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华支睾吸虫组织蛋白酶D样天冬氨酸蛋白酶基因的克隆表达和重组蛋白的免疫学分析
目的 对新发现的华支睾吸虫(Clonorchis sinensis)的组织蛋白酶D样天冬氨酸蛋白酶基因进行克隆、表达和免疫学初步研究.方法 将华支睾吸虫组织蛋白酶D样天冬氨酸蛋白酶基因(去除了信号肽编码序列)克隆到原核表达质粒pET-28a(+)中,在大肠杆菌BL-21/DE3中用IPTG诱导表达,表达产物通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定,用镍离子金属螯合剂亲和层析柱进行纯化,纯化的重组蛋白免疫SD大鼠制备抗血清.用蛋白印迹(Western blotting)进行免疫学分析.结果 PCR、双酶切及DNA测序结果 均表明pET-28a(+)-组织蛋白酶D样天冬氨酸蛋白酶重组质粒构建成功.SDS-PAGE结果 表明目的 基因在大肠杆菌BL-21/DE3中获得高效表达,经亲和层析获得了高纯度蛋白.重组蛋白可被其免疫的SD大鼠血清识别,表明其具有免疫原性;并且能识别感染了华支睾吸虫的SD大鼠血清,表明具有免疫反应性.结论 华支睾吸虫组织蛋白酶D样天冬氨酸蛋白酶基因可在原核表达系统中获得具有免疫原性的高效表达,为进一步研究该蛋白的功能奠定了基础.
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组织蛋白酶D与基质金属蛋白酶-9在口腔鳞癌的表达
目的 探讨组织蛋白酶D(CD)与基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在人类口腔鳞癌(OSCC)中的表达意义. 方法 采用免疫组织化学SP法检测76例OSCC组织与20例癌旁正常口腔黏膜的CD与MMP-9水平. 结果 CD和MMP-9在OSCC中的阳性表达率分别为81.6%和77.6%,显著高于癌旁正常口腔黏膜(P＜0.01).两者均与OSCC浸润深度和淋巴结转移密切相关,浸润越深,其表达越强(P＜0.05);有淋巴结转移的病例,其阳性率明显高于无转移者(P＜0.05);MMP-9表达还与组织分化程度密切相关,分化程度越低,其表达越强(P＜0.05).OSCC组织中CD和MMP-9表达具有一定的一致性. 结论 CD和MMP-9的阳性表达与OSCC的侵袭转移有关.
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组织蛋白酶D定量测定对乳腺癌的预后价值
目的探讨乳腺癌组织中组织蛋白酶D(Cath-D)活性变化对乳腺癌的预后价值. 方法检测67例乳腺癌样本(其中淋巴结阴性37例,淋巴结阳性30例)及32例乳腺良性病变样本中Cath-D的活性,研究其预后价值. 结果 (1)乳腺癌样本中的Cath-D的活性明显高于乳腺良性病变样本及正常组织样本(P<0.01).(2)67例乳腺癌样本中,淋巴结阳性样本中的Cath-D的活性明显高于淋巴结阴性者(P<0.05).(3)Cath-D的活性与肿瘤大小(P<0.05)、组织学分级(P<0.05)、按预后好坏的组织学分型(P<0.01)等病理指标有密切相关. 结论 Cath-D的定量检测可作为临床判断乳腺癌患者预后的重要指标.
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uPA、Cath-D蛋白在胃癌中的表达及临床意义
目的 探讨胃癌组织中尿激酶型纤维蛋白溶解酶原激活剂(uPA)和组织蛋白酶D(Cath-D)在胃癌中的表达及其与胃癌临床病理特征的关系.方法 运用免疫组化SP法检测68例胃癌组织及31例正常胃黏膜组织中uPA和Cath-D的表达.结果 胃癌组织中uPA和Cath-D的表达率分别为69.1%和77.9%,高于正常胃黏膜中uPA和Cath-D的表达率(分别为25.8%和32.3%),差异均有统计学意义(P<0.01); uPA阳性表达与胃癌的浸润深度、淋巴结转移及临床分期有关;Cath-D阳性表达与胃癌的分化程度、浸润深度、淋巴结转移及临床分期有关;uPA表达与Cath-D表达呈正相关.结论 uPA和Cath-D的表达与胃癌的浸润及转移密切相关,uPA和CATH-D的表达具有协同性.两者的联合检测有助于判断胃癌发展及预后.
关键词： 胃癌 尿激酶型纤维蛋白溶解酶原激活剂 组织蛋白酶D 免疫组织化学 -
MMP-2、TIMP-2和Cathepsin D表达与结肠癌侵袭转移的关系研究
目的 探讨MMP-2、TIMP-2和Cathepsin D在结肠癌侵袭转移中的作用.方法 采用组织芯片技术,应用免疫组化方法,检测77例结肠癌原发灶及其淋巴结转移灶组织中MMP-2、TIMP-2和Cathepsin D的表达情况.结果 MMP-2、TIMP-2和Cathepsin D的高表达率在原发灶和转移灶中分别为20.78% VS 41.56%、61.04% VS 44.16%、75.32% VS 53.25%.MMP-2高表达率在原发灶显著低于转移灶;TIMP-2和Cathepsin D高表达率在原发灶均显著高于转移灶(P均＜0.05).MMP-2表达强度在原发灶显著低于转移灶,TIMP-2及Cathepsin D表达强度在原发灶显著高于转移灶(P＜0.001).结论 MMP-2、TIMP-2和Cathepsin D的表达与结肠癌细胞浸润和转移能力有关,高表达MMP-2和低表达TIMP-2的癌细胞更易发生淋巴道转移.
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甲状腺癌组织中c-erbB-2、nm23和组织蛋白酶D的表达及其意义
目的探讨甲状腺癌组织中c-erbB-2、nm23和组织蛋白酶D的表达及其与颈部淋巴结转移的关系.方法采用免疫组化S-P法,检测93例甲状腺癌组织中c-erbB-2、nm23和组织蛋白酶D的表达情况.结果未分化癌组织中c-erbB-2和组织蛋白酶D阳性表达率高,两者呈正相关,不同组织学类型间差异不显著.滤泡状甲状腺癌组织中nm23阳性表达率高,乳头状癌组织较低,两者有显著性差异(P＜0.05).无颈部淋巴结转移者nm23阳性表达率高于颈部淋巴结转移者,两者有非常显著性差异(P＜0.01),无颈部淋巴结转移者c-erbB-2和组织蛋白酶D的阳性表达率低于颈部淋巴结转移者,两者有显著性差异(P＜0.05).结论c-erbB-2、组织蛋白酶D及nm23表达均与甲状腺癌颈部淋巴结转移有关,c-erbB-2和组织蛋白酶D高表达与甲状腺癌颈部淋巴结转移呈正相关,nm23低表达与甲状腺癌颈部淋巴结转移呈负相关,三者联合检测对判断甲状腺癌是否发生颈部淋巴结转移有重要意义.
关键词： 甲状腺癌 淋巴结转移 nm23蛋白 C-erbB-2蛋白 组织蛋白酶D -
子宫内膜癌发生过程中自噬活性改变的初步探讨
目的:探讨正常子宫内膜、子宫内膜增生以及子宫内膜腺癌中自噬活性的变化.方法:收集2004年1月至2005年3月行子宫切除或诊断性刮宫的组织标本135例,其中正常子宫内膜43例,子宫内膜单纯性增生及复合性增生27例,子宫内膜不典型增生26例,子宫内膜腺癌39例.用免疫组化法检测全部组织中的Cathepsin-D和Rab7的表达.结果:(1)Cathepsin-D表达在正常子宫内膜增生期明显高于分泌期(0.244±0.091 vs 0.141±0.071,P<0.05);Rab7表达呈同一趋势(0.197±0.084 vs 0.114±0.060,P<0.05);(2)子宫内膜单纯性、复合性增生组的Cathepsin-D表达明显高于子宫内膜不典型增生组,子宫内膜腺癌细胞中Cathepsin-D表达则明显减弱(0.561±0.168 vs0.311±0.089 vs 0.055±0.044,P<0.001);Rab7的表达呈现与Cathepsin-D同一趋势(0.508±0.152 vs 0.281±0.076 vs 0.026±0.019,P<0.001).结论:正常增生期子宫内膜细胞的自噬活性比分泌期子宫内膜细胞明显增强,子宫内膜增生的自噬活性比正常子宫内膜强,而子宫内膜腺癌细胞自噬活性明显减弱,提示自噬活性的改变可能参与了子宫内膜样腺癌的发生.
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微管相关蛋白LC3和组织蛋白酶D在子宫内膜样腺癌中的表达及意义
目的:探讨微管相关蛋白LC3、组织蛋白酶D 在子宫内膜样腺癌组织中的表达及与临床病理参数之间的关系.方法:用免疫组织化学法检测12例正常增生期子宫内膜、12例子宫内膜增殖症以及51例子宫内膜样腺癌组织中LC3和组织蛋白酶D的表达并分析.结果:LC3在子宫内膜样腺癌组织的表达强度显著低于正常增生期内膜和子宫内膜增殖症(P＜ 0.001,P＜ 0.001).LC3在子宫内膜样腺癌中的表达强度与组织学分级以及手术病理分期呈明显的负相关(r =-0.390,P＜ 0.001;r =-0.312,P＜ 0.05).组织蛋白酶D在子宫内膜样腺癌组织中的表达显著低于正常增生期内膜(P＜ 0.05).结论:自噬活性相关的LC3、组织蛋白酶D在子宫内膜样腺癌中的表达下降,自噬活性的改变可能参与了子宫内膜样腺癌的发生和演进过程.
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组织蛋白酶D在皮肤鳞状细胞癌、基底细胞癌和脂溢性角化病的组织表达及其意义
目的:观察组织蛋白酶D(cathepsin D,CD)在皮肤鳞状细胞癌(SCC)、基底细胞癌(BCC)、脂溢性角化病(SK)的组织表达,分析其表达差异及其意义.方法:用免疫组化SP染色法检测CD在15例SCC、15例BCC、14例SK及10例正常对照皮肤组织中的表达.结果:CD在正常皮肤组织表达为阴性,在SK、BCC、SCC瘤组织中表达依次升高,在SCC、SK之间表达有显著性差异(P＜0.05);CD在SK、BCC、SCC间质细胞表达阳性率分别为85.7%、66.7%、33.3%.结论:CD的表达水平可能与SCC侵袭和转移有关.
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组织蛋白酶D与下咽癌侵袭转移的相关性研究
目的:研究组织蛋白酶D(CD)在下咽鳞状细胞癌组织中的表达与下咽鳞状细胞癌的侵袭转移之间的关系.方法:用免疫组织化学法研究59例下咽鳞状细胞癌组织标本和9例正常的下咽黏膜中CD和ki-67的表达;分析CD在下咽鳞状细胞癌细胞中和间质细胞中的表达与肿瘤生物学特性之间的关系.结果:CD在颈淋巴结转移阳性组肿瘤细胞中的表达率较阴性组织高,CD在肿瘤间质细胞中的表达在颈淋巴结转移阳性组的表达率较阴性组高.结论:CD表达与肿瘤侵袭转移的生物特性密切相关,可以作为下咽鳞状细胞癌侵袭转移的预后指标.
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组织蛋白酶D在Raji细胞中的表达与阿霉素化疗敏感性的关系
目的 探讨组织蛋白酶D(Cathepsin D)在人淋巴瘤细胞株Raji中的表达水平变化与Raji细胞增殖和对阿霉素(Adriamycin,ADM)化疗敏感性的关系.方法 实验将对数生长期Raji细胞分为5组:①空白对照组;②二甲基亚砜(DMSO)对照组;③胃酶抑素A(Pepstatin A)处理组;④ADM处理组;⑤Pepstatin A+ADM处理组.Western blot法检测ADM处理前后各组Raji细胞Cathepsin D表达水平的变化.四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测用Pepstatin A预处理后,Raji细胞对ADM敏感性的变化.结果 Cathepsin D在Raji细胞中有表达,与空白对照组相比,Pepstatin A处理组和Pepstatin A+ADM处理组的Cathepsin D表达均有下降,两组的下降程度无统计学差异(P＜0.05);而ADM处理组Raji细胞中Cathepsin D表达增高(P＜0.05).MTT结果显示,单用Pepstatin A处理,对Raji细胞增殖无影响,而ADM处理组及Pepstatin A+ADM处理组均明显抑制Raji细胞增殖,且Pepstatin A+ADM处理组的细胞增殖抑制率显著低于ADM处理组(P＜0.05).结论 在ADM作用下,Raji细胞Cathepsin D表达上调,细胞增殖抑制率显著增高.据此推测Cathepsin D可能参与ADM介导的Raji细胞的凋亡,并能增强Raji细胞对ADM的化疗敏感性.
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Cathepsin-D、MMP-2和MMP-9在乳癌组织中的表达
①目的通过检测人乳癌组织中组织蛋白酶D(Cathepsin-D)、MMP-2和MMP-9三种蛋白酶的表达,探讨其在乳癌演进和异质化过程中的改变及意义.②方法采用免疫组织化学方法,检测58例人乳癌标本、5例正常乳腺标本及5例良性增生乳腺组织标本中三种酶的表达.③结果Cathepsin-D、MMP-2和MMP-9在乳癌的肿瘤细胞和间质细胞中均有表达,在肿瘤细胞中呈异质性过表达,而良性增生乳腺组织呈阴性或弱表达;Cathepsin-D阳性表达与瘤细胞分化程度(分级)有关(x2=8.35,P＜0.05);而MMP-2和MMP-9阳性表达与淋巴结转移有关(x2=7.66、17.67,P＜0.05).④结论乳癌Cathepsin-D、MMP-2和MMP-9的表达与正常或良性增生乳腺组织有质的差别,是乳癌不断演进和异质化的形态和功能特征之一,与乳癌癌细胞的侵袭和转移能力密切相关.
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先天性巨结肠病变肠段 CAD、S-100蛋白表达及其临床意义
目的：探讨组织蛋白酶D（ CAD）、S-100蛋白在先天性巨结肠（ HD）发生、发展中的作用及其作用机制。方法选择HD患儿41例（ HD组），分别取病变肠段的狭窄段、移行段、扩张段；另取10例因肠穿孔或肠梗阻行结肠造瘘术患儿的病变结肠组织（对照组）。免疫组化染色后，观察两组病变肠段CAD、S-100蛋白阳性表达，并比较两组肌间神经从、成熟神经节细胞数量。结果 HD组狭窄段和移行段CAD阳性表达率明显低于对照组，移行段和扩张段S-100蛋白阳性表达率明显低于对照组（ P均＜0．05）。对照组神经纤维、神经胶质细胞可见S-100蛋白阳性表达，而神经节细胞未见S-100蛋白阳性表达；神经节细胞可见CAD阳性表达，细胞形态规则，核仁明显；另有少量细胞形态不规则，缺乏核仁。 HD 组各段肌间神经丛、成熟神经节细胞数明显低于对照组（P均＜0．05）。结论 CAD、S-100蛋白表达降低可促进HD的发生、发展；其机制可能与病变肠段神经节及间质神经纤维数量减少有关。
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先天性巨结肠病变肠段CAD、S-100的检测及意义
目的 探讨检测先天性巨结肠(HD)病变肠段组织中组织蛋白酶D(CAD)、S-100的临床意义.方法 31例经常规病理检查确诊的HD患儿,均行手术治疗,术后随访,并对其病变肠段组织中的CAD、S-100进行检测.取5正常结肠组织(C组)作对照.结果 31例患儿手术后21例有肠炎、便秘(A组),10例无症状(B组).CAD、S-100检测显示,A组肠管扩张段切缘神经节细胞缺如3例、减少5例、未成熟2例、发育不良1例,B组肠管扩张段切缘及C组肠管组织中神经节细胞未见异常.结论 对HD病变肠段进行CAD、S-100检测,有助于HD的确诊,对HD病变切除范围的确定有指导作用,有利于减少术后肠炎、便秘等.
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P-选择素与组织蛋白酶D在肺癌组织中的表达与临床病理的相关性研究
目的 研究患者肺癌组织中P-选择素、组织蛋白酶D(CD)的表达,进而探讨它们与肺癌临床病理的关系.方法 采用免疫组化法检测58例患者肺癌组织中P-选择素、组织蛋白酶D的表达水平.结果 P-选择素和CD在肺癌组织中的阳性率分别为43.1%(25/58)和53.5%(31/58),P-选择素与淋巴结转移有关(P﹤0.05),与病理类型、病理分级、病理分期、5年存活率无关(P﹥0.05).CD表达与病理分期、淋巴结转移、5年存活率有关(P﹤0.05),与病理类型、病理分级无关(P﹥0.05).两个指标均表达阳性的肺癌患者5年存活率为31.3%(5/16),显著低于阴性患者5年存活率81.8%(9/11),P﹤0.05.结论 共同检测P-选择素和CD水平,对于判断肺癌患者的预后有重要意义.
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组织蛋白酶D及碱性成纤维细胞生长因子在子宫内膜癌中的表达
目的:探讨组织蛋白酶D和碱性成纤维细胞生长因子的表达与子宫内膜癌预后的关系.方法:回顾性分析1992-2002郑州大学第二附属医院有完整随访资料的子宫内膜癌标本50例,对其预后进行比较.结果:(1)组织蛋白酶D和碱性成纤维细胞生长因子在正常子宫内膜、非典型增生子宫内膜、子宫内膜癌三种组织中的免疫积分差异有统计学意义(P均＜0.05).(2)二者的表达与临床分期(P均＜0.05)、组织学类型(P均＜0.05)及生存期有关(P均＜0.01),与分化程度无明显相关性(P均＞0.05);(3)组织蛋白酶D与碱性成纤维细胞生长因子的表达有明显相关性.结论:组织蛋白酶D和碱性成纤维细胞生长因子与子宫内膜癌患者预后有关,二者高表达的患者预后差.
关键词： 子宫内膜癌 组织蛋白酶D 碱性成纤维细胞生长因子 预后 -
先天性巨结肠免疫组织化学的表达
目的探讨蛋白基因产物(PGP 9.5)、组织蛋白酶D(CAD)和S100蛋白(S100)在先天性巨结肠(HD)中的表达及其意义.方法采用PGP 9.5、CAD及S100对35例正常结肠和30例HD狭窄段结肠行免疫组织化学染色.利用图文分析系统观察染色表达情况.结果 1.对照组结肠中,CAD对神经节细胞特异性表达.其他神经组织包括神经胶质细胞、雪旺细胞与神经纤维都不表达CAD,但对PGP 9.5和S100均阳性表达.PGP 9.5对神经节细胞强阳性着色,表现为棕褐色细胞状团块.S100对神经节细胞阴性表达,在神经丛中形成细胞状空白区.2.HD狭窄段组结肠中,免疫组织化学表达情况与对照组明显不同.CAD对肠神经组织表达缺失.PGP 9.5染色中棕褐色的细胞状团块及S100染色中的细胞状空白区均未观察到.扭曲增生的神经纤维对PGP 9.5与S100强阳性着色.S100染色的神经纤维着色强度[(146.70±10.87)灰度值]及直径(57.81±14.99)μm与对照组神经纤维的着色强度[(169.25±9.53)灰度值]及直径(23.15±5.56)μm比较,差异显著(P均＜0.01).结论PGP 9.5、CAD、S100在HD狭窄段的异常表达证实肠神经组织发育异常是HD主要病理改变.3种抗体的免疫组织化学染色标记肠神经组织对HD的诊断有重要帮助.
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Cathepsin D与恶性肿瘤的关系
侵袭、转移是恶性肿瘤患者死亡的主要原因.肿瘤侵袭、转移的一个必要条件为肿瘤细胞侵犯并穿过基底膜及细胞外基质所组成的屏障.组织蛋白酶 D(Cathepsin D)是一种天冬氨酸溶酶体蛋白水解酶,活化的Cathepsin D催化降解基底膜和细胞外基质,以利于肿瘤细胞移动并穿过细胞外基质和血管壁进入血液循环,在肿瘤的侵袭、转移中发挥重要作用.目前有关Cathepsin D在肿瘤转移中的研究不断深入,本文就Cathepsin D与多种恶性肿瘤侵袭、转移之间的研究进展进行综述.
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胃癌的螺旋CT征象与MMP-9及Cath-D蛋白表达的关系
目的：探讨胃癌螺旋CT征象与基质金属蛋白酶-9（MMP-9）及组织蛋白酶D（Cath-D）蛋白表达的关系。方法：对52例胃癌患者行螺旋CT平扫及三期动态增强扫描。采用免疫组化SP法检测术后肿瘤组织和正常胃黏膜标本中MMP-9及Cath-D的蛋白表达,分析胃癌组织中MMP-9和Cath-D蛋白的表达与胃癌螺旋CT征象（有无淋巴结转移、Lauren分型及肿块大小）间关系及胃癌组织中MMP-9和Cath-D表达的关联性。结果：胃癌组织中MMP-9和Cath-D蛋白的阳性表达率明显高于正常胃黏膜组织（χ2分别为55.120、53.626,P均〈0.001）;胃癌组织中有淋巴结转移组MMP-9及Cath-D蛋白的阳性表达率高于无转移组（χ2MMP-9=8.341,P=0.004;χ2Cath-D=7.338,P=0.007）;弥漫型胃癌组织中MMP-9及Cath-D蛋白的阳性表达率高于肠型,差异有统计学意义（χ2分别为4.312、6.175,P〈0.05）。胃癌组织中Cath-D和MMP-9蛋白的表达有关联性（χ2=13.874,rP=0.496,P〈0.05）。结论：MMP-9及Cath-D的高表达与胃癌螺旋CT征象上的Lauren分型和淋巴结转移有关。胃癌中组织MMP-9高表达与Cath-D高表达具有一致性,两者在胃癌的发展中可能起协同作用。
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乳癌患者原发灶、复发灶中 VEGF 与 Cath-D蛋白的表达
目的：检测乳癌患者原发灶、复发灶中VEGF、组织蛋白酶D（ Cath-D）蛋白的表达。方法：采用免疫组化SP法检测38例乳癌患者（有淋巴结转移者25例）和22例乳癌胸壁复发患者（有淋巴结转移者5例）原发灶、复发灶及有、无淋巴结转移组织中VEGF、Cath-D蛋白的表达。结果：正常乳腺组织，乳癌原发灶、复发灶中VEGF、Cath-D蛋白的表达差异有统计学意义（χ2＝50．029和24．461，P＜0．05），且乳癌原发灶、复发灶中VEGF、Cath-D蛋白的表达均高于正常乳腺组织，但二组织间差异无统计学意义。乳癌患者有淋巴结转移组VEGF、Cath-D蛋白的表达高于无淋巴结转移组（χ2＝9．017和5．963，P＜0．05）。乳癌组织中VEGF和Cath-D蛋白的表达呈正关联（rP ＝0．411， P＜0．001）。结论：乳癌原发灶、复发灶及有淋巴结转移的乳癌组织中VEGF与Cath-D蛋白高表达，二者可能在乳癌复发和淋巴结转移中起协同作用。
