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混合抗体型自身免疫性溶血性贫血的血型定型和抗体分析
目的：探讨混合抗体型自身免疫性溶血性贫血( AIHA)的血型定型和抗体情况,以期提高临床诊治水平。方法回顾性分析濮阳市人民医院2009年1月至2013年4月收治的23例AIHA患者,均对患者进行分离血清和红细胞,将红细胞进行轻度热放散和氯喹放散试验,采用血型抗原分型的自身吸收实验,取适当血清,加入等量O型红细胞进行抗体吸收、吸收后的血清用于ABO反定型试验,采用PEG法和自身吸收法对自身抗体进行吸收,比较两者在吸收时间、吸收次数和吸收后抗体情况,采用乙醚放散法进行抗体分析。结果所有患者的ABO血型得到正确确定,15例Rh血型得到确定,2种吸收方法处理后血清抗体结果相近,检测自身抗体中有6例合并同种抗体,其中4例得到确定,2例为不确定,其他的均为单纯自身抗体, PEG吸收法在吸收时间上明显较自身吸收法短。结论轻度热放散和氯喹放散法结合适合于临床上混合抗体型AIHA患者血型定型前红细胞处理。 PEG吸收法快速、简单、吸收效果良好。
关键词： 混合抗体型 自身免疫性溶血性贫血 放散 吸收 氯喹 -
氯喹抑制人结直肠癌干细胞转移能力及机制
目的 观察氯喹(CQ)对结直肠癌干细胞转移能力的影响,并探讨其机制.方法 利用流式细胞仪从LoVo细胞和人结直肠癌小鼠移植瘤模型(xhCRC)单细胞悬液中分选出CD133+细胞和CD133-细胞,利用体外细胞球体形成实验检测两群细胞自我更新能力.利用Transwell侵袭和迁移实验检测浓度为10μmol/L和50 μmol/L CQ对CD133+ LoVo细胞和CD133+ xhCRC细胞转移能力的影响.通过膜联蛋白V(Annexin V)-藻红蛋白(PE)/7-氨基放线菌素D(7-AAD)细胞凋亡检测试剂盒检测CQ对CD133+ LoVo细胞和CD133+ xhCRC细胞凋亡的影响;Western blot检测CQ对凋亡相关蛋白裂解半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3(Cleaved Caspase-3)和上皮-间充质转化(EMT)相关蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和Snail的表达的影响.结果 体外球体形成实验结果显示,CD133+细胞比CD133-细胞具有更强的体外形成球体的能力(P =0.004).Transwell侵袭实验结果显示,在CD133+ LoVo细胞中,浓度为10、50 μmol/L的CQ处理细胞24 h,穿过小室的细胞数分别为71、42个,与对照组(115个)比较,差异有统计学意义(P=0.008、0.001,实验组间比较,P=0.009);在CD133+ xhCRC细胞中穿过小室的细胞数分别为41、22个,与对照组(61个)比较,差异有统计学意义(P =0.044、0.001,实验组问比较,P=0.036);Transwell迁移实验结果显示,在CD133+ LoVo细胞中,浓度为10、50 μmol/L的CQ处理细胞24 h,穿过小室的细胞分别为179、95个,与对照组(290个)比较,差异有统计学意义(P=0.001、0.000,实验组间比较,P=0.000),在CD133+ xhCRC细胞中穿过小室的细胞分别为61、43个,与对照组(97个)比较,差异有统计学意义(P=0.017、0.002,实验组间比较,P=0.096).细胞凋亡实验结果显示,浓度为10 μmol/L和50 μmol/L的CQ处理CD133+ LoVo细胞,细胞凋亡率分别为(2.9±0.4)％、(17.7±1.5)％,与对照组[(0.1±0.6)％]比较,差异均有统计学意义(P=0.001、0.000),实验组间比较,P=0.000);处理CD133+ xhCRC细胞,细胞凋亡率分别为(9.7±0.4)％、(17.6±2.3)％,与对照组[(1.0±0.6)％]比较,差异有统计学意义(P=0.003、0.000,实验组间比较,P=0.005).Western blot证实CQ可促进凋亡相关蛋白Cleaved Caspase-3的表达并呈剂量依赖关系,E-cadherin的表达随CQ浓度的增加逐渐减少.结论 CQ可抑制结直肠癌癌干细胞(CSCs)的转移能力,下调EMT相关蛋白表达并诱导其凋亡.
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一氧化氮对重症急性胰腺炎肺损伤的作用及其机制
目的 研究一氧化氮(NO)减轻重症急性胰腺炎(SAP)肺损伤的机制.方法 采用逆行胰胆管牛磺胆酸钠注射制造SAP大鼠模型.动物分为假手术组、胰腺炎组、L-精氨酸(L-Arg)治疗组和氯喹(CQ)治疗组.硝酸还原酶法检测肺组织NO的浓度变化,实时定量PCR(RT-PCR)检测肺组织TLR(Toll-like receptor)2/4mRNA表达变化.结果 与假手术组比较,SAP大鼠肺组织NO浓度降低,肺损伤加重;肺组织TLR2/4 mRNA表达增高,肺组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达升高(P＜0.05).给予不同剂量L-Arg治疗后,肺组织NO浓度明显升高,肺损伤程度减轻;TLR2/4mRNA表达降低,肺组织TNF-α表达降低(P＜0.05).给予CQ抑制肺组织TLR2/4 mRNA表达后,肺组织内NO浓度升高,肺损伤减轻,TNF-α表达降低(P＜0.05).结论 NO可以明显抑制SAP肺组织TLR2/4 mRNA的表达,减少细胞因子的合成及释放,从而减轻肺组织损伤.
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一氧化氮对重症急性胰腺炎肺损伤Toll样受体2/4表达的影响
目的 观察一氧化氮(NO)对重症急性胰腺炎(SAP)肺损伤Toll样受体(TLR)表达的影响.方法 动物分为假手术组、胰腺炎组、氯喹(CQ)治疗组和L-精氨酸(L-Arg)治疗组;实时荧光逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肺组织TLR2/4 mRNA表达.结果 SAP大鼠肺组织TLR2/4表达明显增高(3 h:0.787±0.751、1.512±1.794 E-2;6 h:1.086±1.738、2.097±3.735 E-2;12 h:1.113±6.141、2.957±2.620 E-2),肺损伤加重(P＜0.05或P＜0.01).以CQ抑制肺组织中TLR2/4表达后(3 h:0.313±5.491 E-2,0.005±1.419 E-3;6 h:0.488±7.442 E-2,0.010±1.518E-3;12 h:0.883±8.911 E-2,0.024±2.760 E-3),肺损伤减轻(P＜0.05或P＜0.01).给予L-Arg治疗后,肺组织NO浓度明显升高,TLR2/4表达降低(0.656±3.972 E-2,1.501±6.111 E-2;0.260±0.891 E-2,0.732±5.135E-2;0.126±0.914E-2,0.414±1.678 E-2),肺损伤程度减轻(P＜0.05或P＜0.01).结论 肺组织内TLR2/4表达在SAP肺损伤中明显上调,肺组织损伤加重;NO可以明显抑制SAP肺组织TLR2/4表达从而减轻肺组织损伤.
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扁柏醇联合氯喹对人肺腺癌细胞凋亡的影响
目的 探讨扁柏醇(Hinokitiol)联合氯喹对人肺腺癌(H1975)细胞凋亡的影响.方法 选用人肺腺癌H1975细胞系,应用MTT法检测扁柏醇和(或)氯喹对H1975细胞活性的影响,Westernblot法检测扁柏醇和(或)氯喹对H1975细胞凋亡通路相关蛋白(Cleaved PARP、Cleaved Caspase-3、Bax)表达水平的影响.结果 0、2.5、5、10 μmol/L扁柏醇作用H1975细胞24 h后,呈剂量依赖性地抑制H1975细胞增殖,H1975细胞凋亡相关蛋白(Cleaved PARP、Cleaved Caspase-3、Bax)表达水平升高.当氯喹和扁柏醇联合应用时,与单用扁柏醇相比,显著降低H1975细胞存活率,并提高H1975细胞凋亡率,凋亡相关蛋白Cleaved PARP、Cleaved Caspase-3表达水平显著增加.结论 氯喹增加扁柏醇诱导人肺腺癌H1975细胞凋亡.
关键词： 扁柏醇 氯喹 人肺腺癌H1975细胞系 -
外源性TRAIL基因转染联合氯喹诱导胶质瘤U251细胞凋亡
目的 探讨外源性肿瘤坏死因子凋亡相关诱导配体(TRAIL)联合氯喹对U251细胞凋亡的作用.方法 构建稳定表达TRAIL的质粒pEGFP-TRAIL,然后转染到胶质瘤细胞系U251细胞中(TRAIL组),以pEGFP-C1质粒为阴性对照,以不转染质粒为空白对照;将氯喹(50μmol/L)加入到转染pEGFP-TRAIL质粒U251细胞培养基中,作为联合组.共聚焦显微镜检测GFP-TRAIL蛋白表达,MTT法检测细胞抑制率,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,免疫印迹法检测GFP-TRAIL和Cleaved caspases-8蛋白表达.结果 质粒转染后,共聚焦荧光显微镜检测结果 显示,pEGFP-C1在细胞质中成弥散分布;而GFP-TRAIL在细胞质中成聚点分布,且荧光表达可以持续48 h以上;免疫印迹法分析结果 显示TRAIL组TRAIL蛋白表达水平明显高于空白对照组和阴性对照组(P<0.05).联合组细胞增殖抑制率[(47.22±0.15)%]明显高于阴性对照组[(3.21±0.04)%,P<0.05]和TRAIL组[(23.88±0.22)%,P<0.05].联合组细胞凋亡率[(41.62±0.44)%]明显高于空白对照组[(2.14±0.09)%,P<0.05]、阴性对照组[(3.46±0.17)%,P<0.05]和TRAIL组[(22.48±0.43)%,P<0.05].联合组Cleaved caspases-8蛋白表达水平明显高于阴性对照组、TRAIL组(P<0.05).结论 外源性TRAIL基因转染后可以在细胞中稳定表达并诱导细胞凋亡,与氯喹联合应用可以增强TRAIL诱导的细胞凋亡,其机制可能是氯喹抑制细胞自噬.
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氯喹通过抑制自噬促进TRAIL诱导的胶质瘤细胞凋亡
目的 探讨氯喹对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导的胶质瘤细胞凋亡的影响.方法 体外培养人脑胶质瘤细胞U251和Hela细胞,分为对照组、氯喹组、重组人TRAIL蛋白(rhTRAIL)组和联用组(氯喹与rhTRAIL联合应用);MTT法检测细胞活力,Annexin V-FITC/PI凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡,共聚焦显微镜检测GFP-LC3的分布判断细胞自噬水平,Western Blot检测cleaved caspase-8的表达水平.结果 氯喹和rhTRAIL均显著增加U251细胞和Hela细胞自噬水平,而且联用较单独应用自噬水平更高,Hela细胞自噬水平明显高于U251细胞.U251细胞和Hela细胞增殖抑制率和细胞凋亡率:氯喹组与对照组均无统计学差异(P＞0.05),rhTRAIL和联用组均明显高于氯喹组(P＜0.05),联用组明显高于rhTRAIL组(P＜0.05).氯喹组和对照组Cleaved caspases-8水平无统计学差异(P＞0.05),rhTRAIL和联用组均明显增高(P＜0.05),联用组明显高于rhTRAIL组(P＜0.05).结论 氯喹能通过抑制细胞自噬,增强TRAIL诱导的U251细胞凋亡.
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联合免疫抑制疗法治疗类肿瘤型舍格伦综合征的疗效研究
目的:评价联合免疫抑制疗法在治疗类肿瘤型舍格伦综合征中的临床应用.方法:临床表现为类肿瘤型的舍格伦综合征患者共22名.免疫抑制剂选用的是强的松和氯喹.根据临床表现,将治疗效果分为优、良、差3级.结果:强的松和氯喹联合治疗类肿瘤型舍格伦综合征的总有效率可达95.5%.结论:联合免疫抑制疗法是治疗类肿瘤型舍格伦综合征的较为有效的一种方法.
关键词： 免疫抑制剂 肾上腺皮质类激素 氯喹 类肿瘤型舍格伦综合征 -
氯喹对MT01促进大鼠骨髓间充质干细胞增殖作用的影响
目的:通过检测氯喹(chloroquine,CQ)对MT01促进Wistar大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖的影响,证实MT01可能经由内吞小体对BMSCs细胞生物学性能产生影响.方法:不同工作浓度的CQ与第3代Wistar大鼠BMSCs共培养24、48、72、96 h,检测CQ对BMSCs增殖影响的量效和时效关系;在此基础上,加入工作浓度为1 mg/L的MT01,MTT法检测不同浓度、不同时间点CQ对MT01作用下BMSCs增殖的影响.结果:适当浓度CQ(4mg/L)具有促进BMSCs增殖的作用;48 h CQ刺激BMSCs增殖明显;低浓度CQ(1 mg/L、2 mg/L)对MT01促进BMSCs增殖具有抑制作用.结论:CQ对MT01促进BMSCs增殖具有抑制作用,提示MT01可能通过进入BMSCs内吞小体中发挥作用.
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聚肌胞注射液治疗口腔扁平苔藓的短期疗效观察
口腔扁平苔藓(OLP)是口腔黏膜常见的非感染性疾病,近年来的研究表明,OLP可能是一种局限性的自身免疫性疾病.OLP尚无特效疗法,研究发现氯喹治疗OLP有显著疗效,但因长期服用有明显毒副作用,使其临床应用受到限制.本研究观察聚肌胞注射液局部封闭口服氯喹两种方法治疗糜烂型OLP有一定临床疗效,现报道如下:
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磷酸氯喹在口腔扁平苔藓中的临床应用
综述了氯喹的药物代谢动力学、作用机制、临床应用及药物不良反应.氯喹通过抗炎、免疫抑制、抗感染等作用,应用于口腔扁平苔藓,在改善病情中可发挥重要作用,此药安全有效.
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Nd:YAG激光与小剂量氯喹联合治疗口腔扁平苔藓
为寻找治疗OLP安全有效的方法,作者对20例OLP患者采用口服小剂量氯喹及局部应用Nd:YAG激光照射,结果显效9例,有效10例,总有效率为95%,明显优于对照组(P＜0 01),可以在临床上试用.
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中西医结合治疗口腔扁平苔藓67例疗效观察
目的:探讨中西医结合治疗口腔扁平苔藓的临床疗效.方法:治疗组采用口服知柏地黄丸联合局部应用尤卓尔软膏治疗,对照组采用口服羟氯喹治疗,治疗持续2个月.结果:2月时治疗组患者自觉症状明显改善,溃疡、充血减轻,痊愈7例,显效9例,好转19例,总有效率87.50%,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01).结论:中西医结合治疗口腔扁平苔藓可取得较好临床疗效.
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光化性唇炎8例报告
光化性唇炎是一种光敏感性复发性唇黏膜疾病,好发于下唇唇红部,与机体内卟啉代谢障碍和过度紫外线照射有关.我市所在地区属亚热带气候,海拔较高,紫外线照射较强,光化性唇炎发病率相对较高,本文将1996年以来诊治的8例典型光化性唇炎报告如下:
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非组胺受体拮抗剂治疗荨麻疹七则
荨麻疹,俗称风疹块,是皮肤粘膜过敏性疾病,临床上多采用组胺受体拮抗剂治疗.本文报道用非组胺受体拮抗剂治疗荨麻疹7则,分述如下.
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输入性疟疾1例
患者女,18岁,海南省人,系我校2003级新生.患者2003年9月18日因午后发热、寒战、伴出汗1周到咸宁市中心医院就诊.入院检查:T38.6℃P102次,Bp14.66/9.33kPa,R26次,神清,咽无充血,双肺呼吸音粗,未闻及干湿性罗音,心律齐,肝脾肋下未触及.伤寒杆菌抗原C*H凝集价＜1∶80.尿常规:UBG±16μmol/L,白细胞LEU±15cells/μl,血常规检查:疟原虫阳性.患者经抗疟(氯喹、伯喹),护肝(甘利欣),抗炎及支持对症处理,于9月22日治愈出院.
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氯喹通过诱导凋亡增强5-氟尿嘧啶的抗结肠癌效果
目的:探讨结肠癌化疗药物5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)与各个阶段的自噬抑制剂联合使用后,结肠癌细胞的增殖和凋亡情况,以寻找合适的治疗结肠癌的药物.方法:自噬三个阶段的抑制剂与5-FU联合使用处理结肠癌细胞系HT-29和SW480后,MTT方法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,western blot检测细胞自噬和凋亡情况.结果:5-FU能诱导结肠癌细胞的自噬和凋亡.3-甲基腺嘌呤(3 methyladenine,3-MA)和氯喹(Chloroquine,CQ)均能增强5-FU诱导的结肠癌细胞凋亡,而CQ的增强效果更加明显.同时,又进一步证明了CQ可诱导结肠癌细胞发生caspase依赖的结肠癌细胞凋亡.结论:CQ有望成为一种能与5-FU联合使用治疗结肠癌的有效化疗药物.
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CQ11逆转多药耐药人胃癌细胞株对多柔比星的耐药
目的:探讨氯喹衍生物CQ11对耐长春新碱(vincristine, VCR)人胃癌多药耐药(multidrug resistance, MDR) 细胞株SGC7901/VCR的耐药逆转作用. 方法:将SGC7901和SGC7901/VCR细胞分别与各种浓度的多柔比星(doxorubicin, DOX)和/或CQ11在体外共同培养,采用MTT法检测其细胞毒作用;采用荧光分光光度计测定细胞内DOX蓄积量.结果:SGC7901/VCR细胞对DOX的耐药程度是SGC7901细胞的37.5倍.1.0、2.5 和 5.0 mol/L的CQ11分别使DOX对SGC7901/VCR细胞的敏感性分别增加到2.2倍(P<0.01)、5.5倍(P<0.01) 和14倍(P< 0.01).DOX蓄积实验表明,CQ11能显著增加SGC7901/VCR细胞内DOX蓄积,而对SGC7901细胞内DOX蓄积无明显影响.结论:通过增加细胞内DOX蓄积量,CQ11在体外能有效逆转SGC7901/VCR细胞对DOX的耐药性.
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疟疾的检出控制预测和预防(续前)
第二章早期检出和控制流行4 识别和流行病学调查在潜在流行地区,常是非专业人员对当地疟疾流行有所了解.然而在无疟疾传播的地区,个别病例被漏诊,甚至在流行初期疟疾也被忽略.类似的情况,大量发热病人出现甚至超过一个流行季节,也可能没有考虑是疟疾.如恶性疟抗氯喹扩散地区,疟疾当作伤寒用抗生素给予治疗.任何发热病人在潜在疟疾的地区大量出现,一般而言应考虑到是疟疾.
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氯喹在血管紧张素Ⅱ诱导的小鼠血管重塑中的作用
目的:探讨氯喹(chloroquine,CQ)对血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,AngⅡ)诱导的小鼠血管重塑的作用及可能机制.方法:将32只8周龄雄性C57 BL/6小鼠随机分为4组,分别为对照组、AngⅡ处理组、AngⅡ+CQ低剂量组及AngⅡ+CQ高剂量组,每组8只.对照组不做任何处理,AngⅡ组通过皮下埋置微渗透泵持续给予AngⅡ,剂量为490 ng/(kg·min).AngⅡ+CQ氐剂量及高剂量组小鼠在接受AngⅡ基础上,按10 mg/(kg·d)及50 mg/(kg·d)剂量每天腹腔注射CQ.各组处理时间均为28 d.分别在第0,3,7,14,21及28天用尾套法测定各组小鼠血压及心率.在第28天时处死小鼠,取主动脉,采用HE染色及Masson染色评价主动脉血管重塑情况.采用Western印迹检测主动脉Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白(collagen Ⅰ/Ⅲ)及自噬通路分子(LC3B-Ⅱ与P62)表达.结果:与对照组相比,AngⅡ处理组小鼠血压升高,主动脉管壁增厚,主动脉发生明显纤维化,collagen Ⅰ/Ⅲ表达增加,自噬发生标志LC3B-Ⅱ表达增加,自噬底物P62表达降低.与AngⅡ处理组相比,CQ低剂量及高剂量处理组小鼠血压降低,主动脉管壁变薄,纤维化减轻,collagen Ⅰ/Ⅲ表达减少,LC3B-Ⅱ及P62表达均增加;并且CQ高剂量组较低剂量组上述各指标的改变程度更大.结论:CQ可剂量依赖性地抑制AngⅡ诱导的小鼠主动脉重塑,其机制可能与抑制自噬过度激活有关.
