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肺腺癌中PD-1、PD-L1蛋白表达与K-RAS基因突变状态的相关性分析
目的 探讨肺腺癌程序性死亡分子-1 (programmed death 1,PD-1)、程序性死亡分子配体-1(programmed death ligand 1,PD-L1)蛋白的表达与K-RAS基因突变的相关性.方法 采用免疫组化EnVision两步法检测PD-1、PD-L1蛋白的表达,应用实时荧光定量PCR技术检测K-RAS基因的突变类型.结果 肺腺癌组织中PD-1、PD-L1的阳性率均高于良性病变肺组织(P＜0.01),PD-1、PD-L1蛋白表达与患者性别、年龄、吸烟史、分化程度、淋巴结转移及TNM分期均无相关性(P＞0.05).36例肺腺癌样本中发生K-RAS基因突变者8例(22.2％),K-RAS基因突变与患者性别、年龄、吸烟史、分化程度、淋巴结转移及TNM分期均无关(P＞0.05).相关分析显示PD-1、PD-L1蛋白表达与K-RAS突变无关(P＞0.05).结论 PD-1、PD-L1蛋白在肺腺癌中的表达明显高于良性病变肺组织,但两者表达程度与肺腺癌的临床病理特征及K-RAS基因突变无关.
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食管鳞状细胞癌中PD-L1的表达及其预后意义
目的 分析PD-L1表达与食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)临床病理因素的相关性和预后价值.方法 采用免疫组化法检测253例ESCC组织中PD-L1的表达,PD-L1阳性分别被定义为1％与5％的肿瘤细胞阳性.Kaplan-Meier法构建生存曲线,单因素和多因素Cox回归模型分析独立的预后因素.结果 肿瘤表达PD-L1的患者有预后较好的趋势,但差异无统计学意义(P＞0.05).把患者分为Ⅰ+Ⅱ期(60.9％,154/253)和Ⅲ+Ⅳa期(39.1％,99/253)两个亚组,在Ⅰ+Ⅱ期患者中,PD-L1表达是独立的预后因子,提示患者预后较好(1％为分界值,P=0.046和0.021;5％为分界值,P=0.011和0.004);而在Ⅲ+Ⅳa期患者中,PD-L1表达与患者预后无明显相关性(1％为分界值,P=0.586和0.682;5％为分界值,P =0.807和0.620).结论 不同分期的ESCC中,PD-L1表达的预后意义存在差异.在Ⅰ+Ⅱ期患者中,PD-L1表达是独立的预后因子,而在Ⅲ+Ⅳa期患者中无预后意义.
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人乳腺癌中共刺激分子PD-L1、PD-L2的表达及其临床意义
目的 探讨共刺激分子PD-L1、PD-L2在人乳腺癌的表达及其与临床病理特征、预后的相关性.方法 采用免疫组化SP两步法检测PD-L1、PD-L2在10例正常乳腺组织、18例乳腺导管内癌和40例乳腺浸润性导管癌中的表达,并分析两种共刺激分子的表达与乳腺癌患者临床病理特征的关系.结果 正常人乳腺腺上皮不表达PD-L1和PD-L2,乳腺导管内癌弱表达PD-L1和PD-L2,乳腺浸润性导管癌中PD-L1和PD-L2的阳性率分别为45％ (18/40)、35％ (14/40),显著高于PD-L1和PD-L2在乳腺导管内癌的表达.统计学分析结果显示PD-L1和PD-L2表达与乳腺癌淋巴结转移(P＜0.05)密切相关.PD-L1和PD-L2表达与ER、PR表达(P＜0.05)有相关性,但PD-L1、PD-L2表达与乳腺癌其他临床病理特征无相关性.PD-L1和PD-L2表达在ER、PR、HER-2均阴性的乳腺癌患者中高表达,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 人乳腺癌癌细胞异常表达PD-L1和PD-L2,且与淋巴结转移密切相关;PD-L1和PD-L2有望成为乳腺癌免疫治疗的潜在靶点.
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RNAscope技术在非小细胞肺癌PD-1、PD-L1表达分析中的应用价值
目的 探讨RNAscope技术对非小细胞肺癌PD-1、PD-L1表达分析中的应用价值.方法 采用免疫组化与RNA-scope技术分别检测PD-1、PD-L1蛋白及mRNA的表达情况.结果 采用免疫组化EnVision两步法检测64例非小细胞肺癌患者中PD-1、PD-L1的阳性率分别为54.7％和28.1％,RNAscope方法检测PD-1、PD-L1的阳性率分别为40.6％和35.9％,统计学分析显示两种方法的检测结果差异无统计学意义(P＞0.05).一致性分析结果显示,两种方法检测PD-1的Kappa值为0.171,一致性差;PD-L1的Kappa值为0.608,一致性一般.结论 RNAscope技术作为一种新兴的检测技术需要更多的实验研究来证实其应用价值.
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RNAscope技术对非特殊型浸润性乳腺癌中PD-1、PD-L1表达分析的应用
目的 探讨RNAscope技术在检测非特殊型浸润性乳腺癌PD-1、PD-L1表达中的应用价值.方法 采用免疫组化法与RNAscope技术分别检测PD-1、PD-L1蛋白及mRNA的表达.结果 免疫组化法检测60例非特殊型浸润性乳腺癌中PD-1、PD-L1的阳性率分别为55.0％ (33/60)和28.3％(17/60),RNAscope技术检测非特殊型浸润性乳腺癌中PD-1、PD-L1阳性率分别为56.7％ (34/60)和30.0％ (18/60),两种方法差异无显著性(P=1.000).一致性分析结果显示,两种方法检测PD-1的Kappa值为0.831,一致性好;PD-L1的Kappa值为0.879,一致性好.结论 RNAscope技术和免疫组化法在检测非特殊型浸润性乳腺癌PD-1、PD-L1表达的一致性接近100％,为今后临床筛选用药患者的检测方法提供了基础的临床数据.
关键词： 乳腺肿瘤 非特殊型浸润性乳腺癌 RNAscope技术 PD-1 PD-L1 -
PD-1及其配体在实体肿瘤中的应用
程序性死亡生长因子-1( PD-1/CD279)是新近研究的热门分子,PD-1与其配体PD-L1/2(B7-H1/CD274)终导致淋巴细胞“耗尽”以及诱导免疫耐受。 PD-L1在肿瘤细胞中可呈高表达,其异常表达与患者预后密切相关。近越来越多的研究关注于PD-1、PD-L1/2在各类实体肿瘤中的表达,日前美国食品及药物管理局 FDA 批准 Keytruda ( pembroli-zumab)用于治疗对其它药物治疗无效的晚期或无法切除的黑色素瘤患者,其机制是Keytruda能阻断PD-1细胞通路,这些均提示针对PD-1、PD-L1/2分子治疗可能成为肿瘤治疗的突破点,且PD-1、PD-L1/2在实体肿瘤的表达可能成为预后评估新生物学的标志物。该文现就PD-1、PD-L1/2在肿瘤中的研究新进展作一综述。
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肺腺癌中PD-L1、B7 H3的表达与EGFR基因突变的关系
目的 探讨程序性凋亡配体1(programmed death-ligand 1,PD-L1)、B7H3在肺腺癌中的表达与表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因突变状况的关系,为EGFR基因突变的肺腺癌患者提供一种新的临床治疗方法.方法 收集78例手术切除的肺腺癌组织,所有标本均有EGFR基因检测结果.应用免疫组织化学PV-6000法检测PD-L1、B7H3的表达情况.结果 肺腺癌组织中有32例(41.0%)发生EGFR突变,其中女性的突变率高于男性(30.8%vs 10.3%,P<0.05),不吸烟者比吸烟者有更高的突变率(28.2%vs12.8%,P<0.05).PD-L1、B7H3在EGFR突变型患者中的阳性率分别为71.9%、68.8%,均高于其在野生型患者中的发生率45.7%、43.5%(P<0.05),且均与21外显子突变密切相关(P<0.05),但未发现与19外显子突变相关(P>0.05).PD-L1在女性、不吸烟者及Ⅱ~Ⅲ期中的表达水平高于男性、吸烟者及I期患者(P<0.05).B7H3的表达与TNM分期及淋巴结转移情况相关(P<0.05).PD-L1与B7H3表达呈正相关关系(P<0.05).结论 PD-L1、B7H3高表达在EGFR突变型肺腺癌的发生发展中起重要作用,以PD-L1、B7H3为靶点的免疫治疗,可能成为这部分患者治疗的新方法.
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PD-1/PD-L1途径在慢性病毒感染中的作用
程序性死亡因子配体-1(PD-L1)分子是B7超家族的重要成员,在单核细胞、树突状细胞及大部分外周组织可以广泛诱导性表达.PD-L1可以和程序性死亡-1(PD-1)及CD80受体结合调节淋巴细胞的功能.PD-1/PD-L1信号在病毒感染后效应T细胞免疫耐受中具有重要作用,并且预示阻断该途径可能是抗病毒感染治疗的方向之一.
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系统性红斑狼疮患者外周血中性粒细胞PD-L1表达和临床意义
目的 探讨程序性死亡配体1(PD-L1)在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血中性粒细胞上的表达及临床意义.方法 应用流式细胞仪检测77例SLE患者和43例健康对照者外周血中性粒细胞表面PD-L1表达百分率,比较SLE组和对照组之间以及SLE活动组和稳定组中性粒细胞表面PD-L1表达百分率,分析其与SLE临床表现及实验室检查指标的相关性,并检测10例SLE患者治疗前后中性粒细胞PD-L1的表达.结果 ① SLE组外周血PD-L1+中性粒细胞百分率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.000 1);活动组PD-L1+中性粒细胞百分率高于稳定组,差异有统计学意义(P=0.002 7).② SLE患者PD-L1+中性粒细胞百分率与SLE疾病活动性评分(SLEDAI)、抗核抗体(ANA)、免疫球蛋白G(IgG)、红细胞沉降率(ESR)呈正相关性,与红细胞计数(RBC)、血红蛋白(HGB)浓度、红细胞压积(HCT)呈负相关性,对这些呈线性相关的变量进行线性回归分析显示SLE患者PD-L1+中性粒细胞百分率与ANA和ESR的线性回归差异有统计学意义(P=0.020、0.005).以外,在低补体3(C3)组和低白细胞计数(WBC)组中,SLE患者PD-L1+中性粒细胞百分率与C3、WBC呈负相关性.SLE患者中低WBC、低血小板计数(PLT)、高中性粒细胞数、高中性粒细胞百分比阳性组PD-L1+中性粒细胞百分率均高于对应的阴性组,差异均有统计学意义(P<0.05).③ SLE患者发热、皮肤表现、低白细胞血症、低红细胞血症、低血小板血症、贫血和血尿阳性组PD-L1+中性粒细胞百分率均高于对应的阴性组,且差异均有统计学意义(P<0.05).④ SLE患者有效治疗后PD-L1+中性粒细胞百分率降低(P<0.01).结论 SLE患者外周血中性粒细胞表面PD-L1表达异常,与疾病的活动性和严重程度以及抗体产生有关.
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PD-L1和 PD-1在胃癌组织中的表达及其临床意义
目的：探讨程序性死亡配体-1（PD-L1）和程序性死亡受体-1（PD-1）在胃癌组织中的表达及其与患者临床病理特征的关系。方法收集151例行胃癌根治术患者的肿瘤组织标本及其对应的74例转移淋巴结标本，以及20例癌旁组织标本，采用免疫组织化学法检测其中 PD-L1和 PD-1蛋白表达，并分析其与患者各项临床指标关系。结果 PD-L1和PD-1在胃癌细胞及癌间质淋巴细胞表达较癌旁组织明显升高，阳性率分别为60.93%和38.41%；癌旁组织不表达 PD-L1和 PD-1；在转移淋巴结的表达与对应肿瘤组织一致，一致率分别为82.43%和87.84%。胃癌组织 PD-L1和 PD-1表达不相关。PD-L1表达与 pTNM 分期、浸润层面、淋巴结转移情况及脉管癌栓相关（P <0.05），PD-1与各临床指标不相关。结论 PD-L1和 PD-1在胃癌组织中表达显著升高，并与胃癌患者临床病理特征密切相关；PD-L1可能成为预测胃癌进展和预后的新分子标志物，阻断 PD-L1/ PD-1信号通路有望成为胃癌免疫治疗的新策略。
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人P D-L1基因启动子克隆及其荧光素酶报告基因载体的构建
目的：对人源PD-L1基因启动子进行PCR扩增，构建PD-L1荧光素酶报告基因。方法：用PCR扩增方法获得PD-L1基因启动子；PD-L1启动子和载体行KpnⅠ、XhoⅠ酶切、连接和转化，然后行菌落PCR以及测序等。构建成功后转染至A549细胞中并检测PD-L1启动子活性。结果：经PCR方法扩增出PD-L1基因启动子片段，；菌落PCR鉴定各重组体构建正确并经生工测序成功；瞬时转染A549细胞后经报告基因检测得知所克隆的不同片段序列具有启动子活性。结论：成功克隆PD-L1基因启动子，构建出不同片段基因启动子荧光素酶报告基因，为进一步研究其分子机制提供详实基础。
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非小细胞肺癌58例PD-L1和CD8的表达及临床意义
目的 探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者的PD-L1和CD8表达,通过肿瘤微环境的免疫分型,为非小细胞肺癌患者的免疫治疗提供依据.方法 收集经病理诊断为NSCLC的58例肿瘤组织蜡块,患者多为Ⅰ期腺癌.用免疫组化染色法查看肿瘤组织的程序性死亡受体-配体1(programmed death-ligand 1,PD-L1)表达及CD8+T细胞的肿瘤浸润情况.根据PD-L1和CD8的表达情况,将肿瘤免疫微环境分为四型:Ⅰ型(PD-L1+ CD8+)、Ⅱ型(PD-L1-CD8-)、Ⅲ型(PD-L1+ CD8-)、Ⅳ型(PD-L1-CD8+),并分析患者临床特征与免疫分型的关系.结果 58例NSCLC患者中PD-L1阳性率为74.14％ (43/58),CD8+T细胞轻度浸润的占60.34％ (35/58)、中度浸润的占29.31％ (17/58)、重度浸润的占1.72％ (1/58).按肿瘤免疫微环境进行免疫分型,Ⅰ型的占72.41％ (42/58)、Ⅱ型的占6.90％ (4/58)、Ⅲ型的占1.72％(1/58)、Ⅳ型的占18.97％ (11/58).结论 NSCLC患者在早期可能就已有PD-L1上调表达,若要进行PD-1/PD-L1单抗免疫治疗,好先进行PD-L1表达和CD8+T细胞浸润等免疫微环境指标的分型检测,以提高治疗有效率.
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细胞因子IL-2、INF-α、INF-γ对膀胱癌细胞株PD-L1表达的影响
目的 探讨细胞因子IL-2、INF-α、INF-γ对膀胱癌细胞株T24、5637、BIU-87中PDL1表达的影响.方法 采用免疫组化染色法检测膀胱癌细胞株T24、5637、BIU-87及永生化膀胱上皮细胞组SV-HUC-1中PD-L1的表达.采用半定量RT-PCR和Western blot法检测细胞因子IL-2、IFN-α和IFN-γ刺激下T24、5637、BIU-87及SV-HUC-1细胞PD-L1 mRNA和蛋白水平变化.结果 T24、5637、BIU-87细胞PD-L1表达阳性,SV-HUC-1细胞中PD-L1表达阴性;IFN-α、IL-2和IFN-γ均可上调T24、5637、BIU-87细胞PD-L1 mRNA和蛋白的表达,但对SV-HUC-1细胞作用不明显(P＜0.05).结论 细胞因子IL-2、IFN-α和IFN-γ可上调T24、5637、BIU-87细胞PD-L1 mRNA和蛋白的表达水平,但对SVHUC-1细胞作用不明显.
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PD-L1及TGF-β在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义
目的 探讨在非小细胞肺癌(NSCLC)中PD-L1及TGF-β表达水平,及其与NSCLC临床病理参数和术后无病生存期(DFS)的关系.方法 收集81例NSCLC标本,采用免疫组化方法检测术后肿瘤组织中PD-L1、PD-1、Foxp3+和TGF-β蛋白的表达水平.结果 81例患者中PD-L1阳性表达为46例(56.8%),阴性表达35例(43.2%).TGF-β阳性36例(44.4%),阴性45例(55.6%).PD-1阳性33例(40.7%),阴性48例(59.3%);Foxp3+阳性44例(54.3%),阴性37例(45.7%).NSCLC中PD-L1蛋白表达与各临床病理参数无明显相关性.单因素分析发现T分期、TGF-β表达、PD-L1表达影响.SCLC术后DFS,具有统计学差异(P<0.05),多因素分析发现T分期、TGF-β表达、PD-L1表达是影响NSCLC术后DFS的独立因素(P<0.05).PD-L1阳性表达组术后DFS为(21.000±1.429)个月,阴性表达组为(14.500±1.615)个月,两组有统计学差异(χ2=6.930,P=0.008).TGF-β阳性组PFS为(14.500±0.813)个月,阴性组为(21.000±1.639)个月,两组有统计学差异(χ2=8.71,P=0.003).结论 非小细胞肺癌中PD-L1及TGF-β蛋白是预测NSCLC术后DFS的重要指标,且PD-L1表达越高预示术后DFS越长,而TGF-β则表达越高,预示术后DFS越短.
关键词： PD-L1 TGF-β 非小细胞肺癌 无病生存期(DFS) -
PD-L1调节结直肠癌细胞生物学行为的作用研究
目的 探讨PD-L1基因沉默对结直肠癌细胞生物学功能的影响.方法 构建慢病毒转染系统下调PD-L1在直肠癌细胞系中的表达,然后进行流式、侵袭实验、划线实验和细胞毒实验.结果 沉默PD-L1基因后,结直肠癌细胞凋亡率显著增加,细胞的增殖、侵袭和迁移能力在不同程度上受到抑制.结论 PD-L1表达下调可以在体外促进结直肠癌细胞的凋亡,抑制细胞的增殖、侵袭和迁移能力,可以有效抑制癌细胞的恶性生物学行为.
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针对PD-1和PD-L1通路的肿瘤免疫治疗
程序性死亡受体-1 (programmed death recep-tor-1,PD-1)/程序性死亡配体-1(programmed death ligand-1,PD-L1)信号通路是近年来发现的参与肿瘤免疫逃逸的重要途径之一, 并已成为肿瘤免疫治疗的研究热点.PD-1和PD-L1的过度表达提示某些恶性肿瘤预后不良. 针对PD-1和PD-L1通路的单克隆抗体通过提高T淋巴细胞功能已发展为肿瘤免疫治疗, 其临床试验表现出令人深刻的有效率,特别在恶性黑色素瘤、非小细胞肺癌、肾癌以及膀胱癌.
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肝癌组织中PD-L1和HIF-1α的相关性研究
目的:探讨细胞程序化死亡-配体1(PD-L1)和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在肝癌组织中的相关性,研究缺氧信号通路阻断剂YC-1对肝癌细胞中的PD-L1表达的影响.方法:采用免疫组化染色法检测90例肝癌组织中PD-L1和HIF-1α的表达,分析两者之间的相关性.将肝癌细胞Huh7和Hep3B细胞分别置于乏氧培养箱中,对照组加入DMSO,实验组加入50 u mol/L的YC-1,作用48 h后分别提取总RNA和蛋白.用Real-time PCR和Western blot分别检测两组细胞中PD-L1的表达水平.结果:PD-L1和HIF-1α的表达在肝癌组织中呈正相关,阻断缺氧信号通路后PD-L1的表达下调.结论:HIF-1 α信号通路激活是导致肝癌组织中PD-L1表达升高的原因之一,加以阻断可以抑制PD-L1的表达.
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腺相关病毒介导的PD-L1基因转染对大鼠肝移植术后肝脏的保护作用
目的:探讨腺相关病毒(AAV)介导的PD-L1基因转染对大鼠移植肝的保护作用及其可能机制.方法:96只近交系大鼠随机分为等基因肝移植组(G1)、同种异体肝移植组(G2)、AAV空载体组(G3)和PD-L1转染组(G4),每组1 2对.通过大鼠肝移植急性排斥模型,将PD-L1-AAV2-RFP(RFP)经门静脉灌注夹闭法转染供肝,观察移植后大鼠中位生存时间(MST),全自动生化分析仪测定肝功能,在荧光显微镜、光镜同视野下观察RFP在移植肝的表达和病理变化.采用免疫组织化学染色法评估PD-L1蛋白的表达及炎性细胞浸润情况.结果:G1在观察期内全部存活;G2与G3 MST分别为18(17～20)d和18(17～19) d;G4显著延长了移植肝的存活(MST 29 d,P＜0.05).术后14d G4的肝功能及病理变化与术后7dG2和G3相似.G3、G4术后7d中观察到明显的红色荧光,随时间逐渐增强.移植肝PD-L1蛋白的变化趋势与RFP的表达相似.G1移植肝T细胞含量极少;术后14 d G2、G3移植肝CD4+、CD8+、CD25+不同程度淋巴细胞浸润,G4移植肝T淋巴细胞浸润明显减少,尤以CD8+细胞为著,与各组相比差异显著(P＜0.05).结论:腺相关病毒介导的PD-L1基因转染可延长移植肝的存活,其机制可能是PD-L1基因转染增强了PD-L1/PD-1信号通路,通过抑制移植肝CD4+、CD8+、CD25+T细胞浸润及其功能,从而发挥对移植肝的保护作用.
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抗PD-1/PD-L1免疫治疗生物标志物研究进展
抗程序性死亡蛋白-1和程序性死亡蛋白配体-1(PD-L1)免疫检查点抑制剂已在多种实体瘤取得明显疗效,但是单药治疗有效率不高.因此,探寻合适的疗效预测标志物、精准选择潜在获益人群成为目前研究的热点.研究表明,PD-L1表达、肿瘤突变负荷、错配修复基因缺陷等可能与免疫治疗的疗效相关,对这些标志物的深入分析和探索可能为临床筛选免疫检查点抑制剂获益人群提供依据.
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放疗联合抗PD-1及PD-L1抗体在肿瘤治疗中的进展
放疗主要以局部治疗肿瘤被广泛应用于临床,它不仅可以通过损伤DNA直接杀伤肿瘤细胞,而且也对机体的免疫系统产生巨大影响.这种治疗方式不仅有抑制作用,更有激活效应.程序性死亡蛋白-1及其配体-1的抗体作为目前热门的免疫检查点抑制剂,可通过恢复和提高机体T细胞的免疫杀伤功能抑制肿瘤的增长.随着研究的深入,人们发现二者联合应用治疗肿瘤,疗效较单一治疗模式提高.
