首页 > 文献资料
-
人PD-L1真核表达载体的构建及结肠癌细胞稳定表达单克隆株的筛选和鉴定
目的:构建人程序性死亡配体1(PD-L1)重组质粒载体,筛选稳定高表达人PD-L1的结肠癌单克隆细胞株.方法:提取HCT116细胞总RNA,RT-PCR克隆PD-L1基因片段,将其重组至含有HA标签和Neo真核细胞筛选抗性的pcDNA3质粒载体上,转染HCT116细胞,倍比稀释8个细胞浓度至96孔板,G418筛选两周,挑取单细胞克隆,通过免疫印迹鉴定外源性PD-L1的表达;通过MTS、Transwell和软琼脂细胞克隆形成实验比较PD-L1低表达和高表达单克隆细胞株生长增殖、迁移和细胞克隆形成能力的差别;后通过在两组细胞中过表达帽依赖性荧光素酶报告基因阐述造成上述表型的可能机制.结果:成功构建人PD-L1的真核表达载体,并筛选获得稳定高表达PD-L1的HCT116单克隆细胞株.功能研究初步证明PD-L1可促进细胞克隆形成能力、迁移和生长增殖.过表达PD-L1可使帽依赖性荧光素酶报告基因的表达上调约3～4倍,表明其机制部分为PD-L1可上调帽依赖性蛋白质翻译.结论:获得了PD-L1重组质粒载体及可用于后续功能研究的稳定高表达人PD-L1的HCT116单克隆细胞株.
关键词： PD-L1 重组质粒载体 稳定高表达结肠癌单克隆细胞株 -
PD-L1对肺癌细胞迁移能力的影响
目的:探索PD-L1在肺癌细胞中的表达及其对细胞迁移能力的影响.方法:采用流式细胞术检测不同病理类型肺癌细胞株表面PD-L1分子表达水平,分别选择高、中、低表达的细胞株,后添加细胞因子诱导肺癌细胞株,采用免疫印迹术筛选出能够提高肺癌细胞株PD-L1分子表达水平的细胞因子;采用siRNA干扰技术,下调中、高表达PD-L1的肺癌细胞株中PD-L1的分子表达水平,transwell实验检测细胞迁移能力改变.结果:PD-L1在细胞株HCC827、H1299、A549(腺癌)、H226、H520(鳞癌)、H460(大细胞癌)、H446(小细胞癌)表面的表达水平分别为HCC827、H460(高表达),H1299、H226、H446、H520(中表达),A549(低表达).选择具有transwell迁移能力的腺癌细胞株H1299、A549,分别添加细胞因子IL-4、IL-6、IL-13、TGF-β-1、IFN-γ培养,筛选出TGF-β-1、IFN-γ两种因子能够上调肺癌细胞株PD-L1的表达水平,transwell实验结果显示细胞迁移能力较对照组显著增强.si-PD-L1干扰肺癌细胞株PD-L1表达后,PD-L1的表达水平明显下调,细胞迁移能力较对照组显著减弱;TGF-β-1、IFN-γ诱导细胞株PD-L1表达水平上调后能够引起细胞迁移能力增强,经siRNA干扰后,PD-L1表达水平下调,细胞迁移能力随之显著减弱.结论:PD-L1的表达能促进肺癌细胞的迁移,可能参与肺癌转移过程.
-
RNAi沉默肺腺癌A549细胞系PD-L1基因表达对其增殖和凋亡的影响
目的:沉默肺癌细胞系A549的程序性死亡配体l(programmed death ligand 1,PD-L1)基因,观察其对A549细胞增殖和凋亡的影响.方法:构建PD-L1 shRNA重组质粒pGPU6/PD-L1,并应用脂质体转染法将其转染入A549细胞.RT-PCR法检测PD-L1基因的表达;Western blotting法检测PD-L1蛋白的表达;MTT法检测pGPU6/PD-L1对A549细胞增殖的影响;Annexin Ⅴ-FITC/PI双染法检测pGPU6/PD-L1对A549细胞凋亡的影响.结果:成功将pGPU6/PD-L1转染入A549细胞;RT-PCR结果显示pGPU6/PD-L1使A549细胞PD-L1基因表达水平降低;Western blotting结果显示pGPU6/PD-L1转染A549细胞使PD-L1蛋白表达减少;MTT结果显示pGPU6/PD-L1能够抑制A549细胞增殖;Annexin Ⅴ-FITC/PI双染法检测结果显示pGPU6/PD-L1能够诱导A549细胞凋亡.结论:pGPU6/PD-L1能够下调肺癌细胞A549 PD-L1的表达,抑制细胞增殖,并诱导细胞凋亡.
-
CIK细胞对RNAi沉默PD-L1基因的肺腺癌A549细胞的体外抑制作用
目的:观察沉默肺癌A549细胞的程序性死亡受体1(programmed death ligand 1,PD-L1)基因表达后,CIK细胞对其体外抑癌的作用.方法:分离外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),加入细胞因子(cytokine,CK),体外细胞因子诱导为杀伤细胞(cytokine induced killer cells,CIK cells).将已构建的PD-L1 shRNA重组质粒pGPU6/PD-L1,应用脂质体转染法转染入A549细胞.RT-PCR法检测PD-L1基因的表达;Western blotting法检测PD-L1蛋白的表达;CCK8法检测CIK细胞对各组A549细胞的杀伤率.结果:成功将pGPU6/PD-L1转染入A549细胞;RT-PCR结果显示pGPU6/PD-L1使A549细胞PD-L1基因表达水平降低;Western blotting结果显示pGPU6/PD-L1转染A549细胞使PD-L1蛋白表达减少;CCK8结果显示pGPU6/PD-L1能够增强CIK细胞对A549细胞的体外抑瘤能力.结论:下调肺癌细胞A549的PD-L1 mRNA表达,MTT证明能够增强CIK细胞对其体外杀伤作用.
-
结肠癌中PD-L1的表达及其与临床病理和预后的关系
目的:探讨程序性死亡因子配体1(PD-L1)的表达与结肠癌临床病理及预后的关系.方法:收集术前未予化疗治疗的临床病例资料齐全的原发性结肠癌病例80例,分别取其癌组织、癌旁组织、正常组织,采用免疫组化法检测PD-L1的表达.比较PD-L1表达与年龄、肿瘤大小、TNM分期、组织学分级、淋巴结转移、远处转移之间的关系,并结合随访资料分析PD-L1表达与否和预后的关系.结果:80例癌组织标本中,22例(27.5％)高表达PD-L1,24例(30.0％)中度表达PD-L1,34例(42.5％)弱表达或无PD-L1染色.癌旁和正常组织中PD-L1阳性表达率分别为9例(11.3％)和5例(6.3％).PD-L1的表达与TNM分期(P =0.009)、淋巴结转移(P=0.000)、远处转移(P=0.014)呈正相关.PD-L1在年龄、性别、组织学分级和肿瘤大小中表达差异无统计学意义(P＞0.05).Cox多变量分析显示:TNM分期晚、分化程度低、淋巴结或远处转移、PD-L1表达阳性是影响预后的独立危险因素.结论:PD-L1在结肠癌组织中表达明显升高,并与淋巴结转移及预后生存密切相关.
-
PD－L1、Ki67预测非小细胞肺癌术后进展的研究
目的：探讨在非小细胞肺癌组织中PD－L1、Ki67表达水平，分析其与术后进展及临床病理参数的关系。方法：应用免疫组化法检测术后肿瘤组织中PD－L1、Ki67蛋白的表达水平。结果：94例患者中 PD －L1阳性表达为44例（46．81％），阴性表达50例（53．19％）。Ki67高表达33例（35．11％），低表达61例（64．89％）。PD－L1表达与Ki67表达具有相关性（χ2＝8．05，P＝0．01）。PD－L1阳性表达组术后无进展（PFS）生存期为（21．86±2．93）个月，阴性表达组为（35．69±3．08）个月，两组比较具有统计学差异（χ2＝10．60，P＝0．00）。Ki67高表达组术后PFS为（21．01±2．76）个月，低表达组为（33．11±2．92）个月，两组比较具有统计学差异（χ2＝5．69，P＝0．02）。PD－L1表达水平与肿瘤病理类型、肿瘤分化程度及术后肿瘤进展相关（P＜0．05）。Ki67表达与患者性别、病理类型及肿瘤分化程度相关（P＜0．05）。多因素分析发现TNM分期、肿瘤分化程度、PD－L1对非小细胞肺癌术后PFS影响具有统计学差异（P＜0．05）。结论：非小细胞肺癌中PD－L1和Ki67蛋白是预测肿瘤术后进展的重要指标，且表达越高预示术后PFS越短。
-
PD-L1表达与食管癌预后相关性的Meta分析
目的：分析程序死亡性因子配体1（ PD-L1）表达评估食管癌预后的价值。方法：通过PubMed、the Cochrane Library、Web of science、万方数据库和中国期刊全文数据库，检索PD-L1与食管癌预后相关性队列研究。提取资料，采用RevMan5.3进行Meta分析。结果：纳入6项研究，1119例食管癌患者。分析显示PD-L1高表达者的死亡风险高（ HR＝1.90，95%CI：1.28~2.81，P＝0.001）。PD-L1表达水平与性别、肿瘤浸润程度（T）、区域淋巴结转移（N）、TNM分期无明显关联，而与远处转移（M）有显著相关性（P＝0.03）。结论：PD-L1高表达是食管癌预后危险因素，提示其可能为食管癌预后标记物和潜在治疗目标。
-
Gab1与PD-L1在胆管癌中的表达及意义
目的：免疫组化检测Gab1和PD-L1在胆管癌、癌旁组织和正常胆管组织中的表达水平，探讨它们在胆管癌中的表达及意义。方法：收集胆管癌组织70例，胆管癌旁组织30例，正常胆管组织30例。用免疫组化的方法检测Gab1与PD -L1的表达情况。结果：胆管癌组Gab1蛋白平均光密度分析值为0.1657±0.0251，癌旁组为0.1453±0.0177，正常组为0.1021±0.0115。胆管癌组PD-L1平均光密度为0.2211±0.0279，癌旁组为0.1971±0.0372，正常组为0.1754±0.0146。Gab1与PD-L1在胆管癌组、癌旁组、正常胆管组中表达均为逐渐减弱的趋势，有显著的组间差异（ P﹤0.05）。胆管癌组织中Gab1与PD-L1表达呈正相关（ r＝0.3011，P﹤0.05）。结论：Gab1在胆管癌组织中的表达随PD-L1的升高而升高，呈正相关关系。Gab1与PD-L1蛋白与胆管癌的发生、发展有关。
-
头颈部原发性黏膜恶性黑色素瘤患者PD－L 1表达及其临床相关因素分析
目的：探讨头颈部原发性黏膜恶性黑色素瘤患者程序性细胞死亡配体1（PD－L1）表达及其临床意义。方法：研究采用免疫组化检测45例头颈部原发性黏膜恶性黑色素瘤样本PD－L1表达，分析其表达与患者临床病理学特征及疾病预后的关系。结果：所有患者均接受手术切除治疗联合干扰素治疗。随访患者5年生存率为44．4％（20／45），平均生存期为51个月，无复发生存期为23个月。免疫组化染色证实57．8％（26／45）肿瘤样本为 PD －L1高表达，显著多与临近非肿瘤组织（P＝0．0037）。PD－L1表达与患者年龄（P＝0．09）、性别（P＝0．16）、肿瘤分布（P＝0．08）无关，而PD－L1阳性患者的无复发生存期显著短于阴性患者（P＝0．027）。多变量分析证实PD－L1高表达是头颈部原发性黏膜恶性黑色素瘤患者预后不良独立标志物。结论：PD－L1高表达与头颈部原发性黏膜恶性黑色素瘤进展和预后不良密切相关，可以作为该疾病的预后标志物。
-
银屑病与PD-1相关性研究进展
银屑病(psoriasis)是一种常见免疫介导的,与遗传、代谢等多种因素相关的疾病,目前病因不明.近来越来越多的研究证明了PD-1(Programmed cell death 1)作为表达于效应T细胞表面的免疫受体,在银屑病炎症反应中发挥着重要作用.而其配体PD-L1在银屑病表皮中表达,也与疾病发病息息相关.本文主要从PD-1信号通路,就银屑病发病机制及其对应的治疗进展作一综述.
-
PD-1/PD-L1抑制剂在肿瘤免疫治疗中的研究进展
随着对肿瘤免疫治疗的研究深入,人们发现PD-1/PD-L1信号通路是造成肿瘤发生免疫逃逸从而引起肿瘤发生发展的一个重要因素.PD-1/PD-L1通路的激活能负向调控机体T细胞功能,使得机体免疫系统功能缺失,肿瘤细胞逃逸,进而肿瘤得以发展.PD-1/PD-L1抑制剂可特异性阻断PD-1与PD-L1的结合,恢复T细胞的免疫功能,在提高肿瘤患者的缓解率及生存期中发挥了重要的作用,也为肿瘤的免疫治疗提供了新思路新方法.
关键词： PD-1 PD-L1 PD-1/PD-L1抑制性抗体 肿瘤 免疫治疗 -
PD-L1在急性髓系白血病中的表达及临床意义
目的 探究程序性死亡分子1配体-1(PD-L1)在急性髓系白血病(AML)中的表达作用和临床意义.方法 选取2013年1月～2016年12月在我院进行治疗并确诊为AML的初治患者49例为观察组,选择同期在我院接受治疗的27例非恶性疾病如缺铁性贫血、巨幼细胞性贫血者作为对照组.对比两组患者血液中的PD-L1表达水平,分析患者性别、年龄、初诊白细胞计数、亚型的对血液中PD-L1的影响,确定PD-L1表达与临床疗效的相关性.结果 对照组患者治疗前的PD-L1表达与观察组比较,差异无统计学意义(>0.05).治疗后,观察组的PD-L1表达高于对照组,统计学意义显著(<0.01).单因素结果显示,PD-L1在AML初诊患者中的表达水平与患者的性别、年龄、初诊WBC数、分型无相关性(>0.05);未缓解AML患者组PD-L1表达水平高于持续完全缓解组AML患者(<0.01).结论 PD-L1可能参与AML的免疫逃逸机制,并可能与病情进展及治疗效果相关.
-
共抑制分子PD-1在母胎免疫中的研究进展
程序细胞死亡分子1(programmed cell death 1,PD-1)属B7/CD28家族成员,对T细胞活化与功能具有负向调节作用.PD-1缺陷小鼠可诱发炎症因子的产生,阻断PD-1/PDL信号通路的形成可促进免疫应答的形成,表明PD-1在外周耐受的过程中发挥着重要的作用.因此,以PD-1为研究点对阐明母胎免疫耐受的形成具有重要的意义.
-
PD-L1作为PD-1靶向药物治疗非小细胞肺癌疗效预测生物标志的意义及其局限性
近两年来,以PD-1/PD-L1为主的免疫检查点抑制剂药物的研究与应用迅速兴起,PD-L1蛋白与免疫细胞受体PD-1结合可传导抑制性信号,降低T细胞的免疫功能,从而使肿瘤发生免疫逃逸.在非小细胞肺癌(NSCLC)的二线治疗方案中,这种疗法能够显著提高患者的总体生存率(OS).目前已上市的PD-1/PD-L1抑制剂有:Nivolumab(Opdivo)、Pembrolizumab(Keytruda)、Atezolizumab(Tecentriq).PD-L1作为目前常用的免疫疗效预测标志物,有临床研究显示肿瘤样本中PD-L1表达越高,PD-1/PD-L1抑制剂的疗效越好.2016年10月24日,FDA批准Keytruda用于PD-L1高表达(>50％)的非小细胞肺癌患者的一线治疗.然而由于免疫组织化学染色的精确度较低及肿瘤PD-L1表达的时空异质性等原因,将PD-L1作为肺癌免疫治疗的预测生物标志物仍有争议.现本文就PD-L1作为预测生物标志物的意义及其局限性作出如下综述.
-
肺腺癌(伴或不伴淋巴结转移)组织中PD-L1表达及其与癌间质中浸润T细胞亚群数量的关系
目的:检测伴或不伴淋巴结转移的肺腺癌组织中PD-L1表达及其与癌间质中浸润T细胞亚群数量的关系,探讨其发生的免疫学机制和预后的评估指标.方法:选取临床手术切除的经病理诊断证实为肺腺癌的87例组织,采用免疫组织化学方法,检测伴或不伴淋巴结转移肿瘤组织内CD4+、CD8+、PD-L1表达情况,应用统计学分析.结果:在不伴淋巴结转移肺腺癌组织的细胞簇中CD4+和CD8+细胞均较伴淋巴结转移肿瘤组织中略微增多.在伴淋巴结转移的肺腺癌组织中CD8+细胞比CD4+细胞明显减少(P<0.05).在伴淋巴结转移的肺腺癌组织中CD4/CD8比率较无淋巴结转移肿瘤簇中明显减少(P<0.05),且PD-L1的表达较不伴淋巴结转移的肿瘤蔟中明显增多(P<0.05).结论:PD-L1在伴淋巴结转移的肺腺癌中表达增多,CD8+、CD4+淋巴细胞减少.这种免疫逃逸机制可能在肺腺癌发生与转移中起重要作用.
-
基于免疫抑制性受体的血液肿瘤靶向免疫治疗研究
T细胞免疫功能缺陷导致多数血液肿瘤患者不能产生有效的抗肿瘤免疫应答,从而逃避宿主免疫系统的攻击,即肿瘤细胞免疫逃逸.近年来认为肿瘤免疫抑制为重要的机制之一是CD8+T细胞的功能耗竭,主要为免疫细胞异常表达程序性死亡分子1(PD-1)和细胞毒性T淋巴细胞相关抗原(CTLA-4)等免疫抑制所介导,而阻断此通路可以使T细胞部分或全部恢复功能.文章介绍近年来血液肿瘤中PD-1和CTLA-4及二者在介导T细胞免疫耐受中的作用及其在靶向治疗研究中的进展,为血液肿瘤的免疫靶向治疗提供新的思路.
-
布鲁氏菌病患者中PD-1和PD-L1的表达特点分析
目的 观察布鲁氏菌病患者血清PD-1和PD-L1的表达特点.方法 选取我院2015年6月-2017年3月期间收治的53例布鲁氏菌病患者(研究组)和同期来我院接受健康体检的50例健康体检者(对照组)作为研究对象,采集两组对象血液标本,检测PD-1、PD-L1表达水平.再根据病程的不同将研究组患者分为急性期组和慢性期组,对比两个亚组患者的PD-1、PD-L1表达水平.结果 研究组的PD-1、PD-L1表达水平分别为(25.09±4.82)％、(48.52±6.69)％,高于对照组的(10.98±5.01)％、(20.17±3.50)％(P<0.05).急性期组的PD-1、PD-L1表达水平分别为(33.72±5.13)％、(54.43±6.80)％,高于慢性期组的(17.60±4.88)％、(42.39±6.38)％(P<0.05).结论 布鲁氏菌病的发生可导致血清PD-1和PD-L1明显升高,且PD-1和PD-L1的表达水平会随着病程变化而变化.
-
肝细胞癌组织PD-L1表达特点及其临床病理特征
目的 探讨PD-L1在肝细胞癌中的表达特点及其表达水平与临床病理学之间的关系.方法 选取47例肝移植术后确诊为肝细胞癌的病理标本,对其进行PD-L1免疫组化检测,对PD-L1表达与性别、年龄、大小、分化程度、个数、血管侵犯、肝硬化、血清AFP等临床病理学因素之间相关性进行统计学分析.结果 在47例肝癌患者中,13例PD-L1表达阳性(阳性细胞计数>1%),阳性率为27.7%,几乎全部为免疫细胞表达;肝癌PD-L1表达水平与分化程度有关,分化程度越低,PD-L1表达越高(P=0.017),但与性别、年龄、大小、个数、血管侵犯、肝硬化、血清AFP等因素均无关.结论 肝癌PD-L1表达水平与其他癌种比较中并不算高,其与患者临床病理特征存在一定的相关性.阻断PD-1/PD-L1通路将成为晚期肝癌免疫治疗的新途径,肝癌组织PD-L1可能会成为预测其疗效的生物标志物.
-
PD-L1和PD-1在胃癌组织中的表达及其临床意义
目的：：探究在胃癌组织中PD-L1和PD-1表达情况及其临床应用意义。方法：2013年1月至2015年6月期间，我院接受根治手术治疗的胃癌患者80例手术区标本作为观察组，选取患者的癌旁组织标本作为对照组，对比患者的临床指标情况。结果：观察组标本的PD-L1和PD-1指标的阳性率分别为62.5％（50/80）、38.8％（31/80），对照组组织的PD-L1和PD-1指标的阳性率均为0，两个指标表达情况没有相关性，其中PD-L1指标与患者的浸润情况、淋巴结转移情况以及pTNM分期情况密切相关，而PD-1表达与该类指标不相关。结论：在胃癌组织中PD-L1和PD-1指标有明显的升高，并且PD-L1指标与肿瘤的进展以及预后情况密切相关，值得在胃癌诊治中指导应用。
-
关于癌症免疫治疗及其在三阴性乳腺癌治疗的进展
目前癌症免疫疗法主要分为四大类,过继细胞,免疫检查点阻滞剂,非特异性免疫激活剂与癌症疫苗.因篇幅限制,本文将着重综述免疫检查点阻滞疗法.目前乳腺癌以综合治疗为主,包括手术、化疗、放疗、靶向、内分泌治疗,基于如此强大的综合治疗,乳腺癌已成为目前世界上能得到临床治愈的实体肿瘤之一,但三阴性乳腺癌因缺乏性激素受体及HER-2故无法从内分泌和分子靶向治疗中获益,且因其较强的生物学特性,导致其具有较高的复发率及远处转移率,是乳腺癌中预后差的类型,本文将综述目前有关免疫检查点阻滞疗法的新发现及相关机制,从而展望未来三阴性乳腺癌免疫治疗的可能.
