经元细胞凋亡率上升,各剂量组细胞凋亡率随着浓度增加呈现先降后升的趋势.RT-PCR和免疫印迹结果表明,低剂量硝酸钇可上调抗凋亡基因Bcl-2的表达,高剂量组则上调Bax的表达,抑制Bcl-2的表达.结论 硝酸钇可通过调节凋亡相关基因Bcl-2和Bax表达影响小鼠胚胎干细胞的神经发育,但这种影响因剂量高低而具有两面性.
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不同粒径SiO2颗粒诱导BEAS-2B细胞凋亡的研究
目的 探讨不同粒径二氧化硅(silica particles,SiO2)颗粒对支气管上皮细胞凋亡的诱导作用,进一步阐明SiO2颗粒粒径相关的毒作用机制.方法 以体外培养的支气管上皮细胞(Bronchial epithelial cells,BEAS-2B)为模型,随机分为对照组和SiO2(Nano-Si40、Nano-Si60和Si200)颗粒暴露组,暴露浓度为6.25、12.5和25 μg/ml.采用透射电子显微镜(TEM)观察3种SiO2颗粒粒径、形貌特征及分散稳定性.细胞处理24 h后,采用MTT比色法测定细胞存活率;采用乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)法测定细胞膜的完整性;TEM观察SiO2颗粒摄取;采用倒置荧光显微镜观察4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色后细胞核的形态;Annexin V/PI双染标记后采用流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测细胞凋亡的情况.结果 电子显微镜结果显示3种SiO2颗粒分布均匀,大小均一,颗粒呈圆形或椭球形,分散性良好,未发生明显聚集.Image J软件计算颗粒平均粒径分别为41.26±3.78、61.51±7.93和206.31±18.70 nm.与对照组相比,SiO2颗粒作用BEAS-2B细胞24 h后,细胞存活率下降(P＜0.05);细胞培养液中LDH活力明显升高(P＜0.05);3种SiO2颗粒均能够被BEAS-2B细胞摄取,大量的粒子以单个粒子或以膜包裹的聚集状态分布在胞质中,呈核周分布的现象;DAPI染色细胞核出现核固缩、核碎裂和染色质凝聚边缘化等典型的凋亡细胞核形态;3种SiO2颗粒均能诱导细胞凋亡发生,且随着颗粒浓度的增加和粒径的减小,凋亡率逐渐升高.结论 SiO2颗粒可被BEAS-2B细胞摄取,降低细胞存活率,进而破坏细胞膜完整性,终诱导细胞凋亡发生,且具有明显的剂量和粒径依赖趋势.
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Caspase-3 shRNA对染铝神经细胞凋亡的干预
目的 通过体外实验来研究铝的神经毒性,探讨慢病毒载体Caspase-3 RNA于扰对染铝神经细胞凋亡的干预效果.方法 原代培养神经细胞,用AlCl3·6H2O染毒,选用病毒为载体的Caspase-3 shRNA试剂感染神经细胞,荧光标记感染成功的细胞计算神经细胞的感染效率,荧光定量PCR技术检测干预后Caspase-3基因的表达情况计算慢病毒载体的Caspase-3 shRNA的抑制率.光学显微镜、荧光染色观察神经细胞的形态学变化,并检测细胞活力；AnnexinV-PI双染法检测神经细胞感染后的凋亡坏死率.结果 慢病毒载体的Caspase-3 RNA干扰试剂的感染效率大于90％,抑制率为66.47％.用慢病毒载体的Caspase-3 shRNA感染原代培养神经细胞后可见染铝神经细胞活力显著上升(P＜0.01);吖啶橙(AO)-溴化乙啶(EB)双荧光染色法可以清楚地观察到染铝细胞的早期凋亡和晚期凋亡现象明显减少;Annexin V-PI双染法检测结果显示,感染后染铝神经细胞凋亡率显著降低(P＜0.01).结论 馒病毒载体的Caspase-3shRNA感染细胞后,可以显著抑制Caspase-3基因的表达,神经细胞活力明显增高,凋亡细胞的数量显著降低.
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苯乙基异硫氰酸盐对神经分化胚胎干细胞凋亡诱导及其机制的研究
目的 研究苯乙基异硫氰酸盐对体外神经分化胚胎干细胞(ES)凋亡的诱导及其作用机制.方法 应用MTT法检测苯乙基异硫氰酸盐对ES细胞活性的影响;体外未分化培养和悬滴、悬浮培养后由5×10-7mol/L视黄酸诱导神经定向分化培养的ES细胞,经不同浓度苯乙基异硫氰酸盐(0、2、4和8 ttmol/L)作用24 h,采用流式细胞仪、Ho-chest33258染色和Capase-3酶活性分析检验ES细胞的凋亡效应,并采用蛋白免疫印迹方法 检测细胞内Bcl-2及Bax基因的表达变化.结果 与阴性对照比较,未分化和神经分化培养的ES细胞在苯乙基异硫氰酸盐作用下均可出现凋亡形态变化、细胞凋亡率增加和胞内Capase-3酶活性上升,同时胞内Bcl-2基因的表达受到抑制,且呈一定剂量反应关系;另相同剂量条件下,苯乙基异硫氰酸盐对神经分化ES细胞凋亡的诱导作用远较未分化ES细胞显著.结论 苯乙基异硫氰酸盐具有诱导神经分化ES细胞发生凋亡的作用,Capase-3活性增加和Bcl-2表达抑制可能是其作用的主要机制.
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氯化镉在Balb/c 3T3细胞转化过程中对细胞凋亡的影响
目的 探讨氯化镉(CdCl2)在Balb/c 3T3细胞转化过程中对细胞凋亡的影响及其分子机制.方法 N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)启动后,CdCl2持续处理Balb/c 3T3细胞14 d,建立两阶段细胞转化模型.苔盼蓝排染法检测CdCl2的细胞毒性,Annexin V-HTC/PI双染色结合流式细胞仪检测细胞凋亡率,小鼠毒理基因芯片检测CdCl2促癌作用过程中的基因表达变化.结果 1 mg/L MNNG启动后,324 μg/L CdCl2持续处理能诱导细胞转化灶的出现.CdCl2处理2 d后细胞存活率降低,凋亡率显著升高.同时基因表达谱分析筛选出的差异表达基因中,有11个基因的功能与细胞凋亡有关,10个基因的功能与细胞抗氧化机制有关.结论 CdCl2在促癌过程能诱导Balb/c 3T3细胞凋亡,同时影响凋亡和抗氧化相关基因的表达.
关键词： 细胞凋亡 细胞转化 Balb/c 3T3细胞 氯化镉 基因芯片 -
氯丙嗪对大鼠卵巢颗粒细胞损伤及其作用机制
目的 通过氯丙嗪染毒体外培养的大鼠卵巢颗粒细胞,研究其对卵巢颗粒细胞的毒性作用,并初步探讨可能的作用机制.方法 对未成熟的Wistar大鼠卵巢颗粒细胞进行原代培养,用不同浓度的氯丙嗪(0、0.1、1和10μmol/L)染毒24 h.MTT法检测细胞相对活力,ELISA法检测培养液中孕酮(P)和雌二醇(E<,2>)的含量,Hoechst 33258检测颗粒细胞的凋亡变化.结果 在本次实验所设置的剂量范围内,与对照组比较,氯丙嗪能明显地抑制大鼠卵巢颗粒细胞增殖和E<,2>的分泌(P<0.05),促进颗粒细胞凋亡(P<0.01),呈浓度依赖关系;而低剂量的氯丙嗪(0.1μmol/L)却能够促进P的分泌(P<0.05),但是随着剂量的升高,P的分泌量逐渐下降.结论 氯丙嗪可通过抑制卵巢颗粒细胞增值、诱导颗粒细胞凋亡并影响细胞甾体激素的分泌,而引起卵巢功能障碍.
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苯代谢物1,2,4-苯三醇对K562细胞的凋亡诱导和分化抑制作用
目的 研究苯代谢产物1,2,4-苯三醇对K562细胞的增殖和分化的影响.方法 应用台盼蓝染色排除法计数活细胞数,应用碘化丙啶(PI)染色结合流式细胞术分析细胞周期分布情况,应用PI/FITC-annexin V双染结合流式细胞术分析细胞凋亡情况,联苯胺染色法计数分析K562细胞红系分化情况.结果 1,2,4-苯三醇(0.025～0.4 mmol/L)处理24 h对K562细胞产生浓度依赖性的增殖抑制.0.2 mmol/L的1,2,4-苯三醇作用24 h后,K562细胞G0/G1期细胞比例显著下降,S期和G2/M期细胞比例显著升高,细胞出现明显的细胞凋亡.用0.005 mmol/L浓度的1,2,4-苯三醇预处理24h的K562细胞经氯化高铁血红素诱导24、48和72 h的红细胞分化率分别是21.57%、40.62%和46.60%,均显著低于对照细胞相应时间点的红细胞分化率.结论 在本试验条件下,苯代谢物1,2,4-苯三醇在一定的浓度范围内对K562细胞表现出浓度依赖性的增殖抑制作用,这种增殖抑制作用可能是通过细胞周期改变进而引起细胞凋亡来实现的,而在无细胞毒性的低浓度下1,2,4-苯三醇就可明显抑制K562细胞的红系分化,1,2,4-苯三醇的凋亡诱导作用和分化抑制作用可能在苯血液毒性机制方面有重要意义.
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氟化钠对体外培养小鼠睾丸间质细胞凋亡与Bcl-2、Bax表达的影响
目的 观察氟化钠对体外培养小鼠睾丸间质细胞凋亡的影响,以及对睾丸间质细胞中Bcl-2和Bax表达的改变.方法 体外培养的小鼠睾丸间质细胞,将细胞分4组,加入不同浓度的氟化钠(0、5、10和20 mg/L),染毒0、24、48、72、96和120 h后采用MTT法检测各组细胞的增殖,并用免疫组织化学法检测氟化钠对小鼠睾丸间质细胞Bcl-2和Bax的表达.结果 氟化钠作用24和48 h后,20 mg/L氟化钠对睾丸间质细胞增殖率有明显抑制作用,而5和10 mg/L组没有明显影响;10 mg/L氟作用72 h后,明显抑制睾丸间质细胞的增殖;各浓度氟作用96和120 h后均表现明显抑制作用.与对照组比较,染氟组睾丸间质细胞凋亡显著增加(P＜0.01),Bax表达增加(P＜0.01),而Bcl-2表达减少(P＜0.01).结论 氟化钠对小鼠睾丸间质细胞的增殖有抑制作用,并诱导小鼠睾丸间质细胞凋亡.氟化钠影响体外培养小鼠间质细胞凋亡及Bcl-2和Bax表达,证实了氟化钠对小鼠间质细胞的发育有毒性作用.
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硫酸铍致小鼠肺线粒体通透性转换孔高通透性开放及细胞凋亡研究
目的 研究腹腔注射硫酸铍(BeSO4·4H2O)溶液致小鼠肺线粒体通透性转换孔(mPTP)的高通透性开放及细胞凋亡效应.方法 6周龄雄性昆明小鼠36只随机分成3组,每组12只:空白对照组、1.0 mg/kg BeSO4组和2.0 mg/kg BeSO4组,分别按0.1 ml/10 g(体重)腹腔注射灭菌生理盐水、1.0、2.0 mg/kg BeSO4灭菌生理盐水,均隔天注射,一月后处死小鼠取肺脏:差速离心制备线粒体悬液检测线粒体活性氧(ROS)、跨膜电位(△ψm)和mPTP开放度;提取蛋白测定细胞色素C(Cyt-c)、Bax、Bcl-2的表达;电子显微镜观察肺细胞超微结构.结果 与对照组比较,硫酸铍染毒组小鼠肺线粒体ROS含量、PTP开放度、细胞色素C和Bax表达均增加(P＜0.05),△ψm、Bcl-2及Bcl-2/Bax比例均降低(P＜0.05);染毒组小鼠肺上皮细胞绒毛消失,细胞核固缩,凋亡特征明显.结论 腹腔注射硫酸铍可致小鼠肺细胞线粒体通透性转换孔高通透性开放及肺细胞凋亡.
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慢性镉所致肾脏毒性作用机制的研究进展
随着工业生产的发展,镉的生产和使用不断增加,同时也造成了它对生产和生活环境的污染.现已阐明机体长期接触低剂量镉可引起肾脏的损伤.镉致肾脏损伤的机制至今未完全阐明,我们仅就慢性镉所致肾脏毒性作用机制的研究进展作一简要介绍.
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E2F转录因子在细胞周期调控中作用的研究进展
目前研究表明多种细胞因子参与细胞周期调控,其中E2F转录因子家族已被证明是重要的调控环节之一[1].它们通过调节控制细胞DNA合成及与细胞增殖有关的基因表达而起作用,同时其本身的活性又受另一些在细胞周期进程中有重要作用的蛋白所调控.这样调节E2F家族的蛋白,E2F转录因子及它们的靶基因就形成了一条对细胞增殖有调节作用的途径.现对E2F转录因子在细胞周期调控中的作用及E2F家族与细胞凋亡及肿瘤的关系进行综述.
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乙醇引起睾丸损伤及其作用机制
近年来,不孕不育发生率呈升高趋势.据调查,在所有不孕不育夫妇中,因男性因素引起不孕不育的比例约50％.丹麦学者研究结果表明,近50年男性精液中精子数和精子活力均明显下降,而睾丸癌和隐睾发生率显著升高[1].已知,引起精子质量下降和睾丸异常的因素包括环境毒物、药物、高温、环境内分泌干扰物和不良生活方式(酗酒和吸烟)等.
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鱼藤酮对中脑多巴胺能神经元毒性机制的探讨
帕金森病(PD)是一种常见的中老年神经系统变性疾病,临床上以静止性震颤、运动迟缓、肌强直和姿势步态异常为主要特征.本病的发病机制仍不清楚,可能是多种因素综合作用的结果.近年来,环境因素已成为PD发病机制的研究热点.
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Fas/FasL系统与肝癌细胞免疫逃逸的研究进展
Fas是一种重要的诱导细胞凋亡的死亡受体,在靶细胞表面相应配体FasL的激活下介导细胞凋亡.近的研究揭示肝癌细胞通过表达FasL反击免疫系统,消除体内抗肿瘤T细胞,并且抵抗Fas/FasL系统介导的凋亡,从而使肿瘤成为机体的免疫豁免部位而逃逸免疫系统的攻击.本文就Fas/FasL系统与肝癌细胞免疫逃逸研究进展做一综述.
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胚胎异常发育中的细胞凋亡(二)
众所周知,发育是一个受基因严密调控的过程,此过程中任一环节受到干扰都会影响胚胎的正常发育,出现畸形甚至死亡.发育过程中几乎所有组织都要发生程序性细胞死亡(PCD)或细胞凋亡(apoptosis),PCD是保证个体发育成熟的必需过程[1].但PCD又是一易受到致畸物干扰的过程,致畸物可诱导(抑制)PCD,造成靶细胞的缺失、发育不良、生长过度等不良后果.因此PCD与胚胎异常发育的关系近年来受到人们的密切关注,成为畸胎学或发育毒理学的重要研究课题.我们将扼要介绍几种致畸物的致畸作用与细胞凋亡的关系,并对致畸物诱发凋亡的可能途径作一概述.
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一氧化氮在与线粒体相关的细胞凋亡中的作用
细胞凋亡是在特定的内源性和/或外源性信号的诱导下,生物体内细胞死亡相关途径被激活,并在相关基因调控下发生的程序性死亡过程[1].它在生物体的进化、内环境稳定以及诸多系统的发育中起着重要作用,同时很多疾病的发生及治疗同凋亡有着紧密的联系[1-2].近来的研究表明细胞凋亡过程中许多重要事件的发生都与线粒体密切相关,例如:线粒体跨膜电位(mitochondrial transmembrane potential,△Ψm)的下降、细胞色素C(Cyt C)的再分布、活性氧(ROS)的生成、半胱氨酸蛋白酶(Caspase)的激活等[3].
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关于氰戊菊酯的雄性生殖毒性研究
氰戊菊酯(Fenvalerate,Fen)是一种Ⅱ型拟除虫菊酯类农药,具有广谱、高效、低毒和低残留等特点,被广泛应用于农业生产和日常生活中,从而造成水体、土壤和大气等污染[1].Fen具较强的亲脂性,易通过污染水源、食品或空气等多种方式进入人体并产生蓄积,对人体健康造成潜在危害[2].
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敌百虫诱导SH-SY5Y细胞凋亡的研究
目的为了揭示敌百虫的慢性毒作用机制,对敌百虫诱导人成神经瘤细胞SH-SY5Y的凋亡作用进行了研究.
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黄芩甙对于刀豆蛋白A引起的小鼠肝损伤的保护作用及其机制
目的黄芩甙是一种临床上常用的治疗急慢性肝炎的药物,为了研究其对肝损伤的保护作用及机制,采用刀豆蛋白A(ConA)引起的小鼠急性肝损伤模型及相关的体外实验进行研究.
