首页 > 文献资料
-
葛根素对血管平滑肌细胞凋亡及其相关基因表达的影响
目的:观察中药黄酮葛根素对血管平滑肌细胞(VSMC)凋亡的影响,并进一步探讨其作用的分子机制,探讨葛根素对何种VSMC凋亡相关基因的表达有影响.方法:应用流式细胞仪、荧光显微镜及电镜观察药物作用后细胞凋亡情况;采用cDNA差式分析法观察药物对细胞凋亡相关基因表达的影响.结果:①葛根素可促进VSMC凋亡,药物作用48h后凋亡率为15.5%,对照组为1.0%,荧光显微镜及电镜观察均可见明显的细胞凋亡特征.②cDNA差式分析筛选出两条长752bp和761bp的片断,同源检索显示与葡萄糖调节蛋白GRP94基因高度同源.结论:葛根素可促进VSMC凋亡,可能与促进VSMC的GRP94的基因表达有关.
关键词： 黄酮 葛根素 VSMC 细胞凋亡 cDNA差式分析法GRP94动脉粥样硬化 -
高血压大鼠主动脉平滑肌BK通道表达增强
动脉血管张力持续增加足原发性高血压的基本病理生理机制,而血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)离子通道的活动又是血管张力调节的主要因素.
-
CARP相互作用蛋白HTRM的表达谱分析及亚细胞定位
目的 观察CARP相互作用蛋白HTRM的组织表达谱和亚细胞定位及其对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的作用.方法 我们利用CLONTECH公司的成人多组织膜,通过Northern杂交的方法 ,检测HTRM在心脏、脑、胎盘、肺、肝、骨骼肌、肾脏以及胰腺中的表达情况.将HTRM带上GFP标签转染HEK293S细胞,观察其亚细胞定位情况.再将HTRM及对照载体转染VSMC细胞,通过细胞计数以及MTT两种方法检测细胞的增殖情况.结果 Northern Blot实验显示HTRM有两个转录本,2.4kb的转录本主要在心脏和骨骼肌中表达,1.35kb的转录本主要在胎盘中表达;亚细胞定位显示HTRM是一个胞浆蛋白;高表达HTRM可以轻微的促进VSMC细胞增殖.
-
人胚胎干细胞H9诱导分化收缩型平滑肌细胞的方法研究
目的 改进人胚胎干细胞H9向收缩型平滑肌分化方法的研究.方法 从形态和细胞免疫荧光、碱性磷酸酶(ALP)鉴定人胚胎干细胞(human embryonic stem cell,hESC)的全能性.采用单层培养H9诱导分化为中胚层(mesoderm,MES),进而改进诱导方法分化为收缩型平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC).采用real-time PCR、western blotting、细胞免疫荧光化学技术以及流式细胞术鉴定诱导分化方法的合理性以及效率.结果 hESC表面标志物蛋白分子OCT-4在细胞核内表达呈阳性(绿色),ALP显示呈黑紫色.Real-time PCR结果显示,随着时间的推移,VSMC标志基因a-SMC、SM22a、CALPONIN在一定的时间节点后呈爆发式上升;western blotting显示第6天后开始递增表达;细胞免疫荧光显示,分化18天的细胞a-SMC阳性表达(绿色);流式细胞术结果表明,分化第15天时,a-SMC阳性细胞达90％以上.结论 改进后的诱导体系更适合H9向收缩型VSMC分化.
-
血管平滑肌细胞在高血压中的作用
高血压主要表现是外周阻力血管张力的持续升高,导致血管舒缩活动异常,而血管舒缩活动主要取决于血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)[1].因此,目前学者们认为高血压是一种以血管平滑肌细胞增生为主要病变的疾病,高血压时VSMC增生,向内膜下迁移,使血管腔变窄、管壁增厚、外周阻力增高.成熟机体的VSMC呈收缩表型,具有收缩功能,如从收缩表型向合成表型转化,则造成VSMC增生、肥大和向内膜下迁移等生物行为改变,而这种改变又与VSMC的信号传导途径和凋亡有关,因此无论是对高血压的发生、发展,还是防治均需对VSMC进行深入研究[2-5].
-
桃红四物汤对血管平滑肌细胞FAK/P38MAPK信号表达的影响
目的:研究桃红四物汤药物成分对血管平滑肌细胞(VSMC)FAK/P38MAPK信号表达的影响,并探讨其在抑制VSMC的迁移及增殖中的相关机理.方法:制备桃红四物汤含药血清,体外分离培养大鼠颈总动脉VSMC,将VSMC分为正常对照组(A组,正常大鼠血清培养)与干预组(B组,桃红四物汤含药血清干预)分别进行处理,采用免疫细胞化学方法检测各组FAK的表达情况,采用Western blot法检测各组不同时间及不同浓度含药血清干预下P38MAPK表达的变化.结果:大鼠VSMC在含药血清干预后,FAK及P38MAPK的表达均降低(P＜0.01),P38MAPK的表达随含药血清干预时间的延长及作用浓度的增加而降低(P＜0.01).结论:桃红四物汤药物成分对FAK/P38MAPK信号的表达产生负性影响,此影响可能参与了对VSMC的迁移及增殖的抑制作用.
-
肉桂氨茴酸对血管平滑肌细胞生长及周期蛋白P21和P53表达的影响
目的 探讨肉桂氨茴酸对血管平滑肌细胞(VSMC)生长及周期蛋白P21和P53表达的影响.方法 以培养的兔主动脉VSMC株为模型,应用活细胞计数进行细胞增殖和迁移检测,计算半数抑制浓度(IC50).采用流式细胞仪分析肉桂氨茴酸作用24 h后VSMC周期的变化和细胞凋亡率,以western印迹法检测细胞周期蛋白P21和P53的表达.结果 20%的胎牛血清条件下,肉桂氨茴酸显著抑制VSMC的增殖和迁移,在9.6～305.8 μmol/L范围内,随剂量增加其抑制率增加.IC50为75.6 μmol/L.IC50的肉桂氨茴酸作用VSMC 24 h后,G1期细胞数占24%,显著低于作用前的51%(P＜0.01),形成明显的亚二倍体峰,细胞凋亡率为36.7%.经IC50的肉桂氨茴酸作用VSMC 24 h后出现明显的P21和P53条带,而空白对照组无表达.结论 肉桂氨茴酸浓度依赖性抑制VSMC的生长,其抑制作用主要通过细胞凋亡的方式.肉桂氨茴酸抑制VSMC增殖与细胞周期蛋白P21和P53的表达有关.
-
血管平滑肌细胞衰老与动脉粥样硬化
动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是导致大多数心脏病和脑卒中的主要因素.近年来随着分子生物学的发展和细胞衰老标记的确认,通过对AS动物模型和斑块离体细胞培养的研究,发现血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)的衰老和DNA氧化损伤等明显的特征,说明VSMC衰老是导致AS的重要因素.
-
姜黄素烟酸酯对血管平滑肌细胞增殖及ERK1/2信号通路的影响
目的探讨姜黄素烟酸酯( curcumin trinicotinate, CurTn)对血管平滑肌细胞( vascular smooth muscle cell, VSMC)增殖的影响及其可能机制。方法体外培养VSMC,体积分数为0.1的 FBS 刺激 VSMC 生长。 MTT 法观察CurTn对VSMC 活力的影响；流式细胞术分析细胞周期；Western blot 检测 PCNA、p-ERK1/2、CyclinD1蛋白的表达。结果 CurTn抑制VSMC增殖并呈现一定量效、时效关系,并且使G1期的细胞比例增加,S期细胞比例下降,PCNA蛋白表达下调。同时发现 CurTn 能明显抑制 p-ERK1/2、Cy-clinD1蛋白表达。结论 CurTn能明显抑制VSMC增殖,其作用机制可能与p-ERK1/2、CyclinD1蛋白表达下调有关。
-
川芎嗪对大鼠血管平滑肌细胞增殖及FGFR1与p21ras表达的干预作用
目的 观察川芎嗪对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖及FGFR1、p21ras蛋白表达的影响.方法 体外培养大鼠VSMC,建立VSMC增殖模型,应用不同浓度的川芎嗪干预,MTT法测定细胞增殖活力;免疫印迹法检测FGFR1与p21ras蛋白的表达.结果 与对照组比较,川芎嗪中、高剂量组细胞增殖活力均显著降低(P＜0.05),低剂量组FGFR1与p21ras表达无显著差异(P＞0.05),中剂量组、高剂量组的FGFR1与p21ras表达均较明显降低(P＜0.05),中、高剂量组表达较低剂量组比显著降低(P＜0.05),高剂量组表达又较中剂量组显著降低(P＜0.05),呈剂量依赖性.结论 川芎嗪能抑制VSMC增殖,该作用与其抑制FGFR1及其相应信号通路中p21ras蛋白的表达有关.
-
24-乙酰泽泻醇A对ox-LDL诱导大鼠VSMC表型转化的影响及其与ERK1/2通路的关系
目的 观察24-乙酰泽泻醇A(alisol A 24-acetate)对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)表型转化及其表型转化过程中合成基质金属蛋白酶9(MMP-9)能力的影响,并探讨与ERK1/2的相关性.方法 以酶消化法体外培养大鼠VSMC,ox-LDL(50 mg/L)进行诱导,24-乙酰泽泻醇A(10 mg/L)进行干预,免疫细胞化学染色观察VSMC收缩表型标记蛋白SM22α的变化;RT-PCR检测VSMC MMP-9 mRNA的表达及Western blot检测VSMC MMP-9和ERK、p-ERK蛋白表达的变化.结果 在ox-LDL诱导下,VSMC收缩表型标志蛋白SM22α的表达降低,细胞向合成型转化,促进MMP-9的合成,伴随着ERK1/2磷酸化水平升高(P＜0.05);在24-乙酰泽泻醇A的干预下,VSMC收缩表型标志蛋白SM22α的表达增加,细胞向收缩表型转化,伴随着MMP-9及p-ERK的表达下降(P＜0.05).结论 24-乙酰泽泻醇A能有效抑制VSMC表型转化和MMP-9的表达,其机制可能与抑制ERK1/2信号通路有关.
-
骨形态发生蛋白7抑制高磷诱导的血管平滑肌细胞钙化
慢性肾脏病(CKD)患者高磷血症可诱导血管平滑肌细胞(VSMC)向成骨样细胞转分化,是血管钙化发生的关键起始环节.骨形态发生蛋白7(BMP-7)是维持多种组织器官正常发育分化成熟的因子.本研究观察BMP-7对高磷诱导的VSMC成骨样分化及钙盐沉积的影响,以期探讨BMP-7是否具有预防血管钙化发生的作用.
-
辛伐他汀对大鼠血管平滑肌细胞增殖及FGFR1与p21ras表达的干预作用
目的:观察辛伐他汀对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖中FGFRI、p21ras蛋白表达的影响.方法:体外培养大鼠VSMC,建立VSMC增殖模型,应用不同浓度的辛伐他汀干预,MTT法测定细胞增殖活力;免疫印迹法检测FGFR1与p21ras蛋白的表达.结果:与对照组比较.辛伐他汀各浓度组细胞增殖活力均显著降低(P<0.05);与对照组(FGFR1 208.07±10.70,p21ras 202.43±12.36)相比,低剂量组(FGFR1 181.47±7.43,p21ras 182.00±8.98)的FGFR1、p21ras表达差异无显著性(P>0.05),中剂量组(FGFR1 144.90±9.03,p21ras147.03±9.13)、高剂量组(FGFR1 104.43±8.08,p21ras 100.3 ±8.37)的表达均较明显降低(P<0.05),中、高剂量组FGFR1、p21ras表达较低剂量组均显著降低(P<0.05),高剂量组表达又较中剂量组显著降低(P<0.05),呈剂量依赖性.结论:辛伐他汀能抑制VSMC增殖,该作用是通过抑制FGFR1、p21ras蛋白表达实现的,这可能是辛伐他汀治疗动脉粥样硬化、再狭窄及高血压等心血管疾病的重要机制之一.
-
重组hPTEN基因修饰对PDGF诱导的体外培养血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响
目的:探讨重组hPTEN基因修饰对PDGF诱导的体外培养血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响及具体作用机制.方法:构建真核表达质粒pcDNA4/myc-His-PTEN,通过脂质体介导转染VSMC细胞.MTT法检测在人PDGF条件培养基诱导下转染后的VSMC细胞及未转染的VSMC细胞的增殖情况.实验分6组,采用RT-PCR方法观察各组细胞Akt和NF-κB的mRNA表达.结果:经脂质体介导转染人VSMC细胞系,RT-PCR检测证实PTEN在VSMC细胞内稳定表达.MTT法检测转染后的VSMC细胞可抑制PDGF诱导的体外培养血管平滑肌细胞( VSMC)的增殖.RT-PCR结果显示,在各组细胞Akt及NF-κB均有表达,PDGF组与空白对照组比较,AktmRNA及NF-κB mRNA呈高表达,而LY294002组、PDTC组及PTEN组VSMCs中AktmRNA及NF-κ B mRNA表达量均较PDGF组显著降低.结论:PTEN基因转染在一定程度上可抑制PDGF诱导的体外培养血管平滑肌细胞(VSMC)的增殖.
-
红景天苷对大鼠血管平滑肌细胞ACE基因表达的影响
目的检测红景天苷对大鼠血管平滑肌细胞ACE基因表达的影响.方法离体培养SD大鼠VSMC,应用RT-PCR方法,检测红景天苷对血管平滑肌细胞ACE基因表达的影响.结果随红景天苷用药浓度的增加(0.3 ～0.5 mmol·L-1),ACE mRNA表达逐渐降低.结论红景天苷可抑制血管ACE的表达,这种作用在心血管病的临床治疗中有潜在的应用价值.
-
IL-1β对血管平滑肌细胞Cathepsin S的表达影响
目的 探讨体外情况下IL-1β对血管平滑肌细胞组织蛋白酶S(Cathepsin S,Cat-S)的表达影响.方法 原代培养小鼠主动脉平滑肌细胞(VSMC)传代后用IL-1β(10ng/ml)诱导细胞12、24、36h,免疫荧光(Immunofluorescence,IMF)法检测VSMC Cat-S的表达变化,ELISA试剂盒检测细胞培养基Cat-S浓度.结果 原代培养的细胞 VSMC-α-actin呈阳性,细胞纯度达96%以上.Cat-S免疫荧光染色,对照组呈阴性,IL-1β组均为阳性,并随着诱导时间的延长荧光强度不断增强.对照组培养基Cat-S浓度微量,经 IL-1β诱导12 h后明显增加,与对照组相比差异显著(P<0.01),24 h后达到高峰并趋于稳定.结论 炎性细胞因子IL-1β在体外可促进VSMC表达、分泌组织蛋白酶Cat-S.
-
美迪紫檀素的体外细胞毒性研究
目的：探究美迪紫檀素对正常大鼠心肌细胞 H9C2、人胚肝细胞 L-02、人胚肾上皮细胞 HEK293、大鼠主动脉血管平滑肌细胞 VSMC的细胞毒性作用。方法体外培养 H9C2、L-02、HEK293、VSMC细胞，加入不同浓度（0．1、1、5、10、50、100、200、250、300μmol／L）的美迪紫檀素溶液，采用 MTT法检测美迪紫檀素对细胞增殖的影响；同时给予1、50、300μmol／L的美迪紫檀素溶液，利用 Hoechst33342荧光染色观察细胞凋亡情况，并考察细胞培养液中乳酸脱氢酶（LDH）、谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）及肌酸激酶（CK）活性的变化。结果与对照组比较，0．1～300μmol／L浓度下的美迪紫檀素对 H9C2细胞增殖和凋亡没有影响，培养液中的 LDH、AST、ALT活性无统计学差异（P ＞0．05）。0．1～300μmol／L浓度下的美迪紫檀素均可抑制 L-02和 VSMC细胞增殖，促进细胞的凋亡，并可使培养上清液中的 LDH活力增加，L-02细胞培养上清液中 AST和 ALT活力也增加（P ＜0．05），在250～300μmol／L范围内对 HEK293细胞有一定的抑制作用，促进其凋亡，并增加 LDH活力。美迪紫檀素对 L-02和 HEK293细胞的抑制作用呈浓度依赖性。结论美迪紫檀素对 H9C2细胞生长没有影响，对 L-02、VSMC 细胞生长有一定的影响，250～300μmol／L浓度的美迪紫檀素对 HEK293细胞生长有影响。
