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RAS相关区域家族1A和死亡相关蛋白激酶基因启动子在视网膜母细胞瘤中的甲基化状态
目的 研究肿瘤抑制基因RAS相关区域家族1A(RASSFIA)和死亡相关蛋白激酶(DAPK)基因启动子在视网膜母细胞瘤(RB)组织和外周血的甲基化状态.方法 对RB石蜡组织切片进行实验研究,对RB患者和正常人进行病例对照研究,应用甲基化特异性聚合酶链式反应技术检测28例RB组织、9例RB患者外周血中RASSF1A和DAPK基因启动子的甲基化状态,分别收集年龄、性别相匹配的5例角膜捐赠者死亡后获取的正常视网膜、5例健康志愿者的血清作为对照,采用Fisher确切概率法比较两组间甲基化率的差异.结果 RB组织中RASSF1A基因启动子的甲基化率为60.7%(17/28),高于正常人视网膜组织0%(0/5)或瘤旁组织17.9%(5/28),差异有统计学意义(P<0.01),且单侧RB组织的甲基化率(72.7%)高于双侧(16.7%).另外在2例(2/9)RB患者外周血中检测到RASSF1A基因启动子的高甲基化.而DAPK基因启动子在RB组织及患者外周血中均未发生甲基化.结论 RASSF1A基因启动子高甲基化是RB中一种常见频发的表观遗传修饰.(中华眼科杂志,2009,45:631-635)
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我国汉族Vogt-小柳原田综合征患者人类白细胞抗原-DQB1基因启动子区单核苷酸多态性的研究
目的 探讨我国汉族Vogt-小柳原田综合征患者人类白细胞抗原(HLA)-DQB1基因启动子区单核苷酸多态性(SNP).方法 采用病例-对照研究方法.应用聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)-克隆-测序方法检测88例汉族Vogt-小柳原田综合征患者和88例非Vogt-小柳原田综合征正常对照者的HLA-DQB1基因启动子区(QBP)等位基因.使用Chromas软件和Bioedit软件进行序列比对和分析测序结果.应用卡方检验或Fisher精确概率法分别对受试者PCR-SSCP带型、基因频率进行统计分析.结果 受试者(患者与正常人)HLA-DQB1基因启动子区(QBP)分为16种聚丙烯酰胺凝胶电泳带型,带型QBPb(对应序列为QBP2.1+77C＞A,χ2=26.01,Pc＜0.001)和QBP1(对应序列为QBP3.3,χ2=16.99,Pc＜0.001)在Vogt-小柳原田综合征患者中出现频率显著高于正常人.而QBPg(对应序列为QBP3.1,χ2=12.10,Pc＜0.05)和QBPn(对应序列为QBP6.1+39G＞A,χ2=14.64,Pc＜0.05)在Vogt-小柳原田综合征患者中出现频率显著低于正常人.受试者启动子区共存在12种单核苷酸多态性,其中Vogt-小柳原田综合征患者的-189C/A的C等位基因频率显著高于正常人(χ2=45.92,P=0.000),而-227G/A的G等位基因频率低于正常人(χ2=15.63,P=0.000).结论 HLA-DQB1启动子区-189C/A的C等位基因可能是Vogt-小柳原田综合征遗传易感因素,而-227G/A的G等位基因可能是Vogt-小柳原田综合征的遗传保护因素.
关键词： 葡萄膜脑膜脑炎综合征 聚合酶链反应 多态性 单核苷酸 启动区(遗传学) -
小肝癌氩氦刀治疗后复发因素预后分析
目的 分析氩氦刀治疗小肝癌(直径小于5cm的肝癌)的长期疗效及复发转移的相关危险因素.方法 采用氩氦超导手术系统,在B超引导下采用经皮氩氦刀治疗156例小肝癌患者.采用免疫组织化学方法分析肝癌组织血管内皮生长因子(VEGF)表达,PCR和DNA序列测定方法分析基本核心启动子(BCP)、前C区(PC)突变情况.以生存率、无复发生存率为预后指标进行单因素和COX比例风险模型多因素分析,分析变量包括肝癌临床病理特征、肝癌组织VEGF表达以及HBV病毒学因素(HBV DNA定量、基因型、BCP区和PC区突变).结果 156例肝癌患者氩氦刀术后随访中位时间37(8～48)个月,1、2、3年总生存率分别为92%、82%、64%,无复发生存率分别为72%、56%、43%,随访期内共85例(5 4.5%)复发.156例肝癌患者中,VEGF表达阴性60例,弱阳性表达49例,强阳性表达47例.HBV DNA<10~3 copies/ml者14例,10~3～10~5 copies/ml者82例,>10~5 copies/ml者60例.142例HBVDNA>10~3 copies/ml的患者中,HBV B型20例(14.1%),C型122例(85.9%).PC区G1896A突变65例(45.8%),BCP区A1762T/G1764A双突变100例(70.4%).多因素分析显示:Child-Pugh分级和肝癌组织VEGF表达是影响小肝癌术后生存率的独立预后因素,而VEGF表达和HBV BCP区突变是影响无复发生存率的独立预后因素.结论 肝癌组织VEGF高表达和HBV BCP区突变预示小肝癌术后复发转移风险率高.
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前列腺特异抗原启动子介导的双反义RNA腺病毒载体的构建及体内抑癌研究
鸟氨酸脱羧酶(ODC)和S-腺苷蛋氨酸脱羧酶(AdoMetDC)是多胺生物合成的两个关键酶,在前列腺肿瘤的发生、恶变和转移中发挥着重要作用.本课题组前期构建了非组织特异的ODC反义RNA表达载体[1],在此基础上,本研究构建了前列腺组织特异、由前列腺特异抗原启动子介导、针对ODC和AdoMetDC翻译起始区的双反义腺病毒载体,并通过裸鼠皮下前列腺癌移植瘤模型,研究重组腺病毒在体内对前列腺癌细胞的作用.
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应用噬菌体展示技术筛选乙型肝炎病毒表面抗原基因启动子Ⅱ结合蛋白
目的通过筛选乙型肝炎病毒(HBV)表面抗原基因启动子Ⅱ(SPⅡ)结合蛋白,为HBV复制机制的研究探索新的途径.方法应用噬菌体展示技术,以HBV的表面抗原基因启动子Ⅱ的聚合酶链反应(PCR)产物DNA作为固相筛选分子,对噬菌体人肝细胞cDNA文库进行5轮"吸附-洗脱-扩增"筛选过程,经噬斑的PCR扩增后,构建克隆载体,后对所筛选克隆进行DNA序列测定和同源性分析.结果噬菌体经富集后,从随机筛选的20个克隆中得到4个阳性克隆,成功构建了克隆载体.序列测定后经过同源性分析,确定了和HBV SPⅡ结合的肝细胞蛋白--尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶4(NADHDH4).结论用噬菌体人肝cDNA文库筛选得到了HBV SPⅡ的结合蛋白,分析了该蛋白的编码基因,为进一步研究HBV的复制、转录、调节机制开辟了新的途径.
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LRP16基因启动子的亚克隆及表达调控载体的构建
目的:为深入研究LRP16基因的表达调控机制,克隆及亚克隆了LRP16基因的启动子序列,构建LRP16基因启动子表达调控载体.方法:在NCBI的人类基因组数据库中截取并下载LRP16基因转录起始位点5′侧翼区约3kb的基因组序列设计PCR扩增引物,从健康外周血中扩增获得该片段,以此序列为基础进行亚克隆,分别获得6条5'端不等、3'端平齐的片段,后插入用于表达调控研究的pGL3-Basic载体.结果:获得了7条长度依次差别约为400bp的LRP16启动子克隆,分别构建了调控荧光素酶报告基因的真核表达载体.结论:上述载体的成功构建为信息资源与实验手段的有效结合克隆启动子序列提出了一种模式,并为LRP16表达克隆及启动子的活性分析奠定了基础.
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KDR启动子驱动的TNFR逆转录病毒载体构建及其靶向表达
目的:为进行TNFR的靶向基因治疗研究打基础.方法:将人 TNFR55 和 TNFR75 基因序列分别与KDR启动子(KDRp)及灭活自身启动子的逆转录病毒载体RV-D299重组,构建 RV-D299-KDRp-TNFR55 及 RV-D299-KDRp-TNFR75 逆转录病毒载体,分别转染包装细胞PA317,获得稳定的产病毒细胞系.结果:获得的TNFR55和TNFR75产毒细胞系病毒滴度分别为 1×105CFU/ml和 2×105 CFU/ml.感染 RV-D299-KDRP-TNFR55 病毒的 ECV304 细胞与TNF孵育后的培养上清,对 L929 细胞的细胞毒活性比相同条件下的 NIH3T3 细胞低约 2.6 倍,而感染 RV-TNFR55 病毒的 ECV-304 与相同条件下的NIH3T3细胞无明显差异.结论:建立了 TNFR55 和 TNFR75 逆转录病毒高产毒细胞系,构建的 RV-D299-KDRP-TNFR55 和 RV-D299-KDRP-TNFR75 重组病毒载体可以介导TNFR在血管内皮细胞中靶向表达.
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雌激素上调LRP16基因表达靶启动子区的研究
目的:鉴定雌激素上调LRP16基因表达关键的靶启动子区域并探讨其分子机制.方法:对LRP16基因5'-侧翼2.6kb中的-213bp至-24bp启动子区进行亚克隆,构建5个控制不同启动子长度的荧光素酶报告重组子PS7-11,以既往构建的pS5、pS6为对照,与雌激素受体α(ERα)真核表达载体共转染MCF-7和Hela细胞,加入雌二醇(17β-E2)刺激后通过Luciferase assay方法测定相对荧光素酶活性.结果:MCF-7和Hela两个细胞系各组相对荧光素酶活性值上升趋势相平行,-213 bp至-24 bp区域各启动子克隆均具有较高的转激活活性,特别是pS10,在MCF-7细胞中对报告基因的上调活性达427倍,远远高于PS5.结论:E2主要通过-213 bp至-24bp区域增强LRP16基因的转录,其中-213bp至-126bp(pS10)应为关键的启动子区.
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人胰岛素基因逆转录病毒旋转感染Phoenix细胞的表达
目的:观察新构建人胰岛素基因逆转录病毒表达载体(pM54)在Phoenix和HepG2等细胞的表达情况.方法:1)脂质体法转染pM54质粒进入pT67、Phoenix和3T3细胞系;2)用新构建质粒的父本质粒p54和pCMVβGal质粒做转染基因对照;3)制备转染后细胞培养拟逆转录病毒上清液;4)旋转感染Phoenix及HepG2细胞;5)ELISA法检测转染、感染后上清液INS含量.结果:ELISA法检测证实感染细胞培养上清液中含较高水平目的蛋白INS的表达.对照结果均为阴性.结论:人胰岛素基因逆转录病毒介导旋转感染Phoenix等细胞,目的蛋白INS获得了预期的表达.实验为基因治疗或基因结合干细胞治疗糖尿病的进一步相关研究提供了重要数据.
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肺动脉高压患者Ⅱ型骨形成蛋白受体基因启动子-142G>A突变的研究
目的 探讨Ⅱ型骨形成蛋白受体(BMPR2)基因启动子突变与肺动脉高压发病的关系.方法 对1例家族性肺动脉高压(FPAH)、19例特发性肺动脉高压(IPAH)患者和50名健康成人进行BMPR2基因启动子区转录起始点上游-2022 bp的DNA序列测定.分别将突变型和野生型BMPR2基因启动子区片段插入pGL3-basic双荧光素酶报告基因载体中,获得pGL3-BMPR2启动子-突变型重组质粒和pGL3-BMPR2启动子-野生型重组质粒.以2种重组质粒分别转染人肺动脉平滑肌细胞(HPASMC)和人肺动脉内皮细胞(HPAEC),用Veritas微孔板发光检测仪检测突变型和野生型BMPR2基因启动子区片段在2种细胞中的转录调控活性(结果以萤火虫荧光素酶/海肾荧光素酶活性比值表示).应用MAPPER软件分析突变型和野生型BMPR2基因启动子区转录因子结合位点.结果 在1例36岁女性FPAH患者的BMPR2基因启动子区发现杂合子突变-142G>A.突变型BMPR2基因启动子片段在HPASMC和HPAEC中的转录活性(分别为9.58±3.85、59.07±25.54)均明显低于野生型(分别为16.80±3.55、115.58±38.02,均P<0.05),而且缺失转录因子Sp3结合位点.结论 BMPR2基因启动子-142G>A突变可能与FPAH发病有关.
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端粒酶逆转录酶基因启动子调控的肿瘤细胞特异表达载体的构建和鉴定
目的利用端粒酶逆转录酶基因启动子,构建能在人肿瘤细胞中特异表达目的基因的表达载体.方法通过PCR方法从pEGFP-N1质粒中扩增出绿色荧光蛋白基因并克隆到逆转录病毒载体pLNCX的多克隆位点上,命名为pLNCX-EGFP.设计含有特定酶切位点的引物,从人基因组中扩增出端粒酶逆转录酶基因启动子序列,将该序列片段定向克隆到已用限制性内切酶切除巨细胞病毒启动子的pLNCX-EGFP载体上,构建成端粒酶逆转录酶基因启动子调控的含有绿色荧光蛋白报告基因的表达载体pLNT-EGFP.将该表达载体pLNT-EGFP瞬时转染高表达端粒酶活性的HLF细胞株和不表达端粒酶活性的WI38细胞株,以检测端粒酶逆转录酶基因启动子的转录活性.结果表达载体pLNT-EGFP经酶切、测序分析证实与设计的完全一致.细胞瞬时转染结果表明,pLNT-EGFP能特异地在端粒酶阳性细胞中高效表达绿色荧光蛋白报告基因,而在端粒酶阴性细胞中不表达报告基因.结论成功构建了由端粒酶逆转录酶基因启动子调控的肿瘤细胞靶向表达载体.
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人端粒酶逆转录酶单位启动子和存活因子启动子在肿瘤靶向性基因治疗中的作用
目的 通过体内外研究人端粒酶逆转录酶单位(hTERT)启动子和存活因子启动子在实现肿瘤基因治疗靶向性中的作用并探讨其应用前景.方法 PCR方法扩增hTERT启动子片段和存活因子启动子片段,并构建包含重组可溶性肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体(TRAIL)的重组腺相关病毒载体.体外转染四株肝细胞癌细胞株及人原代正常肝细胞(PHH),通过EGFP表达及MTT检测启动子活性.体内建立SMMC-7721皮下移植瘤模型,观察瘤内注射rAAV病毒对肿瘤生长的影响.结果 两启动子驱动的外源基因表达具有肿瘤细胞特异性,且它们驱动的TRAIL表达能降低HCC的存活率,而不能降低PHH存活率.以rAAV为载体,hTERT启动子驱动的TRAIL能显著抑制皮下肿瘤生长.结论 肿瘤特异启动子是实现以rAAV为载体的肿瘤靶向基因治疗的潜在手段.
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人端粒酶逆转录酶启动子调控下活性半胱氨酸蛋白酶-3治疗人卵巢癌
目的 构建人端粒酶逆转录酶启动子(hTERTp)调控下的活性半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)重组腺病毒载体并检测其对人卵巢癌的治疗作用.方法 构建表达hTERTp调控下活性caspase-3的重组腺病毒载体AdHT-rev-casp3;以CMV启动子调控下活性caspase-3的重组腺病毒载体Ad-rev-casp3为对照,分别应用Western印迹、细胞计数试剂盒(CCK-8)法、流式细胞术和TUNEL检测AdHT-rev-casp3作用后卵巢癌细胞系AO及正常人脐静脉内皮细胞HUVEC中活性caspae-3蛋白p17和聚腺苷二磷酸-核糖多聚酶(PARP)裂解片段p85的表达水平、细胞存活率和凋亡率;建立裸鼠人卵巢癌皮下及腹腔移植瘤模型,Western印迹检测AdHT-rev-casp3作用后裸鼠肿瘤及肝脏组织中活性caspase-3的表达情况,观测作用前后裸鼠生存率及肿瘤体积的变化以及裸鼠体内肝酶ALT和AST水平.结果 AO细胞在AdHT-rev-casp3(MOI=70)感染后明显表达活性caspase-3蛋白p17和PARP的裂解片段p85蛋白,细胞存活率为55%,凋亡率为26%,而HUVEC在AdHT-rev-casp3感染后无明显p17和p85表达,细胞存活率和凋亡率与阴性对照组差异无统计学意义;AdHT-rev-casp3作用后的裸鼠肿瘤组织中明显表达活性caspase-3,而肝脏组织中则无表达;AdHT-rev-casp3能明显延长荷瘤裸鼠的生存期[(177±12)d vs(106±11)d],抑瘤率为60%,其作用后裸鼠体内的肝酶水平无明显增高.结论 hTERTp系统调控下rev-caspase-3的重组腺病毒AdHT-rev-casp3同时具有较强的致细胞凋亡能力和肿瘤靶向性,能明显抑制卵巢癌移植瘤的生长,延长荷瘤裸鼠的生存期,并明显降低rev-caspase-3对肝脏的毒性作用.
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乙型肝炎病毒X蛋白对SNAI1基因启动子转录活性调控的作用
目的 观察乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)对SNAI1基因启动子活性是否存在调控作用,并明确SNAI1启动子区重要的转录激活调控序列.方法 运用分子克隆技术,构建一系列5'端缺失,保留共同3'端的SNAI1启动子荧光素酶报告质粒.将报告质粒分别与内参pRL-TK质粒、HBx重组腺病毒载体共转染人肝癌SMMC7721细胞,检测各组相对荧光素酶活性.结果 酶切鉴定及DNA测序证实SNAI1基因系列启动子荧光素酶报告质粒构建成功.HBx共转染下的系列启动子缺失实验发现,HBx能显著上调SNAI1基因启动子(-869～+59)活性[SNAI1(-869)Luc:无处理组6.17±0.08,阴性对照组6.09±0.44,实验组12.52±0.72,P<0.01],其转录调控序列定位于SNAI1基因启动子区-869～-514之间.结论 HBx可有效激活SNAI1基因转录表达,SNAI1启动子区存在HBx作用的重要转录活性调控序列,提示了HBx促进肝癌侵袭转移的新路径.
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氟尿嘧啶诱导Egr-1启动子调控造血因子基因表达对造血恢复的影响
目的 探索5-氟尿嘧啶(5-Fu)诱导Egr-1启动子调控造血生长因子基因表达对化疗后造血损伤的恢复作用.方法 构建携带Egr-1调控序列启动的GM-CSF和EGFP双顺反子基因pCIneo真核表达载体(Egr-EG);通过脂质体转染骨髓基质细胞系HFCL,挑出G418抗性的阳性克隆(HFCL/EG);采用流式细胞仪和倒置荧光显微镜观察EGFP绿色荧光表达的阳性细胞;在加入5-Fu的HFCL/EG细胞培养体系中,采用RT-PCR、Western印迹和ELISA检测GM-CSF的表达;采用活性氧抑制剂N-乙酰半胱氨酸鉴定化疗通过活性氧诱导Egr-1启动子CarG 序列调控下游基因表达的特异性.将HFCL/EG细胞输入荷瘤的重症联合免疫缺陷(SCID)小鼠体内,对其实施5-Fu化疗,观察外周血象动态改变和对肿瘤的影响.结果 构建了Egr-1调控序列启动的双顺反子基因表达载体(EgrEG);在HFCL/EG细胞中证实有外源性基因EGFP和GM-CSF的表达,在5-Fu处理后HFCL/EG细胞培养上清液GM-CSF含量较未加5-Fu组明显增高(P＜0.01);RT-PCR和Western印迹显示化疗后HFCL/EG细胞GM-CSF mRNA和GM-CSF蛋白表达增强.在5-Fu处理的HFCL/EG细胞中,N-乙酰半胱氨酸明显减少GM-CSF含量.实验组与对照组相比外周血白细胞下降幅度明显减轻,恢复加快,而各组间肿瘤抑制率与化疗组相关,而与外源基因表达无明显的差异.结论 5-Fu诱导Egr-1启动子调控的造血生长因子基因表达对化疗后的造血损伤具有一定的恢复作用.
关键词： 启动区(遗传学) 5-氟尿嘧啶 粒-巨噬细胞集落刺激因子 骨髓基质细胞 活性氧 -
乙型肝炎病毒前S2蛋白下调胰岛素受体启动子的研究
目的 探讨乙型肝炎病毒(HBV)前S2蛋白对胰岛素受体(INSR)启动子转录的下调作用.方法 HBV前S2蛋白真核表达质粒pcDNA3.1(-)-preS2及INSR启动子真核报告质粒pCAT3-INSRp使用常规分子生物学方法进行构建,并经酶切、测序证实.接下来,将构建好的pcDNA3.1(-)-preS2质粒以1.0、1.5、2.0μg转染HepG_2细胞,提取总RNA后进行相对实时荧光定量PCR检测以明确前S2蛋白mRNA的表达量.然后,分别将pCAT3-INSRp质粒以0.2μg递增量(0～2.0μg)转染HepG_2、Huh7细胞系,CAT-ELISA法检测转染细胞的氯霉素乙酰转移酶(CAT)表达量以制作pCAT3-INSRp的量-效曲线.后,根据量一效曲线选择合适的pCAT3-INSRp转染剂量(1.0μg)与不同剂量的pcDNA3.1(-)-preS2(1.0、1.5、2.0、2.5、3.0μg)共转染HepG_2及Huh7细胞,同时使用抗前S2蛋白单克隆抗体以阻断前S2蛋白的作用,使用CAT-ELISA方法检测转染细胞的CAT表达量,以观察前S2蛋白对于INSR启动子的调节作用.结果 转染了pcDNA3.1(-)-preS2的细胞可以正确表达HBV前S2蛋白的mRNA.pCAT3-INSRp质粒转染细胞后CAT的表达随着转染剂量的增加而增加,量-效曲线为S形.转染不同剂量pcDNA3.1(-)-preS2后,HepG_2细胞内CAT基因的表达水平分别为对照的69.8%、60.1%、19.7%、10.3%、5.6%(转染后36 h)和68.6%、56.0%、10.3%、8.6%、3.2%(转染后72 h).同时,在转染2.0μg pcDNA3.1(-)-preS2的细胞培养上清中加入前S2单抗后,其CAT的表达量恢复为对照的55.4%(36 h)和69.7%(72 h).Huh7细胞的结果同HepG_2细胞结果相似.结论 克隆的INSR启动子有顺式激活下游基因的活性;HBV的前S2蛋白对INSR启动子转录具有下调作用,可以在分子水平解释肝源性糖尿病发病机制的一部分.
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苯中毒骨髓单个核细胞TOPO Ⅱ α启动子调控因子组蛋白乙酰化修饰的改变
目的 探讨职业性苯中毒患者骨髓单个核细胞拓扑异构酶(TOPO) Ⅱ α启动子调控因子组蛋白乙酰化修饰的改变.方法 25例职业性苯中毒患者骨髓单个核细胞为苯中毒组,25例正常人骨髓单个核细胞为对照组,染色质免疫沉淀分析法检测TOPO Ⅱ α启动子各调控因子组蛋白乙酰化水平的变化,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法测定TOPO Ⅱ α启动子各调控因子mRNA表达水平.结果 (1)与对照组比较,苯中毒组TOPO Ⅱ α启动子调控因子特化蛋白1(SP1)、活化转录因子2(ATF-2)、特化蛋白3 (SP3)、核因子Y A(NF-YA)、抑癌基因转录因子P53、原癌基因转录因子c-MYB、CCAAT盒结合蛋白ICBP90、NF-M组蛋白H4、H3乙酰化水平下降,差异有统计学意义(P＜0.05),C-JUN组蛋白H4、H3乙酰化水平无明显改变,差异无统计学意义(P＞0.05);(2)与正常对照组比较,苯中毒组TOPO Ⅱ α启动子调控因子SP1、NF-YA、C-MYB、C-JUN及NF-M mRNA表达水平降低,差异有统计学意义(P＜0.05),ATF-2、ICBP90 mRNA表达水平不变,差异无统计学意义(P＞0.05);SP3、P53 mRNA表达水平则升高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 (1)职业性苯中毒TOPO Ⅱ α启动子调控因子组蛋白化学修饰水平的改变伴随着调控因子mRNA水平的变化;(2)TOPO Ⅱ α启动子调控因子组蛋白乙酰化修饰可能在苯中毒所致的造血毒性中发挥一定的作用.
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肿瘤基因治疗相关的特异性启动子研究新进展
肿瘤基因治疗是一种在基因水平上治疗肿瘤的方法，是现有治疗肿瘤的先进方法之一。但是，肿瘤基因治疗技术还存在很多未解决的问题，例如目的基因表达的靶向性问题等。现有研究证实，使用特异性启动子可以提高肿瘤基因治疗的靶向性。启动子是指能启动mRNA转录的一段特异性DNA序列，特异性启动子是指仅在特定组织或肿瘤中才会被激活的启动子。该文将就肿瘤基因治疗相关的特异性启动子的近期研究，按启动子的作用类型进行综述。
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人破骨细胞分化因子基因启动子报告载体的构建
目的:构建能够报告人破骨细胞分化因子(ODF)基因启动子活性的表达载体.方法:以人基因组DNA为模板,PCR扩增含有ODF基因启动子的2段序列(-2433～-1 243 bp和-1 262～+100 bp),通过T-A克隆将这2个序列片段分别连接到pGEM(R)-T Easy克隆载体上.利用特定的限制性内切酶位点,将这2个序列片段酶切后进行正确拼接并定向克隆到不含启动子的pEGFP-1报告基因载体上.将该重组质粒pEGFP-1-ODF瞬时转染成骨细胞系UMR106,检测其能否在ODF基因启动子(-2 358～+100 bp)的调控下表达报告基因增强型绿色荧光蛋白(EGFP).结果:pEGFP-1-ODF经酶切鉴定和序列分析证实与设计完全一致.细胞瞬时转染结果表明,pEGFP-1-ODF转染的UMR106能表达EGFP.结论:人ODF基因启动子报告载体的成功构建,为进一步研究ODF基因表达转录水平的调控机制奠定了基础.
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血红素加氧酶-1启动子基因多态性与高血压的关系
目的:探讨血红素加氧酶-1(HO-1)基因启动子区域的(GT)n双核苷酸重复序列多态性与天津地区原发性高血压(EH)的关系及与血浆炎症因子、胆红素水平的关联性.方法:选择102例EH患者(EH组)及134例正常对照组作为研究对象,采用聚合酶链反应(PCR)方法扩增染色体DNA中含HO-1基因相应的DNA片段,聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)技术分析基因型.自动生化分析仪分析血浆胆红素水平.酶联免疫吸附(ELISA)法分析血清白细胞介素(IL)-10及肿瘤坏死因子(TNF)-α水平.结果:EH组血浆胆红素、TNF-α、IL-10水平显著高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).HO-1重复≥32次长等位基因在EH组的分布明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.01).HO-1长等位基因携带者血浆胆红素水平低于短等位基因携带者,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:HO-1基因启动子区域的(GT)n双核苷酸重复多态性可能与EH人群的易感性有关.HO-1长等位基因携带者患高血压的危险性增大.
