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丙烯酰胺对L-02胎肝细胞株细胞凋亡和原癌基因c-fos、c-jun表达的影响
目的 观察丙烯酰胺(AA)对L-02胎肝细胞株细胞凋亡的影响以及对原癌基因c-fos、c-jun蛋白表达的影响.方法 以不同终浓度AA(低剂量组:0.01和0.Immol/L,中剂量组:0.5、1.0和2.5mmol/L,高剂量组:5.0和7.5mmol/L)对L-02细胞分别染毒12h和24h,CellTiter 96 MTS/PMS Assay法检测细胞存活率,流式细胞术法检测细胞凋亡,westernblot方法检测c-fos、c-jun蛋白表达水平.结果 与对照组相比.低剂量染毒组细胞存活率略有升高,中、高剂量组则显著降低(P<0.05);中、高剂量(>2.5mmol/L)染毒组细胞凋亡率显著高于对照组(P<0.05);染毒组C-jun、c-fos蛋白表达水平较对照组显著增高(P<0.05).且随着AA浓度的升高呈先升高后降低的趋势;随着染毒时间的延长,c-jun、c-fos蛋白表达水平也显著增高(P<0.05).结论 AA可引起细胞凋亡及原癌基因c-jun、c-fos蛋白表达增高.
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甲苯对原代培养海马神经细胞的毒性研究
目的通过在体外对原代培养的海马神经细胞进行染毒,观察其对神经细胞的毒作用,并探讨其作用机制.方法取新生的SD大鼠海马神经细胞进行原代培养,两周后,用甲苯染毒,分成3个染毒组,染毒浓度分别为3、6和9mmol/L,并设空白对照组和赋形剂组,染毒24h,观察其对细胞形态、细胞存活率、LDH漏出率、细胞内游离钙和细胞凋亡的影响.结果甲苯染毒后,细胞的形态发生改变,引起细胞突起萎缩,细胞肿胀变圆,细胞数量减少;神经细胞存活率的显著下降,且随着染毒时间的延长及浓度的升高其存活率逐渐降低;高剂量组神经细胞LDH漏出率的显著升高,与对照组相比有显著性(P＜0.05);细胞细胞内的[Ca2+]i浓度显著上升,与对照组相比P＜0.05,并呈剂量依赖性的变化,加入钙通道拮抗剂硫氮卓酮后,则未见[Ca2+]i浓度上升;可见明显的细胞凋亡.结论甲苯体外染毒对神经细胞有较强的毒性.这可能与甲苯有较强的脂溶性、引起细胞钙内流增加,促进细胞凋亡有关.
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镉对大鼠睾丸生精细胞凋亡的影响及锌的保护作用
为探讨镉对睾丸结构和功能损害及锌对其保护作用的分子机制,研究镉对生精细胞凋亡的影响和锌的保护作用,选用2月龄Wistar雄性大鼠24只,均分为染镉组、镉加锌组和对照组,分别自腹腔注射氯化镉(2mg/kgBW),注射氯化镉同时及其前后2h各注射醋酸锌一次和等量生理盐水,7d后采用原位缺口平移技术(INST)检测各组睾丸生精细胞凋亡数目的变化.结果显示与对照组相比,染镉组大鼠睾丸生精细胞凋亡数目明显增多(P<0.01,t=3.87);镉加锌组睾丸生精细胞凋亡数目无明显变化(P>0.05,t=1.34).染镉后大鼠睾丸生精细胞凋亡明显增加,锌对镉所诱导的生精细胞凋亡有保护作用,这些变化可能是镉损害睾丸结构和功能以及锌对其起保护作用的分子机制之一.
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锰对多巴胺能神经细胞PC12的毒性及其机制研究
为探讨锰(Mn)抑制神经细胞增殖的机制,体外培养神经细胞株PC12,培养基分别含有100、200及500 mmol/L MnCl2, 作用24、48、72h后,用四唑盐比色实验(MTT)和平板克隆形成实验检测细胞的存活和生长;台盼蓝拒染法绘制生长曲线; DTNB法测定谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性、丙二醛比色法测定丙二醛(MDA)的含量;DNA凝胶电泳检测神经细胞凋亡.结果显示,MTT和平板克隆形成实验检测结果显示100～500mmol/L的Mn均对PC12细胞株有显著的抑制作用,且呈剂量-效应关系.GSH-Px活性降低;MDA的活性升高.DNA凝胶电泳结果显示锰能够诱导PC12细胞凋亡.提示锰对神经细胞PC12的增殖具有显著的抑制作用,其机制是通过降低过氧化物酶的活性、干扰神经细胞的DNA代谢和诱导神经细胞凋亡.
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甲基汞对脑神经胶质细胞凋亡及c-fos表达的影响
为探讨氯化甲基汞(MMC)所致脑发育损伤及其与c-fos表达的关系,采用光镜、电镜等形态学方法,观察了MMC对体外培养的大鼠脑神经胶质细胞的损害作用,并应用免疫细胞化学方法(SP法)观察MMC对培养神经胶质细胞c-fos 表达的影响.结果表明,体外培养的胶质细胞接触MMC后,出现胞浆浓缩、轴突回缩、染色质边聚、固缩等现象,呈凋亡的典型形态.MMC 0.02 mmol/L作用于神经胶质细胞10 min后,c-Fos蛋白阳性细胞百分率随其后的培养时间而变化:c-Fos蛋白阳性细胞率0.5 h开始增高,2 h达高峰,4～6 h又逐渐减少.MMC 0.00125、0.005、0.02、0.08和0.32mmol/L作用10 min后,0.32 mmol/L组的阳性率显著高于除0.08 mmol/L组外的其他各组(P<0.01).提示MMC可诱导体外培养大鼠脑神经胶质细胞c-fos表达,并诱发其凋亡.MMC诱发神经细胞凋亡可能与c-fos介导有关.
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β-胡萝卜素抑制人肝癌细胞株SMMC-7721增殖的研究
为了探讨β-胡萝卜素抑制肝癌细胞增殖的机制,在体外培养肝癌细胞株SMMC-7721,培养基添加20、40及80 μmol/L β-胡萝卜素作用12、24和48h后,用四唑盐比色试验(MTT)检测细胞的存活和生长;台盼蓝拒染法绘制生长曲线; DNA凝胶电泳检测肝癌细胞凋亡.MTT检测结果显示20～80μmol/L的β-胡萝卜素均对SMMC-7721细胞株有显著的抑制作用,且呈剂量-效应关系.DNA凝胶电泳结果显示β-胡萝卜素能够诱导SMMC-7721细胞凋亡.结论认为β-胡萝卜素对人肝癌细胞株SMMC-7721的增殖具有显著的抑制作用,其机制可能是通过干扰肝癌细胞的DNA代谢和诱导肝癌细胞凋亡.
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十溴联苯醚诱导小鼠海马神经元细胞氧化应激和凋亡的机制
目的 探索十溴联苯醚(PBDE-209)诱导小鼠海马神经元细胞凋亡的潜在机制.方法 原代海马神经元细胞和海马神经元细胞系HT-22用0、6.25、12.5、25、50和100 μg/mL PBDE-209处理24 h.检测原代海马神经元细胞SOD活性,MDA、NO和GSH的含量,用AnnexinV/PI双染法检测海马神经元细胞系HT-22细胞凋亡情况,用免疫蛋白印迹Western blot检测Bax、Bcl-2、CHOP、GRP78、PERK和Caspase-12蛋白表达水平.结果 染毒组原代海马神经元细胞和HT-22细胞系细胞存活率显著降低(P＜0.05).原代海马神经元细胞MDA、NO含量显著升高(P＜0.05),GSH含量、SOD活性显著降低(P＜0.05);原代海马神经元细胞的Bax/Bcl-2比值、CHOP、Caspase-12蛋白表达水平升高(P＜0.05).HT-22细胞系GRP78、PERK、C aspase-12表达水平和细胞凋亡率升高(P＜0.05).结论 氧化应激和内质网应激可能参与PBDE-209诱导的海马神经元细胞凋亡过程.
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丙烯酰胺致L-02肝胎细胞损伤作用的研究
目的 观察丙烯酰胺(AA)对L-02肝胎细胞株细胞周期、细胞凋亡的影响以及对DNA的损伤作用.方法 以不同终浓度AA(0.01、0.1、0.5、1.0、2.5、5.0和7.5mmol/L)对L-02细胞进行染毒,12h和24h后分别检测细胞存活率、细胞周期、细胞凋亡和DNA损伤.结果 与对照组相比,低剂量(0.01mmol/L和0.1mm01/L)染毒细胞存活率略有升高,中剂量(0.5、1.0和2.5mmol/L)、高剂量(5.0mmol/L和7.5mmol/L)则显著降低(P<0.05);G1期细胞含量随染毒剂量的升高逐渐降低,中、高剂量组(>1.0mmol/)G1期细胞含量显著低于对照组(P<0.05),S期细胞含量则相反;中、高剂量(>2.5mmol/L)染毒组细胞凋亡率显著高于对照组(P<0.05);中、高剂量(>1.0mmol/L)染毒细胞拖尾DNA含量以及OTM值显著升高(P<0.05).结论 AA可引起细胞周期紊乱及细胞凋亡,并且对DNA有较强的损伤作用.
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氟诱导大鼠肾脏细胞凋亡与Caspase蛋白表达关系的研究
目的 探究死亡受体途径、线粒体途径与氟诱导肾脏细胞凋亡的关系.方法 48只SD大鼠随机分为4组:对照组、低氟组、中氟组扣高氟组,每组12只,分别饮用含氟化钠浓度为0、50、100和200 mg/L的去离子水,染毒120天,观察氟斑牙形成情况,称体重,测尿氟含量.制备肾脏细胞悬液,流式细胞术(FCM)检测肾脏细胞凋亡.免疫组化检测肾脏组织中Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9及细胞色素C(Cyt C)蛋白表达.结果 与对照组比较,低氟组、中氟组、高氟组肾脏细胞凋亡率显著增高(P＜0.05).与对照组比较,中氟组、高氟组Caspase-8、Cyt C、Caspase-9、Caspase-3阳性表达的平均光密度值明显增高(P＜0.05).结论 死亡受体途径、线粒体途径可能同时参与了氟诱导大鼠肾脏细胞凋亡的过程.
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富马毒素诱导肝癌细胞凋亡时Fas表达的变化
富马毒素(Fumonisins)是一组主要由串珠镰刀菌(Fusariummoniliforme)产生的真菌毒素.富马毒素B1(Fumonisin B1,FB1)是该毒素产生毒性作用的主要组分.FB1广泛存在于人、动物的粮食、饲料中,在动物体内可导致马脑白质软化症、猪肺水肿、大鼠的肝肾损伤.
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辛硫磷对大鼠骨髓间充质干细胞DNA损伤、细胞凋亡及P53蛋白表达的影响
目的 研究辛硫磷对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs) DNA的损伤作用及其对氧化损伤、细胞凋亡和P53蛋白表达的影响.方法 Percoll离心法分离培养大鼠BMSCs,正常传代.取第3代BMSCs,调整细胞密度为1.0×106/瓶,当细胞至亚融合状态,分别以0(对照)、0.2、2和20μ g/L的辛硫磷浓度染毒24h.采用MTT法检测BMSCs的存活率,分光光度比色法检测BMSCs超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(C AT)活性和丙二醛(MDA)含量,单细胞凝胶电泳检测BMSCs的DNA损伤,流式细胞术检测大鼠骨髓间充质干细胞凋亡率,Western blotting检测BMSCs的P53蛋白表达水平.结果 与对照组相比,0.2～20μg/L辛硫磷染毒24h,可诱发大鼠BMSCs的DNA损伤,且具有剂量-效应关系；各染毒组大鼠BMSCs的存活率、SOD和CAT活性均显著下降(P＜0.05),细胞凋亡率和MDA含量均显著升高(P＜0.05)；辛硫磷染毒可以诱导大鼠BMSCs P53蛋白表达水平的增加(P＜0.05).结论 辛硫磷可诱导大鼠BMSCs氧化损伤、DNA损伤、细胞凋亡和P53蛋白表达,且具有剂量-效应关系.
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植酸对SGC-7901细胞凋亡相关蛋白NF-kBP65、Bcl-2、IkB-α及C-myc表达的影响
目的 研究植酸对SGC-7901细胞的生长抑制作用的机制.方法 采用Western blotting法检测凋亡相关蛋白NF-kBP65、Bcl-2、IkB-α及C-myc的表达.结果 植酸可抑制人胃癌SGC-7901细胞中Bcl-2、C-myc、NF-kBP65蛋白的高表迭;促进IkB-α蛋白的表达.结论 凋亡相关蛋白NF-kBP65、Bcl-2、C-myc、IkB-α参与了植酸对人胃癌SGC-7901细胞的凋亡诱导作用的调控.
关键词： 植酸 细胞凋亡 凋亡相关蛋白 SGC-7901细胞 -
重组人肿瘤坏死因子相关凋亡配体的凋亡效应
目的 研究重组可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡配体(TRAIL)诱导细胞凋亡的生物学活性.方法 应用RT-PCR方法检测TRAIL受体(DR4和DR5)表达;细胞数目分析采用CCK试剂盒;细胞凋亡应用PI染色并经流式细胞仪检测;线粒体膜电位观察采用JC-1荧光染料.结果 重组可溶性TRAIL抑制细胞增殖并诱导细胞凋亡;凋亡过程中出现线粒体膜电位的降低.结论 此重组可溶性TRAIL具有诱导细胞凋亡的生物学活性.
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微波辐射对人胰腺癌JF305细胞增殖的抑制作用及其机制
目的 探讨不同强度,频率为2450 MHz微波辐射对人胰腺癌JF305细胞增殖的抑制作用及其机制.方法 分别以强度为2.5、5.0、10.0、15.0和20.0 mW/cm2的微波处理JF305细胞20 min,24 h后采用MTT法检测微波辐射后对细胞增殖的抑制情况,Annexin V-FITC和PI双染检测细胞凋亡,Caspase-3活性检测试剂盒检测辐射后细胞Caspase-3活性;Western blotting法检测细胞内Caspase-3和HSP 70蛋白表达量.结果 微波辐射作用JF305细胞后,细胞增殖活性明显受到抑制,细胞发生凋亡,随着辐射强度的提高,细胞凋亡率明显增加.随着辐射强度的增加,细胞内Caspase-3活性同对照组细胞相比呈上升趋势,差异具有统计学意义;细胞内Caspase-3和HSP 70蛋白表达水平也随着辐射强度的增加呈上升趋势.结论 微波辐射对人胰腺癌JF305细胞增殖具有抑制作用,其可能机制是通过改变细胞内的应激水平而引起细胞凋亡.
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阿特拉津对大鼠支持细胞凋亡的影响
目的 探讨阿特拉津对雄性SD大鼠睾丸支持细胞凋亡的影响及其作用机制.方法 选用18 ～21日龄雄性SD大鼠,建立支持细胞原代培养模型.设溶剂对照组和阿特拉津10、50、100和200 μmol/L 4个染毒剂量组,对支持细胞染毒24 h后,采用MTT法检测细胞活性,免疫荧光法观察波形蛋白的表达,流式细胞术测定细胞凋亡率,Real time-PCR与ELISA分别检测FasL、caspase-3与caspase-8的mRNA表达及蛋白含量.结果 阿特拉津50、100和200 μmol/L染毒组细胞活力分别为82.47％、75.23％和53.76％,与溶剂对照组比较分别降低17.53％ (P ＜0.05)、24.77％ (P ＜0.05)、46.24％ (P ＜0.01).波形蛋白表达受抑制.阿特拉津50、100和200 μmol/L染毒组细胞凋亡率分别为8.53％、13.07％和14.45％,与溶剂对照组比较分别升高86.86％ (P ＜0.01)、186.13％ (P ＜0.01)、216.06％ (P ＜0.01).FasL、caspase-3、caspase-8的mRNA表达及蛋白含量上调(P＜0.05或P＜0.01).结论 阿特拉津可影响大鼠支持细胞活性,可通过FasL途径诱导支持细胞凋亡.
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甘草提取物( Gc34)对MDA-MB-231乳腺癌细胞体外促凋亡作用研究
目的 观察甘草提取物Gc34对MDA-MB-231细胞的体外促凋亡作用.方法 MTT法检测不同时间(24、48、72h),不同浓度(25、50、75、100μg/ml)Gc34对MDA-MB-231细胞增殖的抑制作用；采用AO/EB染色、透射电镜实验判断凋亡；流式细胞仪检测其凋亡率.结果 MTT结果显示,随着Gc34作用浓度升高,细胞增殖能力随之下降,Gc34对MDA-MB-231细胞体外增殖抑制呈明显的剂量-时间依赖性,72h半数抑制浓度(IC50)为65.38μg/ml；AO/EB染色表明药物组细胞出现明显凋亡迹象,而阴性对照组中细胞形态完好；透射电镜结果显示,75μg/ml Gc34处理72h后细胞出现典型凋亡形态学改变；流式细胞仪分析结果显示,随Gc34剂量增加细胞凋亡率逐渐上升,呈明显的剂量依赖性.结论 甘草提取物Gc34在体外能明显抑制MDA-MB-231细胞增殖并诱导其凋亡.
关键词： 甘草 细胞凋亡 MDA-MB-231 乳腺癌细胞 -
葡萄籽原花青素对PC12细胞氧化损伤的神经保护作用及机制研究
目的 探讨葡萄籽原花青素(GSP)对PC12细胞氧化损伤的神经保护作用及机制.方法 用H_2O_2作用于PC12细胞,MTT检测细胞活性,用流式细胞仪测定PC12细胞凋亡率,共聚焦显微镜观察细胞Caspase-3活性的变化.结果 与模型组比较100μg/ml葡萄籽原花青素可使PC12细胞活性升高(P
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多氯联苯诱导小胶质细胞凋亡及钙离子紊乱
目的 探究多氯联苯(polychlorinated biphenyl,PCB)对小胶质细胞的神经毒作用及机制.方法 实验分为对照组及PCB118、138、153、180染毒组,染毒剂量分别为0.000、0.015、0.030、0.050、0.100、0.150 μmoL/L.通过对细胞存活率检测结果进行统计学分析,终确定后续实验染毒剂量分为低、中、高3个剂量水平,其中除PCB118高剂量组为0.15 μmol/L外,低剂量组均为0.015 μmol/L,中剂量组为0.05μmol/L,高剂量组为0.1μmol/L.体外培养小鼠小胶质细胞经不同剂量PCB染毒后,CCK-8法检测细胞生长活性;FITC Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡率;ELISA法检测乳酸脱氢酶(LDH)释放量;荧光探针法(Fluo-4 AM)检测细胞内钙离子含量变化.结果 PCB118、138、153、180均能抑制细胞活性,并随染毒剂量增加细胞存活率降低,凋亡率升高.PCB118染毒剂量在0.15 μmol/L时毒作用明显增强,存活率降低至(66.56±0.10)％,凋亡率升高至(27.39±1.80)％;PCB138、153在0.1μmol/L时存活率为(66.66±0.10)％、(67.17±0.12)％,凋亡率达到(48.77±2.43)％及(56.42 ±3.59)％;PCB180染毒剂量为0.015 μmol/L时细胞存活率为(92.07±0.38)％,凋亡率为(6.82±0.51)％,显著高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).LDH释放量与染毒剂量成正比,低剂量PCB118、138、153、180 LDH释放量分别为(523.78±13.58)、(430.37±22.03)、(540.58±13.08)和(411.88±21.92) U/L,均明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).PCB染毒组细胞内钙离子(Ca2+)平均荧光强度明显增强,染毒剂量在0.015 μmol/L时PCB118、138、153、180组细胞内Ca2+平均荧光强度分别为(10.14 ±2.36)、(32.47±1.56)、(16.54±0.97)和(40.46土2.19),显著高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 多氯联苯可以引起神经毒性,升高LDH,破坏细胞膜完整性,使胞内钙离子增加,导致细胞凋亡.
关键词： 多氯联苯 小胶质细胞(BV-2) 乳酸脱氢酶 细胞凋亡 Ca2+ -
铅对大鼠成骨细胞Fas和Bcl-2基因表达的影响
目的研究铅对乳鼠成骨细胞凋亡相关基因表达的影响.方法分离并培养原代成骨细胞,加入不同浓度(0、1、10、100μmol/L)Pb(Ac)2,培养72h,用免疫组化染色法检测成骨细胞凋亡相关基因表达的情况.结果铅处理组成骨细胞Fas基因表达增加(r=0.78),而Bcl-2基因表达减少(r=-0.82).结论铅对成骨细胞的影响可能与Fas和Bcl-2基因表达改变有关.
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胡桃醌对宫颈鳞癌Caski细胞增殖及凋亡作用的研究
目的 探讨胡桃醌对宫颈鳞癌Caski细胞增殖及其促凋亡作用的影响,并对其促凋亡的机制进行初步探究.方法 选取处于对数生长期的Caski细胞将其分为空白对照组和不同剂量(20、40、60、80和100 mol/L)胡桃醌组,共6组.采用MTT法观察胡桃醌对Caski细胞的抑制作用,并计算出半数抑制浓度(IC50=42.4 μmol/L),依据IC50确定胡桃醌的有效浓度;电镜观察40 μmol/L胡桃醌对Caski细胞凋亡的形态学特征,Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2及Bax的表达.结果 MTT试验显示,与对照组比较,除20 μmoL/L的胡桃醌外,其他各浓度组差异均有统计学意义(P ＜0.05,P＜0.01);电镜下可见凋亡细胞及凋亡小体,Western blot检测显示与正常对照组相比,40 μmol/L胡桃醌Bcl-2表达明显降低而Bax表达明显增加(P＜0.05).结论 胡桃醌可以抑制Caski的增殖,并诱导细胞凋亡.
