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肺癌多药耐药基因(MDR genes)的研究进展
目前肺癌已成为因癌症死亡的主要因素.肺癌的时期诊断在目前尚困难,确诊时已属中晚期而失去手术机会.故化疗在治疗中发挥重要作用.在临床治疗中肺癌多药耐药性(mulidrugresistance,MDR)使疗效不佳或复发.故多药耐药性的研究成为治疗的关键之一.多药耐药性是指肿瘤药物产生抗药性的同时,对结构和作用机制不同的抗肿瘤药物产生交叉耐药性.国内外对肿瘤MDR的发生机制提出了许多耐药机制,其中多药耐药基因mdrl编码的P-gp高表达是MDR产生的主要原因.多药耐药基因(multidrugresistance genes,MDR genes)多药耐药相关蛋白基因表达分子生物学技术的表达基因片段成为可能,肺癌的多药耐药性得以进一步认知,肺癌的治疗就能进一步完善.
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α-干扰素体外逆转乳腺癌细胞多药耐药的研究
目的:探讨干扰素(IFN-α)对人乳腺癌多耐药细胞株MX-1/T的作用及作用机制.方法:采用甲基四氮唑盐(MTT)法检测IFN-α对多药耐药细胞MX-1/T生长的抑制作用.结果:IFN-α浓度0～1400U/ml时对MX-1/T细胞未见明显的抑制作用,当胞因子浓度＞1400U/ml其抑制作用明显加强,并随剂量加大作用加强.结论:IFN-α对MX-1/T细胞的多药耐药性有明显的逆转作用,且在一定浓度范围内有剂量依赖性.
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人参皂苷Rg3逆转人胆管癌细胞多药耐药性的实验研究
目的 探讨人参皂苷Rg3逆转人胆管癌多药耐药细胞株QBC939/ADM的耐药性.方法 人胆管癌多药耐药细胞株QBC939/ADM的建立,主要采用阿霉素(ADM)持续接触浓度递增法,必要时结合高低浓度交替法诱导人胆管癌细胞QBC939产生多药耐药性(MDR).将三种不同浓度的化疗药物,即环磷酰胺(CTX)、丝裂霉素(MMC)、5-氟尿嘧啶(5-FU)分别作用于QBC939及QBC939/ADM,用CCK-8法检测不同化疗药物的细胞毒作用,流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR法检测MDR基因的表达水平,将得到的数据运用统计学分析,并得出结果 ,从而证明人胆管癌多药耐药细胞株QBC939/ADM的建立.以中药人参的有效成分人参皂苷Rg3作为MDR逆转剂,逆转QBC939/ADM的MDR,用CCK-8法、流式细胞术、RT-PCR法检测其逆转作用.结果CCK-8法检测化疗药物作用于对照组和实验组的细胞毒作用,结果显示:实验组细胞的OD值(吸光度)明显低于对照组,P<0.05,差异有统计学意义;流式细胞仪检测化疗药物作用于对照组和实验组的细胞凋亡率:实验组的细胞凋亡率明显高于对照组,P<0.05,差异有统计学意义;RT-PCR法测定MDR基因的表达,结果显示实验组MDR基因的表达明显低于QBC939/ADM,P<0.05,差异有统计学意义.结论 人胆管癌多药耐药细胞株QBC939/ADM成功建立,并初步证明中药人参的有效成分人参皂苷Rg3能有效逆转其MDR,但其逆转机制尚未研究,需进一步探索.
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氯化两面针碱对人卵巢癌紫杉醇耐药细胞株A2780 Taxol细胞耐药性的逆转作用
目的:研究氯化两而针碱(nitidine chloride,NC)对人卵巢癌紫杉醇耐药细胞株A2780 Taxol细胞耐药性的逆转作用及机制.方法:氯化两面针碱干预A2780 Taxol后,应用MTT比色法检测多柔比星(adriamycin,ADM),依托泊苷(etoposide,VP-16),羟基喜树碱(hydroxycamptothecin,HCPT)对A2780Taxol细胞的抑制率;实时荧光定量PCR检测不同给药组对多药耐药基因(MDR1 mRNA)表达的影响;HE染色法观察肿瘤细胞结构的改变;TUNEL法分析其对细胞凋亡的影响.结果:耐药细胞A2780 Taxol对ADM,VP-16,HCPT的耐药倍数分别为1.87,1.07,3.25;经氯化两面针碱干预后,降低了A2780Taxol细胞对抗肿瘤药ADM,VP-16,HCPT的IC50值,可下降A2780 Taxol细胞的多药耐药(MlDR1)基因的表达,HE染色可见NC给药组改变了A2780 Taxol细胞的形态结构,TUNEL染色凋亡细胞明显增多,凋亡指数为(58.03±1.46)％.结论:氯化两面针碱能有效逆转A2780 Taxol多药耐药性,具有良好的抗肿瘤药物多药耐药逆转作用.
关键词： 氯化两面针碱 多药耐药性 A2780 Taxol细胞 逆转录 -
中药逆转肿瘤化疗多药耐药性(MDR)体外研究概述
化学药物治疗是治疗人体恶性肿瘤的重要手段之一.然而由于肿瘤细胞耐药性常常限制了疗效进一步提高,并终使治疗失败.肿瘤细胞耐药类型较多,可分为内在耐药(IDR)和获得性耐药(ADR)两类;根据耐药谱的不同,可分为原药耐药(PDR)和多药耐药(MDR),自从Biedle和Riehm发现MDR现象以来,国内外对MDR进行了广泛、深入实验与临床研究,证明其机制主要包括[1]:P-糖蛋白(P-gp)过度产生;谷胱甘肽(GSH)依赖性解毒酶系统活性增加;DNA修复机制增强;DNA拓扑异构酶含量减少或性质发生改变.
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补骨脂素逆转人乳腺癌耐药细胞株MCF-7多药耐药性研究
人乳腺癌细胞产生多药耐药性(multidrugresistance,MDR)是肿瘤化疗失败的主要原因之一.已知某些中药具有钙拮抗作用,且药物作用较温和,能逆转MDR从而提高化疗效果,具有很好的应用和开发前景.补骨脂是补益药中少有的钙离子通道拮抗剂,本实验选用其主要成分之一的补骨脂素为研究对象,进行逆转人乳腺癌细胞株耐药性的研究,为今后进一步开发有效耐药逆转剂打下基础.
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川芎嗪干预白血病及脐带血细胞P-糖蛋白表达初步研究
被广泛应用于临床的川芎嗪(Ligustratine,te-tramethgpyrazine,TMP)已被证实可通过下调P-糖蛋白(Pgp)表达等机制逆转肿瘤细胞多药耐药性,从而增加耐药肿瘤细胞内化疗药物浓度.
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扶正增敏法治疗乳腺癌的设想
扶正法是中医治疗乳腺癌的核心内容,多药耐药性(multidrug resistance,MDR)是乳腺癌化学治疗的一大障碍.寻找有逆转MDR作用而毒副作用小的化疗增敏剂对提高乳腺癌治疗水平具有重要意义.随着研究的深入,中医中药逆转MDR的研究近年来有了较大的发展,从扶正法中考察MDR的内涵,无疑有重要的意义.
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肿瘤多药耐药研究现状
肿瘤严重威胁着人类生命健康,它的防治一直是医学界研究的热点.在肿瘤治疗中,化疗占据着不可替代的重要地位.有些肿瘤在经历了初有效化疗后,仍难免复发,这其中一个很重要的原因就是肿瘤细胞对化疗药物产生了多药耐药性.合理的联合化疗虽能大限度发挥细胞毒作用,但都可因多药耐药(Multidrug Resi stance,MDR)的出现而宣告失败.因此,逆转肿瘤多药耐药,提高肿瘤细胞对化疗药物的敏感性已成为肿瘤研究领域的一大热点.
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粉防己碱逆转人乳腺癌MCF-7多药耐药细胞的抗凋亡作用
目的:研究粉防己碱与长春新碱合用能否逆转人乳腺癌MCF-7多药耐药细胞的抗凋亡作用.方法:用荧光染料Hoechst 33342和碘化丙锭联染观察染色质凝集,流式细胞术检测G1亚峰,TUNEL法检测凋亡细胞,Fluo-3染色法测定细胞内游离钙.结果:抗肿瘤药物长春新碱处理MCF-7敏感和耐药细胞后24 h,可观察到2种类型的染色质凝集;但在耐药细胞中,相同浓度处理下染色质凝集的细胞明显减少.无明显细胞毒性的粉防已碱(20 μmol@L-1)与长春新碱合用,荧光显示法和TUNEL法均证实敏感和耐药的凋亡细胞明显增多.粉防己碱与长春新碱合用明显升高细胞内的游离钙含量.结论:粉防己碱能有效地逆转人乳腺癌MCF-7细胞的抗凋亡作用.
关键词： 粉防己碱 长春新碱 多药耐药性 细胞凋亡 人乳腺癌McF.7细胞 -
川芎嗪逆转HepG2/ADM细胞多药耐药性的体外研究
目的:研究川芎嗪对人肝癌多药耐药细胞系HepG2/ADM多药耐药性的逆转效应及对P-gp170表达的影响,深入探讨川芎嗪逆转肿瘤细胞多药耐药的机理.方法:应用细胞培养、细胞毒实验、RT-PCR、流式细胞仪等方法,观察川芎嗪对体外培养HepG2/ADM细胞的逆转作用.结果:川芎嗪可以使细胞膜表面的P-gp170表达减弱,增加阿霉素对HepG2/ADM细胞的毒性;RT-PCR结果表明川芎嗪可以使HepG2/ADM细胞的mdr1基因表达减弱;流式细胞仪检测结果表明川芎嗪可以使HepG2/ADM细胞内罗丹明-123的浓度增加,从而增加阿霉素对HepG2/ADM细胞的毒性.结论:川芎嗪具有在体外逆转HepG2/ADM细胞多药耐药的效应,具有临床应用前景.
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复方中药紫龙金克服肿瘤细胞多药耐药性的机制
目的 探讨中药紫龙金(Zilonin,ZLJ)对多药耐药肿瘤细胞的作用机制.方法 采用MTT法检测ZLJ对细胞增殖的影响;流式细胞术检测细胞周期以及罗丹明123的荧光强度变化;Western blot 方法 检测相关蛋白的表达变化.结果 ZLJ分别处理人乳腺癌MCF-7和MCF-7/DOX耐药细胞,以及人口腔上皮癌KB和KBV200耐药细胞.MTT法测定表明:ZLJ作用耐药和敏感细胞的IC50值相近,耐药细胞对ZLJ没有交叉耐药性;无论对敏感和耐药细胞,流式细胞术分析发现ZLJ阻断细胞于S期;ZLJ单独处理MCF-7/DOX和KBV200耐药细胞,可以微弱地降低其耐药性,分别与多柔比星(doxorubicin,DOX)和长春新碱(vincristine,VCR)合用,可以明显地增加DOX和VCR的活性;ZLJ处理耐药细胞MCF-7/DOX后,检测到细胞内耐药蛋白P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)呈时间依赖性降低.Western blot检测表明,ZLJ的抑制作用是通过使凋亡标志蛋白PARP出现切割,启动凋亡通路实现的.结论 中药ZLJ抑制耐药细胞增殖,没有交叉耐药性;其抑制作用与诱导细胞凋亡以及降低P-gp表达有关.
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肺癌多药耐药机制及其逆转方法的研究进展
肺癌是严重影响人类生存的恶性肿瘤之一,其死亡率已居全球恶性肿瘤之首.目前主要采取以化疗为主的综合治疗方案,但临床治疗失败率很高,主要原因是肺癌细胞对化疗药物产生多药耐药性(multi-drug resistance,MDR).因此,逆转耐药已经成为治疗肺癌的关键.本文就近年来对肺癌耐药机制及其逆转策略的研究进展作一综述.
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雌激素调控ABCG2介导的乳腺癌MCF-7细胞化疗敏感性
目的 探讨雌二醇(E2)对乳腺癌耐药蛋白ABCG2表达和乳腺癌MCF-7细胞化疗敏感性的影响.方法 用雌激素受体激动剂E2及其拮抗剂TAM(同时也是GPER激动剂)、GPER特异性激动剂G1及其特异性拮抗剂G15分别或联合处理MCF-7细胞,Western blot和免疫荧光法检测MCF-7中ABCG2的蛋白表达量和细胞内定位;用盐酸阿霉素(Dox)处理经上述干预的细胞,流式细胞技术及CCK8法检测细胞对化疗药物敏感性的改变.结果 ABCG2在MCF-7的细胞膜及细胞质均有表达,E2可以上调ABCG2蛋白的表达量(P＜0.05),且使胞质内ABCG2向细胞膜移动,并且抑制细胞毒性作用,上述效应能被抑制剂TAM显著抑制(P＜0.05);TAM单独处理细胞后ABCG2蛋白表达量减少(P＜0.05),GPER特异性激动剂G1同样也抑制ABCG2蛋白的表达(P＜0.05),但两者对ABCG2胞膜定位的影响不显著,G1具有增强Dox化疗效能的作用,上述抑制作用均能被特异性抑制剂G15抑制.结论 E2同时激活ER及GPER时起到上调ABCG2的作用,抵抗化疗药物效果,但特异性激活GPER使ABCG2表达量明显减少,提高化疗疗效.
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华蟾素注射液抗肝癌细胞多药耐药性的蛋白质组学分析
目的 在蛋白表达水平上探讨华蟾素注射液对抗人肝癌多药耐药的机制.方法 体外培养人肝癌耐5-氟尿嘧啶细胞Bel-7402/FU,MTT法测定华蟾素注射液细胞毒性及耐药逆转作用.双向凝胶电泳与质谱技术检测0.26 mg/L华蟾素注射液作用于耐药细胞株前后的差异表达蛋白,Western blot验证质谱鉴定的蛋白FAK、CRT和TMOD3表达情况.结果 华蟾素注射液对细胞Bel-FU的IC5o为0.66 mg/L,浓度为0.08、0.16及0.32 mg/L华蟾素注射液的耐药逆转倍数分别为1.56、2.18及2.99倍;0.26 mg/L华蟾素注射液作用后,耐药细胞中13个蛋白点表达下调,另有1个蛋白点表达上调.华蟾素注射液下调耐药细胞中FAK、CRT和TMOD3表达与双向凝胶电泳及质谱技术检测的差异表达蛋白变化一致.结论 华蟾素注射液可引起耐药相关蛋白表达变化而逆转多药耐药.
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加热对人肝癌细胞-7721/Adm耐药株阿霉素的增敏作用
探讨比较阿霉素(ADM)与43℃加热单独或合并处理人肝癌细胞-7721敏感株(简称7721细胞)和人肝癌细胞-7721/Adm耐药株(简称7721/Adm细胞)的细胞毒作用.以体外培养的人肝癌细胞-7721敏感株和已经建立的人肝癌细胞-7721/Adm耐药株为研究对象,采用水浴加温法,体外细胞毒试验(MTT法),观察阿霉素(ADM)与加热处理对细胞的生长抑制的影响;采用流式细胞技术检测热处理对7721细胞和7721/Adm细胞胞内阿霉素浓度的影响.1.热处理可以明显提高两种细胞对阿霉素的敏感性:7721细胞、7721/Adm经阿霉素及43.5℃热处理,其细胞存活率分别下降35.2%(30min)、24.8%(60min)和29.4%(30min)、22.8%(60min);2.流式细胞仪检测显示热处理可明显提高这两种细胞,尤其是7721/Adm细胞内的阿霉素浓度:7721细胞组提高30.8%,HCC-7721/Adm组提高51%.热处理可以显著提高人肝癌细胞-7721敏感株和人肝癌细胞-7721/Adm耐药株对阿霉素的敏感性.
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Raf-1基因可能与口腔上皮癌细胞多药耐药性发生机制有关
目的 通过检测Raf-1基因在口腔上皮癌多药耐药细胞株(KBV)及敏感细胞株(KB)中表达的差异,探讨Raf-1基因在口腔上皮癌细胞多药耐药性发生中的作用. 方法 体外培养口腔上皮癌多药耐药株及敏感株,通过RT-PCR技术及免疫荧光技术、免疫印迹技术检测Raf-1基因在KB及KBV细胞中转录及翻译水平的差异,通过MTT法及流式细胞检测技术(FCM)检测KB及KBV细胞对长春新碱(VCR)敏感度的差异.结果 KB组细胞株在Raf-1基因转录和翻译水平均非常显著地低于KBV组(P<0.01);MTT法检测结果显示,KBV组细胞对长春新碱的耐药性是KB组的16.5倍;流式细胞术检测结果显示,KB组细胞凋亡率显著高于KBV组(P<0.01).结论Raf-1基因可能参与口腔上皮癌耐药性的发生过程,成为引起肿瘤细胞耐药的重要原因之一.
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骨肉瘤P-糖蛋白、胎盘型谷胱甘肽-S-转移酶和DNA拓朴酶Ⅱ的表达及其与预后的关系
目的探讨骨肉瘤组织中P-糖蛋白(P-gp)、胎盘型谷胱甘肽-S-转移酶(GST-π)和DNA拓朴酶Ⅱ(TopoⅡ)的表达及其与预后的关系.方法应用SP法检测P-gp、GST-π、TopoⅡ在80例骨肉瘤中的表达,并应用COX比例风险模型评估它们对预后的影响.结果 80例骨肉瘤中P-gp、GST-π和TopoⅡ的表达率分别为36.25%、91.25%和47.5%,其中P-gp和TopoⅡ表达与WHO新分型和预后显著相关(P<0.05).结论 P-gp、GST-π、和ToPo Ⅱ等多因素联合作用是骨肉瘤多药耐药性(multi-drug resistance,MDR)的主要作用机制,并且P-gp和TopoⅡ可能成为评估骨肉瘤预后的有价值的指标.
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P糖蛋白、谷胱甘肽-S-转移酶在胃癌中的表达
多药耐药性(multi-drug resistance, MDR)是多种肿瘤化疗失败的主要原因[1],研究表明P糖蛋白(P-glycoprotein, P-gp )和谷胱甘肽-S-转移酶( glutathione-S-transferase-π, GST-π)是恶性肿瘤产生MDR的物质基础[2],本文应用免疫组化方法,检测P-gp和GST-π在胃癌组织中的表达,以探讨P-gp和GSTπ在胃癌耐药机制中所起的作用和临床意义.
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多药耐药蛋白P-gP170在胃癌中的表达
肿瘤对化疗药物的耐药性,常常影响化疗药物的效果,其耐药机理之一是由多药耐药基因(mdr-1)表达产物P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp 170)增高介导的多药耐药性(multidrugresistance,MDR)[1,2].本文应用免疫组化法检测了133例原发性胃癌P-gp170的表达,探讨其表达与组织学类型、生物学行为间的关系.
