应用多重连接探针扩增法简便高效检测Prader-Willi综合征的基因缺失

Objective: Prader-Willi syndrome (PWS) is characterized by severe hypotonia and feeding difficulties in early infancy, followed by excessive eating and gradual development of morbid obesity in later infancy or early childhood. Patients with PWS are often too young to manifest sufficient features or have atypical findings, making genetic testing important to confirm the diagnosis of PWS. Approximately 99% of patients with PWS have a diagnostic abnormality in the parent-specific methylation imprint within the Prader-Willi critical region (PWCR) at chromosome 15q11.2-q12. Of them, 70% have a paternal deletion; 25% have a maternal uniparental disomy (UPD); and <5% have a mutation in the imprinting center. Methods: Current techniques can identify a diagnostic abnormality, such as paternal deletion or maternal UPD for most of patients with PWS, but they are labor-intensive and cost-expensive. Multiplex ligation-dependent probe amplification (MLPA) is a novel, simple, and cost-effective technique for analysis of relative quantification in a single assay, which has recently been applied for the detection of genomic deletions, duplications, and amplifications in a variety of genes. Results: Six out of 20 patients referred for genetic diagnosis of PWS were found to have a deletion by MLPA, confirmed by FISH and DNA methylation analysis with 100% concordance. Conclusion: MLPA's high sensitivity and specificity for deletion detection is the same as FISH or Southern blot based analysis. Additional collaborative effort for developing and validating the complete MLPA-PWS assay, for not only detecting deletion but also identifying methylation abnormality, is on going.

妊娠中期母血清唐氏综合征三联筛查4 680例与不良妊娠结果分析

Objective:To investigate the efficiency of maternal serum triple screening for the genetic abnormality in second-trimester and the morbidity of adverse pregnancy outcome in false positive results of the test. Methods: A total of 4 680 pregnant women with singleton pregnancies assigned in Obs & Gyn Hospital, Fudan University, underwent triple screening test (alpha fetoprotein, AFP; human chorionic gonadotropin, HCG and unconjugated estriol, uE3) by fluorescence enzyme immunoassay between 2003 and 2005. The valid MoM (Multiples of Median) value of mid-trimester serum AFP, uE3, and hCG and risk assessments was provided by Beckman Coulter Co. When applied in the prenatal Down syndrome screening service. The study compares the incidence of chromosomal abnormalities with Down syndrome in screen positive women and compares to the MoM value established in the literature. The risks of having a fetus with congenital abnormalities or of developing obstetric complications in the screen positive women with their matched controls.Results:The MoM values for the triple tests of our study are similar to established values of literature. Only 51.01% women with pregnancies agree to receive screening. Amniocentesis utilization rate was 55.12% in the screen-positive pregnancies. The false positive rate was 6.89% and the median of maternal age of the women was 28.13 (range 19 to 49) years old. Chromosomal abnormalities were identified in 21 pregnancies, including 9 cases of trisomy 21.The detection rate was 77.77%. Pregnancies with positive screening results had a significantly higher risk of adverse outcomes than those with negative results (P< 0.05). Whereas there was no difference in the incidences of fetal congenital appearance or skeleton abnormality. Conclusion: Adjusting MoM values of local unaffected populations is limited to increasing the detection rate. Because chromosomal defects have variable exhibitions, amniocentesis utilization is still a choice for screen-positive pregnancies. Screen-positive pregnancies had increased risk of chromosomal abnormalities.

贵州地区82例地中海贫血产前筛查基因诊断结果分析

目的 了解贵州地区孕期夫妇及胎儿的地值海贫血基因突变类型,为我省地中海贫血遗传学咨询提供参考资料.方法 收集2012年10月～2014年10月在贵州医科大学附属医院及贵州省人民医院产前诊断中心行地中海贫血产前诊断的患者资料,通过血常规及血红蛋白电泳检测筛查,再通过反向点杂交(RDB)和聚合酶链反应(PCR)法行地中海贫血的基因分型.结果 ①82例患者中,共检出α-地中海贫血26例,占31.7％,检测出中国人常见的缺失型α 地中海贫血(-SEA、α3.7、α4.2);β 地中海贫血患者56例,占68.3％,检测出中国人常见的7种基因突变类型,以CD17(A→T)、CD41-42(-TCTT)、IVS-2-654(C→T)常见.②双方基因诊断为均携带α 地中海贫血或携带有β 地中海贫血的夫妻有51对,采用抽脐血或羊水的方式进行产前基因诊断,产前诊断为轻型地中海贫血的胎儿33例,地中海贫血阴性胎儿10例,中重型地中海贫血胎儿8例.其中,产前诊断检测出患有重型β-地中海贫血的胎儿5例,1例胎儿为bart's 水肿胎,2例胎儿患有血红蛋白H 病, 均采取终止妊娠的措施.结论 地中海贫血患者的发生率有较为显著的差异,但其基因突变率有相似的趋势,其中,β-地贫基因携带者的检出率明显要高于α-地贫基因携带者;通过产前筛查可以避免重型及中间型地中海贫血患儿的出生.

妊娠中期妇女唐氏筛查及产前诊断结果分析

目的 探讨妊娠中期妇女唐氏筛查对于严重先天性缺陷儿宫内诊断的临床价值以及不同高风险值诊断阳性率的差别.方法 采用时间分辨免疫荧光法(DEL FIA)对37 267例妊娠中期妇女进行血清甲胎蛋白和游离β人绒毛膜促性腺激素检测,应用Multicalc软件计算出风险值.高风险孕妇经遗传咨询,知情同意,自愿选择行产前诊断.结果 37 267例孕妇中筛查出高风险孕妇2 401例,阳性率为6.44%,其中唐氏综合征高风险孕妇2 066例,789例(羊水463例,脐血326例)接受产前诊断,发现胎儿染色体异常38例,异常检出率为4.82%,其中唐氏综合征12例,18三体综合征1例.不同高风险值范围孕妇诊断阳性率差异无显著性(P>0.05).结论 产前筛查对于严重先天性缺陷儿的宫内诊断具有重要的临床价值,高风险是指导产前诊断的确切指征.

遗传性消化道肿瘤现状及二代测序应用前景

消化道肿瘤是世界范围内高发的恶性肿瘤。在我国恶性肿瘤发病率中，胃癌居第3位，结直肠癌居第6位[1]。绝大多数胃癌为散发性胃癌，但约10%的胃癌患者具有家族聚集特征，其中约1/3被认为具有遗传背景。同样在结直肠癌患者中，约5%～10%的肠癌患者有遗传相关因素。遗传性弥漫型胃癌和遗传性非息肉病性结直肠癌是目前发病率相对较高、相关研究较系统、有相对明确的遗传因素、并有相应的诊疗和随访规范的两种遗传病[2,3]。本文旨在以上述两种特征鲜明的遗传病为例介绍当前遗传性消化道肿瘤的现状，并结合二代测序新技术的应用和我国胃肠肿瘤的发病特点，探讨在我国如何进行消化道肿瘤的遗传筛查和监测。

胚胎植入前遗传学诊断和筛查的研究进展

胚胎植入前遗传学诊断(PGD)和筛查(PGS)是近20余年发展的一种具有较低危险度的植入前遗传学检测方法.该方法对卵母细胞或者植入前胚胎进行活检,利用分子生物学技术进行检测,对遗传物质进行分析,选择遗传信息正常的胚胎植入女方子宫,以避免妊娠有“病”的胎儿,同时提高妊娠率和活产率,降低流产率和多胎率.其主要适用于高龄、反复流产、反复植入失败和有遗传病史的夫妇等.综述在PGD和PGS中所应用的荧光原位杂交(FISH)、聚合酶链反应(PCR)、比较基因组杂交(CGH)、微阵列CGH (array-CGH)、单核苷酸多态性-微阵列(SNP-array)和高通量测序等方法.各种技术方法均有其优缺点和适用范围,单细胞高通量测序技术以其高度的敏感性、准确性、灵活性等特点显示出巨大的优势,随着该技术的进一步完善和成熟,将成为PGD/PGS的一个强有力的检测手段.

6945例新生儿耳聋基因突变方式调查

目的:分析新生儿耳聋基因突变携带率,构建信息储备库,为临床诊断、遗传咨询提供可靠数据.方法:选取2014年1-10月在石家庄市妇幼保健院出生的6 945例新生儿于出生3d后采足跟血,应用荧光聚合酶链反应(PCR)法行先天性遗传性耳聋GJB2基因235delC位点、迟发性耳聋SL C26A4基因(IVS7-2A ＞G和2168A＞G)和药物性耳聋线粒体12S rRNA基因(1555A＞G和1494C＞T)检测,所有检测均在家属知情同意下进行.结果:6 945例新生儿中共发现突变携带者239例,检出率为3.44％.其中114例(1.64％)携带235delC杂合突变,1例(0.01％)携带235delC纯合突变;97例(1.40％)携带IVS7-2A＞G杂合突变,1例(0.01％)携带IVS7-2A＞G纯合突变,14例(0.20％)携带2168A＞G杂合突变;9例(0.13％)携带1555A＞G均质突变,2例(0.03％)携带1555A＞G异质突变,1例(0.01％)同时携带有IVS7-2A＞G杂合突变、1555A＞G异质突变和235delC杂合突变.结论:GJB2基因235delC位点和SL C26A4基因IVS7-2A＞G位点是新生儿耳聋基因突变的主要方式.新生儿耳聋基因检测工作的开展有助于了解新生儿耳聋基因携带情况,在分子水平上为优生优育工作提供一定的指导.

201例妊娠前女性常见耳聋基因的突变筛查

目的:对妊娠前女性进行常见耳聋基因突变筛查,初步测算天津地区育龄女性常见耳聋基因的突变频率和突变类型.方法:应用耳聋基因芯片,针对GJB2,SLC26A4,GJB3基因以及线粒体12S rRNA基因的9个突变热点,对201例妊娠前女性进行携带者筛查,对检测到携带突变的女性的配偶进行GJB2或SLC26A4基因的Sanger测序.结果:在201例样本中共检出突变携带者10例,检出率为4.98％.包括GJB2基因突变6例,SLC26A4基因突变3例,线粒体12S rRNA基因突变1例.对10例携带者配偶进行测序发现1例GJB2基因235delC杂合突变携带者的配偶携带109G＞A杂合突变.结论:对听力正常女性进行常见耳聋基因突变检测可有效筛查出携带者,进而可以为减少聋儿出生提供线索和依据.

046 测定妊娠10～12周母血浆中胎儿DNA浓度的正常值:遗传筛查新指标的初步探讨

遗传性中频听力下降家系遗传学特征分析

目的:分析一个中国遗传性中频听力下降家系的临床听力学特征并探讨其遗传学规律.方法:通过家系调查,对家系成员进行全身系统检查及临床听力学检测,分析遗传规律,绘制遗传图谱并进行听力学特征分析.结果:此耳聋家系成员共计8人,其先证者为感音神经性聋,无全身其他系统异常.耳聋遗传方式为常染色体显性遗传,听力表型为迟发型、以中频下降为主的听力损失.结论:该家系遗传学特征分析符合常染色体显性遗传非综合征型中频听力下降家系,为后续针对此家系进行候选基因突变筛查、连锁分析及致病基因的定位与克隆研究奠定了基础.

荧光原位杂交在植入前遗传学诊断中的应用

随着辅助生殖技术的发展,植入前遗传学检查技术的进展也日新月异,荧光原位杂交(FISH)技术运用于植入前胚胎染色体异常的检测后,大大提高了体外受精的植入率和临床妊娠率,降低了流产率.目前荧光原位杂交技术主要应用于胚胎植入前遗传学筛查、染色体结构异常及性连锁遗传疾病的性别鉴定.但是,关于植入前遗传学诊断的远期安全性仍有很多争议,就目前荧光原位杂交技术在植入前遗传学诊断中的应用进行综述.

蛋白质组学在产前筛查与诊断中的应用

母血胎儿非整倍体筛查是减少和避免缺陷儿出生的有效手段,但其检出率和假阳性率有待进一步改善,以减少羊水穿刺等侵入性检查.以质谱为基础的蛋白质组学技术的蓬勃发展为该病相关标记物的发现提供了新的研究平台.通过对比正常与非整倍体胎儿母血蛋白质组的变化就能发现一个或一组候选标记物,有望改良目前的筛查方法或发展一种非侵袭性诊断方法.近年来,利用蛋白质组学技术筛选母血和羊水中胎儿非整倍体异常标记物的研究进展迅速,多数研究认为增加新的标记物能明显改善目前的常规筛查方法.然而,为了取得大的临床诊断效能,应该选择一组潜在标记物在染色体正常与异常的妊娠妇女血液或羊水中进行大样本的对比分析.

9508例妊娠中期孕妇血清学筛查结果分析

目的:回顾性分析妊娠中期孕妇产前血清学筛查结果,探讨血清学筛查的重要意义.方法:检测2010年9月—2014年3月于北京军区总医院妇产科门诊产检的妊娠中期(15~20+6周)9 508例孕妇血清中的甲胎蛋白(AFP)、人绒毛膜促性腺激素β亚单位(β-hCG)和游离雌三醇(uE3)的浓度并结合孕周、年龄、体质量等因素进行风险评估.结果:9 508例接受妊娠中期唐氏筛查的孕妇中,有743例孕妇筛查结果为高风险,筛查阳性率为7.81%.其中唐氏综合征(DS)高风险检出率为5.92%(563/9 508),18-三体高风险检出率为0.20%(19/9 508),开放性神经管缺陷(NTD)高风险检出率为1.69%(161/9 508).羊水细胞染色体核型分析确诊DS 5例,18-三体1例,其他染色体异常共12例.本研究结果显示:20岁~组,25岁~组,30岁~组和≥35岁组间DS和NTD的高风险检出率差异均有统计学意义(P<0.01);年龄≥35岁高风险孕妇中DS阳性率明显高于年龄<35岁高风险孕妇(P<0.01);对筛查低风险孕妇进行随访发现DS假阴性结果1例.结论:产前血清学筛查对降低出生缺陷、提高人口素质有一定的指导意义.

孕中期联合血清学和NIPT进行唐氏综合征筛查的回顾性分析

目的:探讨联合孕中期血清学筛查(second trimester serum screening,STSS)和胎儿染色体非整倍体无创DNA产前检测(noninvasive prenatal testing,NIPT)进行唐氏综合征(Down syndrome,DS)筛查在天津地区的临床应用价值.方法:对10429例15~20+6周妊娠妇女进行二联STSS,设定1/270为DS高风险切割值,所有妊娠妇女均具有妊娠结局随访记录.对二联STSS结果为DS高风险的妊娠妇女建议羊膜腔穿刺,同时告知NIPT的范围及局限性,由妊娠妇女自愿选择;建议二联STSS风险值在1/1000~1/270之间(含1/1000)的低风险妊娠妇女,及风险值小于1/1000的高龄(预产期年龄≥35岁)妊娠妇女行NIPT.联合筛查结果以NIPT结果为终筛查结果,若妊娠妇女没有进行NIPT,以二联STSS结果为终筛查结果.结果:二联STSS的DS检出率为73.33%(11/15),假阳性率5.75%(600/10429),阳性预测值为1.80%(11/611);NIPT的DS检出率为100%(13/13),阳性预测值为100%(13/13);孕中期联合筛查的DS检出率为93.33%(14/15),假阳性率为1.62%(169/10429),阳性预测值为7.65%(14/183),较单纯二联STSS方案DS阳性预测值有所提高(P=0.000).结论:联合STSS和NIPT的DS筛查能够提高二联STSS的阳性预测值,减少因侵入性产前诊断造成的胎儿流产,为天津地区提供可参考的DS产前筛查方案.

双胎妊娠胎儿染色体非整倍体产前筛查的研究进展

双胎妊娠胎儿染色体非整倍体疾病的发生率较单胎妊娠高，同时其筛查受到很多因素的影响。双胎妊娠的合子性质非常重要，直接影响风险率的计算模式，临床实践中多以妊娠早期绒毛膜性间接判断。目前双胎妊娠染色体非整倍体疾病筛查方案集中在妊娠早期胎儿颈部半透明层厚度（nuchal translucency，NT）筛查、妊娠早期联合筛查（NT+血清学筛查）、妊娠中期血清学筛查以及利用无创产前检测技术（noninvasive prenatal test，NIPT）进行胎儿染色体非整倍体疾病筛查。这些方案主要涉及染色体疾病中发病率较高的21-三体综合征和18-三体综合征。考虑到检出率、假阳性率以及经济学效应，妊娠早期联合筛查为目前双胎妊娠染色体非整倍体疾病筛查的主要方案，对近年来双胎妊娠染色体非整倍体产前筛查研究进展进行综述。

建立天津地区孕中期唐氏综合征筛查人群中位数系统的研究

目的:建立天津地区孕中期唐氏综合征筛查人群中位数系统并探讨其临床应用价值.方法:采用时间分辨荧光分析法检测113544例妊娠14～20+6周妊娠女性血清甲胎蛋白(AFP)和游离β人绒毛膜促性腺激素(Freeβ-hCG)的浓度.用唐氏综合征筛查风险评估软件(LC3.0)的Medians Tool统计其中61881例AFP和Freeβ-hCG的人群中位数、体质量,对LC3.0的中位数方程、体质量校正方程系数进行修正.对另外38662例妊娠女性AFP和Freeβ-hCG的中位数漂移情况进行监控及调整,建立天津地区孕中期唐氏综合征筛查人群中位数系统.另选取13001例妊娠女性测定其AFP和Freeβ-hCG激素水平,分别利用高加索人群中位数系统和已建立的人群中位数系统进行孕中期唐氏综合征筛查,通过Medians Tool将13001例妊娠女性AFP和Free β-hCG的中位数、体质量与已建立的中位数曲线、体质量曲线进行拟合,检测其吻合度.结果:13001例妊娠女性的中位数与已建立的中位数方程是吻合的,AFP和Freeβ-hCG的校正因子分别为1.01、1.00.经染色体核型分析,13001例妊娠女性中共确诊唐氏综合征9例.以高加索人群中位数系统进行筛查的检出率为77.78％,假阳性率为8.30％,阳性预测值为0.65％.利用已建立的人群中位数系统进行筛查的检出率为77.78％,假阳性率为5.33％,阳性预测值为1.00％.结论:天津地区孕中期人群的AFP和Freeβ-hCG与高加索人群存在差异,利用已建立的中位数系统进行孕中期唐氏综合征筛查,可以有效降低假阳性率,提高筛查效率.

Waddles小鼠遗传性小脑性共济失调突变基因的筛查

目的:探查引起Waddles(Wdl)小鼠遗传性小脑性共济失调的突变基因.方法:采用成年2～4个月的Wdl小鼠30只和同等数量同胎生的正常小鼠进行运动试验以确认动物模型.应用高通量温度梯度毛细管电泳技术,对Wdl小鼠第4号染色体Wdl基因位点进行PCR及RT-PCR扩增产物的筛查,并用基因测序和RT-PCR的方法来证实突变基因的存在.结果:Wdl小鼠的Car8基因中的第7个外显子扩增产物的分子质量比正常小鼠的扩增产物分子质量小.Wdl小鼠Car8基因的第7个外显子中有19个核苷酸缺失.结论:Wdl小鼠突变基因的发现为探查基因序列异常和运动功能障碍之间的关系开创了新的视角.

PCR-HRM分析筛查成骨不全一家系患儿基因突变

目的：采用PCR-高分辨率熔解曲线（HRM）分析筛查成骨不全（OI）一家系患儿（先证者）COL1A1基因突变位点，探讨其基因型与临床表型的联系。方法对先证者进行家族史及临床资料的调查，采集先证者、家属及50名正常对照者血液标本，应用PCR-HRM分析筛查先证者及正常对照者COL1A1基因突变，基因测序确证突变位点。结果先证者COL1A1基因17外显子筛查结果异常，其熔解温度（Tm）值比正常对照者Tm值低约0.4℃。先证者与正常对照者的标准熔解曲线及差异熔解曲线均有明显差异。测序结果为c.1138G>A，突变导致380位氨基酸由甘氨酸（Gly）变成丝氨酸（Ser）：p.（Gly 380 Ser），为错义突变。先证者父亲、祖母均具有相同突变位点。先证者母亲及正常对照者基因测序结果无此突变。该突变在中国人群中未见报道。该家系遗传特征为常染色体显性遗传，先证者临床诊断为Ⅳ型OI，临床表型较严重。结论 PCR-HRM分析是有效的OI基因筛查新方法。COL1A1基因c.1138G>A突变在中国人群中为新发现的突变位点。α螺旋结构域Gly被替换可能导致较严重的临床表型。

时间分辨荧光免疫法、多指标联合在唐氏综合征筛查中的应用

唐氏综合征(Down syndrome)即21-三体综合征或先天愚型,是人类常见的染色体异常引起的疾病.此类患儿生存率高,目前缺乏有效的治疗手段,患儿的出生将给家庭和社会带来沉重的负担.目前,避免缺陷儿出生的唯一方法就是进行产前筛查和产前诊断.我们已筛查孕妇61 075例,唐氏综合征高风险2 315例,高风险率3.8％,确诊唐氏综合征胎儿39例.通过汇总分析筛查数据,了解本市胎儿唐氏综合征患病情况,以及孕妇年龄对胎儿唐氏综合征患病率的影响.

实时三维超声在胎儿畸形筛查和诊断中的临床应用价值

目的 探讨实时三维超声在胎儿畸形的筛查和诊断中的临床应用价值.方法 采用实时三维超声对3 758例孕14～41周胎儿进行二维及三维超声检查,并与出生后及引产结果相比较.结果 在3 758例孕14～41周的胎儿中,经引产或出生后证实的各种畸形266例,二维超声产前检出256例,漏诊10例,二维超声诊断符合率96.2％(255/266)；二维超声诊断胎儿畸形的敏感度96.2％,特异度100％,准确度99.7％,阳性预测值100％,阴性预测值99.7％,实时三维超声产前检出263例,漏诊3例,诊断符合率为98.9％(263/266),实时三维超声诊断胎儿畸形的敏感度98.9％,特异度100％,准确度99.9％,阳性预测值100％,阴性预测值99.9％.结论 实时三维超声对胎儿畸形的筛查和诊断具有较高敏感度和特异度,在胎儿畸形的产前诊断方面具有较高的应用价值.