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外源性三磷酸腺苷在大鼠肝脏低温保存中的作用
目的研究外源性三磷酸腺苷(ATP)在大鼠肝脏低温保存中的作用及其机制.方法采用持续低温机器灌流保存模型,利用高效液相色谱、光镜及放射自显影等技术测定低温保存大鼠肝脏的能量代谢、功能、形态学变化及外源性ATP是否能进入肝细胞内.结果灌流液中不含ATP及MgCl2组(A组)和灌流液中含5*!mmol/L ATP、不含MgCl2组(B组),随保存时间的延长,大鼠肝细胞内ATP及Atkinson's能量转换(EC)迅速下降,两组差异不显著(P>0.05),而灌流液中含5*!mmol/L ATP及5*!mmol/L MgCl2组(C组),ATP及EC则下降缓慢(P<0.01); A、B组乳酸脱氢酶(LDH)及天冬氨酸转氨酶(AST)迅速增高(P>0.05), C组上升较A、B组缓慢(P<0.05); 保存24*!h后A组、B组形态学变化基本一致,均可见肝细胞肿胀明显, C组则显示肝细胞水肿较轻;放射自显影显示[α-32p]ATP进入肝细胞内.结论外源性ATP在大鼠肝脏低温保存中有保护作用,但需Mg2+参与;外源性ATP能够进入低温保存的大鼠肝细胞内.
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应用钙离子拮抗剂保护离体肾的实验研究
目的探讨钙离子拮抗剂对离体肾的保护作用。方法以3月龄的日本纯种大耳兔为实验对象，分为正常组、实验对照组和实验组，实验对照组将肾脏置于4 ℃高渗枸橼酸盐腺嘌呤器官保存液（HC-A液）中保存24 h，实验组将肾脏置于4 ℃含维拉帕米的HC-A液中保存24 h。正常组肾切取即刻测定肾细胞线粒体内钙离子及肾组织中三磷酸腺苷（ATP）的含量；实验对照组和实验组保存2 4 h后测定肾细胞线粒体内钙离子及肾组织中ATP的含量。结果与肾脏切取后立即检测组相比，实验对照组肾细胞线粒体内Ca2＋含量明显上升（P ＜0.01），ATP明显下降（P＜0.01）；实验组上述改变可得以显著改善（ P＜0.01）。结论在离体肾保存中，应用钙离子拮抗剂维拉帕米可阻止Ca2＋进入细胞线粒体内，防止能量消耗，从而保护离体肾。
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不同热缺血时间对犬胰腺移植物功能及能量代谢状态的影响
目的探讨热缺血时间对胰腺能量代谢状态及胰腺移植后移植物功能的影响.方法切取犬胰腺左叶,按分组要求,胰腺分别经历30、60、90、120 min热缺血,以0～4 ℃ UW液灌洗,并保存24 h,然后行胰腺节段自体异位移植,同时设正常对照组和未经历热缺血的胰腺节段自体移植组.术后连续观察血糖、静脉葡萄糖耐量试验(IVGTT)、血液中胰岛素含量,测定术后24 h和1周时胰液中淀粉酶浓度,高效液相色谱法检测移植前胰腺组织中ATP和腺苷核苷酸总量(TAN),并观察移植后1 h时移植物的组织学变化.结果热缺血30 min组和60 min组的术后3～5 d血糖即可恢复至正常范围,而热缺血90 min组和120 min组术后1周血糖未能恢复至正常;术后1周,无热缺血组、热缺血30 min组和60 min组的IVGTT K值大于1,热缺血90 min组和120 min组小于1,且其静脉血中胰岛素的浓度明显低于无热缺血组、热缺血30 min组和60 min组(P＜0.05);热缺血30 min组和60 min组胰腺组织中ATP和TAN的含量明显高于热缺血90 min组和120 min组(P＜0.05);无热缺血组以及热缺血30 min组和60 min组的胰腺组织结构基本正常,而热缺血90 min组和120 min组的组织破坏明显,腺泡坏死、出血和炎症细胞浸润严重.结论用于移植的胰腺热缺血30～60 min是安全的,移植后胰腺功能迅速恢复正常;超过60 min的热缺血对移植物的能量代谢有显著负面影响.
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生物发光法测定PC12细胞微量ATP含量
目的研究生物发光法测定PC12细胞内腺苷三磷酸(ATP)含量的可行性及短暂缺氧血清剥夺再灌注后ATP含量的动态变化.方法将PC12细胞随机分为正常对照组、缺氧组, 测定短暂缺氧血清剥夺再灌注后不同时间点的ATP含量和细胞活性, 对缺氧组ATP含量与细胞活性进行相关性分析.结果与正常对照组相比, 缺氧血清剥夺15 min再灌注1 h后的ATP含量、细胞活性显著降低, 差异具有显著性意义(P＜0.05);缺氧血清剥夺15 min再灌注6 h后基本恢复至正常水平.缺氧组ATP含量与细胞活性呈显著正相关(r=0.904, P＜0.05).结论生物发光法测定PC12细胞内ATP含量有较高的准确性.短暂缺氧血清剥夺再灌注后, 存在低能量状态, 且可完全恢复.
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三磷酸腺苷在房室结折返性心动过速消融终点判定中的意义
[目的]探讨三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)在射频消融(radiofrequency cather abalation,RFCA)慢径治疗慢-快型房室结折返性心动过速(atrioventricular nodal reentrant tachycardia,AVNRT)消融终点判定中的意义.[方法]40例慢-快型AVNRT患者RFCA前经股静脉快速(2 s内)注射ATP(0.15 mg/kg起始量及每次增加0.1 mg/kg),直至出现房室结双径路(dua atrioventricular nodal pathways,DAVNP)现象、Ⅱ度或Ⅲ度房室传导阻滞等.对ATP试验诊断有房室结双径路现象者RFCA慢径阻断成功后重复原ATP剂量,连续记录体表心电图和心内电图.[结果]RFCA前行ATP实验29例(72.5%)出现DAVNP现象,该29例患者RFCA慢径阻断成功后重复注射原ATP剂量,均无DAVNP现象.[结论]ATP是诊断DAVNP的一个判定指标,如若RFCA术前ATP试验诊断有DAVNP现象,术后ATP试验诊断无DAVNP现象意味着慢径阻断成功.
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ATP对LPS诱导人脐静脉内皮细胞炎症因子表达的影响及其机制
[目的]观察不同浓度三磷酸腺苷(ATP)对脂多糖(LPS)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)表达相关炎症因子的影响,并探讨其可能机制.[方法]采用RT-PCR检测不同浓度ATP对LPS(1 mg/mL)诱导HUVECs表达炎症细胞因子如白细胞介素-1β(IL-1β)、单核细胞趋化因子-1(MCP-1)和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的影响,进一步采用RT-PCR检测靶浓度的ATP对HUVECs表达TLR受体及TLR4辅助分子CD14和MyD88的mRNA水平的影响.[结果]经1mg/mL的LPS干预处理后,IL-1β、MCP-1和ICAM-1在HUVECs中的mRNA表达水平显著上调,差异具有统计学意义(P＜0.01);ATP在低浓度(1μmol/L、10μmol/L)时可显著下调LPS诱导的IL-1β、MCP-1和ICAM-1的mRNA表达水平,差异具有统计学意义(P＜0.01).ATP在10 μmol/L浓度时显著下调TLR4、TLR3 mRNA表达水平,并可显著下调TLR4调节蛋白CD14和MyD88 mRNA表达水平,差异具有统计学意义(P＜0.01).[结论]低浓度的ATP可能通过负性调节TLR4信号通路而抑制LPS诱导的炎症细胞因子在HUVECs中的表达,有望为临床上动脉粥样硬化等炎症性疾病的治疗提供一条新的途径.
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ATP及其受体P2X参与膀胱感觉的研究进展
P2X受体是非选择性门控阳离子通道,细胞外ATP是其天然配体,已经克隆的7个亚型在膀胱均有分布,其中P2X2、P2X3受体分布于感觉神经元、膀胱上皮细胞和上皮下传入神经纤维上.研究认为膀胱上皮细胞可释放ATP,作用于P2X2、P2X3受体参与膀胱的容量感觉、痛觉和排尿反射,现对这方面的研究进展作一综述.
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CD4+细胞内三磷酸腺苷测定在肾移植中的应用
肾移植术后监测病人的免疫状态，可以平衡免疫过度及免疫不足，指导免疫抑制药物用量。监测病人的免疫细胞状态有很多方法，但都没有在移植工作中广泛运用。Cylex - immuknowTM技术通过测定CD4 +T淋巴细胞经过刺激后所释放的三磷酸腺苷(ATP)含量变化，来反映机体的整体免疫状态，可较好的为肾移植术后的免疫状态提供风险评估。
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重症急性胰腺炎感染期CD4+T淋巴细胞内ATP含量的变化
目的:探讨CD4+T淋巴细胞内三磷酸腺苷( ATP)含量在重症急性胰腺炎(SAP)感染期的变化.方法:将南开医院收治的42例SAP患者(SAP组)及36名健康志愿者(对照组)纳入研究.SAP组入院后于1,4,7,14,21d用ImmuKnowTM免疫细胞功能测定试剂盒检测CD4+T淋巴细胞内ATP值,对照组以相同的时间间隔做相同的检测.之后根据SAP组是否进入感染期分为感染组(18例)和非感染组(24例).分析和比较3组ATP含量的变化,并用受试者工作特征(ROC)曲线分析ATP含量变化对判断SAP继发感染的价值.结果:对照组CD4+T淋巴细胞ATP含量保持稳定.两个SAP组的ATP含量变化趋势基本一致,入院后第1,4天两组的ATP含量明显高于对照组(P＜0.05),第7天两组ATP含量明显降低,均于第14天降至低水平,其中感染组下降程度明显大于非感染组(p＜0.05),随后两组ATP含量开始回升,第21天非感染组ATP含量已基本接近对照组,但感染组仍低于对照组(P＜0.05).ROC曲线分析表明,当CD4+T细胞内ATP值降低(＜151.55 ng/mL)时,SAP继发感染的机率明显增加；ATP含量的降低对判断SAP继发感染的敏感度为0.810,特异度为0.605.结论:CD4+T淋巴细胞内ATP含量可较准确地反映SAP患者的整体细胞免疫功能状况和继发感染的风险.
关键词： 胰腺炎 急性坏死性 CD4阳性T淋巴细胞 腺苷三磷酸 -
全身炎症反应综合征大鼠心脏腺苷酸水平的动态变化及意义探讨
目的对大鼠全身炎症反应综合征(SIRS)模型心肌亚细胞结构、能量代谢的变化进行研究,以期进一步了解心肌能量代谢改变在SIRS向多器官功能障碍综合征发生发展过程中的作用.方法 Wistar大鼠随机分为SIRS-A组(内毒素注射后1 h)、SIRS-B组(内毒素注射后3 h)及对照组(Con).高效液相色谱法测定各组大鼠心肌ATP,ADP和AMP的含量.大鼠心肌细胞进行透射电镜检查.结果①SIRS-A组ATP,ADP及AMP含量分别为(1.51±0.39)×10-1,(3.22±0.59)×10-1和(2.17±0.56)×10-1mmol/g;SIRS-B组为(1.31±0.53)×10-1,(2.75±0.74)×10-1,(1.88±0.57)×10-1mmol/g;对照组为(2.57±0.82)×10-1,(5.75±0.69)×10-1,(5.35±0.76)×10-1mmol/g,3组ATP,ADP和AMP含量差异有显著性(P＜0.05或0.01).SIRS-A组,SIRS-B组的ATP,ADP和AMP含量低于对照组(P＜0.05);SIRS-B组与SIRS-A组之间ATP,ADP和AMP含量差异无显著性(P＞0.05).②透射电镜观察可见SIRS大鼠心肌细胞线粒体排列紊乱,空泡变性,肌纤维水肿.结论能量代谢障碍和线粒体功能结构的改变等在SIRS发展为MODS过程中起到了重要的作用.
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葛根素对丙烯酰胺染毒大鼠中枢神经能量代谢影响
目的 观察葛根素对丙烯酰胺染毒大鼠中枢神经能量代谢的影响.方法 无特定病原体级成年雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组和葛根素低、中、高剂量组,每组10只.模型组和葛根素低、中、高剂量组大鼠均予剂量为30 mg/kg体质量丙烯酰胺腹腔注射染毒,对照组大鼠腹腔注射等体积的0.9％氯化钠溶液;染毒1 h后,3个葛根素剂量组大鼠分别予剂量为40、80和160 mg/kg体质量葛根素腹腔注射,每周3次,连续给药4周.于第4周,断头处死大鼠后分离其脑和脊髓,检测脑和脊髓线粒体中腺苷二磷酸(ADP)/腺苷三磷酸(ATP)比值、ATP合成酶活力及线粒体膜电位.结果 与对照组比较,模型组和3个葛根素剂量组大鼠脑与脊髓组织线粒体中ADP/ATP比值均升高(P<0.05),ATP合成酶活力和线粒体膜电位均下降(P<0.05).与模型组比较,3个葛根素剂量组大鼠脑与脊髓组织线粒体中ADP/ATP比值均下降(P<0.05),脑组织线粒体中线粒体膜电位均升高(P<0.05).与模型组比较,葛根素高剂量组大鼠脑与脊髓组织ATP合成酶活力均升高(P<0.05),葛根素中、高剂量组大鼠脊髓组织线粒体膜电位均升高(P<0.05).随着葛根素剂量的增加,大鼠脑和脊髓组织线粒体中ADP/ATP比值下降(P<0.05),线粒体膜电位升高(P<0.05).结论 葛根素可能通过调节线粒体ATP合成酶增强大鼠中枢神经线粒体的能量代谢功能,并对丙烯酰胺染毒大鼠中枢神经线粒体膜有一定的保护作用.
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应用生物荧光法检测三磷酸腺苷评估肝细胞功能储备
目的:探索生物荧光定量分析三磷酸腺苷作为评估肝实质功能的可行性.方法:选择2005-2006年入住我院肝胆胰脾外科的32例肝病患者(26例为恶性肝病,6例为良性肝病)作为研究对象, 男27例(84.38%),女5例(15.62%),中位年龄53.87(范围33-76)岁.所有患者均于术前进行谷草转氨酶(AST)和总胆红素(TBIL)常规肝生化检查.术中根据肝脏形态学改变将患者进行分组, 分别为正常组7例 (21.88 %);大结节硬化组9例 (28.12%);小结节硬化组16 例(50.00%).无菌收集肝手术切除病变旁肝组织标本,经过酶解消化、细胞悬浮、培养、离心、肝细胞计数、ATP的提取和检测等步骤,后换算出每个肝细胞ATP含量检测;进一步将ATP数据与术前肝功能其它指标(AST、TBIL)进行相关分析.结果:ATP含量在大结节硬化组明显较正常组增高 [(1 224.66±373.37) mol/cell vs (438.66±186.97) mol/cell, P＜0.01], 较小结节组也明显升高[(1 224.66±373.37) mol/cell vs (697.39±402.24) mol/cell, P＜0.01];微小结节硬化组较正常组也明显升高 [(697.39±402.24) mol/cell vs (438.66±186.97) mol/cell, P＜0.05].所有患者单个肝细胞ATP(mole/cell)水平与术前生化检查AST (R=0.60933, P<0.01)及TBIL (R=0.61458, P<0.01)呈正相关. 结论:肝细胞ATP检测水平有可能作为评估肝实质储备功能的指标,ATP水平可能用于预测手术风险及术后恢复过程.
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肾小管上皮细胞ATP耗竭再恢复时热休克蛋白72与Paxillin的相互作用
目的研究肾小管上皮细胞ATP耗竭再恢复时热休克蛋白(HSP)72与桩蛋白(Paxillin)的相互作用和意义.方法应用代谢抑制剂暂时性阻断肾小管上皮细胞ATP的生成,引起细胞内的ATP耗竭;换用含10 mmol/L葡萄糖的DMEM培养液,使细胞内ATP再恢复;以热处理细胞或编码HSP72 RNA的腺病毒感染细胞,诱导细胞高表达HSP72.Western印迹检测HSP72水平;间接免疫荧光和Western印迹检测Paxillin在细胞内的分布变化.免疫共沉淀观察HSP72与Paxillin的相互作用.结果肾小管上皮细胞ATP耗竭再恢复时,对照组细胞内的Paxillin由局部黏附结构区域向细胞浆内弥散分布;HSP72由细胞浆转移至细胞膜.细胞高表达HSP72后,HSP72在细胞浆和细胞膜中的蛋白含量均增加(P＜0.05);Paxillin由细胞浆向细胞膜的转移明显减少(P＜0.05);Paxillin在细胞内的正常分布改善;HSP72和Paxillin之间的相互作用显著增加(P＜0.05).结论肾小管上皮细胞ATP耗竭再恢复时,HSP72可保持Paxillin在细胞内的正常分布特点和区域,其机制可能是HSP72增加与Paxillin的相互作用,发挥分子伴侣的功能.
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免疫细胞功能分析在监测肾移植受者免疫状态中的应用
目的 评估免疫细胞功能分析(ImmuKnow ATP测定)在监测肾移植受者免疫状态中的价值.方法 2010年3月至2010年12月在浙江大学医学院附属第一医院肾脏病中心首次接受同种肾移植的131例受者被纳入本研究.根据临床情况分为:健康对照(HC)组;肾移植术前(Pre-Tx)组;术后稳定(Tx)组;术后感染(Infect)组;排斥反应(AR)组和急性肾损伤(AKI)组6组.分别于术前、术后2周、1月、3月、6月及异常时间点(出现排斥,感染等)动态监测各组患者及健康人群的免疫细胞功能,分析免疫细胞功能与淋巴细胞亚群分析(CD4/CD8)、混合淋巴细胞反应(MLR)及他克莫司(FK506)血药浓度的相关性.结果 ATP浓度检测结果显示:Pre-Tx组与HC组比较差异无统计学意义;与Pre-Tx组比较,肾移植术后2周、1月组患者ATP浓度升高(均P＜ 0.01);随着移植时间延长ATP浓度趋于平稳;AR组ATP浓度显著高于Tx组,感染组,AKI组(均P＜0.01).logistic回归分析结果显示:肾移植受者的ATP浓度与MLR、CD4/CD8和血FK506浓度无相关关系(分别R2=0.0072,R2=10-6,R2=0.004;均P＞0.05).结论 肾移植受者术后1月内免疫细胞功能较强,随着时间延长趋于稳定.ImmuKnow法检测的ATP值对急性排斥反应发生有一定的预示作用.
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Smac/Diablo与X-连锁凋亡抑制蛋白在ATP耗竭再恢复诱导肾小管上皮细胞凋亡中的作用
目的 研究线粒体蛋白Smac/Diablo和细胞X-连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)在ATP耗竭及再恢复导致肾小管上皮细胞凋亡中的作用和机制.方法 应用代谢抑制剂暂时性阻断人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)内ATP的生成,再换用含糖的培养液使细胞内ATP再恢复,诱导肾小管上皮细胞凋亡.应用Hoechst33342检测肾小管上皮细胞凋亡的发生.用间接免疫荧光检测Smac/Diablo在细胞内的分布.分别提取胞质蛋白和细胞总蛋白,以Westem印迹检测胞质中Smac/Diablo、XIAP和活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3前体(pro-caspase-3)的蛋白水平.结果 肾小管上皮细胞内ATP耗竭及再恢复时,Hoechst33342染色可见HK-2细胞核固缩和凋亡小体的形成;间接免疫荧光可见Smac/Diablo由线粒体释放至胞质;Western印迹可见胞质内Smac/Diablo的含量增多(P＜0.01);XIAP和pro-caspase 3的蛋白水平降低(P＜0.05).结论 肾小管上皮细胞内ATP耗竭及再恢复时,Smac/Diablo释放至胞质,XIAP蛋白水平降低,进而激活caspase 3,介导肾小管上皮细胞凋亡.
关键词： 凋亡 Smac/DIABLO X-连锁凋亡抑制蛋白 肾小管上皮细胞 腺苷三磷酸 -
单唾液酸四己糖神经节苷脂对豚鼠胆红素神经毒性的影响
目的 观察单唾液酸四己糖神经节苷脂(简称GM1)对豚鼠胆红素神经毒性的影响.方法 在制作胆红素脑病动物模型基础上予GM1干预,观察对照组、模型组、干预组新生豚鼠(每组12只)干预后4、8h的脑组织ATP含量与含水量、脑组织超微结构.结果 模型组与干预组脑组织ATP含量(4、8h)明显低于对照组(P＜0.05),且干预组与模型组比较差异也有统计学意义(P＜0.05);模型组脑组织含水量在干预后8h显著增高(P＜0.05),GM1干预治疗可显著减轻胆红素毒性脑水肿(P＜0.05);脑组织超微结构变化与之相符.结论 沉积于脑组织胆红素可抑制神经元能量代谢,致脑细胞水肿;GM1可影响能量代谢变化,减轻脑水肿,对胆红素神经毒性具有治疗作用.
关键词： 单唾液酸四己糖神经节苷脂 腺苷三磷酸 胆红素脑病 -
四逆汤对供心冷保存和再灌注期间ATP的影响
目的:探讨四逆汤(SD)对供心冷保存和再灌注期间ATP的影响,以了解SD对供心的保护作用.方法:新西兰大白兔16只随机分成2组,1组为对照组,2组为实验组.取心前,取心肌测ATP.1组用4℃ UW液灌洗、2组用4℃ UW+SD液灌洗;常规取心后,1组在4℃ UW液中, 2组在4℃ UW+SD液中保存6 h.取心肌测ATP.然后在Langendorff模型上,1组用KHB液,2组用KHB+SD液再灌注30 min,再取心肌测ATP.结果:2组取心后各时点ATP均高于1组.结论:在灌洗液、保存液及再灌液中加入SD能使供心冷保存和再灌注期间ATP维持较高水平.SD对供心有保护作用.
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辅酶Q10对供心冷保存和再灌注过程中ATP的影响
目的:探讨辅酶Q10(Co-Q10)对供心冷保存和再灌注过程中ATP的影响,以了解Co-Q10对供心冷保存和再灌注过程中的保护作用,以达到延长供心保存时间,增加临床供心来源的目的.方法:新西兰大白兔16只随机分成两组,1组为对照组,2组为实验组.取心前,取心肌测ATP.1组用4℃UW液灌洗,2组用4℃UW+Co-Q10液灌洗,常规取心后,1组在4℃UW液中,2组在4℃UW+Co-Q10液中保存6小时.取心肌测ATP.然后在Langendorff模型上,1组用KHB液,2组用KHB+Co-Q10液再灌注30分钟.再取心肌测ATP.结果:2组冷保存和再灌注后ATP含量均高于1组.结论:在灌洗液、保存液及再灌液中加入Co-Q10能使供心冷保存和再灌注后,ATP维持较高水平,对供心有良好保护作用,值得临床使用.
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以逆境生理理论分析肿瘤的发病机制
1 引言1.1 肿瘤发生与细胞受损及功能异常密切相关病因学研究表明,外在化学、物理、生物等因素均可能使机体细胞受到损害;内环境紊乱、免疫功能下降等则使机体抗肿瘤能力降低.内外因素共同作用致基因突变,突变细胞降低生长因子需求,表现出肿瘤细胞的不死性特点.细胞膜葡萄糖转运增强、ATP酶活性增高、细胞内无氧代谢增强及特异性肿瘤标志物分泌等特点表明肿瘤细胞存在细胞功能异常.细胞功能异常和肿瘤发生密切相关.
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低氧培养对小鼠胚胎成纤维细胞生长和线粒体分布及功能的影响
目的 研究低氧培养条件对小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs)的生长和线粒体分布及功能的影响.方法 将MEFs分为20％氧浓度的常氧培养组和5％氧浓度的低氧培养组连续培养,每24小时采用台盼蓝染色对MEFs活细胞计数;MitoTracker Green对细胞线粒体染色并在激光共聚焦显微镜下观察;腺苷三磷酸(ATP)试剂盒检测ATP合成.结果 对数生长期低氧培养组活细胞数高于常氧培养组,差异有统计学意义(P＜0.05);并且低氧培养组细胞内线粒体核周分布型比例高于常氧培养组,差异有统计学意义(P＜0.05);同时两组细胞内ATP水平比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 低氧培养条件影响线粒体在MEFs细胞内的分布和能量的合成,对细胞生长的促进作用高于常氧培养.
